Aplicaes da biotecnologia na rea animal As aplicaes da biotecnologia moderna na rea animal so mltiplas e tm um mercado potencial de bilhes de dlares por

ano. A competio por tal mercado exige que as empresas faam investimentos significativos em pesquisa para desenvolver produtos, que incrementem a produo e gerem animais que sejam: capazes de produzir protenas teraputicas, modelos de estudos para doenas humanas e fornecedores de rgos para os seres humanos. Essas pesquisas utilizam ferramentas genticas que foram desenvolvidas pela tecnologia do DNA recombinante e da transgnese. Este texto est dividido em duas partes. A primeira denominada Produo Animal e a segunda, Animais Geneticamente Modificados. Em ambas, so tratados os benefcios propiciados pelo uso dessas tecnologias na pecuria e na sade humana. Produo animal Seleo assistida com testes de DNA e clonagem

H sculos, produtores tm realizado seleo artificial em vrias raas e linhagens de animais domsticos, a fim de aumentar a freqncia de genes favorveis economicamente. No entanto, quando o objetivo a obteno de mudanas mais drsticas no potencial gentico, a exemplo da mudana da base alimentar (pasto x gros) ou dos requerimentos de mercado (reduo de gordura), os produtores lanam mo de estratgias de substituio de raas ou cruzamentos, transferindo genes de uma populao para outra, dentro de uma mesma espcie. Esse tipo de seleo lento, pois tem de respeitar o intervalo de geraes, ou seja, a idade mdia dos pais na poca da procriao. No caso dos bovinos, que tm um intervalo de gerao de quatro anos, um programa de melhoramento tradicional envolve dcadas de trabalho, e pode no alcanar os seus objetivos. A seleo assistida usando testes de DNA permite verificar, imediatamente aps o nascimento, se os genes de interesse foram eliminados ou adicionados. Ento, h a certeza da obteno das caractersticas de interesse daquele animal e s preciso que ele chegue idade adulta para transferir tais caractersticas para os seus filhos pelas tcnicas clssicas de transferncia de embries ou pela clonagem. Na Europa e nos Estados Unidos, esses testes esto sendo usados para eliminar o gene que confere carne suna uma aparncia plida e aqosa. Um programa governamental ambicioso, desenvolvido na Inglaterra, faz 10.000 testes de DNA de ovinos por semana para identificar animais resistentes ao scrapie (doena que causa tremor, semelhante ao mal da vaca louca) e somente depois disso os animais so usados nos programa de seleo. A clonagem ainda no usada no melhoramento animal pois um procedimento moroso e altamente ineficiente. O primeiro mamfero clonado por meio de clulas de um doador adulto foi a ovelha Dolly, em fevereiro de 1997. A tcnica constitui na transferncia nuclear de duas clulas. A clula receptora, normalmente um vulo no-fertilizado, e a doadora, com o seu ncleo do indivduo a ser clonado, so fundidas e implantadas em uma me de aluguel. Clones de bovinos, eqinos, sunos e caprinos esto sendo anunciados com freqncia pela mdia. No Brasil, o Dr. Rodolfi Rumpf, em 2001, foi o primeiro a conseguir a clonagem de bovinos quando nasceu Vitoria, pela tcnica de transferncia nuclear.

Desenvolvimento e produo de vacinas, tratamentos, suplementos e novos kits de diagnstico Vacinas

Animais sadios produzem mais carne, leite e derivados. A vacinao uma das medidas mais importantes em sade animal, pois, alm de mant-los sos, elimina o risco de transmisso de doenas (zoonoses) para os homens. O estado de imunidade pode ser obtido por meio de variados tipos de vacinas, baseadas em microrganismos vivos enfraquecidos ou mortos e comercialmente disponveis. Apesar do sucesso das vacinas, ainda existem muitas delas que no so totalmente eficazes e que possuem muitos inconvenientes, a exemplo da biossegurana na produo, das dificuldades no diagnstico diferencial entre animais doentes e imunizados e de uma janela imunolgica longa (perodo em que o animal, apesar de estar vacinado, ainda no esta protegido contra a doena). Alm desses problemas, h grandes riscos de reintroduo da enfermidade em pases livres da infeco. Vacinas utilizando a tecnologia do DNA recombinante so alternativas s vacinas tradicionais e j existem muitas sendo comercializadas e outras tantas sendo testadas. Tais vacinas podem ser desenvolvidas eliminando ou destruindo genes do patgeno que causa a doena ou de suas subunidades (protenas). Tratamentos, suplementos e novos kits de diagnstico

Medicamentos como antibiticos e antiinflamatrios so tambm produzidos pela tecnologia do DNA recombinante. Bactrias que vivem no intestino do homem e de animais so utilizadas como biorreatores e produzem esses frmacos com qualidade e quantidade superiores metodologia clssica, alm de serem produzidas a um preo inferior. A medicina veterinria uma cincia econmica e sempre a relao custo x benefcio tem que ser considerada. No adianta gerar um produto de terceira gerao que seja mais caro que o produto tradicional. Um dos primeiros suplementos, derivado de um organismo geneticamente modificado, produzido por bactrias para a utilizao na produo animal foi a somatrotofina bovina (BST), um hormnio produzido no crebro e que responsvel pelo crescimento dos bezerros, com um papel relevante na produo do leite em vacas em aleitamento. Vrias questes sobre as vantagens econmicas, riscos para o animal e para os indivduos que se alimentaro com o leite e a carne de animais tratados com tal hormnio tm sido levantadas pelo pblico e, apesar das controvrsias, o BST legalmente utilizado na produo leiteira em vrios pases, incluindo o Brasil. O diagnstico molecular permite detectar doenas em estgios pr-clnicos, ou seja, logo no incio da doena, e so extremamente importantes na medicina veterinria. Quanto maior o perodo de incubao da doena, maior a possibilidade de sua transmisso. Os sinais clnicos podem surgir em todos os animais ao mesmo tempo, levando perda completa do plantel basta lembrar da epidemia de febre aftosa na Inglaterra, onde foram sacrificados milhes de animais, levando a prejuzos de bilhes de dlares. Hoje, os kits de diagnstico usando produtos

derivados da engenharia gentica ou usando PCR (Reao de Polimerase em Cadeia) permitem a deteco da doena em seu estgio inicial ou possibilitam eliminar os animais doentes e reduzir os efeitos nefastos das epidemias. Animais geneticamente modificados Animais transgnicos podem ser definidos como aqueles que contm molculas de DNA exgeno, introduzidas por interveno humana intencional, objetivando a expresso de novas caractersticas. Por analogia, o gene transferido denomina-se transgene. Entretanto, a integrao por si s no garante a expresso do transgene. Uma outra definio de animal transgnico relativa expresso do gene inserido. Quando acasalado com seus pares no-modificados geneticamente, o animal produz descendentes que herdaro o gene, devido a sua incorporao s clulas germinativas. As tcnicas de transgnese em animais domsticos foram desenvolvidas e otimizadas, visando basicamente quatro principais linhas de pesquisa: 1. o estudo da regulao e expresso gnica 2. a utilizao de animais transgnicos como biorreatores 3. a gerao de modelos animais para estudos biomdicos e para xenotransplante 4. a introduo de novas caractersticas genticas importantes economicamente. a) Estudo da regulao e expresso gnica Animais transgnicos tm sido amplamente utilizados para a elucidao dos mecanismos moleculares que controlam a expresso e a regulao de diversos genes, durante o desenvolvimento fetal e em tecidos adultos. Elementos regulatrios foram descobertos utilizando tcnicas de transgnese em animais promotores. Enhancers (amplificadores) e elementos silenciadores de vrios genes tm sido identificados e uma variedade de promotores que controlam a expresso de genes tecido-especficos (rim, fgado, crebro, sangue e glndula mamria) so, atualmente, utilizados para direcionar a sntese de protenas em um tecido de interesse. Outra grande aplicao da transgenia animal se d na rea de biologia do desenvolvimento, onde tem sido possvel estudar e construir mapas detalhados de genes envolvidos no desenvolvimento embrionrio de uma variedade de espcie. b) Utilizao de animais transgnicos como biorreatores A possibilidade de animais transgnicos expressarem protenas em determinados rgos, utilizando-se promotores tecido-especficos, torna-os viveis como biorreatores de protenas de importncia biomdica. Animais domsticos podem servir como biofbricas na produo em larga escala de protenas expressas no sangue ou no leite. O isolamento de protenas expressas nos fludos (sangue e leite) tem vantagem sobre os tecidos, pois os fludos so constantemente produzidos e as protenas so fceis de recuperar.

Porcos transgnicos para o gene da -globina humana sob o controle do promotor do gene da -globina desses animais foram gerados e expressaram de moderado a altos nveis da -globina humana no sangue. Entretanto, a expresso de protenas recombinantes circulantes no sangue mostrou-se prejudicial para a sade do animal. Dessa forma, glndulas mamrias passaram a ser utilizadas, pois apresentaram algumas vantagens. As protenas do leite, por exemplo, no circulam no corpo do animal. Alm disso, o leite pode ser coletado em grandes quantidades, e protenas como -casena e -lactoglobulina so expressas em abundncia e exclusivamente na glndula mamria. Assim, protenas heterlogas podem ser expressas nas glndulas mamrias, clonando seus respectivos genes em vetores que contenham promotores e elementos regulatrios de genes que codificam para protenas do leite. Diversos trabalhos com ovinos, caprinos e sunos transgnicos tm sido realizados, utilizando-os como biorreatores de protenas expressas no leite. Por exemplo, o fator IX do cogulo de sangue humano e 1 antitripisina foram produzidos no leite de ovelhas transgnicas; o ativador de plasminogeno humano ativo biologicamente, no leite de cabras transgnicas; e a protena C com atividade anticoagulante e a hemoglobina humana, no leite de sunos transgnicos. No entanto, os nveis de produo dessas protenas foram geralmente muito baixos e variveis. Assim, pesquisas adicionais so necessrias para compreender os mecanismos responsveis pelas variaes na produo de protenas recombinantes, antes de utilizar animais transgnicos como biorreatores na indstria biotecnolgica. c) Gerao xenotransplante de modelos animais para estudos biomdicos e

Animais transgnicos tambm podem ser utilizados para estudar o mecanismo molecular que contribui para a patologia de doenas humanas, assim como para testar agentes teraputicos que evitem o inicio da doena, diminuam seu progresso ou reduzam os sintomas. Camundongos tm sido mais freqentemente utilizados como modelo animal para um grande nmero de doenas em humanos, entre elas, fibrose cstica, arteriosclerose, osteognese imperfeita, -talassemia, obesidade, AIDS entre outras. A transgenia em animais tambm aplicada na pesquisa de cncer. Uma variedade de oncogenes de origem viral e celular foi identificada como causadora de cncer em camundongos transgnicos. Animais transgnicos, portanto, tm se mostrado uma fonte alternativa para a elucidao da influncia da gentica, da fisiologia e do ambiente no desenvolvimento do cncer. Uma outra aplicao, dentro da rea de pesquisas aplicadas sade humana, a utilizao de animais transgnicos como doadores de rgos, que expressem fatores de inibio rejeio. Camundongos e sunos transgnicos tm sido engenheirados para expressar altos nveis de fatores de inibio na superfcie do endotlio de vasos e capilares sangneos e, no caso de sunos, servirem como doadores de rgos para humanos (xenotransplante).

d) Introduo de economicamente

novas

caractersticas

genticas

importantes

O objetivo nessa rea a produo de animais transgnicos que apresentem caractersticas de importncia comercial, tais como maior eficincia na converso alimentar, maior quantidade de protena na carne, maior taxa de crescimento corporal, maior produo de carcaa e resistncia a doenas. Os primeiros experimentos, visando ao aumento da taxa de crescimento corporal, foram realizados em sunos. Animais transgnicos foram obtidos para os genes do hormnio do crescimento de bovino (GH) e o do fator liberador do hormnio do crescimento (GHRF). No entanto, efeitos negativos foram observados nos animais, entre eles, reduzida performance reprodutiva, artrite, ulcera gstrica, dermatite, doenas renais e morte prematura. Estudos posteriores foram realizados em porcos, ovelhas e bovinos transgnicos, utilizando o gene do hormnio do crescimento. No entanto, todos os trabalhos mostraram um limite na manipulao fisiolgica desses animais, j previamente selecionados para alta produo. Nenhum dos animais apresentou aumento significativo no peso corporal, mesmo tendo sido encontrados altos nveis do hormnio do crescimento circulante (nas ovelhas, alcanando 3000 ng/ml no sangue). Apesar do grande interesse em produzir animais com maior taxa de crescimento corporal e rendimento de carcaa, existem poucos trabalhos sobre nesse campo pela manipulao do hormnio do crescimento. Os peixes foram os nicos em que foi obtido sucesso com o GH. O salmo transgnico j esta sendo comercializado nos Estados Unidos, com uma taxa de converso 15% maior que os no-transgnicos, o que permite um crescimento mais rpido. Outra estratgia potencial para o uso da transgenia em animais a possibilidade de alterao da composio do leite, aumentando, por exemplo, a quantidade de protenas como a -casena. Modificaes significativas na composio do leite foram obtidas principalmente em camundongos, nos quais grande quantidade de protenas heterlogas foi expressa no leite. Entretanto, muitos estudos ainda so necessrios antes de se utilizar animais domsticos transgnicos para a produo de diferentes tipos de leite. Animais transgnicos tambm tm sido gerados visando modificao da estrutura de fibras txteis, tais como l e cashmere. O crescimento da l depende do nvel de cistena, um aminocido que no normalmente sintetizado por clulas animais, mas que pode ser obtido na dieta alimentar. Camundongos foram transformados com dois genes de bactrias, codificadores de protenas importantes envolvidas na biossntese da cistena. A expresso de tais protenas foi observada no trato gastrointestinal dos animais. Mtodos similares foram tentados em ovinos, utilizando o gene do fator de crescimento, mas nenhum animal transgnico que expressasse as enzimas no intestino foi produzido. Entretanto, outros pesquisadores conseguiram gerar ovelhas transgnicas que expressaram o gene do fator de crescimento, tendo como objetivo produzir uma maior quantidade de l. Os resultados mostraram um aumento de 6% na produo nos animais transgnicos e nenhuma modificao das caractersticas da fibra. Esse foi o primeiro trabalho envolvendo aumento de uma caracterstica de produo por meio da engenharia gentica, sem efeitos danosos sade ou reproduo. Por fim, uma outra aplicao das tcnicas de transgnese a produo de animais transgnicos resistentes a doenas. O custo com doenas estimado em cerca de 10% a 20% dos custos de produo total. Historicamente, o controle ou a eliminao de agentes infecciosos em animais domsticos depende do uso de vacinas e drogas, perodo de quarentena e erradicao. Mtodos utilizando transferncia de genes so atrativos, visto que programas de melhoramento

convencional por meio de seleo tm muitos problemas e so mais demorados. Estratgias de imunizao baseada na transferncia de DNA tm por objetivo expressar, estavelmente ou transitoriamente, componentes que forneam ou influenciem o mecanismo de defesa do hospedeiro contra patgenos infecciosos. Diferentes genes, que conferem resistncia a doenas genticas, j foram identificados e clonados. O gene Mx1 de camundongos, por exemplo, que confere resistncia seletiva ao vrus da doena influenza, tem sido utilizado em homens, bovinos, sunos e ratos. A protena Mx1 inibe o acmulo de RNAm do vrus e, portanto, animais transgnicos portadores de tal gene so resistentes influenza. Este tipo de transgenia denominada imunizao intracelular. Uma tcnica alternativa para conferir resistncia a doenas a que utiliza o RNA anti-sense. Ela tem como princpio a hibridizao do RNA anti-sense com o RNAm complementar alvo, inibindo a produo de produtos gnicos detrimentais. O RNA anti-sense pode atuar de vrias maneiras: 1) impedindo o processamento do RNAm; 2) aumentando a sensibilidade do RNAm dsRNA ribonuclease; 3) bloqueando a traduo do RNAm no ribossomo; 4) inibindo a exportao de RNAm do ncleo; 5) modificando uma nica base do RNAm. O primeiro estudo utilizando RNA anti-sense foi realizado em camundongos, visando inibio da replicao do vrus da leucemia. Os resultados mostraram que todos os camundongos transgnicos que expressaram RNA anti-sense no apresentaram os sintomas da leucemia, enquanto nos camundongos controles alguns morreram e outros apresentaram diferentes estgios da doena. Outro estudo foi realizado em coelhos contra o adenovrus h5 (Ah5), mas essa tcnica ainda limitada em animais domsticos. Concluses As aplicaes da biotecnologia na rea animal so mltiplas e esto em diferentes etapas de desenvolvimento, algumas com problemas tcnicos a serem resolvidos e outras que j geraram produtos que podem entrar no mercado ou que j esto sendo comercializados. O ambiente efervescente e fascinante e, certamente, contribuir para a melhor qualidade de vida do homem. Vasco Azevedo veterinrio, Ph.D. em gentica molecular de microorganismos, professor do departamento de Biologia Geral do Instituto de Cincias Biolgicas da UFMG e conselheiro do CIB