Replicao: O Sentido da Sntese do DNA

A replicao semi-conservativa do DNA exige que duas cadeias polinucleotdicas que formam a hlice do DNA se separem, de modo a expor as bases que iro orientar o emparelhamento dos nucleotdeos para formao das novas cadeias complementares s cadeias moldes. A separao de duas cadeias da hlice do DNA ocorre medida que as novas cadeias vo sendo sintetizadas. A regio de separao das cadeias tem a forma de uma letra Y e denominada forquilha de replicao.

A sntese semidescontnua do DNA

Os experimentos mostraram que ambas as cadeias filhas so sintetizadas na forquilha de replicao por um complexo de enzimas que inclui a polimerase III do DNA. Como, no entanto, as duas cadeias moldes so antiparalelas, em uma delas a sntese da cadeia complementar ocorre no sentido 5 => 3, mas na outra cadeia essa sntese teria que se dar no sentido inverso, ou seja, 3 => 5. No entanto, as duas cadeias so sintetizadas pela polimerase III do DNA, que s catalisa o crescimento da cadeia no sentido 5 => 3. A explicao para esse paradoxo que, na forquilha de replicao, uma das cadeias sintetizada continuamente por uma polimerase que se move no mesmo sentido do deslocamento da forquilha. J a cadeia com polaridade inversa sintetizada no sentido inverso ao do deslocamento da forquilha de replicao, portanto, tambm no sentido 5 => 3. Isso possvel porque, nesse ltimo caso, a polimeraze sintetiza segmentos polinucleotdicos curtos, que so, posteriormente, unidos para formar a nova cadeia contnua. Na figura abaixo podemos ver as duas cadeias sendo sintetizadas no sentido 5 => 3.

Figura 1 -Replicao do DNA. Ambas as cadeias so sintetizadas no sentido 5 => 3. A cadeia leading sintetizada continuamente, enquanto a cadeia lagging sintetizada

descontinuamente. Modificada a partir de http://www.blc.arizona.edu/Marty/181/181Lectures/Figures/POHS_Figures/Chap11/Fig 11_16.gif A cadeia que cresce no mesmo sentido que o deslocamento da forquilha de replicao, e cuja sntese ocorre continuamente, chamada de cadeia leading, conforme pode ser visto na figura 1 acima. A cadeia que cresce no sentido oposto ao deslocamento da forquilha de replicao, e cuja sntese ocorre descontinuamente, chamada de cadeia lagging. Esse modo de replicao do DNA, em que uma das cadeias sintetizada continuamente e a outra, descontinuamente, chamado de sntese semidescontnua. Costuma-se dizer tambm qua a sntese do DNA na forquilha de replicao assimtrica, pois em uma das cadeias (cadeia leading) ela ocorre continuamente, enquanto que na outra (cadeia lagging) ela ocorre de modo descontnuo, em fragmentos. Esses fragmentos so denominados fragmentos de Okazaki e podem ser vistos na figura 1 acima.

A descoberta dos fragmentos de Okazaki

A hiptese da sntese descontnua da cadeia lagging foi corroborada por um experimento realizado pelo pesquisador Reiji Okazaki1, no final da dcada de 1960. Okazaki forneceu, a bacterias em diviso, timina tritiada, isto , um desoxirribonucleotdeo com a base timina (=timidina) marcado com tomos de trtio (um istopo radioativo do hidrognio). Esse precursor do DNA, altamente radioativo, foi deixado em contato com as bactrias por apenas alguns segundos, de modo que somente o DNA recm-sintetizado, ou seja, aquele imediatamente aps a forquilha de replicao, se tornasse radioativo. O DNA foi ento isolado e analisado, mostrando que parte da radioatividade estava contida em fragmentos de cadeias polinucleotdicas, com cerca de mil a dois mil nucleotdeos. Quanto maior fosse o tempo de contato das bactrias com o precursor radioativo maior era quantidade de radioatividade em cadeias de DNA de grande tamanho. A concluso foi que os nucleotdeos eram primeiramente polimerizados em fragmentos de mil a dois mil nucleotdeos, os quais eram, em seguida, reunidos para formar cadeias longas. Esses pequenos pedaos de DNA que aparecem transitoriamente durante a sntese da cadeia lagging foram denominados fragmentos de Okazaki.