Evaluacin del Efecto Hipolipemiante del Limn (Citrus limon)

Yasmin Khan, Rafeeq Alam Khan*, Syeda Afroz y Afshan Siddiq*

Tendencias

El presente estudio fue especialmente diseado para investigar los efectos hipolipidmicos del jugo de limn en conejos despus de una dieta alta en colesterol por 4 semanas
Introduccin

El colesterol es un esterol anfiptico, hidroflico en la terminacin hidroxi con una cadena de hidrocarburo hidrofbico los cuales se pueden incorporar a las bicapas de la membrana. Como es un compuesto esencial de la estructura de la membrana celular, el colesterol determina la organizacin de los lpidos en la membrana y la integridad estructural (Goldstein et al., 2006; Ikonen, 2006). La hipercolesterolemia se caracteriza por los niveles altos de colesterol en sangre. No es una enfermedad sino un desarreglo metablico que puede contribuir a muchas enfermedades, principalmente enfermedades cardiovasculares. Se relaciona con los trminos de hiperlipidemia e hiperlipoproteinemia. El colesterol elevado en la sangre se debe a anormalidades en los niveles de lipoprotenas, las partculas que transportan el colesterol en el torrente sanguneo. Esto puede estar relacionado con la dieta, factores genticos (como mutaciones en los receptores LDL en hipercolesterolemia familiar) y la presencia de otras enfermedades como la diabetes y una tiroides poco activa (Durrington et al, 2003). La hipercolesterolemia es un desorden silencioso que generalmente se diagnostica despus de un ataque cardiaco o una embolia. Las enfermedades cardiovasculares se han convertido en el principal problema clnico y de salud pblica en pases del sur de Asia, especficamente India, Pakistan, Srilanka, Bangladesh y Nepal. Estas poblaciones tienen un mayor riesgo an si migran a otros pases (Iqbal et al., 2005). El programa nacional de educacin del
*Departmento de Farmacologa, Facultad de Farmacia Universidad de Karachi, Karachi, Pakistan.

colesterol (NCEP) public una gua en 1993 para evaluar y tratar la hiperlipidemia (Eric et al., 2002). El programa NCEP incluye cambios teraputicos en el estilo de vida como reducir el consumo de grasas saturadas a <7% del total de caloras y < 200mg/da de colesterol. Un 25 a 35% de consumo diario de grasas proporciona bajos niveles de grasas saturadas y grasas trans al cuerpo. Las opciones teraputicas para reducir el LDL tambin incluye el uso de 2mg/da de esteroides vegetales, y un aumento en el consumo de fibra viscosa (fibra soluble) de unos 10-25 g/da. Tambin el ejercicio y modificaciones en el estilo de vida son beneficiosos. Por otra parte, la mayora de los medicamentos alopticos son txicos y generan radicales libres en el cuerpo (Beldeu,2006). Este estudio fue diseado especialmente para investigar el efecto hipolipemiante del limn con efectos secundarios mnimos.

Materiales y Mtodos Seleccin de Animales

El estudio se realiz en 18 conejos blancos saludables de ambos sexos con un peso de entre 1000 y 1500 gr. Los conejos se seleccionaron como animales experimentales ya que los cambios bioqumicos producidos en conejos son comparablemente similares a los que se observan en humanos (Irene et al., 1979). Por otra parte se pueden recolectar fcilmente cantidades suficientes de muestras de sangre, son fciles de manejar y econmicos.

Grupos de Animales
Los animales se dividieron en dos grupos: el control y con tratamiento, cada uno con 9 animales. Se monito-

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Foto: Wall Paper Dojo

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re la salud aparente de estos animales durante el periodo de acondicionamiento en el ambiente de laboratorio por una semana antes de que se administrara el medicamento, observando especficamente prdida de pelo, diarrea, hematuria, ulceracin de piel y disminucin de actividad. Se ubicaron individualmente en jaulas, con condiciones controladas de temperatura 23+2C. Se les proporcion una diete y agua ad libitum.

Los animales tratados con limn (1ml/kg) despus de la HCD no mostraron intoxicaciones. Sin embargo hubo prdida de peso de 30 a 100 gr durante el periodo total del estudio. Sin embargo al final del estudio hubo un decremento de 53 gr en el peso promedio.

ndice de Mortalidad
La tabla 1 revela el ndice de mortalidad de los animales que se mantuvieron bajo una HCD por 30 das, los animales tratados con limn y control por 45 das. Se observaron muertes en animales con HCD durante la 2a y 3a semana de tratamiento. Sin embargo no hubo muertes en los animales control y grupos bajo tratamiento.

Dosificacin
Los animales de ambos grupos recibieron una dieta alta en colesterol (HCD) durante un periodo de 30 das, por ej., con 0.125 g/kg de colesterol (Merck) en aceite de maz al 0.5% adquirido en un supermercado local. Despus de 30 das se les administr oralmente a los animales del grupo bajo tratamiento, jugo de limn fresco durante 30 das en una dosis de 1 ml/kg durante la primera fase del estudio, mientras que a los animales del grupo control se les administr agua bajo una ruta equivalente al del volumen de las respectivas dosis, de acuerdo a su peso corporal. Durante la segunda fase del estudio, a los animales bajo tratamiento se les continu administrando jugo de limn hasta los 45 das y se compararon con el grupo control para el mismo periodo.

No. de decesos de animales/total de animales (porcentaje)

Anlisis Bioqumico
Se recolectaron muestras de suero al final del tratamiento para evaluar el perfil lipdico usando un kit de reactivos estndar de Human Germany. Todos los valores se expresaron como promedio y la desviacin estndar del promedio. Se realiz la prueba Student y se observaron los valores de P. Los valores de P<0.05 se consideraron como significativos y los P<0.005 como muy significativos. Los procedimientos estadsticos se realizaron de acuerdo al mtodo de Alcaraz y Jimnez (1989).

Recoleccin de muestras
Se recolectaron muestras de sangre de 5 ml por triplicado, primero despus de 30 das de HCD y despus otra vez despus de 30 y 45 das de tratar con jugo de limn; se extrajeron de la vena del odo de los animales en tubos de gel para evaluar el perfil lipdico.

Respuestas a Intoxicacin
Se observaron las respuestas a intoxicacin como ulceracin en piel, variacin del peso promedio, hematuria, alopecia, prdida de actividad, diarrea, salivacin, comportamiento agresivo y color de piel en diferentes grupos de animales durante el tiempo total del experimento. Los animales del grupo control no mostraron intoxicacin, pero hubo una aumento en general de peso en los animales control de 15 a 35 gramos, sin embargo, los animales con HCD mostraron comparativamente un aumento mayor en el peso de los animales de 25 a 260 gr durante el periodo total del experimento excepto en la segunda semana, en donde hubo una disminucin de peso de 75 gr. Los animales con HCD mostraron una intoxicacin ligera, como piel amarilla, alopecia (especialmente en el cuello y pies), orina amarilla con un pH cido y prdida de actividad que se pudo deber a la diarrea severa.

Resultados
La tabla 2 muestra los efectos comparativos del limn sobre el colesterol, triglicridos, LDL y HDL a una dosis de 1ml/kg de limn durante 30 y 45 das respectivamente en animales que recibieron una dieta alta en colesterol durante 30 das. Despus de 30 das los animales mostraron una disminucin muy significativa de colesterol 150.8+19.1mg/dl en comparacin con los animales control, p. ej., 345.3+ 28 mg/dl. Mientras que a los 45 das el decremento en colesterol continu hasta la sifra de 16.9+ 2.8 ml/dl en comparacin con el valor de los animales control, p.ej., 232.6+9.0 mg/dl. Similarmente se observ una disminucin muy significativa en la concentracin de LDL despus de 30 das p. ej., 122.6+13 mg/dl en comparacin con los animales control p.ej., 273+ 38 mg/dl. La disminucin en los niveles de colesterol y LDL persisti an despus de 45 das. As la concentracin de HDL aumentaba significativamente

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despus de 30 das p.ej., 7.27+1.7 mg/dl comparado con el control p.ej., 3.07+0.26 mg/dl. Sin embargo, el aumento en los niveles de HDL resultaron no significativos despus de 45 das p.ej., 2.15+0.31 mg/dl en comparacin con el control p.ej., 2.1+ 0.32 mg/dl. La disminucin en triglicridos no fue significativo despus de 30 das en comparacin con los animales control. Sin embargo se observ un aumento significativo en los niveles de triglicridos despus de 45 das p.ej., 26.69+ 1.4mg/dl en comparacin con el control 40.3+3.5mg/dl. La tabla 3 muestra el % de reduccin de colesterol, triglicridos, LDL y HDL a una dosis de 1ml/kg de limn por 30 y 45 das respectivamente en animales que recibieron una dieta alta en colesterol por 30 das.

Discusin
Las hierbas se han utilizado para tratamientos mdicos desde el comienzo de la civilizacin y algunos derivados (ej., aspirina, reserpina y digitalis) se han convertido en pilares de la farmacologa humana. Las hierbas se han usado para varias enfermedades cardiovasculares, como la insuficiencia cardiaca congestiva, hipertensin, angina de pecho, artereoesclerosis, arritmia e insuficiencia cerebral. Sin embargo, muchos remedios herbales que se utilizan actualmente no han sido objeto de una evaluacin farmacolgica detallada, y algunos tienen el potencial de causar serios efectos txicos y mayor interaccin entre medicamentos. La alta prevalencia al uso de la herbolrea en la prctica mdica actual en el mundo ha incrementado las

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dudas sobre la seguridad y eficacia de las medicinas a base de hierbas para enfermedades cardiacas y los mdicos deben estar informados de sus daos y beneficios. Es necesario continuar con estas investigaciones para esclarecer la actividad farmacolgica de los remedios herbales que se estn utilizando en la actualidad para tratar enfermedades cardiovasculares (Nick et al., 1998). Las frutas, vegetales y sus compuestos producen efectos potentes en el sistema biolgico humano (Lampe, 1990). Los efectos de disminuir el colesterol de los vegetales, frutas y sus compuestos se han examinado en detalle. Las dosis diarias para que estos alimentos muestren el efecto de bajar el colesterol en humanos se ha reportado como sigue; vegetales varios (750g/da) y manzanas frescas (350-400g/ da), guayaba(0.5-1kg/da), ajo(10-20g/da) con una dieta baja en grasa combinada con vegetales, protenas (33g/da) y fibra soluble (18g/da)(Lampe, 1990; Jenkins, 1999). La artereoesclerosis es la principal causa de enfermedad cardiaca y embolias. Por lo tanto, el contenido de grasa en sangre es probablemente el principal determinante para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Varios autores reportaron los efectos hipolipidmicos del jugo de limn (Monforte, 1995; Gorinstein, 2004) adems, algunos estudios sugieren que el alto consumo de jugo de naranja o uva puede reducir la hipercolesterolemia postulando que en gran medida se deba a las principales flavanonas de los ctricos, la hesperidina de la naranja y narangina de la toronja, como sus glicsidos de hesperidina y naringina (Kurowska, 2000).

El presente estudio fue especialmente diseado para investigar los efectos hipolipidmicos del jugo de limn en conejos despus de una dieta alta en colesterol por 4 semanas. El limn contiene componentes naturales importantes, incluyendo el cido ctrico, el cido ascrbico, minerales y flavonoides (Benavente et al, 1997) por lo que se ha relacionado al limn con propiedades saludables asociadas con su contenido de vitamina C, pero recientemente los flavonoides tambin han demostrado jugar un papel en este respecto. Algunos investigadores sugieren que los flavonoides tienen diferentes funciones biolgicas como antioxidante, anti-inflamatorio, antialergnico, antiviral, antiproliferativo, antimutagnico y anticarcinognico (Middleton & Kandaswami, 1986; Godeberg, 1994, Meyer, 1994 y Rice, 1997). El jugo de limn (1ml/kg/da) produjo una reduccin significativa del colesterol, triglicridos, niveles de lipoprotenas de baja densidad en suero (Figuras 1 y 2). Estos resultados sugieren que el efecto hipocolesterolmico del jugo de limn se puede deber a su efecto antioxidante ya que estudios previos han sugerido que la administracin del antioxidante (vitamina C) en ratas hipocolesterolmicas mejoraba la funcin endotelial de los vasos coronarios y perifricos (Henry et al., 1997). Es ampliamente aceptado que las elevaciones de los niveles de colesterol y LDL en plasma son factores determinantes en las enfermedades coronarias. Se ha relacionado la artereoesclerosis con niveles altos de LDL. Esto se debe a que el LDL en sangre se deposita en las paredes de los vasos sanguneos

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y se convierte en el principal componente de las placas arteroesclerticas. Estudios sugieren que el proceso patolgico podra invertirse al reducir los niveles de LDL en suero (Ross, 1993). Ya que el jugo de limn redujo significativamente los niveles de colesterol y LDL, se puede concluir que el limn podra prevenir la arteroesclerosis. Adems aumenta significativamente los niveles de HDL, considerado colesterol bueno en suero (Stein 1999). El aumento de HDL ha demostrado disminuir el proceso de arteroesclerosis (Nofer, 2002). Por tanto, se puede concluir que el jugo de limn se

puede considerar como un suplemento valioso para prevenir enfermedades coronarias.

Traduccin: I.A. Violeta Morales V. Fuente: Journal of Basic and Applied Sciences Vol. 6, No. 1. 39-43.

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