ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIN DE CIDOS NUCLEICOS TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENTICO I: CONJUGACIN

INTRODUCCION

Los plsmidos son generalmente elementos que se replican independientemente del cromosoma del hospedador. A diferencia de los virus, los plsmidos no tienen una forma extracelular y existen dentro de las clulas como cidos nucleicos. Es posible diferenciar entre un plsmido y un cromosoma en procariotas, por que los plsmidos no llevan genes que sean requeridos por el hospedador en todas las condiciones. El principal mecanismo de transmisin de clula a clula es la conjugacin, que es una funcin codificada por algunos plsmidos. Es un proceso replicativo en el que ambas clulas terminan con copias del plsmido. Los plsmidos que gobiernan su propia transferencia de una clula a otra por contacto se llaman conjugativos, pero no todos los plsmidos son conjugativos. La transmitabilidad por conjugacin est controlada por un conjunto de genes dentro del plsmido que constituye la regin tra. La regin tra contiene genes que codifican protenas que funcionan en la transferencia del DNA y en su replicacin, y otras que funcionan en la formacin de parejas conjugativas. La presencia de una regin tra en un plsmido puede tener otra importante consecuencia si el plsmido se integra en el cromosoma. En este caso el plsmido puede movilizar la transferencia del DNA cromosmico de una clula a otra. Las cepas de bacterias que transfieren grandes cantidades de DNA cromosomal durante la conjugacin se llaman Hfr, alta frecuencia de recombinacin. Un plsmido conjugativo usa este mecanismo para transferir una copia de s mismo al nuevo hospedador. Sin embargo, otros elementos genticos resultan a veces movilizados durante la conjugacin. Estos pueden ser otros plsmidos o el cromosoma del hospedador. La conjugacin se descubri por que el plsmido F de E. coli puede movilizar el cromosoma del hospedador y la mayora de los plsmidos de las

bacterias Gram negativas emplean un mecanismo similar al usado por el plsmido F. Los pilis permiten el apareamiento especfico entre la clula donadora y la receptora. Estos establecen contactos especficos con un receptor de la otra clula y luego se retraen, empujando una clula hacia la otra. Despus los contactos entre las clulas donadora y receptora se estabilizan, probablemente por fusin de las membranas externas, y el DNA se transfiere de una clula a otra.

Existen 4 tipos de cepas bacterianas, relacionadas con el plsmido F: - Cepa F-: Clula bacteriana receptora, no posee plsmido F. - Cepa F+: Clula donadora que transfiere el plsmido F durante la conjugacin.

- Cepa Hfr: Clula bacteriana que posee el plsmido F integrado a su cromosoma, tiene la capacidad de conferir porciones de este proporcionando una alta frecuencia de recombinacin. No transfiere el plsmido F. - Cepa F: Clula que posee un plsmido f extracromosmico que anteriormente se encontraba integrado al cromosoma. Acta como clula donadora y transfiere el plsmido junto con genes bacterianos generando clulas heterocigotas (copias de clulas con genes bacterianos de la cepa F donadora) OBJETIVO: Conocer los mecanismos por los que una bacteria puede adquirir un plsmido y as entender el mecanismo por el cual se realiza la conjugacin bacteriana y reconocerla como un fenmeno de transferencia horizontal de material gentico. HIPOTESIS: Si se tienen dos cepas (una con plsmido F (F) y otra que no lo tenga (F-) con caractersticas fenotpicas diferentes (resistencia a kanamicina para F y resistencia a estreptomicina para F-) y se ponen en contacto, entonces el material gentico ser transferido de la clula F (donadora) a la clula F(receptora) por conjugacin, dndole las caractersticas genotpicas y fenotpicas que corresponden, obteniendo al final una cepa con resistencia a kanamicina y estreptomicina. RESULTADOS:
Tabla 1. UFC en medio Luria-Kanamicina.

ANALISIS DE RESULTADOS Se utilizaron dos cepas de E. coli que presentan resistencia a diferentes tipos de antibiticos. Se sembraron ambas cepas en medios de cultivo nutritivos y adicionados con Kanamicina y Estreptomicina respectivamente, y se observo que en el medio de cultivo adicionado con Kanamicina la cepa JM1452StrR (receptora) no creci mientras que si lo hizo en medio adicionado con Estreptomicina, demostrando que es resistente a Estreptomicina. Ocurri lo contrario con la cepa W3110/FKmTn3 (donadora). El proceso de conjugacin se llevo a cabo mezclando la cepa donadora y la receptora, colocndolas en incubacin por 30 min a 37C. En este tiempo se llevo a cabo el reconocimiento celular mediado por el Pili F, la formacin del puente plasmtico y reconocimiento del origen de replicacin para culminar con la replicacin del plsmido transferible, en este caso la resistencia a Kanamicina. Una vez transcurrido el tiempo de incubacin se inocularon las cepas donadora, receptora y la cepa conjugada en los medios antes mencionados y se observ claramente el crecimiento de la cepa conjugada en ambos medios, adquiriendo resistencia a Kanamicina. CONCLUSION: Al llevar a cabo la prctica se pudo conocer uno de los mecanismos de transferencia de material gentico que fue la conjugacin. La transferencia de material gentico entre bacterias principalmente la conjugacin ha permitido la formacin de nuevas cepas con caractersticas distintivas de las proporcionadas por sus ancestros, permitiendo una gran variabilidad celular y una evolucin adaptativa al medio, por ejemplo la aparicin de cepas multirresistentes a antibiticos.

Tabla 2. UFC en medio Luria-Estreptomicina.

Bibliografa Voet, D. y Voet, D. J., Biochemistry,. New York, John Wiley and Sons. 2004.

Nussbaum R. L., MacInnes R. R., Huntington F. Willard, Thompson & Thompson: Gentica en medicina, Elsevier, Espaa, 5a. Edicin, 2004 pp. 129-133.