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FUNDACIN UNIVERSITARIA DE CIENCIAS DE LA SALUD HOSPITAL DE SAN JOS - INFANTIL FACULTAD DE INSTRUMENTACION QUIRRGICA

LABORATORIO 4 DE BIOQUMICA IDENTIFICACIN DE PROTEINAS.


El trabajo hecho a gusto no cansa jams Thomas Jefferson

1. OBJETIVO: Demostrar la presencia de las protenas en diferentes materiales biolgicos e identificar su comportamiento qumico ante diferentes agentes oxidantes. 2. TIEMPO: 3 horas (7:00am a 10:00am)
3. MATERIALES: barreras de proteccin, 5 tubos de ensayo, 1 gradilla, pinzas para tubo de

ensayo, cinta de enmascarar, 1 lpiz, balanza analtica, vidrio de reloj, 2 beakers, 1 erlenmeyer, 1 esptula, agitador 1, pipetas 3, embudo 1, papel filtro o filtro de tela (para tinto), plancha de calentamiento, tenedor desechable 1, REACTIVOS: 1 a 2 huevos crudos, harina de trigo 50 g, muestra de carne cruda 5 g, leche entera cruda 250 ml, reactivo de Biuret 10 ml, acetona 5ml o quita esmalte, cido actico o vinagre, zumo de 2 limones, cloruro de sodio 30g y alcohol 100ml.

4. INTRODUCCIN: Las protenas son una clase de biopolmeros, especificamente son macromolculas compuestas por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. La mayora tambin contienen azufre y fsforo. Las mismas estn formadas por la unin de varios aminocidos, unidos mediante enlaces peptdicos. El orden y disposicin de los aminocidos en una protena depende del cdigo gentico, ADN, de la persona. Desempean una enorme variedad de funciones: unas transportan, otras almacenan molculas pequeas, otras ms constituyen gran parte de la organizacin estructural de las clulas y los tejidos. Quizs las ms importantes de todas las protenas sean las enzimas que son los catalizadores que promueven la enorme variedad de reacciones que forman el metabolismo. Cada tipo de clula en todos los organismos posee varios miles de clases de protenas para cumplir la gran variedad de funciones. Las protenas constituyen alrededor del 50% del peso seco de los tejidos y no existe proceso biolgico alguno que no dependa de la participacin de este tipo de sustancias [1,2]. Las funciones principales de las protenas son[21].: Ser esenciales para el crecimiento. Las grasas y carbohidratos no las pueden sustituir, por no contener nitrgeno. Proporcionan los aminocidos esenciales fundamentales para la sntesis tisular.
11 Recurso en lnea, disponible en: http://www.zonadiet.com/nutricion/proteina.htm [consultado Marzo 22/2011 8:30 pm] 21 Lehninger, A.L. 2005. Biochemistry. 8nd ed. Worth Publ., Inc., New York, N.Y. 3 Tinoco Jr., I., Sauer, K. y Wang, J.C. 1998. Physical Chemistry. Prentice Hall, Inc., Englewood Cliff, N.J.

FUNDACIN UNIVERSITARIA DE CIENCIAS DE LA SALUD HOSPITAL DE SAN JOS - INFANTIL FACULTAD DE INSTRUMENTACION QUIRRGICA Son materia prima para la formacin de los jugos digestivos, hormonas, protenas plasmticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas. Funcionan como amortiguadores, ayudando a mantener la reaccin de diversos medios como el plasma. Actan como catalizadores biolgicos acelerando la velocidad de las reacciones qumicas del metabolismo. Son las enzimas. Actan como transporte de gases como oxgeno y dixido de carbono en sangre. (hemoglobina). Actan como defensa, los anticuerpos son protenas de defensa natural contra infecciones o agentes extraos. Permiten el movimiento celular a travs de la miosina y actina (protenas contrctiles musculares). Resistencia. El colgeno es la principal protena integrante de los tejidos de sostn. Energticamente, las protenas aportan al organismo 4 Kcal de energa por cada gramo que se ingiere. Las protenas son clasificables segn su estructura qumica en[2].: Protenas simples: Producen solo aminocidos al ser hidrolizados. Albminas y globulinas: Son solubles en agua y soluciones salinas diluidas (ej.: lactoalbumina de la leche). Glutelinas y prolaninas: Son solubles en cidos y lcalis, se encuentran en cereales fundamentalmente el trigo. El gluten se forma a partir de una mezcla de gluteninas y gliadinas con agua. Albuminoides: Son insolubles en agua, son fibrosas, incluyen la queratina del cabello, el colgeno del tejido conectivo y la fibrina del coagulo sanguneo. Protenas conjugadas: Son las que contienen partes no proteicas. Ej.: nucleoprotenas. Protenas derivadas: Son producto de la hidrlisis. En el metabolismo, el principal producto final de las protenas es el amonaco (NH 3) que luego se convierte en urea (NH2)2CO2 en el hgado y se excreta a travs de la orina. Para mantener la multiplicidad de sus funciones, las protenas son molculas extremadamente complejas que tienen una estructura determinada formada por la secuencia definida de unidades de estructura qumica comunes a todas las protenas y que son los aminocidos. Las protenas tienen una estructura tridimensional especfica dada por plegamientos de su cadena, dicha estructura debe mantenerse para que la protena ejerza su funcin, esto implica que existan interacciones entre los aminocidos que conforman las protenas y las molculas del medio (agua fundamentalmente), adquiriendo una conformacin natural de mxima estabilidad la cual no debe perderse [1].

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5. PROCEDIMIENTO:

5.1 Identificacin de Protenas


A. Ensayo de Biuret (CuSO4 / NaOH 10%) para el reconocimiento de POLIAMIDAS Las amidas alifticas y aromticas que contiene un solo grupo amidico, son muy difciles de identificar, no existe un ensayo caracterstico. Sin embargo las diamidas o poliamidas (protenas) reaccionan qumicamente intensificando el color azul del in cprico presente en el reactivo de Biuret que se prepara mezclando en partes iguales una solucin de sulfato de cobre al 10% con Hidrxido de sodio al 10% La reaccin se da por la produccin de un complejo proteico que da la coloracin por el complejo formado Marcar los 5 tubos de ensayo con los nombre de los alimentos sobre los cuales van a identificar la presencia de protenas: albmina de la clara de huevo, casena de la leche, protenas de la
O NH NH O

Cu

carne, protenas de la harina de trigo y tubo de control o blanco el cual solo contiene agua. adicionar a cada tubo una pequea porcin del material, aproximadamente 1,5 g o 2 ml de la muestra. adicionar 1 mL del reactivo de Biuret y mezclar fuertemente. Observar el cambio de color azul del sulfato de cobre por el color violeta o azul-violeta que me indica la presencia de una protena.

5.2 Desnaturalizacin de protenas


B. Cambio de solvente: tome y tubo de ensayo y adicione 5ml de clara de huevo y luego 5ml de agua, mezcle bien (suavemente). Mida 2 ml de acetona y deje caer sobre el tubo gota por gota, observe detenidamente hasta identificar un cambio. C. Cambio de temperatura: tome y tubo de ensayo y adicione 5ml de clara de huevo y luego 5ml de agua, mezcle bien (suavemente). Por otro lado realice el montaje de un bao mara que llegue a una temperatura de 80C. Coloque el tubo con la muestra en el bao mara por 3 minutos al sacarlo observe detenidamente.

FUNDACIN UNIVERSITARIA DE CIENCIAS DE LA SALUD HOSPITAL DE SAN JOS - INFANTIL FACULTAD DE INSTRUMENTACION QUIRRGICA D. Cambio de pH: tome 2 beaker y rotlelos como leche con cido actico y leche con zumo de limn, aada 20ml de leche en cada Beaker y luego adicinele al primero 20ml de cido actico o vinagre y al segundo 20 ml de zumo de limn, deje las muestras por 10 minutos o hasta notar coagulacin; a la muestra obtenida fltrela (utilice el embudo, el papel filtro y el erlenmeyer) y observe el residuo que quedo en el papel. E. Combinacin de factores (Cambio de temperatura y pH): tome 1 beaker adicione 50ml de leche y colquela a calentar hasta llegar al punto de ebullicin pero sin dejarla hervir, a esta mezcla caliente adicinele 50ml de cido actico o vinagre (deje la muestra por 10 minutos o hasta notar coagulacin); enfri la mezcla y fltrela, observe detenidamente el residuo slido que se obtiene y comprelo con el residuo anterior (punto D). F. Cambio en la concentracin de sales: tome y tubo de ensayo y adicione 5ml de clara de huevo y luego 5ml de agua, mezcle bien (suavemente), adicione cloruro de sodio poco a poco hasta evidenciar un cambio en la mezcla. G. Cambio por presencia de alcohol: tome un Beaker y aada un huevo completo, btalo bien usando el tenedor desechable, luego adicione lentamente 50ml de alcohol al Beaker y deje la muestra por 10 minutos o hasta notar coagulacin; luego fltrela y observe el resultado final. Para el informe de laboratorio no olvide los parmetros de evaluacin: Objetivos, pregunta e hiptesis Marco terico y la identificacin de variables independiente y dependiente Metodologa: lista de materiales, frases R y S de los reactivos y diagramas de flujo de los procedimientos, ya no es necesario realizar los dibujos de los materiales. Resultados: tabla de resultados con datos cuantitativos y observaciones cualitativas como cambios de color. Anlisis de resultados: explicar porque se dieron los resultados desde los cambios qumicos en especial desde las reacciones qumicas que origina la unin de los compuestos. Conclusiones, bibliografa.
NURY ESPERANZA VARGAS A. MSc CIENCIAS BSICAS. PUJ LICENCIADA EN QUMICA. UD