Universidade Federal da Bahia Instituto Multidisciplinar em Sade Campus Ansio Teixeira

Espectrofotometria

Vitria da Conquista BA Dezembro 2011

Alan Calixto Borges Las Fonseca Lidiane Martins do Nascimento Lllian Souza Nayara Oliveira Pires

Espectrofotometria
Princpios de Tcnica, Instrumentao e Aplicaes

Trabalho Monogrfico apresentado disciplina Qumica Analtica, ministrada pelo Professor Anderson Souza

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO MOLECULAR Princpio da Tcnica da Espectrofotometria Diversas substncias e misturas absorvem luz ultravioleta (UV) ou visvel (Vis). Sendo que, a regio ultravioleta do espetro geralmente est contida na faixa de 200 a 400 nm, e a regio do visvel entre 400 a 800 nm. As respectivas energias de cada regio esto ao redor de 150 a mol-1 e 72 a 36 k.cal.mol-1. Dessa maneira, as energias dessa magnitude correspondem, muitas vezes, diferena entre estados eletrnicos de muitas molculas. A absoro da regio visvel e ultravioleta depende, em primeiro plano, do nmero e do arranjo dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. Consequentemente, o pico de absoro pode ser correlacionado com o tipo de ligao que existe na espcie que est sendo analisada. O diagrama abaixo mostra um feixe de radiao monocromtica de potncia radiante Po, atravessando uma amostra de soluo. Ao atravessar a amostra, parte da intensidade absorvida e o feixe de radiao que deixa a amostra ter ento potncia P. Assim, ao passa-se um determinado feixe de luz de intensidade conhecida (Po) atravs de uma amostra e medir-se a intensidade da luz que emergiu encontra-se o valor da transmitncia (P) desta amostra, determinando, dessa maneira, a razo de luz que atravessa a mostra.

Figura 1. Feixe incidente e Feixe Transmitido

Lei de Lambert- Beer A atenuao de um feixe de radiao por uma soluo absorvente depende da concentrao de molculas dessa soluo e da extenso do caminho sobre o qual ocorre essa atenuao, essa corresponde a chamada

Lei de Lambert-Beer ou somente Lei de Beer. A medida que a luz atravessa um meio contendo um analito que absorve , ocorre uma diminuio da intensidade da radiao em proporo que o analito excitado.Com uma soluo que apresenta determinada concentrao, a medida que o comprimento do caminho do meio que a luz passa, mais analito estar no caminho e maior ser a atenuao, ou a diminuio do feixe de luz. Portanto, a absorbncia diretamente proporcional a concentrao de uma espcie absorvente e o caminho ptico da espcie absorvente. De modo que: c concentrao da espcie a constante de proporcionalidade determinada absortividade (a absortividade deve ter unidades que b - caminho ptico cancelam as unidades de b e c) Log Po/P =abc A relao entre absorbncia e contreao pode ser expressa da seguinte maneira: A = abc ou A = b c a, quando c for em g/ L

absorvente

, quando c for em mol/ L

Em virtude das interaes entre os ftons e as partculas absorventes, a radiao com potencia incide (radiao monocromtica) igual a Po e absorvida pelo analito resultando em um feixe transmitido de menor potencia P. A transmitncia (T) da soluo equivale a frao incidente transmitida pela soluo, sendo expressada em poscentagem de transmitncia: T = P / Po A absorbncia por sua vez, esta relacionada a transmitncia de forma logaritimica. De modo que , a quando a absorbncia aumenta a transmitncia diminui:

A = log Po / P A transmitncia e a absorbncia no podem ser medidas, considerandose que a soluo a ser estudada deva estar contida em algum tipo de recipiente, como a cubeta, pois podem ocorrer perdas nas paredes das clulas, ou ainda o feixe de luz pode ser espalhada em todas as direes a partir de superfcies de molculas grandes ou de partculas estranhas presentes no solvente diminuindo ainda mais o feixe quando este passa pela soluo. Como tais perdas podem ser substanciais, a potncia do feixe transmitida atravs de uma clula com a soluo do analito, comparada com a potncia que atravessa uma clula idntica contendo somente o solvente ou o branco dos reagentes. A relao entre absorbncia e transmitncia pode ser definida do seguinte modo: A= log Po/P= log 1/T A= 2 - Log %T

A ltima das equaes acima, A = 2- log%T, importante, pois permite calcular facilmente a absorbncia a partir da transmitncia percentual. vlido ressaltar que, se a luz passa atravs de uma soluo sem absoro nenhuma, a absorbncia zero, e a transmitncia percentual 100%. No caso em que toda a luz absorvida, a transmitncia percentual zero e a absorbncia infinita. Quando um feixe de energia radiante incide sobre uma substncia pode sofrer algumas modificaes: Passagem atravs da substncia com pequena absoro e, consequentemente, pequena perca de energia; Alterao da propagao do feixe de energia por reflexo, refrao ou difrao; Absoro da energia do feixe no todo ou em parte;

Instrumentao - Componentes do Espectrofotmetro Os espectrofotmetros so instrumentos com capacidade de absorver (absorvncia) ou transmitir (transmitncia) comprimento de onda. A absorvncia registra um espectro de absoro e a transmitncia registra um espectro de transmisso. O espectro de absoro permite identificar uma espcie qumica, como dito anteriormente.

Figura 2. Espectrofotmetro

A seleo de radiaes monocromticas a caracterstica mais importante dos espectrofotmetros, pois possibilita realizar inmeras determinaes quantitativas a partir da Lei de Beer. Na regio espectral ultravioleta-visvel so necessrios componentes mais sensveis capazes de detectar radiaes nessa faixa. Entretanto, em geral, os espectrofotmetros possuem cinco componentes principais: fonte de radiao, seletor de comprimento de onda, recipiente da amostra, detector e processador e dispositivo de leitura, que sero abordados a seguir. Fonte de radiao Geralmente, as fontes de radiao so baseadas na incandescncia e muito prticas no visvel, embora devam elevar a temperatura para atuar na faixa do ultravioleta. As fontes de radiao so formadas por filamentos que com alta voltagem ou aquecimento eltrico so excitados por descargas eltricas. Uma fonte de radiao de boa qualidade deve gerar radiao em que todos os comprimentos de onda dentro da regio espectral determinada sejam

emitidos, ou seja, radiao continua; devem ter intensidade de potencia radiante suficiente para ser detectada pelo detector do instrumento; devem ter potncia constante, ou seja, estabilidade; devem ser de longa vida e baixo custo. As principais fontes de radiao so: Lmpada de filamento de tungstnio: incandescente; a emisso contnua produzida na faixa de 320 a 2500nm, o que limita o uso para o visvel e infravermelho.

Lmpada de deutrio: Consiste em um par de eletrodos fechados em um tubo de quartzo que preenchido de gs deutrio; com a alta voltagem produz descarga eltrica que excita a altos nveis energticos; estes quando retornam ao estado fundamental emitem radiao continua entre 180 e 370 nm, por conta disso mais usada na regio do ultravioleta.

Figura 3. Lmpada de Deutrio

Figura 4. Lmpada de arco de xennio

Lmpada de arco de xennio: So acionadas por eletricidade, tipo de descarga, alta presso. Consiste em dois eletrodos montados em um bulbo, formando um arco voltaico, que emite luz de extrema intensidade; o bulbo preenchido com gs ioniza e atinge alta presso, que aciona a lmpada. Atingem uma extensa faixa, por conta disso, pode ser usada tanto no ultravioleta, quanto no visvel. Seletor de comprimento de onda O seletor de comprimento de onda responsvel por restringir a

radiao que est sendo medida dentro de uma banda estreita que absorvida ou emitida pelo analito, possui como funo converter a energia radiante

recebida em corrente eltrica proporcional a intensidade da radiao. Este seletor deve apresentar alta sensibilidade, de maneira a detectar radiao de intensidade baixa e numa larga faixa de comprimento de onda; possuir alta razo sinal/rudo; resposta constante em uma considervel faixa de comprimento de onda; resposta rpida; e um sinal eletrnico que seja facilmente amplificado para que possa ser registrado. Muitos instrumentos empregam um monocromador para isolar a banda de comprimento de onda desejada para que somente a banda de interesse seja detectada e medida. Outros utilizam espectrgrafos para desmembrar os comprimentos de onda de forma que possam ser detectados pelo uso de detectores multicanais. Os monocromadores geralmente possuem uma rede de difrao para dispersar a radiao sem seus comprimentos de onda constituintes. Girando-se a rede, os comprimentos de onda diferentes podem ser dirigidos para uma fenda de sada. O comprimento de onda de sada de um monocromador pode ser variado continuamente sobre uma faixa espectral considervel. Pela facilidade com a qual o comprimento de onda pode ser alterado em um instrumento baseado no uso de um monocromador, esses sistemas so empregados em aplicaes que requerem varredura espectral, bem como em aplicaes que requerem um comprimento de onda fixo. Em instrumentos que contm um espectrgrafo, a amostra e o seletor de comprimento de onda so invertidos. Como em um monocromador, o espectrgrafo contm uma rede de difrao para dispersar o espectro. Contudo, o espectrgrafo no possui fenda de sada, o que permite que o espectro dispersado atinja um detector de mltiplos comprimentos de onda. Outros instrumentos empregados em espectroscopia de emisso contm, ainda, um dispositivo chamado policromador, o qual contm mltiplas fendas de sada e mltiplos detectores. Isso permite que muitos comprimentos de onda sejam medidos simultaneamente.

Recipiente da amostra Os recipientes usados so cubetas ou cubas retangulares de vidro ou quartzo, como ilustrado a seguir.

1 cm

Figura 5. Cubeta convencional

Na regio do visvel so usadas cubetas de vidro; na regio do ultravioleta, usa-se cubeta de quartzo, transparentes radiao ultravioleta, pois o vdeo absorve a mesma. Uma ideal deve ter 1 cm de largura, para simplificar os clculos da expresso da Lei de Beer, caso as dimenses sejam diferentes, devem ser consideradas no clculo. Para aplicaes industriais, como, por exemplo, no controle de qualidade de lotes de produo, utiliza-se um sistema automatizado em que as amostras circulam em srie em cubetas adequadas. Detector Propriedades dos Transdutores de Radiao

Em uma ampla faixa de comprimento de onda um detector ideal de radiao eletromagntica responde prontamente a baixos nveis de energia. Tambm produz um baixo nvel de rudo eltrico, alm de produzir um sinal

eltrico que facilmente amplificado. Como mostrado na equao: G = KP + K, o sinal produzido por este transdutor deve ser diretamente proporcional potncia radiante P do feixe. Na equao descrita acima G a resposta eltrica do transdutor em unidades de corrente, carga ou voltagem. K representa a constante de proporcionalidade, que mede a sensibilidade do detector em termos de sua resposta por unidade de potncia. Existem detectores que possuem uma constante de resposta K conhecida como corrente de escuro. Esta corrente produzida por um detector fotoeltrico quando nenhuma luz est o atingindo. Este detector ento capaz de realizar uma compensao de forma que essa seja automaticamente subtrada. Desta maneira pode-se simplificara a equao G = KP + K para: G = KP.

Tipos de Transdutores H dois tipos de transdutores, um que responde ao calor e outro a ftons. Todos os detectores que responde a ftons so baseados na influencia da radiao com uma superfcie reativa para produzir eltrons, fotoemisso, ou na promoo de eltrons para os estados energticos onde, pode-se conduzir eletricidade, fotoconduo. A fotoemisso s ocorre atravs das radiaes infravermelha, UV e visvel, j que tais radiaes possuem energia suficiente para provocar a fotoemisso. Os fotocondutores podem ser utilizados nas regies IV prximo, mdio e distantes do espectro. Normalmente a radiao IV detectada quando a temperatura avaliada, de um material escuro localizado no caminho do feixe ou pela medida do aumento da condutividade eltrica de um material fotocondutor quando este absorve a radiao IV. Como o aumento da temperatura resultante da radiao IV muito pequeno, deve-se ter um controle rigoroso da temperatura ambiente com intuito de evitar erros significativos.

 Detectores de Ftons Os detectores de ftons mais empregados so os: fototubos, os tubos fotomultiplicadores, os fotodiodos de silcio e o arranjo de fotodiodos.

Fototubos e Tubos Fotomultiplicadores: a resposta destes tipos de fototubos est baseada no efeito fotoeltrico. O fototubo consiste em um fotoctodo semicilndrico e um anodo em forma de fio selados, sob vcuo, dentro de um invlucro de vidro transparente. O fotocatodo que cncavo possui uma camada de um material fotoemissivo, ou de um xido metlico, ou de um metal alcalino, que emite apropriada. Quando ocorre a voltagem, os fotoeltrons emitidos so atrados para o anodo positivamente carregado. Com o circuito completo, h a produo da fotocorrente, a qual pode ser facilmente amplificada e medida. O tubo foto multiplicador possui semelhana em sua construo com o fototubo, porm bem mais sensvel. Seu fotocatodo emite eltrons sob exposio radiao. Por outro lado, no lugar de um anodo constitudo por um fio nico, o TFM possui vrios eletrodos chamados de dinodos. Os eltrons que so emitidos atravs do ctodo so acelerados na direo do primeiro dinodo, sendo este mantido entre 90 e 100 V positivo/ em relao ao ctodo. Um fotoeltron acelerado, quando atinge a superfcie do dinodo produz vrios eltrons, sendo eles chamados de eltrons secundrios, que so direcionados para o dinodo 2, que mantido entre 90 e 100 V. Novamente ocorre uma amplificao no nmero de eltrons. Quando ocorrer a repetio deste processo em cada dinodo, para cada fton, 105 a 107 eltrons j tero sido produzidos. os eltrons quando irradiados com a luz de energia

Clulas Focondutivas: um filme fino de um material semicondutor, formam os transdutores fotocondutivos, como o caso do sulfeto de chumbo, antimoneto

de ndio, depositado em cima de um vidro no-condutivo e selado a vcuo. Por conta da radiao absorvida a partir destes materiais, os eltrons nocondutivos da camada de valncia so elevados energeticamente, o que diminuir a resistncia eltrica do semicondutor.

Fotodiodos de silcio e arranjos de fotodiodos: o silcio cristalino um material semicondutor, posuindo portanto uma condutividade inferior a de um metal e maior que a de um material isolante. Em temperatura ambiente, possvel que ocorra uma agitao capaz de liberar um eltron de seu estado ligado, ficando este livre para mover-se atravs do cristal. Com essa agitao trmica, ocorre um processo chamado de vacncia, um buraco. A dopagem pode aumentar a condutividade do silcio, um processo em que uma quantidade de um elemento do grupo V ou III, sofre uma distribuio homognea atravs do cristal de silcio. O semicondutor tipo n aquele que no possui eltrons na ligados noligados, e o tipo p aquele que possui um excesso de vacncias. No tipo n os eltrons so caracterizados como portadores de carga majoritria e no tipo p os portadores majoritrios so as prprias vacncias. Os fotodiodos consistem de dispositivos semicondutor que possuem juno pn, respondentes luz incidente por meio da formao de pares de eltrons-vacncias. A partir do momento em que uma voltagem aplicada a um diodo pn o dito caracterizado como um diodo que est reversamente polarizado. Detectores com arranjos de diodos: O espectrofotmetro de arranjo de diodos emprega um sistema de ptica reversa, pois a rede de difrao colocada entre a amostra e o detector e no entre a fonte de radiao e a amostra. Possui como vantagens, possibilitar ao espectrofotmetro PDA (arranjos de fotodiodos) tanto adquirir um espectro sem distores como medir os comprimentos de onda com alta repetio, pois o tempo de varredura no determinado pelo movimento da rede de difrao e a repetibilidade limitada apenas pela geometria do detector, respectivamente.

O detector de arranjo de fotodiodos consiste em um circuito integrado nico que possui um sensor de radiao, um elemento de armazenamento de carga e um elemento de leitura. O arranjo de diodos fabricado em um nico cristal de silcio, onde cada diodo atua como transdutor de intensidade luminosa/carga eltrica e como elemento de armazenamento de carga. Com um ou dois arranjos de diodos colocados ao longo da extenso do plano focal de um monocromador, todos os comprimentos de onda podem ser monitorados simultaneamente, tornando possvel a espectroscopia de alta velocidade. Os arranjos de fotodiodos podem ser tambm obtidos comercialmente com dispositivos chamados intensificadores de imagem, que so dispositivos que os precedem para prover ganho e permitir a deteco de baixos nveis de luz. Dispositivos de Transferncia de Carga: o desempenho dos detectores de dispositivos de transferncia de carga (DTC) parecem se aproximar daquelas dos tubos fotomultiplicadores com a vantagem adicional de serem multicanais, por conta dissso, esse tipo de detector tem sido encontrado em nmero crescente nos instrumentos espectroscpicos modernos. Uma vantagem dos detectores de transferncia de carga que so bidimensionais no sentido de que seus elementos detectores individuais so arranjados em linhas e colunas, e com isso, com esse dispositivo, torna-se possvel registrar um espectro bidimensional completo. Integram o sinal informativo quando a radiao os atinge. Neste caso, o pixel consiste em dois eletrodos condutivos recobrindo uma camada isolante de slica. Essa camada de slica separa os eletrodos de uma regio de silcio dopado tipo n. Essa estrutura constitui um capacitor de xido metlico semicondutor, o qual armazena as cargas formadas quando a radiao atinge o silcio dopado. Quando, uma carga negativa aplicada aos eletrodos, uma regio de inverso de carga criada entre os eletrodos, a qual energeticamente favorvel para o armazenamento das vacncias positivas. As

vacncias mveis criadas pela absoro de ftons pelo silcio ento migram e so coletadas nessa regio. A quantidade de carga gerada durante a exposio radiao medida de uma das duas formas possveis. Em um detector de dispositivo de injeo de carga (CID), a variao de voltagem que surge do movimento da carga da regio sob um eletrodo para a regio sob o outro medida. Em um detector de dispositivo de acoplamento de carga (CCD), a carga movida para um amplificador sensvel carga para medida. Alm das aplicaes espectroscpicas, os dispositivos de transferncia de carga encontram aplicaes amplamente disseminadas em cmaras de televiso de estado slido e em microscopia.

Detectores trmicos: os detectores trmicos so utilizados para medir a radiao infravermelha. Porm o desempenho dos detectores trmicos inferior ao dos fototubos, diodos de silcio, tubos fotomultiplicadores e clulas fotovoltaicas. Alm de absorver radiao infravermelha, ele consiste de um detector que possui superfcie pequena enegrecida e que aumenta sua temperatura. A partir disso, o aumento da temperatura convertido num sinal eltrico que ser amplificado e medido. Como a energia trmica medida a partir dessa energia do ambiente, ela acaba por ser incerta.Por conta disso, esse tipo de medio menos precisa que a ultravioleta e no visvel. Um bolmetro um elemento condutor que sofre variao de acordo com a temperatura. Um detector pneumtico uma pequena cmara cilndrica abundante em xennio, contendo uma membrana enegrecida suficiente para absorver a radiao infravermelha e aquecer o gs. Uma das extremidades do cilindro vedada com um diafragma flexvel para que este venha a se mexer para dentro ou para fora medida que a presso do gs sofre variao.

Os detectores pirolticos no feitos com cristais de materiais pirolticos, como o caso do tinato de brio ou sulfato de triglicina. A partir do momento em que um cristal deste interposto entre um par de eletrodos, ocorre o desenvolvimento de uma voltagem dependente da temperatura, a partir da interposio dos eletrodos. Processador e Dispositivo de Leitura O processador tem a capacidade recebe o sinal eltrico que provm do detector, amplificando e alterando o sinal (caso necessrio), e tambm pode filtr-lo para remover os componentes indesejados. O processador de sinal pode tambm ser solicitado a efetuar operaes matemticas sobre o sinal, tais como diferenciao, integrao ou converso logartmica. Desta forma, o dispositivo de leitura mostra um nmero correspondente intensidade da banda espectral isolada, a absorbncia ou transmitncia. Para se obter uma leitura da porcentagem de transmitncia adequada, necessrio que o dispositivo seja inicialmente zerado com o compartimento da amostra vazio para evitar que alguma radiao atinja o detector. Esse processo denominado de calibrao a 0% T ou ajuste de 0% de T. Em seguida uma clula contendo o branco (geralmente o solvente) ento inserida no compartimento de medida e o mostrador levado a ler 100% de T ajustando-se a posio da abertura de controle de luminosidade e, portanto, a quantidade de luz que atinge o detector. Esse ajuste chamado de calibrao a 100 % T ou ajuste 100% de T. E por fim, a mostra colocada no compartimento e a porcentagem de transmitncia ou absorbncia lida diretamente no mostrador. Atualmente muitos tipos de dispositivos de leitura so encontrados em instrumentos modernos. So alguns exemplos: os mostradores digitais, escalas de potencimetros, registradores, tubos de raios catdicos e os monitores de microcomputadores. Aplicaes

Os mtodos instrumentais de determinao do analito so aplicados principalmente no controle da qualidade, como por exemplo, de matria- prima, dos processos durante a industrializao e at mesmo do produto pronto. So usados tambm no diagnstico de problemas ambientais e acompanhamento peridico destes; e no desenvolvimento de novos materiais para melhorar qualidade de vida, do ambiente, etc. A espectrofotometria especificamente, como supracitado, baseia-se na absoro ou emisso de radiao eletromagntica, ou seja, quando os eltrons movimentam-se entre os nveis energticos. A absoro ocorrida por molculas denominada Espectrofotometria de Absoro Molecular e estende desde o ultravioleta ao infravermelho. Em se tratando de uma regio mais especifica, a ultravioleta-visvel, a espectrofotometria aplicada na determinao de compostos orgnicos e inorgnicos, por exemplo, na identificao de frmacos, na indstria de alimentos para fazer controles e outras diversas reas. Isso porque a Espectrofotometria de Absoro Molecular identifica grupos funcionais da molcula e consegue identificar compostos contendo grupos absorventes.

Referncias Bibliogrficas Espectrofotmetros UVvisvel. http://www.analiticaweb.com.br/

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