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MICROBIOLOGA Y BIOTECNOLOGA II
8. Microorganismos como agentes patgenos
A pesar de que la gran mayora de los microorganismos son inofensivos o incluso beneficiosos, la presencia de microbios capaces de infectarnos adquiere una importancia predominante. Se puede definir la patogenicidad como la capacidad de un microorganismo para producir enfermedad. Fue Robert Koch en 1876 quien comprob la accin patgena de los microorganismos y demostr que el ntrax, causado por un bacilo, se transmita de unos animales a otros. Tambin demostr que cada patgeno produce una enfermedad concreta. De esta manera, Koch enunci los siguientes postulados: Siempre existe un microorganismo especfico para una enfermedad infecciosa determinada. Los microorganismos pueden aislarse y hacerles crecer en cultivo puro en el laboratorio. El cultivo puro produce la enfermedad cuando se inocula en un animal susceptible. Puede recuperarse el microorganismo del animal infectado experimentalmente.

8.1 Enfermedades causadas por bacterias

A pesar de que en el organismo encontramos bacterias inofensivas o incluso beneficiosas formando la flora microbiana, muchas bacterias pueden producir enfermedades aprovechando la debilidad de las defensas del individuo. Para que una bacteria pueda invadir el tejido del husped debe en primer lugar ser capaz de unirse a las clulas de este mediante receptores especficos. Luego debe poder multiplicarse rpidamente resistiendo las defensas del organismo. Algunas especies son capaces de penetrar en las clulas husped, quedando as protegidas del sistema inmunitario. Una vez dentro del organismo, las bacterias pueden quedar limitadas a una zona, liberando toxinas que pueden difundir la otra partes del cuerpo; o ser transportadas por la sangre para concentrarse en otros rganos. Estas substancias txicas pueden matar directamente las clulas o bloquear algn aspecto de su actividad. Entre las enfermedades bacterianas podemos resaltar: Tuberculosis. Afecta a numerosos tejidos y sobre todo al pulmn. El bacilo responsable penetra a travs de la inhalacin de gotitas que expulsa la persona enferma al toser. Despus de varias reinfecciones y normalmente aprovechando una depresin del sistema inmune, el bacilo puede
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proliferar en el aparato respiratorio. En ese momento la propia respuesta defensiva genera unos ndulos alrededor de las bacterias con las que pueden controlar definitivamente la infeccin, o por el contrario quedar vacos al dejar escapar las bacterias. De esta manera van formndose huecos en el mismo tejido pulmonar. El tratamiento incluye antibiticos de rpida actuacin, sobre todo cuando se detecta precozmente por la prueba de la tuberculina. Clera. Enfermedad muy grave que se transmite por contacto y por los alimentos y agua contaminados. El aparato ms afectado es el digestivo manifestando vmitos y diarreas que conllevan la deshidratacin intensa. La vacuna ofrece una prevencin del 50%. Sfilis. Causada por una espiroqueta que se transmite por contacto sexual directo (enfermedad venrea) o a travs de la placenta. Origina heridas en los rganos genitales, seguida de una erupcin generalizada incluyendo afeccin del sistema nervioso. El tratamiento se realiza mediante antibiticos. Meningitis. Consiste en la inflamacin de las membranas que recubren el sistema nervioso central, normalmente causada por un meningococo. Se diseminan a partir de los portadores a travs del contacto con los objetos. Actualmente se realizan campaas de vacunacin en determinadas pocas y zonas de especial incidencia. Sin embargo el tratamiento es difcil pues los medicamentos atraviesan difcilmente las meninges. La tabla siguiente refleja otras enfermedades de tipo bacteriano, indicando la bacteria causante, como se transmite y su manifestacin: Enfermedad Meningitis Tuberculosis Sfilis Tifus Gangrena gaseosa Peste negra Botulismo Clera Lepra Ttanos Neumona Va de transmisin Contacto Aire Sexual Agua Contacto directo Vector (pulgas) Alimentos Agua Contacto directo Contacto directo Aire Bacteria Neisseria miningitides Mycobacterium tuberculosis Treponema pallidum Salmonella typhi Clostridium perfringens Yersinia pestis Clostridium botulinum Vibrio cholerae Mycobacterium leprae Clostridium tetani Diplococcus Manifestacin Inflamacin de las meninges Destruccin del tejido pulmonar Ulceraciones y parlisis progresiva Alteraciones del aparato digestivo Degeneracin del tejido con putrefaccin. Inflamacin de ganglios Neurotoxina paralizante Alteraciones del aparato digestivo Lesiones cutneas y nerviosas Contraccin tetnica de los msculos Congestin pulmonar

8.2 Enfermedades causadas por hongos

Las infecciones originadas por hongos reciben el nombre de micosis. Estas normalmente son superficiales, afectando a la piel, mucosas, pelo y uas. Suelen contagiarse por contacto directo o a travs de objetos.

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Pie de atleta. Afecta a las zonas de la piel con intensa sudoracin y humedad, como pueden ser los pliegues interdigitales en los pies. Est provocada por hongos pluricelulares que crecen en forma de micelio. Se contagia indirectamente a partir de los suelos de duchas pblicas, piscinas, etc. Candidiasis. Se trata de una de las infecciones micticas ms frecuentes. Est causada por Cndida albicans, un hongo levuriforme -una levadura- que se reproduce en la piel y mucosas, digestiva y genital. Se contagia mediante los objetos contaminados o directamente por contacto. Es necesario un tratamiento antifngico de duracin variable.

8.3 Enfermedades causadas por virus

Los virus deben introducirse en el citoplasma celular para completar su ciclo reproductivo, por lo que son parsitos de numerosas organismos, desde bacterias (bacterifagos), plantas, animales, y por supuesto tambin de la especie humana. Muchos de ellos incluso, despus de haber sido eliminados por las defensas del organismo, pueden permanecer en estado latente dentro de las clulas de algunos tejidos especialmente protegidos. Herpes. Los herpes virus son virus polidricos con ADN. Segn la especie causan dolencias diferentes, como la varicela, herpes comn, herpes genital, etc. En el caso de la varicela el virus queda latente en los ganglios nerviosos de tal modo que cuando se reactiva en el individuo adulto origina lesiones ms graves que en conjunto se denominan herpes zster. SIDA. Est originada por el VIH, un retrovirus que afecta especialmente a los linfocitos T4 o auxiliares de la respuesta inmune. Aun que ya en las primeras fases el organismo produce gran cantidad de anticuerpos, estos no resultan efectivos. Durante aos permanece en el sistema linftico, mayormente en estado latente. Gripe. Tambin llamada influenza, es una de las enfermedades vricas ms variable. A veces los sntomas no se diferencian del catarro, pero otras puede convertirse en la causa principal de muerte en ciertas epidemias. Se trasmite por contacto directo con las personas enfermas a travs de las gotitas portadoras del virus. A pesar de no existir un tratamiento eficaz contra este virus, es importante la prevencin por vacunacin, sobre todo en personas ms sensibles por padecer alguna deficiencia funcional grave o simplemente por ser de edad avanzada. Sarampin. Afecta principalmente a nios en los que induce inmunidad permanente. Se trasmite por gotitas infecciosas. Tras dos das de incubacin se manifiesta fiebre, conjuntivitis y sobre todo erupcin cutnea rojiza. Una vez se declara la enfermedad no existe tratamiento efectivo, pero es importante mencionar la vacunacin sistemtica que se viene realizando en los primeros aos de vida. Rubeola. Es una enfermedad altamente infecciosa, aun que de corta duracin y benigna. Con sntomas semejantes al sarampin (aun que de origen diferente) y con inflamacin de ganglios cervicales. Resulta especialmente peligrosa en los primeros meses de embarazo pues puede originar anormalidades congnitas. Enfermedad Va de transmisin Virus Manifestacin Mononucleosis Contacto (saliva) Herpesvirus Inflamacin de la faringe y ganglios. Catarro Aire Picornavirus Inflamacin de mucosas. Hepatitis B Contacto directo Picornavirus Muerte de hepatocitos. Poliomielitis Agua y alimentos Picornavirus Neuronas de la medula espinal.

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Sarampin Parotiditis (paperas)

Aire Aire

Paramyxovirus Paramyxovirus

Rubeola

Aire

Paramyxovirus

Gripe SIDA Rabia Varicela

Aire Contacto directo Saliva de animales infectados Aire

Orthomyxovirus Retrovirus Rhabdovirus Herpervirus

Erupcin cutnea. Inflamacin de glndulas salivares. Inflamacin de ganglios y erupcin cutnea Inflamacin de mucosas respiratorias. Destruye linfocitos. Da paso a enfermedades oportunistas Neuronas del sistema nervioso central Erupciones cutneas y vas respiratorias.

8.4 Otros agentes infecciosos, los priones

Los priones son pequeas partculas proteicas infecciosas. Son la causa de ciertas enfermedades neurodegenerativas (hereditarias o contrables) de los mamferos, incluidos los humanos (sndrome de kuru y sndrome de Creutzfeldt-Jakob), que reciben el nombre genrico de encefalopatas subagudas espongiformes transmisibles (TSEs). La infeccin se propaga cuando protenas infecciosas entran en contacto con protenas normales situadas en las membranas de las neuronas. Se produce entonces una reaccin en cadena (o efecto domin), en la que las molculas patolgicas atacan a las normales y estas, transformadas en patolgicas, a otras normales, etc., extendiendo la infeccin que va invadiendo el cerebro. La acumulacin en las neuronas de depsitos de priones, que no son eliminados por el organismo, acaba causando su destruccin. Existen casos comprobados de enfermedad de Alzheimer (en la que se forman placas degenerativas en las sinapsis) producidos por priones. Los priones saltaron a la prensa por ser los agentes causantes del mal de las vacas locas, que diezm la ganadera bovina del Reino Unido y se extendi por otros pases europeos, incluyendo el nuestro. El trmino cientfico, encefalopata espongiforme bovina, es debido a los abundantes huecos provocados por las neuronas muertas en el cerebro, lo que recuerda a una esponja. Esta enfermedad, llamada tambin de la locura de la vaca, se detect en 1986 en Gran Bretaa. El origen del contagio se relacion muy pronto con la alimentacin del ganado con piensos a los que se les haban aadido suplementos de harina de carne y huesos de ovejas que haban muerto la causa del scrapie o temblor bovino. Esta enfermedad produce, en ovinos y caprinos, prdida de coordinacin, lo que les impide mantenerse en pie, irritabilidad y picores agudos (por lo que tambin se llama prurito lumbar). La aparicin de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en personas que haban consumido carne de vacuno infectada, hizo sospechar una relacin causa-efecto entre ambas enfermedades. Los sntomas de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob son: demencia, con prdida de coordinacin (o a la inversa). En un 10-15% de los casos tiene carcter hereditario (por mutacin) y es rara su adquisicin por contacto directo. No se conoce la va de propagacin en los casos espordicos.

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8.5 Consecuencias sociales y econmicas

Las enfermedades infecciosas constituyen la primera causa de muerte en el mundo, aunque no afectan a todos los pases por igual. Las zonas ms afectadas son las que disponen de menos medios para prevenir y combatir esas enfermedades. La escasez de agua potable, la desnutricin y la falta de higiene son las principales responsables de la proliferacin de las enfermedades infecciosas. A pesar del grave problema que supone este tipo de dolencias, los avances en microbiologa permiten tener un conocimiento cada vez mayor de los mecanismos de accin de los agentes patgenos, sobre todo para prevenir y afrontar su propagacin. As, uno de los patgenos que ms estragos caus en la historia de la humanidad, el virus de la varicela, fue totalmente erradicado gracias a la elaboracin de una vacuna, y desde el ao 1977 no se detect ningn caso en el mundo.

9. Ingeniera gentica y sus aplicaciones

La biotecnologa es la aplicacin de procedimientos genticos para crear nuevos organismos capaces de sintetizar productos especficos de un alto valor comercial. La biotecnologa depende de la ingeniera gentica, ciencia que se ocupa de la manipulacin de los genes y de sus productos. Sus mtodos de trabajo tambin son conocidos cmo tcnicas de ADN recombinante. Estas tcnicas consisten en tomar fragmentos de ADN de distintos organismos y unirlos in vitro, denominndose ADN recombinante el ADN formado. Este ADN se introduce en otras clulas en las que se expresarn los genes contenidos en el fragmento manipulado e insertado. La expresin de estos genes ser siempre una protena. Los principales trabajos que abarca la ingeniera gentica son: Obtencin de fragmentos de ADN de un tamao que permita estudiarlos y manipularlos Obtencin de gran cantidad de estos fragmentos o clonacin gnica Identificacin de determinados fragmentos de ADN que tengan inters cientfico o industrial Determinacin de la secuencia de nucletidos de fragmentos de ADN (no lo veremos)

9.1 Obtencin de fragmentos de ADN

El mtodo ms empleado para obtener pequeos fragmentos de ADN (de entre 4 y 8 pares de bases) para ser analizados y manipulados consiste en la utilizacin de enzimas de restriccin. Son endonucleasas presentes en muchas bacterias que cortan el ADN extrao que penetra en la clula por sitios especficos denominados secuencias de reconocimiento, que en la bacteria original estn protegidos para evitar la destruccin de su propio ADN. Estas enzimas, que actan como verdaderas tijeras biolgicas, cortan el ADN de forma que en cada extremo queda un trozo de hebra monocatenaria formada por bases de la secuencia de reconocimiento. Estos extremos se denominan adherentes o cohesivos, ya que es por ellos por donde se pueden unir a otros fragmentos de ADN cortados por la misma enzima de restriccin.

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Los fragmentos obtenidos se pueden separar por tamaos -es decir, segn el n de nucletidos que llevan- por la tcnica de la electroforesis y, as, estudiarlos.

9.2 Obtencin de mltiples copias de ADN

Los trabajos de ingeniera gentica requieren de gran cantidad de fragmentos de ADN idnticos para poder manipularlos. Hay dos mtodos para lograrlo: la clonacin molecular y la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Clonacin molecular
Tambin se denomina clonacin gnica, y consiste en la formacin de mltiples copias de un determinado fragmento de ADN, mediante el poder de replicacin de los organismos vivos. Es necesario: - Unir el fragmento de ADN ( obtenido gracias a una enzima de restriccin), a otro ADN, llamado vector de clonacin. - Introducir el ADN resultante (recombinante) en clulas husped, donde se replicar formando nuevas copias. Como vectores de clonacin se emplean plsmidos o bacterifagos. Para poder unir el fragmento deseado al vector escogido, ambos deben ser cortados por la misma enzima de restriccin. Esto origina que los extremos de uno y otro fragmento sean cohesivos, y por la complementariedad de bases, se producir la hibridacin, es decir, la unin de estas zonas de ADN por complementariedad de bases. Se unirn luego los extremos gracias a una ADN-ligasa. Se consigue as que el fragmento de ADN deseado se una al ADN del vector, formando un ADN recombinante por la unin de ambos. Si cmo vector de clonacin se utiliza un plsmido, lo primero es cortar dicho plsmido y el fragmento de ADN de inters con la misma enzima de restriccin. De esta manera se producir su hibridacin. A continuacin el vector (formado por el plsmido + el fragmento de ADN recombinante) ser transferido a una bacteria. Cada vez que se replique la bacteria, se producir la replicacin del plsmido. La ltima etapa es la separacin de los plsmidos de los fragmentos clonados.

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9.3 Identificacin de fragmentos de ADN de inters

Para detectar un determinado fragmento de ADN hace falta preparar un molde que lo identifique, llamado sonda de hibridacin. Consiste en un segmento de ADN o de ARN de cadena sencilla, que sea complementario a la secuencia del fragmento que hay que localizar. Hay diferentes mecanismos para obtener las sondas de hibridacin. La sonda de hibridacin se pone en contacto con el ADN problema o bien con las clulas portadoras del mismo -en este ltimo caso, habr que utilizar NaOH para producir su lisis y desnaturalizar su material gentico-. Posteriormente se proceder para determinar con que fragmentos hibrida, quedando as localizado el ADN deseado. Por ejemplo, si se quiere clonar el gen de la insulina y posteriormente identificarlo, la sonda se preparar a partir de clulas de pncreas productoras de insulina. A partir de ellas se aislar el ARNm para esta hormona; mediante una transcriptasa inversa se sintetizar, con nucletidos marcados radiactivamente la cadena de ADN complementaria; mediante ADN pol y ADN ligasa y con nucletidos tambin marcados, se formar la cadena de ADN complementaria. Este ADN formado, actuar como sonda en el proceso de hibridacin para la identificacin del gen de la insulina.

10. Aplicaciones de la ingeniera gentica en medicina

Entre ellas estn: la produccin de substancias con efectos teraputicos (hormona del crecimiento, insulina), produccin de vacunas (como las de la Hepatitis A y B), el diagnstico de enfermedades hereditarias (como la anemia falciforme), identificacin de genes humanos (como el gen de la fibrosis cstica, que afecta a los pulmones), y la terapia gnica (consiste en reemplazar en las clulas un gen defectuoso , causante de una enfermedad por el gen normal).

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Produccin de substancias teraputicas. Como la insulina, la hormona del crecimiento protenas con cierta actividad especfica tales como el interfern, o los factores de coagulacin sangunea. Incluso se estn consiguiendo vacunas y anticuerpos. Estas substancias se consiguen mediante la implantacin de genes humanos en microorganismos en los que se expresan correctamente en cantidad suficiente para ser aprovechada por la industria. Diagnstico precoz de enfermedades genticas. Cuando se dispone de la secuencia de la protena que causa cierta enfermedad gentica, se puede reconstruir la secuencia de ADN correspondiente. Este se podr emplear como sonda para mezclar con el ADN problema y as determinar si hay hibridacin. En tal caso quedar demostrada la presencia del gen anormal en individuos que an no manifiestan la enfermedad o simplemente son portadores de la misma. Terapia gnica. Consiste en la substitucin en las clulas de un gen defectuoso causante de cierta enfermedad. La mayora de los casos estn orientados a un grupo limitado de clulas dentro del individuo, como por ejemplo la mdula sea (se consigue por ejemplo el tratamiento de la inmunodeficiencia congnita grave que se debe al mal funcionamiento de una enzima del sistema inmune; o tambin la introduccin de un genes en paredes de vasos sanguneos obstruidos que permite activar la formacin de capilares que desvan la circulacin). Para esto es necesario identificar el gen implicado, sintetizar y obtener mltiples copias del mismo, introducirlo en un vector idneo y finalmente transferirlo a las clulas objetivo.

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11. Aplicaciones en agricultura

Las nuevas tcnicas de ingeniera gentica permiten tanto la potenciacin de caractersticas deseables, rendimiento de los cultivos, resistencia a herbicidas o la plagas como la creacin de variedades y especies nuevas, de mayor riqueza nutricional. La lucha contra las enfermedades vricas de las plantas, se aborda por ingeniera gentica. Tambin se crearon por ingeniera gentica, a partir de genes transferidos de bacterias, variedades de patata, tomate y algodn o trigo que fabrican molculas txicas (insecticidas) para orugas. La biotecnologa permite en la actualidad obtener bioplaguicidas como por ejemplo contra el hongo parasito de la langosta.

12. Repercusiones econmicas, sociales y ticas de la manipulacin gentica.

La tcnica del ADN recombinante se inici en los aos 70 y ya de aquella surgi la controversia entre sus ventajas econmicas y sus posibles peligros. Por una parte, es evidente que por ingeniera gentica se pueden obtener gran cantidad de substancias beneficiosas, no solo desde el punto de vista de la salud, como desde el punto de vista meramente comercial (plantas resistentes, alimentos transgnicos, etc.) En una primera etapa, las cuestiones sobre ingeniera gentica se centraron en la calidad, seguridad y eficacia de los productos. En una segunda etapa, la discusin gir en torno a cuestiones ticas y a su relacin con los procesos legislativos. Para dar respuesta a estas cuestiones se crearon varias organizaciones, entre ellas el Comit Internacional de Biotica de la Unesco, constituido por unos 50 cientficos de unos 35 pases, fundado por el espaol F. Mayor Zaragoza en 1993. El objetivo de estos comits de biotica es evitar aquellos aspectos del progreso que atenten contra la dignidad humana, que la ciencia no sea identificada como parcialmente sospechosa y que sus posibilidades no generen peligrosidad por falta de definiciones ticas. Los criterios bsicos establecidos son: Lmites por motivos ecolgicos y de sanidad. Tienen que existir controles muy estrictos en la produccin de organismos transgnicos cuando stos puedan causar desastres ecolgicos, como extincin de especies naturales debido su mayor competitividad, causar enfermedades en humanos (por ejemplo infecciones por nuevos virus o nuevas bacterias) o causar contaminaciones en las aguas, debido a nuevos procesos metablicos indeseables. Lmites por motivos ticos y morales. Se considera que muchas aplicaciones que son totalmente lcitas en especies animales y vegetales no lo son en la especie humana debido a la dignidad de la persona. El uso de la ingeniera gentica con la intencin de curar una enfermedad humana (terapia gnica) es moralmente deseable, siempre que se respete la integridad del individuo y no lo exponga a riesgos desproporcionados. En el caso de los embriones hace falta el consentimiento de los padres. Tambin se prohbe trabajar con embriones humanos con finalidad de simple experimentacin. Lmites por motivos sociales. Se considera que tienen que existir lmites legales, basados en el derecho a la intimidad, que impidan un sondeo gentico para acceder a un puesto de trabajo, a la firma de una pliza de seguros, etc. Lmites por motivos polticos. Se considera que las aplicaciones de la ingeniera gentica en la produccin vegetal y animal deben favorecer a todos los humanos y no slo a los grupos que dominan estas tcnicas. Podra haber prejuicios econmicos graves si,

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mediante el establecimiento de patentes de organismos transgnicos, se aumentaran las diferencias entre pases pobres y ricos

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