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Elda Salcedo

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Tecnica para bsqueda de celulas LE

materiales:

tubos de macrohematocritopor tasfrasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota de hepaerina

jeringa con aguja gruesa, de 15 cm de largoembudo Introduccio n: El Lupus Eritematoso

Sistemico es una enfermedad autoinmune,qu e afecta a muchos tejidos y organos como

articulaciones, piel,sistema nervioso, rion, corazon, pulmon, sangre, higado, bazo y ojos.Las

celulas LE son polimorfonucle ares que fagocitaron restosnucleare s alterado, proveniente de la destruccion

del nucleo de otrosleucocitos , por el llamado Factor LE (factor nuclear). Este es

Ig G-anti ADN que se fija a la superficie del nucleo y determinaalter aciones en la cromatina; y

entonces al ser recubierto poranticuerpos , es fagocitado por los neutrofilos.El objetivo es hallar

neutrofilos que tengan adherido an susuperficie restos nucleares, o bien que los restos esten

en su interior.Existen 2 metodos (entre otros) A) Metodo sin cogulo: 1- Sacar sangre al

paciente, y colocar en frasquito con las perlasque posean 1 gota de heparina.2Dejarlo rotar en el agitador

por 30 minutos, o bien agitarvigorosa mente por 5 a 10 minutos para generar la lisis

deleucocitos.3 - Llevar la muestra a estufa de 37 C entre 1 a 4 horas, para darletiempo a los leucocitos

enteros a fagocitar los restos de loslisados y que decanten los globulos del plasma.4Con la jeringa

de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en lainterface plasmaglobulos rojos y descargar dentro de 2 a

4tubos de macrohematoc rito.5Centrifugar a muy baja velocidad (500-1000 rpm), por

5minutos.6Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitosde lostubos, y descargar en

los portas, y realizar los extendido conextensor.7Colorear por el metodo de May Grunwald

- Giemsa y ver con objetivo de inmersion. B) Mtodo con cogulo: 1- Se sacan unos 5 a 10 ml

de sangre y se la deja coagular durante2 horas a 37 C.2Centrifufar a 3500 rpm por

10 minutos.3Eliminar el suero y depositar el coagulo sobre varias capas degasa, y stas sobre un

embudo.4Aplastar el coagulo con una varilla y recojer el producto en untubo de ensayo.5-

Pasar el liquido obtenido a un tubo de macrohematoc rito con la jeringa con aguja larga, y

centrifugar 15minutos a 2000 rpm.6Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y

luegotomar la capa de leucocitos y depositar en portas para hacerextendid os.7- Colorear por el metodo

de May Grunwald Giemsa y ver conobjetivo de inmersion. Observacio ne

interpretaci on: Buscar los campos bien coloreados y con las celulas bienseparadas , evitando lo

observacion de celulas "pegoteadas" por efectode la lisis y la extension.La prueba es positiva

cuando se hallan leucocitos que fagocitaronrest os nucleares de los lisados, o bien los tenga

adheridos en susuperficie, que se notara por la diferencia de color entre el restonuclear y el nucleo de

leucocito entero, y se informara "Se observancelul as LE"El "Fenomeno de Roseta" se debe a la

adhesion de 2 o masneutrofilos a un resto nuclear. Es raro de observar, y se debediferencia

r de las celulas "pegoteadas" propias de extendido.La presencia de leucocitos vacuolados no indica

necesariament ela presencia de celulas LE, ya que fagocitaron cualquier resto celular.La prueba no es

totalmente especifica, debido a queenfermeda des autoinmunes tambien generan

celulas LE, y no tienegran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus.Esto se

explica por el tratamiento con corticoides en estos enfermos,que inhibe la formacion de este

fenomeno, por lo actualmente no tienevalor diagostico y es necesario realizar otras pruebas, tal como a

busqueda de anticuerpos, que son mas sensibles y especificas.Alg unos laboratorios sugieren que

se confirme la presencia deanticuerpos antinucleares (FAN/ANA) antes de buscar e informar

lascelulas LE, ya que es una tecnica con alto error. Ademas no esespecifica para Lupus, y esta cayendo

en desuso. Sin embargo, paradiagnostic ar LES, es uno de los 10-15 parametros a considerar

paraconfirmar la enfermedad. Imagenes de Celulas LE:

Bibliografia: Guia de trabajos practicos de la Catedra de Hematologia de laUNLP-

Asociacin Lupus Argentina ALUA http://www.alu a.org.ar

Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa Joan LlusVives i Corrons,Josep Llus Aguilar

Bascompte3ra edicion,ao20 06. editorial Massonorigen de las imagenes:

http://www.free ed.net/sweethav en/MedTech/He matology/lesson Main.asp?iNum =0411Facultad

de medicina de Londres http://www1.im perial.ac.uk/m edicine/divisio ns/olddivisions /is/haematolog

y/morphology/ bain/images/sli de50/

of 4

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celulas LE
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