1 BIODEGRADAO DE EFLUENTE DE TERMINAIS TERRESTRES DE DISTRIBUIO COMBUSTVEIS ELIZNGELA MAIA E S1, VICELMA LUIZ CARDOSO2

RESUMO: Neste estudo foram utilizadas uma cultura mista (C1) e trs culturas puras: Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa PATC. A cultura C1 foi obtida de um lago com histrico de contaminao de petrleo. O experimento foi incubado durante 42 dias a temperatura de 30 1oC e agitao de 150 rpm. A cada 48 horas, em cmara assptica, foi realizada aerao do meio com agitao manual. Para cada condio estudada foram utilizados reatores em triplicata. Os resultados mostraram que todas as culturas foram capazes de crescer e degradar os contaminantes, mas as culturas que apresentaram melhores resultados ao final do processo foram as culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e a cultura mista C1, com os seguintes valores de concentrao celular e remoo de hidrocarbonetos de petrleo (TPH), nesta ordem: 3,6 (g/L) e 77,8% e 4,06 (g/L) e 80,4%, respectivamente. O modelo no estruturado utilizado para o crescimento foi o descrito por Verhulst e Pearl. A degradao dos combustveis foi descrita pela equao proposta por Ledeking Piret. Os valores obtidos para as velocidades especficas mximas de crescimento mostraram-se muito prximas com 0,901, 0,903, 0,900 e 1,088 d-1 para as culturas Pseudomonas aeruginosa PATC, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e cultura mista C1 e os valores de rendimento (Yx/s) so 0,425, 0,407, 0,471 e 0,505, respectivamente.

Palavras chave: leo diesel,gasolina, biodegradao, modelo cintico

(1) Bolsista, (2) Orientadora

2 ABSTRACT: In this study were used pure and mixed cultures, being they: Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa PATC and mixed named C1. The culture C1 was obtained from lake with a history of petroleum contamination. The experiments carried out during 42 days the temperature of 30 1C and agitation of 150 rpm. At every 48 h was carried aeration under a laminar flow hood with manual agitation. For each condition studied were used reactors in three sets. The results showed that all the cultures were capable to grow and degrade the contaminantes, but the cultures that presented better resulted in the end of the process were the Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 and mixed C1 cultures, with the following values of cellular concentration and TPH removal, in this order: 3,6 (g/L) and 77,8 % and 4,06 (g/L) and 80,4%, respectively. The model not structuralized used for the growth was described for Verhulst and the Pearl. The degradation of fuels was described for the equation proposal for Ledeking Piret. The values obtained for the maximum specific speeds of growth revealed very next with; 0,901, 0,903, 0,900 and 1,088 d-1 for the Pseudomonas aeruginosa PATC, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 and mixed C1 cultures and the values of the income (Yx/s) were 0,425, 0,407, 0.471 and 0,505, respectively.

Keywords: oil diesel, gasoline, biodegradation, kinetic model.

Faculdade de Engenharia Qumica, Universidade Federal de Uberlndia. Caixa Postal 593, CEP - 38400-902, Uberlndia Minas Gerais. e-mail: elizangelamai@yahoo.com.br, vicelma@ufu.br

3 1-INTRODUO O petrleo no estado lquido uma substncia oleosa, inflamvel, menos densa que a gua, com cheiro caracterstico e cor variando entre o negro e o castanho-claro (TRIGGIA, et al., 2001). Embora objeto de muitas discusses no passado, hoje tem-se como certa a sua origem orgnica, sendo uma combinao de molculas de carbono e hidrognio. Admite-se que esta origem esteja ligada decomposio dos seres que compem o plncton - organismos em suspenso nas guas doces ou salgadas tais como protozorios, celenterados e outros - causada pela pouca oxigenao e pela ao de bactrias. Estes seres decompostos foram, ao longo de milhes de anos, se acumulando no fundo dos mares e dos lagos, sendo pressionados pelos movimentos da crosta terrestre e transformaram-se na substncia oleosa que o petrleo. Ao contrrio do que se pensa o petrleo no permanece na rocha que foi gerado - a rocha matriz - mas desloca-se at encontrar um terreno apropriado para se concentrar. Estes terrenos so denominados bacias sedimentares, formadas por camadas ou lenis porosos de areia, arenitos ou calcrios. O petrleo aloja-se ali, ocupando os poros rochosos como forma "lagos". Ele acumula-se, formando jazidas. Ali so encontrados o gs natural, na parte mais alta, e petrleo e gua nas mais baixas (CEPETRO, 2007). O petrleo ainda na sua maioria, aproximadamente 90%, utilizado como fonte de energia e combustvel. O petrleo a principal fonte energtica do mundo, e assim continuar at que tenham exaurido as reservas mundiais (PETROBRS, 2002). A contaminao do ambiente com substncias txicas e perigosas um dos maiores problemas enfrentados pelo mundo de hoje. Pelo fato dos campos petrolferos no serem localizados, necessariamente, prximos dos terminais e refinarias de leo e gs, necessrio o transporte da produo atravs de embarcaes, caminhes, vages, ou tubulaes (oleodutos e gasodutos) (CEPETRO, 2007). Vazamentos e derrames acidentais so ocorrncias freqentes durante a explorao, produo, refinamento, transporte e estocagem de petrleo e seus derivados. E a composio destes no meio ambiente geram carga de poluio muitas vezes de difcil degradao. parte de contaminao acidental de ecossistemas, a vasta

4 quantidade de lodos de leo gerado em refinarias de sistemas de separao gua e leo e o acmulo de sobra de materiais oleosos da parte inferior dos tanques de estocagem de leo cru tambm causa de muitos problemas de contaminao, pelo fato dos processos de tratamento padres usados para descontaminar o solo e a gua subterrnea serem limitados e muitas vezes no so aplicados a estes casos ou por apresentarem efetividade de descontaminao parcial (FERRARI et al., 1996; NICHOLAS, 1997; VASUDEVAN e ROJOVAM, 2001). As estratgias de tratamento biolgico a serem implementadas no tratamento de efluentes lquidos contaminados por gasolina e leo diesel devem levar em conta a quantidade de contaminante, a capacidades de biodegradao da cultura a ser utilizada e o tipo de tratamento biolgico aerbio ou anaerbio. A seleo da tecnologia mais adequada a ser empregada ser feita em funo da melhor relao custo/eficincia e tempo de tratamento (CUNHA et al., 2002). No Brasil a infra-estrutura para distribuio de petrleo, gasolina, leo diesel e lcool etlico composto por: 22 terminais terrestres, dos quais um destes se encontra na cidade de Uberlndia, 30 terminais aquavirios, 6 centros coletores de lcool, 13 refinarias e presena de oleodutos pelo territrio brasileiro (ANP, 2004). Em um derramamento de gasolina e ou leo diesel, uma das principais preocupaes a contaminao de aqferos que possam ser usados como fonte de abastecimento de gua para consumo humano. Por serem pouco solveis em gua, esses hidrocarbonetos derramados, contendo mais de uma centena de componentes, inicialmente estaro presente no subsolo como lquido de fase no aquosa (NAPL). Em contato com a gua subterrnea esses hidrocarbonetos se dissolvem parcialmente. Os hidrocarbonetos monoaromticos: benzeno, tolueno, etilbenzeno e os trs xilenos orto, meta e para, chamados compostos BTEX, so os contaminantes que primeiro iro atingir o lenol fretico (CORSEUL, 2000). Estes contaminantes so considerados substncias perigosas por atuarem no sistema nervoso central e por causarem leucemia em exposies crnicas. Dentre os BTEX, o benzeno considerado o mais txico com padro de potabilidade de 10 g/L, segundo as normas do Ministrio da Sade. Nos terminais de distribuio terrestre so abastecidos diariamente inmeros caminhes de transporte de gasolina e leo diesel para outras regies do pas. Durante o procedimento de carregamento destes combustveis muitas vezes ocorre o derrame destes no ptio de abastecimento. Em alguns casos as guas de lavagens dos ptios e da

5 parte externa dos caminhes, passam por canaletas e so lanadas em lagoas situadas na parte do fundo destes terminais como efluente gerado. A utilizao de culturas puras (bactrias, leveduras e fungos filamentosos) e mistas em processos de descontaminao para destruir, ou reduzir a concentrao destes compostos de locais contaminados, vem sendo uma alternativa tecnolgica bastante promissora, por muitas vezes ser capaz de proporcionar limpeza ou diminuio da carga poluidora que possa estar presente em solo ou em meio lquido (BIELICKA et al., 2002; PIEDADE et al., 2000; LAKHA et al., 2005; TOWNSEND et al., 2004; GOGOI et al., 2003; GRISHCHENKOV et al., 2000; etc).

2-OBJETIVOS Os objetivos desse estudo so: construir um reator batelada em escala ampliada para realizao dos demais experimentos; realizar a montagem do sistema experimental e realizar testes iniciais com a unidade visando verificar se o funcionamento da mesma encontra-se adequado e se existe algum vazamento; ampliar o volume de microrganismos para atender o reator em escala ampliada.

3-REVISO BIBLIOGRAFICA

3.1-O Petrleo O petrleo considerado uma fonte de energia no renovvel, de origem fssil e matria prima da indstria petrolfera e petroqumica. O petrleo bruto possui em sua composio uma cadeia de hidrocarbonetos, cujas fraes leves formam os gases e as fraes pesadas o leo cru. A distribuio destes percentuais de hidrocarbonetos que define os diversos tipos de petrleo existentes no mundo (AMBIENTE BRASIL, 2005). O petrleo bruto extrado pode apresentar a seguinte composio mostrada pela Tabela 3.1:

6 Tabela 3.1 Composio do Petrleo Bruto Compostos Carbono Hidrognio Oxignio Nitrognio Enxofre Porcentagens (%) 81 a 88% 10 a 14% 0,01 a 1,2% 0,002 a 1,7% 0,01 a 5,0%

Fonte: Petrobrs Petrleo e suas Origens, 2005. O parque brasileiro de refino constitudo por 14 refinarias, 12 pertencentes Petrobrs e duas privadas, Refinaria de Petrleo de Manguinhos e Refinaria de Petrleo Ipiranga. As refinarias esto concentradas na regio Sudeste, sendo quatro localizadas em So Paulo, duas no Rio de Janeiro e uma em Minas Gerais. Na Regio Sul, esto localizadas mais quatro refinarias e no Norte e Nordeste localizam-se outras trs. A capacidade de refino est mais concentrada na proximidade dos centros consumidores. As refinarias brasileiras, ao longo dos ltimos anos, aumentaram o volume de petrleo nacional processado em suas unidades, alcanando 75% em 2001. Nas refinarias, o petrleo submetido a diversos processos pelos quais se obtm grande diversidade de derivados: gs liquefeito de petrleo (GLP) ou gs de cozinha, gasolina, naftas, leo diesel, gasleos, querosenes de aviao e de iluminao, leo combustvel, asfalto, lubrificantes, solventes, parafinas, coque de petrleo e resduos. As parcelas dos derivados produzidos em determinada refinaria variam de acordo com o tipo de petrleo processado. Assim, petrleos mais leves proporcionam maior quantidade de gasolina, GLP e naftas, que so produtos leves. J os petrleos pesados resultam em maiores volumes de leos combustveis e asfaltos. No meio da cadeia esto os derivados mdios, como o leo diesel e querosene (PETROBRS, 2005). O processamento do petrleo comea pela destilao, que permite a separao de diversas correntes, como GLP, nafta, querosenes, leo diesel, gasleos e leo combustvel. Algumas dessas correntes sofrem um processamento secundrio para converso em outros produtos. Outras passam por um tratamento para melhoria de suas caractersticas e atendimento das necessidades do mercado consumidor (PETROBRS, 2005)

7 3.2-Gasolina At 1910, a gasolina era obtida pela destilao do petrleo bruto, processo que fornecia baixa octanagem. Nessa poca comearam a ser desenvolver os processos de craqueamento, capazes de produzir gasolinas com maiores ndices de octanas e maior economia de leo cru. Esse desenvolvimento tcnico foi estimulado pela expanso da frota mundial de automveis. Assim, somente por volta da metade da dcada de 1910 o querosene para iluminao foi ultrapassado pela gasolina nas vendas das companhias de petrleo. As propriedades das gasolinas comerciais so influenciadas pelos processos de refinao utilizados e tambm pela natureza dos petrleos que as originam. A gasolina automotiva no uma substncia de composio simples, formada por uma mistura complexa de hidrocarbonetos que pode variar desde que atenda uma especificao determinada. Essa especificao pode variar de um pas para o outro. Logo, quando se fala em gasolina deve-se ter em mente uma mistura e no uma nica substncia como, por exemplo, o lcool que consiste basicamente de etanol como pequena porcentagem de gua. A gasolina um combustvel constitudo basicamente por hidrocarbonetos (compostos orgnicos que contm tomos de carbono e hidrognio) e, em menor quantidade, por substncias cuja frmula qumica contm tomos de enxofre, nitrognio, metais, oxignio, etc. Os hidrocarbonetos componentes da gasolina so membros das sries parafnica, olefnica, naftnica e aromtica, e suas propores relativas dependem dos petrleos e processos de produo utilizados. Atualmente, as gasolinas que saem das refinarias dotadas de vrios processos de refinao, so constitudas de misturas criteriosamente balanceadas desses hidrocarbonetos, visando atender aos requisitos de desempenho nos motores. Uma gasolina para consumo constituda pela mistura de dois, trs ou mais componentes obtidos nesses diferentes processos de refinao, podendo ainda receber a adio de outros compostos como o tolueno ou xilenos, lcoois como o metanol ou etanol anidros, alm de outros aditivos especiais com finalidades especficas, entre os quais podemos citar antioxidantes, antidetonantes, detergentes, anticongelantes, desativadores de metal, corantes, etc (PONTES, 2002). Em relao a composio da gasolina os compostos aromticos (BTX benzeno, tolueno e xileno e outros alquilbenzenos) perfazem cerca de 10 a 59% da gasolina (massa/massa), enquanto que os hidrocarbonetos alifticos compreendem 41 a

8 62%. Os hidrocarbonetos aromticos so geralmente mais txicos que os compostos alifticos com o mesmo nmero de carbonos e possuem maior mobilidade em gua, em funo da sua solubilidade em gua ser da ordem de 3 a 5 vezes maior, como mostra a Tabela 3.2 (TIBURTIUS, et al., 2004). Tabela 3.2 Parmetros fsico-qumicos de importncia para a mobilidade de hidrocarbonetos. Composto Solubilidade em gua (mg/L)a Log KaDW Benzeno 1760 2,12 Tolueno 532 2,73 Xileno 163-185 2,95-3,26 Nonano 0,122 4,67 Decano 0,021 6,69 Dodecano 0,005 7,24 KDW: coeficiente de partio octanol-gua. Fonte:TIBURTIUS et al., 2004 As especificaes das gasolinas so definidas pela Agncia Nacional de Petrleo atravs da Portaria ANP n.o 309 de 27/12/2001 e Regulamento Tcnico ANP n.o 05/2001. O percentual de lcool atualmente adicionado gasolina definido pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, atravs da Portaria MAPA n.o 266 de 21/06/2002.

3.3-leo Diesel O leo diesel um combustvel de composio complexa, constitudo basicamente por hidrocarbonetos parafnicos, olefnicos e aromticos e, em menor quantidade, por substncias cuja frmula qumica contm tomos de enxofre, nitrognio, metais, oxignio, etc. Estes hidrocarbonetos so formados por molculas constitudas de 8 a 40 tomos de carbono, normalmente, sendo, portanto mais pesados do que aqueles que compe a gasolina. O leo diesel formulado atravs da mistura de diversas correntes como gasleos, nafta pesada, diesel leve e diesel pesado, provenientes das diversas etapas de processamento do petrleo bruto (REFAP, 2005). um produto inflamvel, medianamente txico, voltil, lmpido, isento de material em suspenso e com odor forte e caracterstico (PETROBRS, 2005). A partir do refino do petrleo obtm-se, pelo processo inicial de destilao atmosfrica, entre outras, as fraes de leo diesel leve e pesado, que so bsicas para a

9 produo de leo diesel. A elas podem ser agregadas outras fraes como a nafta, o querosene e o gasleo leve de vcuo resultando no produto conhecido como leo diesel. A incorporao destas fraes e de outras obtidas por outros processos de refinao, depender da demanda global de derivados de petrleo pelo mercado consumidor (PETROBRS, 2005). O nmero de cetano de um leo combustvel corresponde ao percentual volumtrico de cetano e alfametilnaftaleno contido neste leo. Quando maior for o nmero de cetano, menor ser o retardo de ignio e por conseguinte melhor ser sua capacidade de incendiar-se. Um leo diesel comumente empregado em motores trmicos tem o nmero de cetano compreendido entre 40 e 60. Os melhores leos diesel so encontrados nas fraes perto do querosene. Dependendo da constituio do leo combustvel, pode-se elevar at 13 pontos o NC (nmero de cetano). Na Tabela 3.4 so apresentadas as caractersticas de um leo combustvel leve e pesado (DEMEC, 2005). Tabela 3.4 Caractersticas de um leo combustvel leve e pesado. Caractersticas Leve Pesado Nmero de cetano 50 60 30-45 gua Zero 0 0,50 o Ponto de anilina C 65 54 Ponto de congelamento oC -34 -18 1,8 4,2 Viscosidade centistoke a 37,7 oC Ponto de imflamabilidade 57,5 85 Ponto de ebulio 174 198 Grau api 42 28 Fonte: (DEMEC, 2005)

3.4-Crescimento de Microrganismos O crescimento em uma cultura microbiana normalmente significa um crescimento no nmero total de clulas devido reproduo dos organismos individuais na cultura. Dois fenmenos ocorrem (LIVRONLINE, 2006): (1) o crescimento, ou reproduo das clulas individualmente; (2) crescimento ou aumento na populao de uma cultura microbiana.

10 3.4.1-A Curva de Crescimento Microbiano Aps a inoculao do meio de cultura, devidamente favorvel ao desenvolvimento do microrganismo em estudo, sob condies operacionais controladas e adequadas de temperatura e agitao, observa-se um comportamento nos valores da concentrao celular, conforme indica a Tabela 3.5 (SCHIMIDELL et al., 2001). Tabela 3.5 Fases no crescimento microbiano Fase de crescimento Lag Exponencial ou log Taxa de crescimento Zero Mxima ou constante Caractersticas Nenhum aumento no nmero de clulas, aumento de tamanho, so sintetizadas novas enzimas para as clulas se adaptarem ao novo meio. Condies de crescimento balanceado; as clulas so uniformes em termos de composio qumica e atividades metablicas e fisiolgicas. Pico da atividade e eficincia fisiolgica. Acmulo de produtos metablicos txicos e/ou exausto de nutrientes. Algumas clulas morrem, outras crescem e se dividem. O nmero de clulas viveis diminui. Acmulo adicional de produtos metablicos inibitrios. A taxa de morte acelerada; o nmero de clulas diminui de modo exponencial. Tipicamente todas as clulas morrem em dias ou meses.

Estacionria

Zero

Morte

Negativa

3.5-Microrganismos Envolvidos no Processo de Biodegradao Os microrganismos apresentam uma imensa diversidade gentica e desempenham funes nicas e cruciais na manuteno de ecossistemas, como componentes fundamentais de cadeias alimentares e ciclos biogeoqumicos. Apesar de sua grande importncia na manuteno da biosfera, estima-se que menos de 5% dos microrganismos existentes no planeta tenham sido caracterizados e descritos. importante ressaltar que grande parte dos avanos da biotecnologia moderna e da agricultura, derivada de descobertas recentes nas reas de gentica, fisiologia e metabolismo de microrganismos. A diversidade gentica e metablica dos microrganismos tem sido explorada h muitos anos visando obteno de produtos biotecnolgicos, tais como a produo de antibiticos (estreptomicina, penicilina, etc.), de alimentos (cogumelos, etc.), processamento de alimentos (queijo, yogurte, vinagre,

11 etc.), bebidas alcolicas (vinho, cerveja, etc.), cidos orgnicos (ctrico e fumrico), lcoois (etanol), alimentos fermentados (molho de soja), tratamento e/ou remediao de resduos, e, na agricultura, na fertilizao de solos (fixao biolgica de nitrognio) e controle biolgico de pragas e doenas (controle de lagarta da soja, da cigarrinha da cana de acar, de fitopatgenos como Rhizoctonia e outros) (COUTINHO et al., 1998). A capacidade microbiana de degradar alguns compostos orgnicos tambm ocorre em locais contaminados, mesmo que os componentes sejam completamente xenobiticos e nenhuma rota metablica de degradao natural exista.

3.5.1-Produo de Biosurfactantes Os microrganismos como bactrias e fungos quando estimulados so capazes de produzir certas substncias que agem como detergentes naturais (biosurfactantes). Entre estes microrganismos esto bactrias dos gneros Cndida, Pseudomonas, Bacillus e outros. Os biosurfactantes possibilitam a mistura (emulso) de compostos como gua e leo, o que normalmente no acontece devido alta tenso de superfcie da gua. O termo surfactante foi criado a partir de partes da expresso inglesa surface active agents agentes ativos na superfcie.

4-MATERIAIS E MTODOS

4.1-Matria-Prima: Efluente Contaminado Utilizou-se como nica fonte de carbono e energia o efluente contaminado gerado em terminais terrestres de distribuio de leo diesel e gasolina. O efluente era coletado periodicamente em uma lagoa que situava nos fundos do terminal, conforme mostra a Figura 4.1, e armazeno em gales de 50 litros, sob refrigerao a 4oC. Durante todo o desenvolvimento do trabalho foi utilizada a mesma amostra para cada etapa do estudo visando evitar qualquer variao de composio e concentrao da matriaprima.

12

Figura 4.1 Foto da lagoa mostrando a canaleta e o bocal de descarga do efluente na mesma.

4.2-Fonte dos Microrganismos Empregados Foram utilizadas quatro culturas sendo uma cultura mista (C1) e trs culturas puras de linhagens conhecidas: Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e Pseudomonas aeruginosa PATC, as duas primeiras culturas foram obtidas de um banco de cultura da Fundao Osvaldo Cruz (FIOCRUZ) e mantido em gelose nutriente (DIFCO 0003) inclinado sob refrigerao a 4oC, para diminuir o metabolismo da bactria, at futura necessidade de uso. A cultura mista C1 foi isolada do solo contaminado de uma lagoa que recebe gua de lavagem do ptio do terminal onde h derrames rotineiros de gasolina e leo diesel. A cultura Pseudomonas aeruginosa PATC foi isolada do mesmo solo da lagoa que forneceu a cultura mista C1.

13 4.3-Meio de Cultura Os meios de cultura empregados neste trabalho so descritos a seguir:

4.3.1-Meio de Cultura para a Manuteno das Culturas Puras As bactrias foram conservadas atravs de repiques mensais, em tubos de ensaio contendo gelose nutriente inclinada. Aps incubao por 48 horas em estufa a 30oC, as culturas foram mantidas sob refrigerao a 4oC, para diminuir o metabolismo celular, at futura necessidade de uso.

4.3.2-Manuteno das Culturas Mistas As culturas (2006). mistas foram mantidas a 4 1oC no meio sinttico, aps

crescimento a temperatura de 30 1oC por 24 horas, conforme descrito por Vieira et al.

4.3.3-Meio de Cultura Utilizado no Isolamento Para o isolamento das culturas bacterianas foram utilizados o meio M2 proposto por Cunha e Leite (2000), cuja composio est apresentada na Tabela 4.1. Tabela 4.1 Meio de cultivo utilizado no isolamento dos microrganismos. Componentes M2 (g/L) NaCl K2HPO4 NH4H2PO4 (NH4)2SO4 MgSO4.7H2O KNO3 Agar - gar 5,0 1,0 1,0 1,0 0,2 3,0 20

14 4.3.4-Meio de Cultura para o Crescimento dos Microrganismos Meio Sinttico para Prvia Adaptao Os microrganismos foram cultivados em meio inorgnico adicionado da concentrao da mistura leo diesel e gasolina de 4% de combustveis, sendo 2% de gasolina e 2% de leo diesel em volume/volume (constituindo um efluente sinttico), cuja composio est relacionada na Tabela 4.2. O pH do meio foi ajustado na faixa 7-7,2 com soluo de NaOH e HCL a 0,1N e posteriormente esterilizado a 121oC durante 20 min, antes da adio da mistura leo diesel e gasolina. Tabela 4.2 Composio do meio inorgnico para adaptao prvia. Componentes K2HPO4 KHPO4 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O MnSO4.H2O Extrato de levedo NH4NO3 g/L 0,5 1,4 0,1 0,02 0,03 2,0 1,0

4.4-Adaptao das Culturas ao Efluente Sinttico Aps a obteno da cultura mista C1 em meio lquido, 10 mL da respectiva cultura crescida (inculo) foi adicionada a erlenmeyers de 500 mL, contendo 100 mL de meio sinttico. A densidade microbiana foi aumentada, devido a repiques sucessivos realizados a cada 48 horas durante 12 dias a 30 1oC e 150 rpm. Os inculos das culturas puras foram obtidos atravs de trs aladas da cultura estoque cultivadas em 100 mL de meio sinttico (o mesmo meio utilizado para cultura mista) nas mesmas condies operacionais e adotando-se o mesmo procedimento experimental citado anteriormente.

4.5-Caracterizao do Efluente As seguintes anlises foram realizadas para a caracterizao do efluente: hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH); leos ou graxas totais pelo mtodo

15 gravimtrico modificado (Macedo, 2003); demanda qumica de oxignio (DQO) foi realizada segundo a metodologia de refluxo fechado pelo mtodo titulomtrico descrita no Standard Methods (APHA, 1999); demanda bioqumica de oxignio (DBO) (STANDARD METHODS, 1998); nitrognio total pelo mtodo kjeldahl e fsforo total pelo mtodo colorimtrico por reduo com cido ascrbico. Caracterizao em relao ao carbono orgnico total foi realizada atravs da tcnica de combusto cataltica a alta temperatura.

4.6-Adaptao das Culturas ao Efluente Ao efluente contaminado foram adicionadas as culturas puras e mista e as seguintes substncias em g/L: 1,2 fertilizante nitrato de amnio; 4,8 superfosfato simples e 2 de extrato de levedo. O pH foi ajustado para 7,0 e a densidade microbiana foi aumentada atravs de repiques sucessivos a cada 96 horas durante 24 dias. Nesta etapa, foi acompanhado o resultado de crescimento celular para as culturas estudadas. Os principais microrganismos presentes na cultura C1 depois de adaptada ao efluente foram devidamente isolados e identificados.

4.7-Estudo da Cintica de Biodegradao de Efluente Contaminado Empregado Culturas Puras e Mista Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se efluente de terminal de combustvel com concentrao de TPH inicial de 8960 mg/L. Os experimentos foram realizados em erlenmeyer de 500 mL, tampados com rolha de borracha, para evitar a perda dos hidrocarbonetos mais leves. Aos reatores contendo 100 mL de efluente foi adicionado fertilizantes e o extrato de levedo e foram inoculados com uma concentrao de inculo em peso mido correspondente a aproximadamente 0,3 g/L de massa seca das respectivas culturas crescidas a temperatura ambiente por 96 horas sob agitao de 150 rpm. O sistema foi incubado durante 56 dias a temperatura de 30 1oC e agitao de 150 rpm. Com intervalo de 48 horas em fluxo laminar foi realizada aerao do meio atravs da retirada da tampa de borracha e ligeira agitao manual por 3 minutos. Para determinar o potencial de biodegradao dos contaminantes foram realizadas anlises de hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH) e crescimento celular.

16 As amostras dos reatores foram retiradas diariamente at o 7o dia e a pos este tempo a cada 7 dias de processo para as respectivas anlises. Para cada condio estudada foram utilizados reatores em triplicata e a cada dia de operao um reator era sacrificado para realizao das anlises de TPH e crescimento celular. Para todos os ensaios foram realizados testes de controle (sem adio de microrganismos) visando determinar as perdas abiticas.

4.7.1-Modelagem Matemtica Balanos de massa para o crescimento celular e consumo de substrato foram realizados nos reatores bateladas para estabelecer a formulao matemtica. A formulao utilizada para a cintica do crescimento celular foi o modelo logstico no estruturado descrito por Verhulst-Pearl apud Bailey (1986), (Eq. 4.1) e para degradao dos combustveis dos combustveis a equao proposta por Luedeking Piret (1959), (Eq. 4.2)
dS 1 dX = dt Y X S dt

(4.1) (4.2)

dX X =max X 1- * dt X

Sendo: max - Taxa mxima especfica de crescimento [T-1]; X* - Parmetro de crescimento celular estacionrio [ML-3]; S Concentrao de hidrocarbonetos totais de petrleo TPH - [ML-3]; X - Concentrao de crescimento celular [ML-3]; Yx/s- Rendimento do crescimento celular em relao a degradao de TPH [M X.MS-1]. Os valores dos parmetros (max, X* e YX/S) foram calculados a partir dos resultados experimentais de ensaios efetuados sob condies controladas. Utilizou-se a tcnica de regresso no-linear, usando em algoritmo de resposta mltipla (MARQUARDT, 1963). A integrao do conjunto de equaes diferenciais para o clculo dos parmetros por ajuste dos dados experimentais foi realizada com auxlio de um mtodo de Runge-Kutta de quarta ordem. A identificao paramtrica foi ilustrada por uma boa correlao entre os valores experimentais e aqueles fornecidos pelo modelo.

17 4.8-Estudo da Substituio da Adio de Extrato de Levedo por Levedura Autolizada Cervejeira Empregando as Culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e Mista C1. Aps a etapa do estudo da cintica de biodegradao, obteve-se melhores resultados de crescimento e biodegradao do efluente quando empregada s culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e a mista C1. Por este motivo, nesta etapa foi realizado o estudo da substituio da adio de extrato de levedo por levedura cervejeira autolizada. Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se efluente de terminal de combustvel aps a adio dos fertilizantes na mesma concentrao utilizada no estudo da cintica de reduo de TPH e levedura cervejeira residual nas seguintes concentraes: 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 e 4,0g/L. Os experimentos foram realizados em erlenmeyer de 500 mL, tampados com rolha de borracha. Os reatores contendo 100 mL de meio foram inoculados com 0,3 g/L das respectivas culturas crescidas em efluente a temperatura ambiente por 24 horas. O sistema foi incubado durante 14 dias sob agitao a 150 rpm. Com intervalo de 48 horas em cmara assptica foi realizado aerao do meio atravs da retirada da tampa de borracha e ligeira agitao manual (3 minutos). Para determinar a melhor concentrao de levedura de cervejeira, que proporciona-se uma remoo de TPH prxima encontrada quando se utilizou o extrato de levedo foram coletadas amostras nos reatores para a realizao das anlises de TPH e crescimento celular. Para as anlises de TPH foram retiradas amostras em 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 14 dias de processo. Para cada dia de amostragem um reator foi sacrificado, ou seja, durante os 14 dias foram sacrificados 9 reatores e suas rplicas. Em relao ao crescimento celular, foi realizada a tcnica de massa seca no incio e no final do processo. Neste caso, os reatores dos quais se retiraram s amostras tambm foram sacrificados. Para todos os ensaios foram realizados teste controle (sem adio de microrganismos) visando determinar as perdas abiticas.

18 4.9-Anlises Quantitativas

4.9.1-Demanda Qumica de Oxignio DQO A anlise de Demanda Qumica de Oxignio (DQO) foi realizada atravs do mtodo de oxidao por dicromato de potssio em meio cido, empregando o procedimento descrito no STANDARD METHODS, 5210 D1995.

4.9.2-Demanda Bioqumica de Oxignio DQO Para determinao da Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO) foi utlilizado o Mtodo de incubao (20oC, cinco dias) (SANDARD METHODS, 1998).

4.9.3-Determinao de Fsforo Total O fsforo foi determinado pelo Mtodo colorimtrico por reduo com cido ascrbico, que cobre a determinao de formas especficas de compostos fosforados, em guas e guas de despejos. O mtodo usado numa faixa de 0,01 mg/L a 0,5 mg/L de fsforo. Esta faixa aplica-se a medidas fotomtricas efetuadas a 880 nm em clulas de 20 mm a 25 mm. Altas concentraes tambm podem ser determinadas por diluio da amostra ou pela medio da cor em 625 nm a 650 nm. O mtodo tem como princpio a formao de um complexo de antimniofosfato-molibdato, pela reao do molibdato de amnio e do tartarato de potssio e antimnio com o ortofosfato. Este complexo reduzido com cido ascrbico para formar uma colorao azul caracterstica do complexo de molibdnio. A intensidade da cor proporcional concentrao de fsforo.

4.9.4-Determinao de Nitrognio KJELDAHL TOTAL O mtodo Kjeldahl foi usado na determinao de nitrognio total, que consiste na soma do nitrognio orgnico e nitrognio amoniacal. O mtodo aplica-se em amostras de gua de abastecimento pblico, guas residurias e efluentes domsticos, conforme descrito no STANDARD METHODS (1998).

19 A amostra aquecida em presena de cido sulfrico concentrado, sulfato de potssio e sulfato de cobre, evaporada at o aparecimento de fumaas de SO3 e total decomposio da matria orgnica. O resduo era alcalinizado e passava pela destilao da amnia presente e posterior titulao.

4.9.5-Carbono Orgnico Total A metodologia e as condies operacionais empregadas na anlise de carbono orgnico total (TOC) esto de acordo com a STANDARD METHODS (1998), gentilmente realizada pela empresa CARGIL AGRCOLA S/A Uberlndia-MG.

4.9.6-Determinao de Hidrocarboneto Total de Petrleo (TPH) A dosagem de TPH foi feita utilizando-se o solvente S-316 (fluorocarbono) para extrair a mistura de combustveis da amostra e um espctofotmetro de infravermelho (equipamento OCMA 350) da marca Horiba, no qual realizada a leitura da amostra. O S-316 um solvente de propriedade da Horiba usado para a extrao de hidrocarbonetos de petrleo em amostras de solo e lquido. Essa metodologia adequada para medir hidrocarbonetos alifticos e aromticos, independe de sua faixa de carbono. A luz emitida na faixa do infravermelho usada para irradiar o extrato e medir a concentrao de TPH. A anlise de infravermelho utilizada para medir TPH envolve medidas de absorbncia, visto que as ligaes carbono-hidrognio nos hidrocarbonetos absorvem luz na faixa do infravermelho. Durante a anlise, absorbncias associadas com as configuraes CH, CH2 e CH3 so medidas em um comprimento de onda prximo de 3,4 m. O equipamento opera numa faixa de comprimento de onda de 3,8 a 3,5 m, sendo capaz de medir as configuraes CH (3,8 m), CH2 (3,42 m) e CH3 (3,50 m) e possui o software para converter as medies em teor total de hidrocarboneto (U. S. EPA, 2001). Para as anlises foram utilizados 10 mL de amostra de efluente e adicionado cido clordrico para levar o pH para valor igual ou inferior a 2,0. Posteriormente, os hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH) foram extrados utilizando o solvente S-316. A leitura foi feita no equipamento OCMA-350 da Horiba devidamente calibrado com a soluo span soluo preparada a partir de um concentrao conhecida do leo de

20 calibrao (leo padro tipo B, fornecido pelo fabricante do instrumento) dissolvida no solvente do teste (S-316).

4.9.7-Quantificao do Crescimento Celular O crescimento celular das culturas estudadas ao longo do processo foi avaliado pela massa seca. Uma amostra do meio foi centrifugada, as clulas precipitadas foram lavadas secadas em estufa a 90oC at peso constante. e

5-RESULTADOS E DISCUSSO

5.1-Caracterizao do Efluente

5.1.1-Caracterizao Fsico-Qumica do Efluente Os resultados de caracterizao do efluente antes e aps a correo de nutrientes (nitrognio e fsforo) esto apresentados na Tabela 5.1, onde se observa que o efluente apresenta valores relativamente elevados de demanda qumica de oxignio (DQO) e hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH), indicando a elevada carga orgnica apresentada pelo efluente. Pode se constatar, as baixas concentraes de nitrognio e fsforo no efluente in natura, sendo necessria a adio de nutrientes para possibilitar o processo de biodegradao.

21 Tabela 5.1 Caracterizao do efluente antes e aps a correo nas concentraes de nutrientes (adicionado de fertilizante e extrato de levedo). Variveis Medidas TPH (mg/L) DBOsolvel (mg/L) leos ou Graxas (mg/L) DQOsolvel (mg/L) Nitrognio total (mg/L) Nitrognio amoniacal (mg/L) Fsforo total (mg/L) pH Resultados Antes da Correo de Nutrientes (valor mn valor mx) 7050 8960 1200 1500 7400 11196 7100 9500 50 70 10 15 20 6,5 6,8 Resultados Aps de Nutrientes (valor mn valor mx) 7050 8960 1300 1750 7400 11196 7900 10400 600 260 400 6,7 6,8

5.2 - Caracterizao microbiolgica das amostras de solo contaminada Na Tabela 5.2 so mostrados os resultados da caracterizao microbiolgica das amostras coletadas no solo da lagoa, que recebe efluente contaminado com leo diesel e gasolina. As culturas mistas obtidas destes locais foram adaptadas ao efluente sinttico contendo leo diesel e gasolina. O critrio de escolha das fontes destas culturas teve como objetivo verificar o desempenho das culturas mistas de ambiente contaminado com derivados de petrleo (solo da lagoa contaminada). lagoa contaminada. Tabela 5.2 - Quantificao microbiolgica dos solos utilizados como fontes das culturas mistas utilizadas na biodegradao dos poluentes presentes no efluente. Bactrias Aerbias (UFC/g de solo) 3,8 0,1x10 7 Fungos (UFC/g de solo) 2,4 0,05x105 Bactrias Anaerbias (NMP/g de solo) 2,4 0,1x10 4 7,7 0,3x1010 BRS (NMP/g de solo) 1,1 0,2x103 2,7 0,07x107 Foram coletadas amostras na superfcie do solo (C1) e a aproximadamente 30 cm de profundidade no solo (C2) da

Amostras

C1 C2

5,2 0,08x105 1,3 0,15x104

22 Pela anlise microbiolgica verifica-se que a concentrao de bactrias aerbias e de fungos coletadas no solo da superfcie da lagoa (culturas C1) foram superiores s coletadas em profundidade. Como o processo a ser estudado ser realizado com aerao intermitente optou por trabalhar com essa cultura. MORGAN e WATKINSON (1989) encontraram a uma profundidade de 0-8 cm da superfcie, quantidades de bactrias aerbias de 2,8x107 UFC/ g de solo e de fungos de 2,4x105 UFC/g de solo, em solos que no sofreram contaminao com hidrocarbonetos. RIBEIRO (2003) coletou o solo virgem, prximo da lagoa contaminada com leo diesel e gasolina (culturas C1 e C2) e obteve uma relevante populao de bactrias aerbias, 1,10 x 106 clulas/g solo. Este resultado foi superior ao encontrado em outros solos, tais como: 4,0 x 104 clulas /g solo para o solo arenoso (OLIVEIRA, 2001) e de 2,7 x 105 ufc/g solo para o solo argilo arenoso (TRINDADE, 2002). A concentrao de fungos nestes solos foi de 7,2 x 103 ufc/g solo, o que foi considerada elevada.

5.3-Adaptao de Culturas Puras e Mista ao Efluente As culturas puras (Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e Pseudomonas aeruginosa isolada PATC) e mista C1 utilizada neste trabalho foram inicialmente adaptadas, conforme descrito na seo 4.4. Este procedimento visava adaptar as culturas mencionadas ao efluente contaminado por leo diesel e gasolina (com correo nas concentraes de nitrognio e fsforo e suplementado com extrato de levedo), para assim selecionar os microrganismos capacitados e com maior potencial metablico em biodegradar as fraes de hidrocarbonetos constituintes da mistura leo diesel e gasolina. A Figura 5.1 o crescimento das culturas microbianas em efluente natural com correo nas concentraes de nitrognio e fsforo. O crescimento foi observado pela quantificao microbiolgica empregando a tcnica de peso seco, ao final de cada cultivo sucessivo.

23

3,5

Concentrao Celular (g/L)

2,5

1,5

0,5

ic ia

iq ue

iq ue

iq ue

ue

iq

iq u

In

ep

ep

ep

ep

R ep

Pseudomonas aeruginosa PATC

Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Repiques Cultura Mista C1

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

Figura 5.1 Adaptao das culturas em efluente Por meio da Figura 5.1, observa-se que todos os microrganismos estudados apresentaram crescimento significativo entre cada repique sucessivo, mostrando que os repiques das culturas foram importantes para adapt-las ao meio em questo. Comparando o desempenho entre as culturas estudadas, a cultura C 1 foi a que apresentou maior crescimento entre cada repique. O que provavelmente, est relacionado ao fato da cultura esta ser advinda de local com historio de contaminao por derivados de petrleo, onde provavelmente sofreu uma pradaptao.

5.4-Identificao da Cultura Mista C 1 Na identificao da cultura C 1 , foram isolados 6 membros pertencentes a esta cultura dos seis membros isolados 4 foram identificados, sendo eles: Pseudomonas sp., Serratia sp., Klebsiella sp e Bacillus sp. Nota-se que os principais gneros de microrganismos que compem a cultura mista C 1 so facultativos, sugerindo que a pequena aerao (3 minutos) em intervalos de 48 h favoreceu o crescimento de microrganismos com

ep

iq

ue

24 metabolismo facultativo. Por outro lado, os gneros Pseudomonas, Serratia e Bacillus so produtores de biosurfactantes e segundo relatado por PRUTHI e CAMEOTRA (1997), a boa performance destas culturas na biodegradao de hidrocarbonetos meio), est a relacionada, em muitos dos casos, produo s de biosurfactantes (molculas anfipticas que reduzem a tenso superficial do facilitando biodisponibilidade compostos bactrias.

5.5-Cintica de Biodegradao Os dados obtidos de concentrao de TPH e suas remoes esto apresentados nos grficos das Figuras 5.2 e 5.3 e na Tabela 4.4 ao longo dos 56 dias de processo. Observando os grficos das Figuras 5.2 e 5.3 constata-se que os microrganismos estudados Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e cultura mista C 1 , foram eficazes na degradao dos contaminantes presentes no efluente, promovendo remoes com valores superiores a 70% decorridos 7 dias de processo. No grfico da Figura 5.2 observa-se, que houve um decrscimo contnuo do TPH neste perodo, mantendo-se inalterado at os perodos de 35 dias para a cultura Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e 42 dias para a cultura Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista. Ao final do processo os maiores valores de remoo de TPH encontrados foram de 81,9% para a cultura Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e de 85,6% para a cultura mista C1 . Pode-se destacar tambm, que em um pequeno perodo de tempo de operao (7 dias) a biodegradao foi alta (76,8% para a cultura Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e de 79,3% para a cultura C 1 ).

5.6-Modelagem da Cintica de Crescimento e Biodegradao Nos sistemas testados evolvendo o uso das 4 culturas, Pseudomonas aeruginosa ATCC, Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e mista C 1 , os resultados do crescimento celular foram bem ajustados pelo modelo no estruturado descrito pela Equao (4.1),

25 enquanto a Equao (4.2) foi utilizada para verificar o comportamento da biodegradao (consumo) da mistura de leo diesel e gasolina. As linhas slidas nas Figuras 5.2 e 5.3 so os resultados dos ajustes do modelo para as condies estudadas e a Tabela 5.3 mostra os parmetros ajustados para o crescimento ( max e X * ) e degradao dos contaminantes da mistura de leo diesel e gasolina (YX/S ). Na Tabela 5.3 pode-se verificar, que a cultura C 1 apresentou maior valor de max 1,088 d -1 e as demais culturas, apresentaram valores de max estatisticamente iguais de 0,900 d -1 . Em relao degradao dos contaminantes verifica-se pela Tabela 5.3 que o valor Y X/S tambm foi maior para a cultura mista e para a cultura Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145. Estes resultados comprovam a discusso anterior em relao ao maior desempenho da biodegradao dos contaminantes e aumento do crescimento observados em relao s culturas C 1 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145.

Figura 5.2 - Crescimento celular em 42 dias de processo

26 Tabela 5.3- Valores dos parmetros ajustados. Parmetros Ajustados max desvio X * desvio (g/L) (d -1 ) 0,901 0,03 0,900 0,05 0,903 0,03 1,088 0,06 2,890 0,08 3,570 0,16 3,074 0,08 3,960 0,17 Y X/S desvio (gX/gS) 0,425 0,08 0,472 0,11 0,408 0,08 0,505 0,10

Culturas Pseudomonas aeruginosa PATC Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Cultura Mista C 1

Figura 5.3 - Concentrao de TPH durante 42 dias de processo

5.7- Estudo da substituio de extrato de levedo o meio por resduo de levedura cervejeira autolizada A justificativa deste trabalho para utilizao de extrato de levedo como suplemento esta relacionada aos bons resultados que diversos autores obtiveram ao empreg-lo em estudos no qual se visava aumentar o poder de culturas mistas na degradao de hidrocarbonetos policclicos aromticos (PAHs) em solos. Alm destes pesquisadores outros tm tambm mostrado que a presena de co-substratos (extrato de levedo) aumenta a degradao de PAHs.

27 Desta maneira, com a escolha das duas melhores culturas (Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e cultura mista C 1 ) obtidas na etapa da cintica de biodegradao realizou-se, este estudo na tentativa de substituir o suplemento extrato de levedo adicionado ao efluente por levedura cervejeira autolizada (LCA), para escolha da concentrao que proporcionasse maiores remoes de TPH, portanto maior biodegradao dos contaminantes. Um parmetro de comparao adotado para seleo da concentrao de LCA foi utilizar os resultados obtidos de crescimento celular e remoo de TPH empregando o extrato de levedo a 2 g/L, no mesmo perodo de tempo adotado. As concentraes adotadas neste estudo foram realizadas com base em concentraes superiores e inferiores ao valor utilizado de extrato de levedo (2 g/L). O critrio de seleo do tempo de operao (14 dias) foi realizado com base nos resultados obtidos na etapa da cintica de biodegradao. Foi observado que ao final dos 56 dias de operao, ocorreu um pequeno aumento nas remoes de TPH de 4,4% e 5,2% para as culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista respectivamente, aps o 14 dia de operao. Por isso, no haveria necessidade de prolongar o tempo de processo (alm dos 14 dias) para obter um pequeno aumento nos valores de remoo.

5.7.1-Crescimento Celular A Tabela 5.4 mostra os resultados de crescimento celular das culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista C1 em 14 dias de processo nas vrias concentraes de resduo de levedura cervejeira. Para facilitar a comparao entre o crescimento dos microrganismos na presena de concentraes de levedura cervejeira autolizada (LCA) e extrato de levedo, estas tabelas apresentam os resultados de ambos os casos. De acordo com a Tabela 5.4, pode-se observar que houve crescimento celular de todas as culturas estudadas nas vrias concentraes de LCA indicando, que no houve inibio do crescimento em nenhuma das condies estudadas. Porm, observase que a concentrao celular variou com a concentrao de levedura de cervejeira empregada.

28 A presena de levedura autolizada cervejeira utilizada como suplemento ao meio pode ter contribudo para o crescimento dos microroganismo ao longo do processo. Verifica-se ainda pela Tabela 5.4, que a substituio do extrato de levedura por LCA na concentrao de 2 g/L, proporcionou uma concentrao de biomassa prxima a obtida utilizando extrato de levedo (2g/L). Portanto, em relao quantidade de biomassa presente no meio ao final do processo, o melhor resultado obtido para a concentrao de LCA foi utilizando 2 g/L. Tabela 5.4-Crescimento Celular para as culturas Pseudomonas aerugionosa ATCC 10145 e mista C1. Culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Concentrao Celular (g/L) 0 dias 0,356 0,327 0,318 0,298 0,642 0,301 14 dias 2,32 2,64 3,21 3,01 2,87 3,52 Cultura Mista C 1 Concentrao Celular (g/L) 0 dias 0,325 0,304 0,288 0,331 0,363 0,294 14 dias 2,71 3,02 3,61 3,43 3,17 3,87

Concentrao de Levedura de Cervejaria (g/L) 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 Extrato de Levedo (2 g/L) 5.7.2-Biodegradao

A Tabela 5.5 e as Figuras 5.4 e 5.5 apresentam as porcentagens de remoo de TPH de cada experimento nas vrias concentraes de LCA estudadas. Foi observado que a variao das concentraes de LCA resultou em cerca de 54 a 81,5% de remoo de TPH empregando culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista C 1 . Comparando os resultados verifica-se que o aumento na concentrao de LCA de 0,5 para 4,0 g/L ocasionou um aumento na remoo de TPH at concentrao de 2g/L e a partir desta ocorreu uma ligeira queda na remoo ao longo do processo. Isto sugere que para concentraes superiores a 2 g/L o aumento na concentrao de LCA no proporcionou um aumento na remoo de TPH fato este que pode ser verificado

29 atravs dos perfis de remoo obtidos nos grficos das Figuras 5.2 e 5.3. Portanto, em relao s concentraes de LCA estudadas o melhor resultado obtido de remoo foi utilizando concentraes de LCA de 2g/L para ambas as culturas (Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista C 1 ). Alm disto, esta mesma concentrao proporcionou resultados bem prximos ao obtido quando empregado o extrato de levedo (2g/L). Com o emprego do extrato de levedo as remoes de TPH obtidas no 14 dia para as culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista C 1 foram: 77,5 e 80,4%, respectivamente. Tabela 5.5-Resultados de remoo de TPH aos 14 dias de processo para as culturas Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e mista C 1 . Dias Levedura Autolizada (g/L) P. 0,5 10145 C1 P. 1,0 10145 C1 P. 2,0 10145 C1 P. 3,0 10145 C1 P. 4,0 10145 C1 0 1 2 3 37,9 2 4 5 6 7 14

0 14,5 2 27,8 2

46,0 2 50,0 2 52,7 2 53,7 2 54,0 2

0 19,5 1 30,0 2 41,7 2 48,3 2 53,1 2 54,8 2 55,7 2 60,0 2 0 17,2 3 32,9 3 46,5 3 55,4 3 61,3 3 65,4 3 66,7 3 67,2 4 0 21,5 1 36,9 2 49,5 4 58,4 4 62,8 4 68,5 4 69,0 4 70,8 4 0 20,7 2 39,7 3 54,2 3 65,7 3 71,4 3 75,3 3 76,7 3 77,2 3 0 28,7 3 49,3 3 59,6 3 68,9 3 73,9 3 76,5 3 78,9 3 81,5 3 0 18,7 1 37,7 2 51,5 2 62,4 2 67,8 2 72,5 2 75,7 2 73,3 2 0 24,7 1 41,7 2 54,8 2 64,0 2 69,8 2 70,8 2 73,0 2 75,5 2 0 16,5 1 33,0 1 49,3 2 57,4 2 67,8 2 67,8 2 72,3 2 72,7 2 0 22,5 1 38,0 2 50,4 2 59,5 2 68,8 2 69,8 2 71,8 2 74,1 2 Entre as duas culturas estudadas na melhor concentrao obtida (2 g/L)

a cultura mista C 1 foi capaz de proporcionar maiores remoes de TPH portanto maior potencial em biodegradar os contaminantes presentes no efluente durante todo o processo. Assim para o estudo da otimizao das condies operacionais empregando planejamento experimental foi utilizada a cultura mista C1.

30

90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 1 2 3 4 Tempo (dias) 0,5 g/L de LCA 3,0 g/L de LCA 1,0 g/L de LCA 4,0 g/L de LCA 2,0 g/L de LCA Controle Abitico 5 6 7 14

Figura 5.4 - Perfil de remoo de TPH para cultura Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145.
90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 1 2 3 4 Tempo (dias) 0,5 g/L de LCA 3,0 g/L de LCA 1,0 g/L de LCA 4,0 g/L de LCA 2,0 g/L de LCA Controle Abitico 5 6 7 14 Remoo de TPH (%)

Figura 5.5(na tese 4.8) Perfil de remoo de TPH para cultura C1.

Remoo de TPH (%)

31 6-CONCLUSES A partir dos resultados obtidos neste estudo, podem-se enunciar as seguintes concluses: Na etapa de adaptao das culturas puras (Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Pseudomonas aeruginosa PATC) e mista (C 1 ) em efluente de terminais de combustveis, todas as culturas mostraram capacidade de crescer em meio contaminado por hidrocarbonetos; A cultura mista coletada na superfcie do solo da lagoa contaminada por leo diesel e gasolina foi selecionada para o estudo por apresentar maior concentrao de bactrias aerbias; Foi possvel a identificao dos principais membros pertencentes cultura mista aps a adaptao no efluente. Foram identificados gneros pertencentes aos gneros das Pseudomonas sp, Serratia sp, Klebisiella sp, e Bacillus sp. Dentre as concentraes de levedura cervejeira autolizada estudada, a concentrao de 2g/L foi a que promoveu remoes de TPH prximo ao obtido quando se utilizou o extrato de levedo, para ambas as culturas estudadas.

7-AGRADECIMENTOS Os autores agradecem o suporte financeiro concedido pelo CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico .

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