3.

MUTACIN DE GENES

Como se mencion anteriormente, un alimento transgnico es aquel alimento obtenido a partir de un organismo modificado por ingeniera gentica. Dicho de otra forma, es aquel alimento obtenido de un organismo al cual le han incorporado genes de otras especies para producir una caracterstica deseada. Un ejemplo sera tomar los genes de un pescado que le permitan resistir al fro e incorporarlos a un tomate.

Los alimentos transgnicos pueden lograrse de dos maneras: Introduciendo un gen de otra especie por medio de la ingeniera gentica. Cambiando la expresin de genes propios sin introducir ADN de otra especie. El hombre lleva varios miles de aos modificando los vegetales que utiliza como alimento. Tal es el caso de muchas frutas que son productos de mezclas de diferentes plantas. Sin embargo, la ingeniera gentica permite ahora llevar a cabo en pocos aos y en forma controlada modificaciones que antes costaban dcadas de trabajo.

El proceso para la obtencin de Alimentos transgnesis Transgnicos que es la la

significa

introduccin de ADN exgeno en el genotipo de un animal es una herramienta importante tanto para la agricultura, como para la

farmacologa, la biomedicina y la biotecnologa. Una gran variedad de mtodos han sido desarrollados para introducir ADN, entre ellos la inyeccin de ADN en embriones y la transfixin de clulas somticas seguidas del transplante nuclear o clonacin.

Con esta tcnica pueden integrarse fragmentos de DNA en el genoma de una clula u organismo para generar, por ejemplo, animales transgnicos, que expresen o carezcan de la expresin de un determinado gen. 3.1 INGENIERIA GENTICA

Ingeniera gentica es una parte de la biotecnologa que se basa en la manipulacin gentica de organismos con un propsito predeterminado, aprovechable por el hombre: se trata de aislar el gen que produce la sustancia e introducirlo en otro ser vivo que sea ms sencillo de manipular. Lo que se consigue es modificar las caractersticas hereditarias de un organismo de una forma dirigida por el hombre, alterando su material gentico. El proceso puede utilizarse ya en bacterias y en clulas eucariotas vegetales o animales. Una vez adicionada o modificada la carga cromosmica, el organismo en cuestin sintetiza la protena deseada y el aumento del rendimiento de la produccin puede obtenerse mediante el aumento en la poblacin portadora. Las bases de la ingeniera gentica han consistido en resolver el problema de la localizacin e insercin de genes y la multiplicacin redituable de las factoras logradas. Las tcnicas utilizadas por la ingeniera gentica son varias, y cada una atiende un aspecto de la tarea de preparacin y solucin de los problemas especficos de esta tecnologa, sin embargo muchas de ellas ha tenido xito en otros campos tecno cientficos.

3.1.1 Gel-electroforesis El problema de encontrar, separar y analizar los fragmentos de ADN correspondiente a un gen especfico se logr resolver sobre la base de los estudios de Linus Pauling que demostraron que las molculas migran a distintas velocidades hacia los polos magnticos: se colocan porciones de ADN sobre un gel de agarosa2 y se les permite que migren hacia los polos del campo magntico. Permite separar especies qumicas (cidos nucleicos o protenas) a lo largo de un campo elctrico en funcin de su tamao y de su carga elctrica. Los cidos nucleicos, ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa.

Si ponemos fragmentos del ADN extrado de una muestra biolgica sobre un soporte poroso (gel) y aplicamos un campo elctrico, se producir la migracin diferencial de los fragmentos a travs de los poros de la matriz. La tincin del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en la molcula de ADN, y la exposicin con luz ultravioleta, permite observar el resultado de sta migracin. El tamao de los fragmentos de ADN se puede estimar comparndolos con el patrn de bandas que se obtiene de marcadores comerciales de peso molecular conocido. La electroforesis de ADN es til para comparar patrones de bandas de diferentes muestras biolgicas. As por ejemplo se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo, para la identificacin de cidos nucleicos de agentes infecciosos o para la obtencin de un fragmento determinado de ADN que, una vez localizado en el gel, puede ser extrado para anlisis posteriores.

3.1.2 ADN recombinante Esta tcnica permite aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulacin e insercin en otro diferente. De esta manera podemos hacer que un organismo animal, vegetal, bacteria, hongo, o un virus, produzcan una protena que le sea totalmente extraa. Se emplea normalmente para la produccin de protenas en gran escala, ya que podemos hacer que una bacteria produzca una protena humana y lograr una superproduccin De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano y se lo "pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula la fabricacin de insulina, lo que haramos al ponrselo a una bacteria es "obligar" a sta a que fabrique la insulina. Esta tecnologa nos permite obtener fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas, que llevar adems el gen o los genes que se desee. Este ADN puede incorporarse a las clulas de otros organismos (vegetales, animales, bacterias...) en los que se podr "expresar" la informacin de dichos genes. (De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano y se lo "pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula la fabricacin de insulina, lo que haramos al ponrselo a una bacteria es "obligar" a

sta a que fabrique la insulina. Por lo tanto en la tecnologa del ADN recombinante podemos diferenciar cuatro etapas bsicas:

1. Corte especfico del ADN en fragmentos pequeos y manejables mediante la utilizacin de un tipo de enzimas conocidas como enzimas de restriccin que pueden considerarse como las "tijeras moleculares". Estas enzimas se aislaron en bacterias y se identifican con distintos nombres, siendo lo caracterstico de ellas estos dos principios:
o

Cada enzima de restriccin reconoce una secuencia especfica de nucletidos y

corta en ese punto cada una de las cadenas de ADN.

o

Los extremos libres que quedan se llaman extremos pegajosos, porque pueden

unirse a otros fragmentos de ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de restriccin. El desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante fue posible gracias a varias lneas de investigacin: El conocimiento de las enzimas de restriccin. La replicacin y reparacin de ADN. La replicacin de virus y plsmidos. La sntesis qumica de secuencias de nucletidos.

3.1.3 Vectores Cuando se pretende que las factoras biotecnolgicas (o una clula) produzca un material especfico, debe drsele la orden especfica, esto es proveerle de los genes necesarios. Para ello se debe agregar a su ADN natural un complemento gnico (previamente determinado y aislado), lo que es posible por medio de un vector o transportador. Estos vectores permiten obtener mltiples copias de un trozo especfico de ADN, lo que proporciona una gran cantidad de material fiable con el que trabajar. El proceso de transformacin de una porcin de ADN en un vector se denomina clonacin.

3.1.4 Tcnica de la PCR Tambin existen mtodos para amplificar una determinada secuencia o fragmento de ADN. La ms conocida es la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa PCR. As se consigue multiplicar un

determinado fragmento de ADN millones de veces para poder tener una para

cantidad

suficiente

estudiarlo. Sin esta tcnica seran imposibles los

estudios de ADN para el reconocimiento de la

paternidad o en caso de delito, pues la cantidad de ADN presente en las

clulas es tan pequea, del orden de picogramos5, que se necesitara una gran cantidad de material celular para tener una cantidad apreciable de ADN. La tecnologa de la PCR cuantitativa en tiempo real combina el mtodo de amplificacin con la utilizacin de sondas especficas marcadas fluorescentemente y encebadores para poder monitorizar el proceso de amplificacin PCR de un segmento especfico de DNA de inters. El termociclador tiene capacidad de incidir sobre cada muestra un haz de luz de una longitud de onda determinada y detectar la fluorescencia emitida por el fluorocromo excitado. Se puede hacer una cuantificacin absoluta o relativa de DNA o RNA, determinar polimorfismos de cambio de base SNP, expresin gnica y deteccin de GMO.

TRANSGNESIS EN ANIMALES: La transgnesis se puede definir como la introduccin de ADN extrao en un genoma, de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y afecte a todas las clulas en los organismos multicelulares. Generalmente, en animales, el ADN extrao, llamado transgen, se introduce en zigotos, y los embriones que hayan integrado el ADN extrao en su

genoma, previamente a la primera divisin , producirn un organismo transgnico; de modo que el transgn pasar a las siguientes generaciones a travs de la linea germinal (gametos). Entre las aplicaciones de los animales transgnicos se pueden destacar:

La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario y su regulacin.

Manipular de forma especfica la expresin gnica in vivo. Estudiar la funcin de genes especficos. Poder utilizar a mamferos como biorreactores para la produccin de proteinas humanas.

La correccin de errores innatos de metabolismo mediante terapia gnica.

La transgnesis puede efectuarse siguiendo dos estrategias distintas: 1. Transgnesis por microinyeccin de zigotos Desde que en 1982 se obtuviera un ratn transgnico, la produccin de animales transgnicas es cada vez ms cotidiana, existiendo ya animales transgnicos de las siguientes especies: ratn, rata, conejo, cerdo, vaca, cabra y oveja.

La tcnica se realiza, fundamentalmente por microinyeccin y se realiza de la siguiente forma:

o

En la primera fase, se aislan un nmero grande de vulos fertilizados. Se consigue sometiendo a las hembras a un tratamiento hormonal para provocar una superovulacin.

La fertilizacin puede hacerse in vitro o in vivo.

o

En la segunda fase, los zigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin que contiene ADN.

En la tercera fase, estos vulos son reimplantados en hembras que actuarn como nodrizas permitiendo la gestacin hasta trmino.

Por ltimo, tras el destete de los recin nacidos, stos se chequean, para ver si ha ocurrido la incorporacin del transgn.

2. Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias. Una estrategia ms poderosa para la transgnesis implica la introduccin de ADN extrao en clulas embrionarias totipotentes(clulas ES) o clulas embrionarias madres (clulas EM).

Estas clulas se toman del interior de la blstula en desarrollo y se pasan a un medio donde se tratan con distintos productos con lo que se conseguir que las clulas no se diferencien, y se mantiene su estado embrionario.

El

ADN

extrao

se

introduce

en

las

clulas

ES

mediante

diversas

tcnicas,posteriormente las clulas transfectadas son reintroducidas en una blstula y sta reimplantada en una hembra.

Con esta tcnica los neonatos son quimeras ; pero mediante el cruce de stas se consiguen animales transgnicos con aquellas quimeras que hayan incorporado el transgn en su linea germinal Cuando la integracin del transgn ocurre despus de la primera divisin celular, el animal es quimrico, lo que quiere decir que las clulas de su cuerpo tienen diferentes caractersticas, segn tengan o no el transgn, as en la "ovecabra" quimera entre oveja y cabra, las clulas de su piel, unas producan lana y otras pelo