Microbiologia

Microbiologia
Alexandre Verzani Nogueira Germano Nunes Silva Filho

Florianpolis, 2010.

Governo Federal
Presidente da Repblica Luiz Incio Lula da Silva Ministro de Educao Fernando Haddad Secretrio de Ensino a Distncia Carlos Eduardo Bielschowky Coordenador Nacional da Universidade Aberta do Brasil Celso Costa

Comisso Editorial Viviane Mara Woehl, Alexandre Verzani Nogueira

Projeto Grfico Material impresso e on-line

Coordenao Prof. Haenz Gutierrez Quintana Equipe Henrique Eduardo Carneiro da Cunha, Juliana Chuan Lu, Las Barbosa, Ricardo Goulart Tredezini Straioto

Universidade Federal de Santa Catarina

Reitor Alvaro Toubes Prata Vice-Reitor Carlos Alberto Justo da Silva
Secretrio de Educao Distncia Ccero Barbosa

Equipe de Desenvolvimento de Materiais

Laboratrio de Novas Tecnologias - LANTEC/CED Coordenao Geral Andrea Lapa Coordenao Pedaggica Roseli Zen Cerny Material Impresso e Hipermdia
Coordenao Laura Martins Rodrigues, Thiago Rocha Oliveira Adaptao do Projeto Grfico Laura Martins Rodrigues, Thiago Rocha Oliveira Diagramao Laura Martins Rodrigues, Grasiele Pilatti Ilustraes Alexandre dos Santos Oliveira, Amanda Cristina Woehl, Talita vila Nunes, Liane Lanzarin, Maiara Ornellas Ario, Grazielle S. Xavier, Jean H. de O. Menezes, Tarik Assis Pinto, Maicon Hackenhaar de Araujo, ngelo Bortolini Silveira Reviso gramatical Ana Carolina de Melo Martins

Pr-Reitora de Ensino de Graduao Yara Maria Rauh Mller Pr-Reitora de Pesquisa e Extenso Dbora Peres Menezes Pr-Reitora de Ps-Graduao Maria Lcia Camargo Pr-Reitor de Desenvolvimento Humano e Social Luiz Henrique Vieira da Silva Pr-Reitor de Infra-Estrutura Joo Batista Furtuoso Pr-Reitor de Assuntos Estudantis Cludio Jos Amante Centro de Cincias da Educao Wilson Schmidt

Curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas na Modalidade a Distncia

Diretora Unidade de Ensino Sonia Gonalves Carobrez Coordenadora de Curso Maria Mrcia Imenes Ishida Coordenadora de Tutoria Zenilda Laurita Bouzon Coordenao Pedaggica LANTEC/CED Coordenao de Ambiente Virtual Alice Cybis Pereira

Design Instrucional Coordenao Vanessa Gonzaga Nunes Design Instrucional Cristiane Felisbino Silva,
Marisa Campos Santana, Joo Vicente Alfaya dos Santos

Copyright 2010 Universidade Federal de Santa Catarina. Biologia/EaD/UFSC Nenhuma parte deste material poder ser reproduzida, transmitida e gravada sem a prvia autorizao, por escrito, da Universidade Federal de Santa Catarina. N778m Nogueira, Alexandre Verzani Microbiologia / Alexandre Verzani Nogueira, Germano Nunes Silva Filho. Florianpolis : Biologia/EaD/UFSC, 2010. 213 p.: il., grafs., tabs., plantas ISBN 978-85-61485-26-9 1. Microbiologia. 2. Ensino. 3. Biologia. I. Silva Filho, Germano Nunes. II. Ttulo. CDU: 576.8 Catalogao na fonte elaborada na DECTI da Biblioteca Universitria da Universidade Federal de Santa Catarina.

Sumrio

Apresentao....................................................................................... 9 1. Introduo Microbiologia.........................................................11

1.1 Histrico .......................................................................................................................13 1.2 Posio dos microrganismos na rvore da vida .................................................17

2. Bactrias.........................................................................................23
2.1 Morfologia e estrutura bacteriana ....................................................................... 25 2.1.1 Formas das bactrias ...................................................................................27 2.1.2 Arranjos bacterianos....................................................................................27 2.2 Estruturas externas e internas das clulas bacterianas ................................... 28 2.2.1 Estruturas externas ......................................................................................28 2.2.2 Estruturas internas .......................................................................................33 2.3 Gentica bacteriana................................................................................................. 36 2.3.1 Material gentico da bactria ...................................................................37 2.3.2 Replicao do DNA ......................................................................................37 2.3.3 Transcrio, traduo e sntese de protenas .........................................37 2.3.4 Mutao e Recombinao do material gentico ................................ 40 2.3.5 Gentica e Biotecnologia ...........................................................................45

3. Reino Protista ...............................................................................51

3.1 Introduo .................................................................................................................. 53 3.2 Algas ............................................................................................................................ 53 3.2.1 Introduo ....................................................................................................53 3.2.2 A importncia das algas ............................................................................55 3.3 Protozorios............................................................................................................... 58 3.3.1 Classificao ..................................................................................................59 3.3.2 Importncia ..................................................................................................61

4. Fungos ............................................................................................63
4.1 Introduo .................................................................................................................. 65 4.2 Caractersticas ........................................................................................................... 65 4.3 Morfologia ................................................................................................................. 66 4.3.1 Sistema somtico ........................................................................................ 66 4.3.2 Sistema reprodutivo ....................................................................................69 4.4 Sistemtica de fungos ............................................................................................. 72 4.4.1 Reino Protista ................................................................................................73 4.4.2 Reino Stramenopila .....................................................................................75 4.4.3 Reino Fungi ....................................................................................................77 4.5 Disseminao ............................................................................................................ 82 4.6 Importncia ............................................................................................................... 83

5. Vrus ................................................................................................87
5.1 Introduo .................................................................................................................. 89 5.2 Caractersticas gerais dos vrus ............................................................................. 91 5.3 Taxonomia viral......................................................................................................... 96 5.4 Ciclo de vida dos bacterifagos ............................................................................ 96 5.5 Cultivo dos vrus ....................................................................................................... 99 5.6 Outros agentes infecciosos .................................................................................... 99 5.7 Viroses ......................................................................................................................... 99

6. Interaes com microrganismos ...............................................103

6.1 Introduo ................................................................................................................ 105 6.2 Interaes positivas ............................................................................................... 105 6.3 Interaes negativas.............................................................................................. 107 6.4 Outras interaes ................................................................................................... 109

7. Microbiologia do Solo ................................................................113

7.1 O solo ..........................................................................................................................115 7.2 Microrganismos do solo .........................................................................................116 7.3 Efeitos dos fatores ambientais ..............................................................................117 7.3.1 Fatores primrios ........................................................................................118 7.3.2 Fatores secundrios ...................................................................................119 7.4 Funes dos microrganismos no solo................................................................ 121 7.5 Rizosfera.................................................................................................................... 125

8. Microbiologia da gua ...............................................................131

8.1 Introduo ................................................................................................................ 133 8.2 Microrganismos e aspectos de sade ............................................................... 134 8.3 Coliformes ................................................................................................................ 136 8.4 Mtodos de anlises microbiolgicas de gua ............................................... 137 8.4.1 Mtodo dos tubos mltiplos ou nmero mais provvel....................138 8.4.2 Mtodo da membrana de filtro ..............................................................139 8.4.3 Outras anlises .......................................................................................... 140

9. Microbiologia do Ar ....................................................................143
9.1 Introduo ................................................................................................................ 145 9.2 Fontes de contaminao ...................................................................................... 145 9.3 Fatores que afetam a populao ........................................................................ 147 9.4 Mtodos de avaliao............................................................................................ 147 9.5 Controle da populao.......................................................................................... 148 9.6 Utilidade ................................................................................................................... 149

10. Ciclo dos elementos qumicos .................................................151

10.1 Introduo .............................................................................................................. 153 10.2 Ciclo do Carbono .................................................................................................. 153 Decomposio dos compostos adicionados ao solo...................................155 10.3 Ciclo do Nitrognio .............................................................................................. 156 10.3.1 Mineralizao ...........................................................................................157 10.3.2 Nitrificao ................................................................................................158 10.3.3 Desnitrificao..........................................................................................159 10.3.4 Imobilizao..............................................................................................159 10.3.5 Fixao de nitrognio .............................................................................161 10.4 Ciclo do Enxofre .................................................................................................... 166 10.5 Ciclo do Fsforo .................................................................................................... 167 10.6 Ciclo do Potssio................................................................................................... 169

11. Patogenicidade .........................................................................173

11.1 Introduo .............................................................................................................. 175 11.2 Etapas do desenvolvimento da doena .......................................................... 176

12. Controle de microrganismos ...................................................183

12.1 Introduo .............................................................................................................. 185 12.2 Fatores que afetam os microrganismos .......................................................... 186 12.3 Agentes fsicos ...................................................................................................... 187 Calor........................................................................................................................187 Calor seco ..............................................................................................................187 Calor mido ......................................................................................................... 188 Pasteurizao ...................................................................................................... 189 Filtrao ................................................................................................................ 189 Frio ....................................................................................................................... 190 Radiao ............................................................................................................... 190 Presso osmtica .................................................................................................192 Ressecamento .......................................................................................................192 12.4 Agentes qumicos ................................................................................................. 193 Fenol e compostos fenlicos............................................................................. 194 Halognios ........................................................................................................... 194 lcool ......................................................................................................................195 Modo de ao dos agentes qumicos ..............................................................195 Avaliao dos agentes qumicos ..................................................................... 196

13. Microbiologia Industrial - Biotecnologia ...............................199

13.1 Introduo .............................................................................................................. 201 13.2 Substratos em biotecnologia ............................................................................204 13.3 Produtos e processos da biotecnologia ..........................................................204 Indstria de alimentos ....................................................................................... 204 Indstria de bebidas alcolicas ....................................................................... 206 Indstria farmacutica ...................................................................................... 207 Indstria agropecuria ...................................................................................... 208 13.4 Aplicaes em meio ambiente ..........................................................................209

Apresentao

O contedo apresentado neste livro de Microbiologia representa um esforo dos professores autores em procurar transmitir aos alunos conhecimentos adquiridos ao longo de anos de ministrao de cursos na modalidade presencial. No uma obra acabada, mas o incio de uma tentativa de uma nova forma de ensinar. Portanto, caro aluno, voc parte importante deste processo. Ningum melhor do que voc para nos ajudar a melhorar este material ao longo do nosso curso. Durante a leitura deste material voc encontrar informaes sobre o histrico da microbiologia e dos organismos que so objeto de estudo dos microbiologistas: bactrias, algas, protozorios, fungos e vrus. Tambm sero discutidos: a presena dos microrganismos nos mais diferentes ambientes como o solo, a gua e o ar, bem como as atividades desenvolvidas por eles e que representam importantes funes na manuteno da vida do planeta. Em adio, os microrganismos apresentam uma intensa vida social em relacionamentos com outros seres vivos e com o meio ambiente. Algumas destas interaes so positivas e outras negativas, como as relacionadas patogenicidade. Por fim, importante conhecer as formas de controlar os microrganismos e os produtos microbianos que utilizamos no cotidiano e que muitas vezes nos passam despercebidos e parecem ser de pouca importncia. Na verdade, ningum vive sem os microrganismos que esto ao nosso redor e dentro da gente. Alexandre Verzani Nogueira Germano Nunes Silva Filho

c a p t u lo 1

Introduo Microbiologia
Neste captulo sero apresentados os principais personagens e suas contribuies para o desenvolvimento da microbiologia. Tambm ser discutido ao longo do tempo o posicionamento dos microrganismos na rvore da vida.

c a p t u lo 1

Introduo Microbiologia

13

1.1 Histrico
Desde a antiguidade havia a suspeita de que deveriam existir organismos menores do que aqueles que se podia observar. Alguns aventuravam a dizer que nas costas de um animal maior existia um menor, e neste menor existia um ainda menor e assim, sucessivamente. Tambm havia a ideia de que as doenas se propagavam por sementes. Mas quem pela primeira vez convenceu o mundo de que os microrganismos existiam foi Antony Van Leeuvenhoek, sendo, portanto, considerado o pai da Microbiologia. Novo impulso s foi dado na microbiologia com o desenvolvimento da indstria tica na Alemanha com a produo de microscpios compostos. O primeiro perodo ureo da microbiologia teve incio no final do sculo XIX, com a derrubada da teoria da abiognese, o estabelecimento dos processos de fermentao como produto da atividade de microrganismos, o da relao de microrganismos com as doenas e o desenvolvimento da microbiologia agrcola e ambiental. A teoria da abiognese teve origem junto com a humanidade. Ela era inclusive defendida por grandes filsofos. Mas medida que o conhecimento sobre biologia evolua, ela ia paulatinamente sendo derrubada. O ponto final foi dado por Redi, em 1668, quando demonstrou que as larvas que surgiam na carne em putrefao eram um estgio da vida das moscas, e que as mesmas no surgiam na carne se a mesma estivesse devidamente protegida.

teoria da abiognese
Hiptese que se baseava na crena de que os seres vivos poderiam ser originados a partir da matria bruta.

14

Microbiologia

Leeuvenhoek era um holands, comerciante de tecidos. Para no ser enganado na compra, comeou a utilizar lentes para verificar os produtos que adquiria. Isto despertou o seu interesse na produo destes instrumentos. Ele passou a produzir lentes com tal acuidade que permitiam aumentos de at 400 vezes. Com estas lentes comeou a investigar o mundo que o cercava. Como ele no era um cientista, passou a comunicar suas descobertas atravs de cartas. Em 1674 escreveu para a Sociedade Real Inglesa que tinha ficado maravilhado ao descobrir em uma gotcula uma srie de animlculos. Ele descreveu com tal preciso o que tinha observado que hoje possvel identificar os microrganismos visualizados. No entanto, como no era da rea da cincia, no deixou discpulos. Com a sua morte, a tcnica de polimento das lentes foi perdida, e seu trabalho interrompido.

Figura 1.1 Retrato de Antony Van Leeuvenhoek. (Disponvel em: <http://upload.wikimedia.org/ wikipedia/commons/9/94/Jan_Verkolje__Antonie_van_ Leeuwenhoek.jpg.> Acesso em: 19/01/2010).

No entanto, com a descoberta dos microrganismos, esta teoria ressurgiu, pois preparados aparentemente isentos de microrganismos, em pouco tempo apresentavam abundncia dos mesmos. Logo, duas correntes de pensamento foram estabelecidas: a da biognese e a da abiognese, cada qual produzindo experimentos tentando provar sua teoria ou derrubar a do outro. Os partidrios da teoria da biognese comearam com o conhecimento de que o calor matava os microrganismos, assim, meios de cultura submetidos fervura por longos perodos, mostravam a ausncia de microrganismos. Mas, com o passar do tempo, os microrganismos surgiam. Logo, eles podiam estar aparecendo de algum lugar e, o mais lgico, era o ar. Trataram, ento, de aquecer o material em recipientes fechados, e assim o mantinham estril. Os adeptos da teoria da abiognese contra atacaram, argumentando que em ambientes fechados os microrganismos no teriam acesso ao oxignio que era considerado na poca essencial a todo o tipo de vida. Foi quando entrou em cena Louis Pasteur. Ele resolveu o problema utilizando um balo de vidro cujo pescoo fora esticado e encurvado na forma de um pescoo de cisne. O frasco,

Introduo Microbiologia

15

contendo no seu interior meio de cultura era ento aquecido e fervido. Com este procedimento, o meio de cultura ficava isento de microrganismos por longos perodos. S surgiam microrganismos, quando o gargalo era quebrado ou quando se fazia o lquido vir at a borda do pescoo e retornar para dentro do frasco (Figura 1.2). Na realidade, pode-se dizer que Pasteur teve muita sorte, pois, outro pesquisador, Tyndall, tambm realizava experimentos semelhantes, utilizando-se de uma caixa selada. Quando ele passava atravs da caixa um raio de luz e verificava que no havia partculas em suspenso no ar, o meio de cultura permanecia estril. Seu experimento foi repetido diversas vezes com sucesso. De repente, o meio comeou a apresentar crescimento. Ao investigar o problema, ele descobriu que o que estava crescendo era um microrganismo que produzia endsporos, capazes de resistir a vrias horas de fervura. Outra participao de Pasteur foi quando do estabelecimento dos processos de fermentao. Pasteur era qumico, e na sua poca as fermentaes eram consideradas reaes qumicas. Ao estudar este processo, Pasteur descobriu que em boas produes de vinhos e cervejas, ocorria a presenas de microrganismos conhecidos hoje como leveduras. Sugeriu ento que estas leveduras deveriam ser inoculadas nos mostos ou sucos de uva para a produo de um bom produto. Mas havia um problema, estes materiais j apresentavam uma microbiota oriunda do campo, da prpria uva, dos processos de transporte e processamento. Como eliminar estes organismos, para introduzir somente os microrganismos desejveis? O aquecimento eliminava os microrganismos, mas tambm alterava as caractersticas do produto. Foi quando Pasteur desenvolveu um procedimento conhecido por pasteurizao. Este procedimento utilizado at hoje na preservao de alimentos como sucos, cervejas e leite. Outro pesquisador que teve participao destacada no desenvolvimento da microbiologia, notadamente na rea mdica, foi Robert Koch. Ele era um mdico que vivia no interior da Alemanha e ganhou de presente de aniversrio de sua esposa um microscpio com o qual comeou a pesquisar o mundo microbiano. Ao investigar a morte de animais por uma doena conhecida por carbnculo, verificou que nas lminas preparadas com esfregao

Figura 1.2 (A) Vidro com forma de um pescoo de cisne e (B) vidro com o gargalo quebrado mostrando o crescimento microbiano. (Adaptado de: <http://www.ateus.net/artigos/ ciencias/imagens/como_a_ vida_comecou_1.gif>. Acesso em: 29/03/2010).

pasteurizao
Aquecimento do produto a baixas temperaturas, e por longos perodos, de forma a destruir os microrganismos indesejveis sem alterar as caractersticas do produto.

16

Microbiologia

do sangue encontrava um microrganismo em forma de basto. Comeou ento a relacionar a presena deste microrganismo ao desenvolvimento da doena. Como provar isto? Bom parecia ser fcil. Bastava inocular este microrganismo em um animal sadio e ver se este desenvolvia a doena. Mas para isso era necessrio obter este organismo em cultura, em uma cultura contendo apenas este microrganismo, ou seja, uma cultura pura. Foi necessrio, ento, o desenvolvimento de metodologia de isolamento, de cultivo de microrganismos e de identificao. A partir da, Koch elaborou quatro postulados, conhecidos como Postulados de Koch, que so utilizados at hoje para relacionar doenas ao seu agente, ou seja: O microrganismo deve estar presente em todos os casos da doena; isolar o microrganismo em cultura pura; ao ser inoculado em um organismo sadio e susceptvel, deve desenvolver os sintomas da doena e por ltimo obter novamente o microrganismo em cultura pura. Com estes postulados, em questo de duas dcadas (1880 a 1900) as doenas mais importantes para a espcie humana, incluindo a de outros animais e as de plantas, tiveram o seu agente identificado. Isto abriu as portas para o controle das infeces, possibilitando a preveno, o tratamento e a cura. Pasteur participou, ainda, no entendimento do processo de imunizao e desenvolvimento de vacinas. Certa vez, ao tentar demonstrar que havia identificado o agente causador de uma doena de aves, verificou que bactrias quando submetidas ao cultivo continuado podiam ficar atenuadas, ou seja, perdem a capacidade de produzir a doena, mas no perdem a capacidade de induzir a imunidade. Na demonstrao, Pasteur inoculou um lote de galinhas com a bactria isolada e outro lote permaneceu como testemunha. Para seu espanto, ambos os lotes permaneceram vivas. Avaliando o que poderia ter ocorrido, descobriu que a cultura utilizada no experimento, era uma cultura velha, ou seja, de vrios dias de incubao. Resolveu ento repetir o experimento, inoculando um novo lote de galinhas e o lote que tinha sido inoculado anteriormente. Ao avaliar o experimento, verificou que as galinhas inoculadas com a cultura jovem haviam morrido. As que receberam a cultura jovem, mas que anteriormente haviam sido inoculadas com a cultura velha, e as que no foram inoculadas, conti-

Introduo Microbiologia

17

O termo foi uma homenagem a Jenner que teria utilizado material de vacas com varola para imunizar humanos.

nuaram vivas. Desta forma, foi sugerido que a imunidade poderia ser obtida inoculando-se microrganismos atenuados e deu o nome desta tcnica de vacinao. Enquanto que a maioria dos microbiologistas da poca estava preocupada com as questes de patogenicidade, em descobrir quem provoca o que, alguns se questionavam indagando: existem tantos microrganismos no ambiente, no solo, na gua, na superfcie de planta e animais, qual o papel destes microrganismos, o que eles fazem? Neste questionamento tiveram grande participao Winogradsky e Beijerinck. Eles demonstraram a importncia dos microrganismos na ciclagem dos nutrientes e descobriram microrganismos quimiolitotrficos e fixadores de nitrognio.

So microorganismos que obtm energia a partir da oxidao de compostos inorgnicos. A maioria destas bactrias autotrfica e utilizam CO2 como fonte nica de carbono, so, portanto quimioautotrficas.

Nas dcadas de 40 e 50 inicia o segundo perodo ureo da microbiologia. Os microrganismos so utilizados como modelos, como ferramentas, na sntese de compostos orgnicos, no desenvolvimento da gentica e tecnologia de DNA recombinante. Estes conhecimentos vieram a culminar com o desenvolvimento da biotecnologia, ou seja, o uso de organismos ou partes destes na obteno de produtos e servios. Qual ser o futuro da microbiologia? Quem tiver a resposta para esta questo, por favor, divulgue, pois, precisamos nos manter atualizados.

1.2 Posio dos microrganismos na rvore da vida

No incio da biologia, devido a diferenas marcantes, os organismos foram divididos em dois grupos (Figura 1.3). De um lado estavam os animais que apresentavam, entre outras caractersticas: mobilidade, crescimento limitado, clulas sem parede celular e eram heterotrficos. J as plantas, imveis, apresentavam clulas com parede celular, crescimento ilimitado e eram autotrficas. Na medida em que os microrganismos foram descobertos, iam sendo distribudos entre os dois grupos. Desta forma, Linnaeus props, em 1753, a incluso de todos os organismos nos reinos Plantae e Animalia. Sendo as bactrias,

18

Microbiologia

algas e fungos includos com as plantas e os protozorios com os animais. No entanto, como os microrganismos apresentam caractersticas que no os classificavam perfeitamente em cada reino, controvrsias comearam a surgir. A maioria das bactrias heterotrfica e apresenta parede celular, sendo algumas espcies mveis. Algas unicelulares so mveis, e determinados grupos no apresentam parede. Os fungos so heterotrficos. Os organismos euglenoides so tratados por alguns como algas flageladas e por outros como protozorios clorofilados. Para resolver o problema Haeckel props em 1866 a criao de um terceiro reino denominado de Protista, ou seja, os primeiros. Nele deveriam ser includos todos os organismos (microrganismos) que no fossem caracterizados como pertencentes aos reinos Plantae e Animalia. No entanto, verificou-se que estes organismos apresentavam uma caracterstica em comum. So organismos unicelulares, isto , no apresentam diferenciao de clulas formando tecidos ou rgos. Com o desenvolvimento da microscopia, verificou-se que dentro do reino Protista havia microrganismos com caractersticas muito distintas. Um grupo apresentava clulas em que o material gentico estava em contato com o citoplasma e foram denominadas de clulas procariticas. Outro apresentava clulas com um ncleo contendo o material gentico envolto por uma membrana e foram denominadas de clulas eucariticas. Tal tipo de clula tambm caracterstica de plantas e animais. Surge ento a ideia da diviso dos protistas em superiores e inferiores. Os pro-

Perodo

Proposta

Antiguidade

1753 Linnaeus

An

Animal

Vegetal
ge Ve tal

im

al

An
1866 Haekel

im

al
Protista

g Ve

eta

An

Fungi
im al

1969 Whittaker

g Ve
Protista Monera

eta

Euk a

Figura 1.3 Evoluo da rvore da vida.

Archaea

1977 Woese

rya

Ba

cte

ria

Introduo Microbiologia

19

tistas superiores eram constitudos dos organismos que apresentavam clula do tipo eucaritica como algas superiores, fungos e protozorios. As bactrias e as algas inferiores, que apresentam clula do tipo procaritica foram denominadas de protistas inferiores. As algas inferiores foram depois denominadas de algas verde-azuladas, cianofceas e mais recentemente denominadas de cianobactrias. Em 1969, Whittaker, baseado na ideia de que os organismos evoluram segundo trs formas de nutrio (absoro, ingesto e fotossntese), props a criao de cinco reinos: Monera, Protista, Fungi, Plantae e Animalia. Os organismos procariticos, como as bactrias, foram includos no reino Monera e os eucariticos unicelulares, como algas e protozorios, no reino Protista. Os eucariticos que se nutrem por absoro foram colocados no reino Fungi, os fotossintticos no Plantae e os organismos que se nutrem por ingesto no Animalia. Com o surgimento das tcnicas de sequenciamento gentico, verificou-se que os organismos evoluram a partir de um ancestral em trs diferentes direes. Com base nisto Woese props em 1977 a criao de trs domnios: Archaea - Incluindo organismos procariticos, denominados genericamente de arqueobatrias, que vivem em condies extremas de temperatura, presso osmtica ou so produtoras de metano. Bactria - Incluindo organismos procariticos denominados de bactrias. Eukarya - Incluindo organismos eucariticos como os reinos Protista (algas e protozorios), Fungi, Animalia e Plantae. Esta nova proposta inclui ainda a teoria da endossimbiose, segundo a qual as organelas existentes nas clulas eucariticas, tais como as mitocndrias e cloroplastos seriam oriundos de bactrias. Esta teoria suportada pelas evidncias estruturais, tipo de ribossomo, alm de apresentarem genoma prprio. Se a clula eucaritica perde suas mitocndrias e/ou cloroplastos, no capaz de reconstitu-las, pois no possui informaes completas no seu genoma para faz-la. A figura 1.1 sumariza a evoluo da rvore da vida.

20

Microbiologia

Resumo
A minuciosa descrio dos organismos observados atravs de uma lente por Leeuvenhoek convenceram o mundo da existncia dos microorganismos, abrindo um novo campo para estudo e pesquisas. No incio, os estudos se concentraram nos microrganismos patognicos com os trabalhos de Pasteur e Koch, particularmente o ltimo na demonstrao de que as doenas eram provocadas por microrganismos especficos. Com a identificao do agente ficou mais fcil o controle, o tratamento e a preveno das doenas. No entanto, as atividades dos microrganismos no se restringem a provocar doenas. Eles so responsveis por inmeras atividades essenciais a vida no planeta e produtos utilizados pela nossa sociedade. A luz do conhecimento atual, os microrganismos apresentam a maior diversidade entre todos os organismos. Dos trs Domnios existentes, em dois (Archaea e Bacteria) eles so componentes exclusivos e no terceiro (Eukarya) participam com pelo menos dois reinos (Protista e Fungi).

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. ZINDLER, Frank. Como a vida comeou. Disponvel em: <http:// ateus.net/artigos/ciencias/como_a_vida_comecou.php>. Acesso em: mar. 2010. <http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/9/94/ Jan_Verkolje__Antonie_van_Leeuwenhoek.jpg.> Acesso em: 19/01/2010.

c a p t u lo 2

Bactrias
Neste captulo sero estudadas as bactrias, com destaque para as suas morfologias, estruturas e arranjos das clulas. Sero tambm abordados aspectos de gentica e engenharia gentica desses microrganismos que habitam praticamente todos os ambientes do planeta Terra.

c a p t u lo 2

Bactrias

25

2.1 Morfologia e estrutura bacteriana

Com certeza, a grande maioria das pessoas que voc conhece j ouviu falar sobre as bactrias. H, no geral, um grande medo da presena delas, pelo seu potencial de causar doenas, mas poucos sabem que elas so mais benficas do que malficas para as pessoas, os animais e o meio ambiente. Pouca gente tem ideia em que ambientes elas existem e, principalmente, de que tamanho elas so. Pare um pouco e reflita! No seu dia a dia, onde voc encontra as bactrias e qual o tamanho delas? As bactrias so seres vivos muito interessantes, pois vivem em praticamente todos os lugares e ecossistemas. Elas esto no ar, na gua, no solo, nos alimentos, nos animais e em muitas partes do nosso corpo. Alguns desses lugares, talvez, voc jamais imaginou, como, por exemplo, em geleiras, a mais de 50 metros de profundidade e em guas vulcnicas com mais de 100 graus Celsius. Recentemente, as bactrias foram encontradas em nuvens e participam at do tipo de clima. Veja que interessante, um organismo to pequeno poder ter uma influnMas qual o tamanho desses organismos to incia em escala to grande, global. Outro exemplo teressantes? Pegue uma rgua comum, dessas curioso a presena de algumas clulas bacteescolares, e veja os risquinhos menores, os mirianas vivendo no estmago de certas pessolmetros, que so as divises dos centmetros. Pois bem, as bactrias so, em linhas gerais, mil as, causando lceras. Vale lembrar que nesse vezes menores do que um milmetro. Esse taltimo ambiente a predominncia dos cidos manho um micrmetro (m) ou micra como seria, em teoria, totalmente desfavorvel prealguns chamam e isso faz com que elas, as bacsena de vida. Mas elas esto l realizando um trias, sejam apenas vistas pelo microscpio. interessante trabalho.

26

Microbiologia

Existem diferentes tipos de bactrias, como vamos ver mais para frente, elas podem variar, normalmente, de 1 a 10m. Mas, em casos extremos, podem ser de 0,2m como nas espcies pertencentes ao gnero Chlamidia a 250m em clulas de espiroquetas. Curiosamente, 0,2m a medida do limite de resoluo do microscpio tico. Para termos uma ideia do tamanho da bactria que vemos no microscpio ptico comum, que aumenta mil vezes, comparativamente, se pudssemos ver uma mosca domstica nesse mesmo microscpio ela teria o tamanho de 10 metros, aproximadamente. Podemos dar outro exemplo que ajuda a entender o tamanho desses microrganismos, fazendo um exerccio mental, em um milmetro cbico pode haver nove trilhes de clulas de bacilos, que so as de formas alongadas. Outra curiosidade que em um grama de fezes humanas frescas podem existir 1011 bactrias. Muitas dessas, com um potencial incrvel de contaminar uma praia ou um alimento. Veja que a expresso: tamanho no documento, se aplica bem para as bactrias que so pequenas, sim, mas muito importantes no nosso cotidiano Mas, j que sabemos o porte delas, vamos estudar a seguir o que uma clula bacteriana, suas estruturas e funes. Como voc sabe, as bactrias so clulas procariticas, de estrutura bastante simples, se comparadas com as clulas eucariticas das plantas, animais e fungos. As clulas das bactrias apresentam apenas um cromossomo que no envolto por membranas. Outra caracterstica interessante que a reproduo delas assexuada, no envolvendo a presena de gametas e os processos tradicionais de mitose e meiose que voc j estudou em outras disciplinas desse curso. As mitocndrias e cloroplastos, que so organelas mais evoludas, no ocorrem nas bactrias, esses organismos, no entanto, apresentam parede celular, membrana plasmtica e ribossomos mergulhados no citoplasma. Algumas tm flagelos, que so estruturas ligadas locomoo e outras possuem pili. Essas diferenas veremos a seguir quando ressaltaremos as diferentes estruturas desses microrganismos.

So bactrias em forma de espiral. Alm desta particularidade so relativamente longas, finas, flexveis e se movimentam por rotao e flexo. As espiroquetas so bactrias anaerbias Gram-negativas.

Bactrias

27

2.1.1 Formas das bactrias

H cinco formas de clulas bacterianas: cocos, bacilos, espirilos, espiroquetas e vibries (Figuras 2.1 e 2.2). Os cocos so, em geral, redondos ou levemente ovais e achatados. Como exemplos dessas formas podemos citar os gneros Streptococcus e Staphylococcus, que possuem grande importncia mdica e alimentar. Os bacilos so formas alongadas, parecendo bastes ou bastonetes, que so nomes usados para descrev-los tambm. H vrios exemplos de microrganismos nesse grupo como Escherichia coli que uma das bactrias mais estudadas no mundo pelas questes ambienAntraz tais, em anlises de gua, e pelo seu potencial de O antraz uma doena infecciosa aguda causer patognica. As dimenses de E.coli so 1m sada pelo Bacillus anthracis, formador de esporos. Ocorre mais frequentemente em anide largura por 3m de comprimento. O gnero mais selvagens e domsticos, porm, o antraz Bacillus possui vrias espcies importantes na pode tambm ocorrer em humanos que so microbiologia. Voc j deve ter ouvido falar no expostos aos animais infectados ou pele de antraz, que uma doena causada por Bacillus animais infectados. Como uma arma biolgica, pode ser facilmente espalhada atravs da anthracis, e perigoso na fabricao de armas pulverizao de plantaes, sistemas de disbiolgicas.
tribuio de ar e espaos fechados.

Vibrio cholerae
A clera uma doena infecciosa aguda, transmissvel e perigosa, caracteriza-se por uma infeco intestinal grave, podendo levar morte em decorrncia da desidratao. A bactria causadora o vibrio colrico ou Vibrio cholerae, em forma de vrgula, mvel, que se desenvolve no intestino humano e produz a toxina responsvel pela doena. O vibrio colrico foi descoberto em 1883 por Robert Koch, cientista ingls, um dos pais da microbiologia. O agente etiolgico da clera encontrado nas fezes das pessoas infectadas. O contgio direto, atravs da gua e dos alimentos contaminados. As moscas e outros insetos podem funcionar como vetores mecnicos, transportando o vibrio para a gua e para os alimentos. O homem chega a eliminar milhes de bactrias por grama de fezes.

As formas espiraladas e espiroquetas, menos comuns do que as de cocos e bacilos, so alongadas e so importantes em estudos de meio ambiente. Um exemplo de espirilo Rhodospirillum rubrum e de espiroqueta temos Spirochaeta stenostrepta. Uma forma interessante, que parece um chapu de cangaceiro nordestino, e muito importante na rea da sade o vibrio, que parece um bacilo arredondado. Vibrio cholerae a causadora da clera, que mata milhares de pessoas em reas com baixa estrutura sanitria.

2.1.2 Arranjos bacterianos

As bactrias podem estar isoladas ou em arranjos. Os principais arranjos ocorrem em co-

28

Microbiologia

cos. Quando dois cocos coexistem chamamos esse agrupamento de diplococos. o caso de Streptococcus pneumoniae, causadora da pneumonia em seres humanos. Uma fileira ou cadeia de cocos chamada de estreptococos e acontece em Streptococcus pyogenes, outra bactria que causa infeces em pessoas. Um cacho de cocos, os estafilococos, aparece em Staphylococcus aureus, por exemplo, que muito importante em estudos de infeco hospitalar e em intoxicao alimentar. Outras formas menos comuns de cocos so as ttrades, com quatro cocos, e as sarcinas, que parecem uns cubos ou caixas de oito clulas. Em bacilos, quando da diviso celular, podem ocorrer diplobacilos. Os estreptobacilos so fileiras de bacilos. Como na natureza existem curiosidades e excees s regras, h formas e arranjos de clulas em estrelas, como o caso do gnero Stella. Clulas quadradas ocorrem no gnero Haloarcula. Em geral, as formas e arranjos das bactrias so caractersticas hereditrias e apresentam o seu prprio tipo. Entretanto, h casos no muito comuns em que uma espcie pode ter vrias formas, modificadas por questes ambientais. Os gneros Rhizobium e Corynebacterium, por exemplo, apresentam pleomorfismo e podem variar na natureza. Essas duas bactrias so importantes na rea de microbiologia do solo e assuntos ligados agronomia e biologia.

Pleomorfismo A bactria que no apresenta uma morfologia nica, mesmo que se encontre em condies favorveis sua sobrevivncia.

2.2 Estruturas externas e internas das clulas bacterianas

Podemos distinguir em uma bactria estruturas externas, que sero descritas a seguir, e as estruturas internas, que voc ver posteriormente. A figura 2.3 mostra o desenho bsico de uma bactria contendo o nome de suas estruturas.

2.2.1 Estruturas externas

Na parte externa h os flagelos, pili, fmbrias e a cpsula ou glicoclix.

Bactrias

29

Plano de diviso Diplococos MEV A

2 m

Estreptococos MEV 3 m

Ttrade

C MEV 0,1 m

Sarcina MEV 2 m

Estalococos Figura 2.1 Arranjos de cocos. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, p. 78).

MEV

2 m

30

Bacilo nico

Microbiologia

Vibrio MEV 2m MEV 4 m

Diplobacilos

Estreptobacilos Espirilo MEV 5m MEV 2m

Cocobacilos Espiroqueta MEV 1m MEV 1,5m

Figura 2.2 Outras formas de bactrias. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, p. 79).

Bactrias

31

Citoplasma Ribossomos Incluses Cromossomo (ncleo sem membrana) Plasmdeo

Cpsula Parede celular Membrana plasmtica Fmbrias

Flagelos

Figura 2.3 Estruturas da bactria. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, p. 80).

Flagelos Voc j pensou que uma bactria pode nadar? Os flagelos (Figura 2.4) so compostos de protenas chamadas flagelinas e tm tamanhos de 5-20m x 0,01-0,02m. Sua funo de locomoo, fazendo com que as clulas nadem em meio lquido, atravs da rotao de uma base e que se propaga pelo flagelo. Quando a clula bacteriana vai ao encontro da luz e de alguma substncia qumica dizemos que ela tem fototaxia e quimiotaxia positivas, respectivamente. Pode ocorrer o contrrio e elas fugirem de luz ou qumicos e, nesse caso, dizemos que esses efeitos so negativos. Nem todas as bactrias tm e algumas apresentam at mais do que um flagelo por clula. Os flagelos monotrquios so os do tipo de apenas um polar, os anfitrquios tm duas unidades polares, os lofotrquios tm dois ou mais flagelos em um plo e os peritrquios so os distribudos em toda a clula. Exemplos de bactrias que tm flagelos so algumas espcies dos gneros Pseudomonas e Vibrio. Helicobacter pylori, uma bactria

32

Microbiologia

que pode formar lceras no estmago humano, Caulobacter crescentus, que hoje em dia estudada na fabricao de colas cirrgicas e Escherichia coli so outros exemplos interessantes de microrganismos que tm essas estruturas. Pili e fmbrias So tambm filamentos proteicos, Parede celular bastante finos, e de tamanhos que variam de 0,1-5m x 2-10nm. Pili so maiores e menos numerosos que as fmbrias. Em geral essas estruturas ocorrem principalmente em clulas Gram negativas. As funes dessas peMembrana quenas estruturas (pili) esto associaplasmtica Citoplasma das reproduo, atravs da passagem de material gentico de uma clula para outra, no processo chamado conjugao. Outra funo a de aderncia (fmbrias), que ajuda na fixao celular em um tecido que vai infectar ou causar doena, como no caso de Neisseria gonorrhoea, agente da gonorreia, bastante importante em pases tropicais e de baixas condies de higiene. A Salmonella typhi, uma bactria que causa infeces e intoxicaes alimentares tambm apresenta muitas fmbrias. A Escherichia coli que muito numerosa no intestino de seres humanos e de animais de sangue quente pode ter pili e fmbrias (Figura 2.3). Cpsula ou Glicoclix Em algumas clulas ocorre essa camada de constituio aquosa e de polissacardeos. As suas funes esto associadas proteo (dessecao e barreira contra metais pesados, por exemplo), reserva de alimentos e aderncia em alguma superfcie que seja do interesse da bactria. Exemplos de microrganismos que tm cpsulas so Bacillus anthracis, j citada anteriormente por ser utilizada na fabricao de armas biolgicas, e Xanthomonas campestris, que secretam polissacardeos com grande potencial na indstria de alimentos, como agentes solidificantes e espessantes naturais.

Flagelo

Filamento

Gancho

Corpo basal
Peptideoglicana

Membrana externa

Figura 2.4 Partes do flagelo. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, p. 83).

Os espessantes naturais so carboidratos naturais (goma microbiana xantana entre outras) responsveis pelo aumento da viscosidade de solues em alimentos. A goma xantana quando associada com outras gomas proporciona textura lisa e cremosa, sendo utilizadas para a fabricao de molhos para saladas, bebidas, geleias, produtos crneos, enlatados e sopas.

Bactrias

33

2.2.2 Estruturas internas

Parede celular Essa camada de grande importncia para a clula apresenta uma espessura de 10 a 100nm e corresponde a cerca de 10 a 40% do peso bacteriano. Sua constituio de uma rede macromolecular chamada de peptideoglicana, tambm conhecida como murena. O peptideoglicano um polmero insolvel rgido, composto de acetilglicosamina, cido acetilmurmico e peptdeo. A funo bsica da parede celular proteo e sustentao da clula. H tambm vrias enzimas localizadas nela que so de suma importncia no metabolismo celular.
As clulas Gram negativas (rosas) so descoloridas pela ao do lcool e acetona por apresentarem uma camada menor de peptidioglicano do que as Gram positivas (violetas). Em adio, h mais membranas plasmticas nas Gram negativas, fazendo com que esses dois solventes de membranas penetrem e retirem o primeiro corante do processo, o cristal violeta. Elas so posteriormente coradas por safranina ou fucsina.

Em 1884, um cientista dinamarqus chamado Christian Gram descreveu um mtodo de colorao celular que separa as clulas em dois grandes grupos de bactrias: Gram positivas e Gram negativas. A parede celular das bactrias Gram positivas so mais grossas (30-100nm) e apresentam uma aparncia mais uniforme no microscpio eletrnico. Exemplos de clulas Gram positivas so as dos gneros Streptococcus e Staphylococcus, cocos, j citados anteriormente. A parede celular das clulas Gram negativas tem espessuras que variam de 20 a 30nm e apresentam camadas bastante distintas no microscpio eletrnico, uma de peptidioglicano mais fino e outra de uma membrana celular externa, que no tem nas Gram positivas. Exemplos de bactrias Gram negativas so Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, esta ltima muito ligada a estudos de microbiologia ambiental e da sade, j que pode tambm ser patognica para seres humanos. Membrana citoplasmtica A membrana citoplasmtica tem uma espessura de apenas 7-8nm e composta de unidades de lipdeos com fsforo e protenas (Figura 2.5). Suas funes so ligadas permeabilidade seletiva da clula e a localizao de enzimas do metabolismo celular. Vale lembrar o que significa a palavra osmose, que a passagem do meio menos concentrado para o mais concentrado. Em outras palavras, a membrana plasmtica, atravs de mecanismos internos

34

Microbiologia

onde entram os ons sdio e potssio, faz com que haja um controle do que entra ou sai da clula. Se uma bactria estiver mergulhada numa soluo muito concentrada a tendncia essa clula murchar. Se ela estiver numa soluo com poucos sais, ela tende a inchar com o aumento de gua. Esses controles so fundamentais na clula e funcionam at certo ponto. Citoplasma

Voc sabia que o Mar Morto, na divisa de Israel e Jordnia, no totalmente morto? Nesse inspito lugar, numa depresso geolgica, e que quase no chove, h poucas espcies de bactrias que esto ainda vivendo, quase chegando aos seus limites de sobrevivncia. Vale lembrar que a gua desse mar est diminuindo e ficando mais salgada, pela grande utilizao de fontes que o abastecem para irrigao, e intensa evaporao. At quando essas bactrias vo resistir?

Abaixo da membrana citoplasmtica tem o citoplasma que um meio aquoso, com cerca de 80% de gua, contendo mergulhados os ribossomos, o cromossomo, ons, nutrientes, grnulos e compostos diversos produzidos no metabolismo celular. Em algumas clulas h cristais que so

Camada dupla de fosfolipdeo da membrana plasmtica Peptdeoglicana Membrana externa A Membranas plasmaticas na clula

Fora da clula Canal Proteina integral Camada dupla de fosfolipdeo

~7 nm Protena perifrica

Dentro da clula B Camada dupla de fosfolipdeos na membrana

Figura 2.5 Detalhes da membrana celular. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, p. 90).

Bactrias

35

txicos para alguns insetos, o caso da bactria Bacillus thuringiensis que bastante estudada no controle biolgico de pragas na agricultura. Outro exemplo curioso a presena de partculas de magnetita, compostos de ferro, em certas bactrias aquticas que podem ser atradas pelo campo magntico. Essas estruturas so chamadas de magnetossomos. Cromossomo A clula bacteriana tem apenas um cromossomo que, em linhas gerais, uma longa fita ou molcula enrolada. Esse material, tambm chamado de nucleoide, contm os genes, que so pequenos segmentos ou fraes, onde esto localizadas as informaes genticas da bactria. Diferentemente dos organismos eucariontes, o cromossomo bacteriano no tem membrana nuclear, como voc j estudou anteriormente, e tem DNA em sua constituio. Em adio ao cromossomo nico h, em certas bactrias, um pequeno DNA circular, que chamado de plasmdeo. Eles apresentam de 5 a 100 genes que so ligados sobrevivncia a certos fatores ambientais. Esses plasmdeos so tambm importantes na reproduo celular, como apresentado na parte de gentica desse livro. Ribossomos
Svedberg (S) Svedberg (S) uma medida da taxa de sedimentao de uma partcula em uma centrfuga, onde a taxa de sedimentao associada com o tamanho da partcula e sua forma tridimensional. Antibitico Substncia qumica produzida por um microrganismo para controlar outro microrganismo, podendo elimin-lo ou inibi-lo.

So estruturas arredondadas de cerca de 0,0025 m de dimetro e compostos de RNA e protenas. So locais onde so sintetizadas as protenas da clula, a partir de informaes contidas no material gentico, o cromossomo, e esto tambm mergulhados no citoplasma. Os ribossomos so descritos pela sua taxa de sedimentao em centrfugas, atravs da unidade Svedberg (S). Os ribossomos de clulas procariticas so denominados 70S e os de clulas eucariticas 80S. Vrios antibiticos atuam na inibio na sntese proteica, atravs da fixao dessas substncias nas unidades 30S. o caso de estreptomicina e gentamicina. Endsporos Algumas bactrias dos gneros Clostridium e Bacillus, por exemplo, formam estruturas de repouso chamadas de esporos ou endsporos. Elas so bastante resistentes e podem permanecer vivas at mesmo em gua fervente por alguns minutos. Por apresentarem

36

Microbiologia

material gentico, podem germinar e produzir novas clulas que foram parcialmente destrudas pela ao de algum fator fsico ou qumico. Por essa razo, esses microrganismos so muito importantes na indstria de alimentos, onde, em alimentos enlatados ou vidros, podem resistir e contaminar pessoas que consumiram tais produtos. No caso do Clostridium botulinum, h uma doena associada chamada botulismo e que pode matar pessoas pelo efeito de sua toxina, que ataca os msculos e deixa os que ingeriram essa substncia com aparncia retorcida. Curiosamente, essa mesma toxina que pode matar, pode ser usada na fabricao de botox, que um produto feito de baixas concentraes, e que so aplicados na regio da face de pessoas. O seu efeito o de esticar a pele, dando uma aparncia mais jovial a quem a recebeu.

2.3 Gentica bacteriana

A gentica a cincia que estuda as caractersticas herdadas de um organismo para outro, bem como as mudanas que ocorrem nessas informaes e que podem ser transmitidas para outros descendentes. Como voc j estudou na disciplina especfica desse curso, a gentica aborda o gentipo, que a composio gentica de um organismo e o fentipo, que o conjunto de caractersticas observveis em dado momento, podendo ser modificado pelo meio ambiente. A gentica uma das reas do conhecimento biolgico que mais cresce atualmente e tambm abordada em vrias outras disciplinas como, por exemplo, a biotecnologia e a bioinformtica. Com certeza, voc j ficou maravilhado com os produtos e potencialidades da engenharia gentica em nosso cotidiano. O estudo da gentica tem se desenvolvido muito graas aos microrganismos que, em linhas gerais, crescem muito mais rpido que outros organismos maiores. Vale lembrar que muitos dos princpios de gentica de uma bactria, por exemplo, podem ser extrapolados para outros seres vivos mais evoludos, incluindo clulas humanas. Por essa razo, em termos aplicados, a gentica bacteriana ser abordada nesse captulo, salientando e relembrando alguns conceitos que voc j estudou em outras disciplinas.

Bactrias

37

2.3.1 Material gentico da bactria

A clula bacteriana, um organismo procarionte de estrutura bastante simples, se comparado com clulas eucariontes, de fungos, animais e vegetais, por exemplo, tem apenas um cromossomo enrolado, parecendo um fio de telefone, haploide (n), e mergulhado no citoplasma, formando uma fita dupla, tipo escada. O DNA da bactria Escherichia coli, que a mais estudada no mundo, tem cerca de 4 milhes de pares de bases e teria cerca de 1 mm de comprimento se alongado, o que representa, aproximadamente, mil vezes o tamanho de sua clula e tem ao redor de 10% do peso microbiano. Algumas bactrias podem ter um cromossomo circular extra, menor, chamado de plasmdeo e que tem vrios genes de resistncia da clula.

2.3.2 Replicao do DNA

Antes de a clula se dividir, a bactria precisa replicar o material gentico contido nos genes, que so fragmentos do cromossomo (Figura 2.6, Figura 2.7 e Figura 2.8). A replicao bacteriana um processo semiconservativo em que uma nova fita vai sendo produzida, a partir de uma mais velha. Na primeira etapa da replicao, as duas fitas se separam e so desenroladas pela enzima DNA girase. Depois, outra enzima chamada DNA polimerase vai adicionando novas bases nitrogenadas aos pedaos e nova fita vai sendo formada at o final do processo. As bases nitrogenadas que se ligam so: Timina (T) com Adenina (A), e Citosina (C) com Guanina (G). A enzima DNA ligase a ltima a atuar e faz com que a fita nova seja contnua. Cada molcula de DNA de fita dupla ter uma fita vinda da bactria me (original) e outra da filha (fita nova formada).

2.3.3 Transcrio, traduo e sntese de protenas

Como j vimos, gene um fragmento do DNA que contm uma sequncia de nucleotdeos para sintetizar uma protena. A partir da informao do DNA, ocorrem dois processos que vo culminar na sntese de protenas: a transcrio e a traduo.

38

Microbiologia

DNA Girase

Forquilha de replicao

C C A
DNA polimerase

G A T T A A G T C G C A T A T G
DNA polimerase Fita velha DNA (parental)

T A G C G T C G C A A T C G A T
Forquilha de replicao DNA girase A Fitas novas de DNA

C G T

Fita velha DNA (parental)

Extremidade desoxirribose (3)

Extremidade fosfato (5)

Figura 2.6 Processo de diviso do cromossomo. (Adaptado de PELCZAR et al.; 1996).

Bactrias

39

Parede celular Alongamento da clula e replicao do DNA

Membrana plasmtica DNA (rea nuclear) Cromossomo circular (molcula de DNA de dupla ta)

Incio da diviso da parede celular e da membrana plasmtica

Origem da replicao

Formao das paredes em torno das regies contendo o DNA replicado Separao das clulas

Forquilha de replicao Fita velha Fita nova Forquilha de replicao

Figura 2.7 Diviso da bactria. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, p. 169).

Figura 2.8 Duplicao do cromossomo. (Adaptado de PELCZAR et al.; 1996).

40

Microbiologia

Na transcrio, a enzima RNA polimerase, de forma semelhante ao que ocorre na replicao do DNA, sintetiza uma fita de RNA a partir de uma de DNA. A diferena, nesse caso, que a base nitrogenada Timina (T) se liga com outra base chamada Uracila (U). A ligao das bases Citosina (C) e Guanina (G) ocorrem de forma parecida na duplicao do DNA. Dessa forma, a informao do gene copiada para uma molcula de RNA mensageiro (mRNA), no processo de transcrio. Esse mRNA transporta as informaes para os ribossomos, no citoplasma, onde so feitas as protenas. Os ribossomos so constitudos de protenas e RNA ribossmico (rRNA). Outro termo estudado nessa parte o do RNA transportador (tRNA), que carrega os aminocidos para o ribossomo. O cdigo gentico formado por unidades chamadas cdons. Cada cdon constitudo de trs letras, correspondentes s bases nitrogenadas. AUG, por exemplo, um cdon que codifica o aminocido metionina e d incio ao processo da mensagem. Mais de um cdon pode codificar um aminocido. H 64 cdons, sendo que 61 codificam aminocidos e 3 no, esses do sinais de interrupo da traduo. Em resumo, a traduo o processo em que a informao codificada do mRNA orienta a sequncias dos aminocidos e as respectivas protenas.

2.3.4 Mutao e Recombinao do material gentico

Normalmente, quando voc ouve falar em gentica logo vem mente as informaes hereditrias que so passadas de uma gerao para outra. Essa primeira parte foi abordada at aqui. Mas, como vimos na definio, a gentica tambm estuda as variaes ou alteraes nas clulas microbianas. H dois tipos bsicos de alteraes celulares: as fenotpicas, que so causadas por algum fator do meio ambiente e as genotpicas, no material gentico. Um exemplo interessante de alterao fenotpica o causado pela sacarose em bactrias do gnero Azomonas. Quando o meio est rico em sacarose as suas colnias so grandes e viscosas. Na sua ausncia, elas so pequenas e no so viscosas.

Bactrias

41

As mudanas genotpicas, mais complexas, podem ocorrer de duas formas: mutao e recombinao. As mutaes so alteraes na sequncia de bases nitrogenadas do DNA, dando um produto que pode ser muito diferente do material gentico original. Elas podem ser benficas ou malficas, dependendo do caso. As recombinaes, como o prprio nome diz, um processo que leva a uma nova combinao de genes de um cromossomo. Agentes mutagnicos so aqueles que causam alteraes no DNA e que podem ser transmitidos para os descendentes das clulas afetadas. Alguns exemplos desses agentes so: substncias qumicas nitrogenadas, compostos em fumaas de cigarro, antibiticos e radiaes UV (ultravioleta) e ionizantes; estas ltimas de comprimentos de onda menores como os raios-x e raios gama. Alguns agentes mutagnicos podem ser tambm, cancergenos, desencadeando crescimento desordenado de clulas. O teste de Ames um exame para identificar possveis agentes carcinognicos em bactrias sensveis. As recombinaes genotpicas, conforme j mencionado, so rearranjos de material gentico dando novas combinaes aos produtos obtidos. H em bactrias, trs tipos bsicos de recombinao: transformao, conjugao e transduo. A transformao ocorre quando um fragmento de material gentico de uma clula passa para outra, sendo incorporada no cromossomo da segunda (Figura 2.9). Na natureza, pedaos de um cromossomo de clula que foi lesada, por exemplo, podem ser reabsorvidos por uma clula viva, passando a fazer parte do cromossomo da segunda. Esse processo pode ocorrer naturalmente em vrias bactrias dos gneros: Bacillus, Streptococcus, Staphylococcus, Acinetobacter e Neisseria. A Escherichia coli bastante usada em processos de transformao laboratorial, que iro fornecer condies para trabalhos de engenharia gentica. A conjugao ocorre quando o material gentico de uma clula bacteriana transferido para outra (Figura 2.10). Este processo ocorre pela ao de pilis sexuais que aproximam as clulas, que uma vez aderidas formam um canal atravs do qual transferida a informao gentica. Normalmente, o material vem de plasmde-

42

Microbiologia

os e feito entre clulas doadoras e receptoras. A Escherchia coli um bom exemplo de organismo onde so realizados experimentos de transferncia de genes. O termo fator F (fator de fertilidade) aquele que apresenta a capacidade de transferir material de um organismo para outro. F+ (doador), F (receptor). O termo Hfr o que descreve uma alta frequncia de recombinao. A transduo o processo de transferncia de material gentico de uma clula para outra atravs da ao dos bacterifagos estudados na parte de vrus (Figura 2.11). O material gentico dos vrus injetado na clula hospedeira da bactria e esses so incorporados pelas clulas descendentes.

Molcula de DNA circular de ta dupla Clula bacteriana doadora Lise celular por mtodos qumico ou mecnico

Extrao de DNA

Fragmentos de DNA doador

Clula receptora competente

Fragmentos de DNA doador ligam-se na superfcie da clula receptora.

DNA doador absorvido pela clula receptora. Ocorrncia de recombinao DNA doador integrado no cromossomo da clula receptora.

Clula Transformada

Figura 2.9 Transformao bacteriana. (Adaptado de PELCZAR et al.; 1996, p. 346).

Bactrias

43

F+ Clula doadora Pelo sexual da clula F+ Plasmdio F Cromossomo bacteriano

F Clula receptora

O pelo sexual da clula F+ se liga a uma clula F .

O pelo sexual se retrai, colocando a clula F em contato com a clula F+. As membranas das clulas se fundem, formando um canal entre as duas clulas .

Uma ta do plasmdio F comea a se deslocar para a clula F .

Fita complementar Fita complementar Quando a ta passa para a clula F , tas de DNA complementar so sintetizadas.

O plasmdio transferido torna-se circular e a clula F torna-se uma clula F+ porque apresenta um plasmdio F. F+ F+

Figura 2.10 Conjugao bacteriana. (Adaptado de PELCZAR et al.; 1996).

44

Microbiologia

Bacterifago Fixao na clula hospedeira

DNA hospedeiro Injeo do DNA fgico no hospedeiro

Replicao do DNA fgico Degenerao do DNA hospedeiro Fago com fragmentos de DNA da clula hospedeira

Fagos com DNA fgico

Lise celular

Fago transduzido Fago transduzido liga-se nova clula hospedeira e injeta o DNA

Novo hospedeiro Recombinao Clula com genes transduzidos Figura 2.11 Transduo bacteriana. (Adaptado de PELCZAR et al.; 1996, p. 346).

Bactrias

45

2.3.5 Gentica e Biotecnologia

Desde os tempos remotos, os microrganismos tm sido teis para a humanidade na fabricao de pes, cerveja, vinho, queijos, iogurtes e vrios outros produtos. O termo biotecnologia, no passado, englobava os processos fermentativos das clulas microbianas, com o passar do tempo, selecionadas. Estirpes mais adaptadas e produtivas foram desenvolvidas com o auxlio de mecanismos naturais de alteraes genticas discutidos aqui: mutaes e recombinaes (transformao, conjugao e transduo). A biotecnologia moderna ampliou esse conceito e hoje em dia utiliza-se de novas ferramentas como, por exemplo, a do DNA recombinante, que, artificialmente, manipula genes de origens diferentes para criar novos organismos. Os estudos de plasmdeos foram intensificados e hoje possvel pegar genes de uma bactria, com uma determinada caracterstica interessante, e introduzi-los no material gentico de uma planta. A soja transgnica, hoje resistente a aplicao de fungicida graas introduo de genes de bactrias do solo, um exemplo dessa ideia bastante revolucionria. Outros exemplos interessantes na agricultura so bactrias do gnero Rhizobium e Bradyrhizobium que fixam melhor o nitrognio do ar e so inoculadas em plantas leguminosas. A bactria Pseudomonas foi modificada para produzir uma toxina de outra bactria Bacillus thuringiensis, que combate insetos em plantas. Outros exemplos de grande aplicao na indstria farmacutica da engenharia gentica so: insulina humana por Escherichia coli, interferon por E. coli e Saccharomyces cerevisiae, vacina contra hepatite B, por S. cerevisisiae, taxol, por E. coli, hormnios de crescimento humano, por E. coli, entre tantos outros. Ferramentas in vitro de modificaes genticas podem ser utilizadas para complementar as tcnicas in vivo, como as mutaes e recombinaes. As mais modernas so: enzimas de restrio, sequenciamento e sntese de DNA, clonagem molecular, plasmdeos e bacterifagos como vetores de clonagem (Figura 2.12), amplificao de DNA e mutagnese. As enzimas de restrio so as que reconhecem e quebram em locais especficos do DNA. Os vetores de clonagem so aqueles em que os genes podem ser recombina-

Fungicida Agente que controla fungos. Interferons Protenas expressas por diferentes clulas humanas e sintetizadas como resposta a muitos agentes qumicos e biolgicos, eles atuam na proteo do organismo contra patgenos. taxol Produto vegetal utilizado no combate de cncer de ovrio.

46

Microbiologia

As bactrias possuem um DNA principal e um pequeno DNA circular, o plasmdeo. Com o auxlio de uma enzima de restrio, possvel abrir o plasmdeo e introduzir nele um fragmento de DNA de outra espcie, que pode ser de uma clula humana responsvel por determinada protena. Depois que recebe o novo fragmento de DNA, o plasmdeo torna-se um DNA recombinante, isto , uma molcula formada pela unio de duas ou mais molculas de DNA no encontradas juntas na natureza. Esse DNA recombinante introduzido na bactria, que passa a produzir, por exemplo, uma protena humana, como a insulina, hormnio secretado pelo pncreas que controla a utilizao da glicose pela clula. Esse hormnio est ausente nos indivduos portadores de diabetes, que por isso apresentam deficincia na utilizao da glicose, com srias consequncias para a sade.
DNA

Plasmdeo

Bactria

Enzima de restrio corta o plasmdeo

Clula humana Gene para insulina

Gene para insulina combinado ao DNA da bactria com a DNA-ligase

Bactria com DNA recombinando

Insulina

Multiplicaes sucessivas de bactrias e produo de insulina

Figura 2.12 Esquema simplificado da produo de insulina humana por bactrias. (Adaptado de <http://www.portal impacto.com.br/docs/ 01Rinaldo2ANOF2 Aula24e25.pdf>. Acesso em: 28/03/2010).

Bactrias

47

Bactria Agrobacterium tumefaciens

T-DNA portador do gene exgeno inserido no cromossomo

4 O plasmdeo reinserido
em uma bactria. T-DNA Stio para clivagem de restrio.

5 A bactria utilizada para

inserir o T-DNA portador do gene exgeno em um cromossomo de uma clula da planta.

6 1 O plasmdeo removido
da bactria e o T-DNA clivado com uma enzima de restrio. O plasmdeo Ti recombinante

As clulas vegetais so multiplicadas em cultura

3 O DNA exgeno
inserido no T-DNA do plasmdeo.

2 O DNA exgeno clivado

com a mesma enzima.

7 A planta gerada a partir de um

clone de clulas. Todas as suas clulas so portadoras do gene exgeno e podem express-lo como uma nova caracterstica.

Figura 2.13 Processo de engenharia gentica utilizando plasmdeo Ti. (Adaptado de TORTORA et al.; 2000, pg. 261).

dos e replicados. O termo transposon bastante usado e significa um segmento de DNA que pode se mover de uma molcula para outra. Mutagnese uma tcnica onde um determinado gene de mutao pode ser sintetizado, de forma dirigida. Novas tcnicas bastante empregadas, recentemente, na clonagem de DNA, so as de sequenciamento de DNA pelos processos de Southern blotting, DNA fingerprinting e PCR (polimerase chain reaction). As duas primeiras so importantes para se localizar um determinado gene, num material biolgico. Isso poderia ajudar na preveno de doenas em estgios iniciais de desenvolvimento ou at mesmo antes de ela aparecer.

48

Microbiologia

Em adio identificao, a terapia gnica pode ser utilizada, substituindo genes defeituosos ou ausentes por outros melhores. Outra aplicao interessante a da medicina forense, onde se tem como objetivo desvendar crimes com o auxlio gentico, atravs de anlises de restos humanos e animais. As anlises de PCR so usadas para amplificar amostras de DNA a partir de fragmentos de materiais biolgicos. A partir dessa amplificao, uma quantidade maior de material pode ser produzida para identificar microrganismos em amostras ambientais, por exemplo. Sondas moleculares podem ser utilizadas, tambm, nas indstrias de alimentos e farmacutica, para identificar possveis patgenos e produtores de toxinas humanos. Atravs de tcnicas moleculares, entre tantas aplicaes, h o potencial de se construir mapas genticos dos cromossomos de microrganismos. O objetivo geral seria identificar cada gene do organismo e sua respectiva funo, aumentando as possibilidades de utilizao do potencial gentico, nas mais variadas atividades humanas. Essa ideia geral, definida como projeto genoma, est sendo estudada para outros organismos. Num futuro prximo conheceremos os genes e as suas respectivas funes, em vrios seres vivos, inclusive os seres humanos. Um novo e surpreendente admirvel mundo novo est para surgir, afetando, radicalmente a vida no nosso planeta.

Resumo
As bactrias so microrganismos muito interessantes e habitam praticamente todos os ambientes terrestres. So seres procariontes e apresentam uma clula mais simples comparada com as dos organismos eucariontes. As clulas bacterianas, isoladas ou em arranjos, podem se apresentar numa das seguintes formas: cocos, bacilos, espirilos, vibries e espiroquetas. As estruturas da clula so: flagelo, pili, fmbria, cpsula, parede celular, membrana citoplasmtica, mesossoma, ribossomo, grnulos, citoplasma, esporo, cromossomo e plasmdeo. A bactria tem reproduo assexuada e se divide aps realizar duplicao do material gentico e sntese de

Bactrias

49

protenas. Mutaes e recombinaes podem ocorrer com destaque para os processos de transformao, conjugao e transduo. A gentica bacteriana uma das reas que mais cresce na biologia, dando origem a novos organismos geneticamente modificados, produtos e processos de biotecnologia.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. PRESCOTT, L. M.; HARLEY, J. P.; KLEIN, D. A. Microbiology. 2. ed. Dubuque: W. C. Brown, 1993. 912p. SINGLETON, P. Introduction to bacteria. 2. ed. Chichester: Wiley, 1992. 221p. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. 827p. <http://www.portalimpacto.com.br/docs/01Rinaldo2ANOF2 Aula24e25.pdf>. Acesso em: 15.03.2010.

c a p t u lo 3

Reino Protista
Neste captulo sero estudados os protistas, com destaque para as algas e os protozorios.

c a p t u lo 3

Reino Protista

53

3.1 Introduo
Os protozorios e as algas pertencem ao reino Protista, que incluem os organismos eucariticos unicelulares. No entanto, desde o inicio da biologia, houve a tendncia de os organismos deste reino, que apresentavam mobilidade e heterotrofismo, serem estudados pelos zoologistas, enquanto que os fotoautotrficos foram assumidos pelos botnicos. Desta forma, organismos do mesmo reino so discutidos e disputados como dois grupos. Isto muitas vezes cria certa confuso. Os organismos euglenoides, por exemplo, so considerados pelos botnicos como uma alga flagelada e pelos zologos como um protozorio clorofilado.

3.2 Algas
3.2.1 Introduo
Um dos grupos de organismos mais interessantes e estudados em microbiologia o das algas. Muita gente faz confuso sobre o que, de fato, so as algas e iremos abordar sobre quem so e qual a rea de importncia delas no meio ambiente e alimentao. Voc sabia que as algas j foram antigamente descritas e estudadas totalmente como plantas? Elas j fizeram parte do Reino Plantae e, curiosamente, o termo alga vem de uma palavra em latim que significa planta marinha. As algas so, tambm, estudadas na botnica, como voc j viu em outra disciplina (Sistemtica Vegetal I). Claro que existem algas que parecem com plantas, pois

54

Microbiologia

muitas possuem cloroplastos, onde realizada a fotossntese, mas h tambm outras que so muito diferentes dos vegetais. O estudo das algas chamado ficologia. Em geral, as algas podem ser microscpicas (microalgas) e macroscpicas (macroalgas) e apresentam pigmentos fotossintticos. H uma grande diversidade desses organismos e a classificao delas bastante complexa e polmica. Em linhas gerais, os ficologistas trabalham com dois grupos de organismos: os procariontes e os eucariontes. As dos procariontes fazem parte do antigo Reino Monera, com destaque para as cianofceas, ou algas azuis, hoje chamadas de cianobactrias. Elas so do domnio Bactria, so unicelulares ou filamentosas e so fototrficas. O tamanho delas pode ser o de uma bactria normal, com dimetro de aproximadamente 0,5 a 1m at clulas maiores de 10m. Elas apresentam, em geral, clorofila a, que verde, e outros pigmentos como a ficocianina (azul) e ficoeritrina (vermelha ou marrom). Em geral habitam ambientes tanto terrestre como aquticos, podendo este ltimo ser de gua doce ou salgada. Exemplos de gneros de cianobactrias so: Oscillatoria, Spirulina, Anabaena, Nostoc, Nodularia e Microcystis. Vale destacar que a Anabaena, que tem um carter endoftico e fixa o nitrognio do ar, faz associao simbitica com uma samambaia aqutica de nome Azolla, que pode ser importante, nutricionalmente, em sistemas de produo de arroz irrigado. Mycrocystis um importante organismo que causa floraes em guas, produzindo toxinas e contaminando os ambientes aquticos. O segundo grande grupo de algas, as eucariontes, fazem parte dos Reinos Protistas e Plantae. Elas apresentam cloroplastos, fazem fotossntese, e so classificadas em filos: Clorophyta (algas verdes), Rhodophyta (algas vermelhas), Phaeophyta (algas marrons), Euglenophyta (euglenas), Dinophyta (dinoflagelados) e Bacilariophyta (diatomatceas). As Clorophytas (verdes) podem ser unicelulares e multicelulares, apresentam clorofila a e b, amido e lipdios como substncia de reserva e habitam ambientes midos e aquticos (principalmente gua doce). Um exemplo interessante de microalga verde a Chlorella que usada na alimentao humana e tem aproximadamente

carter endoftico
Situado ou que ocorre dentro de tecidos de plantas, sem causar aparentemente dano a seus hospedeiros.

Reino Protista

55

10m de dimetro. Exemplos de filamentosas verdes so dos gneros Spirogyra, Ulothrix e Cladophora. As Rhodophytas (vermelhas) tm clorofila a e d e apresentam amido das flordeas como substncia de reserva. Apresentam pigmentos chamados ficoeritrinas, so aquticas e bastante empregadas na alimentao oriental para fazer sushi. Um exemplo desse tipo tem o nome de Nori, que uma alga vermelha do gnero Porphyra. As Phaeophytas (marrons) so marinhas, apresentam clorofila a e c, pigmentos carotenoides e xantofilas, variam de tamanho, podendo apresentar formas microscpicas at os Kelps que podem chegar a 60 metros. Exemplos desse grupo so as Wakame (Undaria e Sargassum) e Kombu (Laminaria), importantes na culinria oriental. As Dinophytas (dinoflagelados) so unicelulares, tm clorofila a e c, apresentam como pigmento carotenoides e como substncia de reserva amido e gordura. Podem produzir toxinas que matam peixes e outros animais. As Euglenophyta (euglenas) so unicelulares com flagelos, tm clorofila a e b, carotenoides e xantofila como pigmento, tm como substncia de reserva grnulos de paramilo. As Bacilariophyta (diatomatceas) so unicelulares, aquticas e terrestres, tm clorofila a e c, a substncia de reserva a crisolaminarina e tm tambm carotenoides e xantofila. Apresentam uma carapaa dura, com grande quantidade de slica e tm uma diversidade de formas. A partir dos antigos depsitos das frstulas, podem formar rochas denominadas diatomito, com essa estrutura dura e rgida, podendo ser usadas na fabricao de filtros e pedras de raspagem de calos em pessoas.

Kelps
Coberturas extensas de algas (florestas de algas). Os kelps, so constitudos por algas da ordem Laminariales.

3.2.2 A importncia das algas

Pelo fato j salientado que fazem fotossntese, a maior importncia das algas, em termos ecolgicos no planeta, est na produo global de oxignio. H estimativas de que mais de 50% do O2 est ligada s algas, que habitam uma vasta rea de superfcie dos oceanos. Outra importante funo desse grupo de organismos que fazem parte, atravs do fitoplncton, da cadeia alimentar de

56

Microbiologia

muitos seres vivos, incluindo grandes animais. de se esperar que, num grande vazamento de petrleo, como, por exemplo, do navio Exxon Valdez, em 1989, uma imensa rea e um grande nmero de espcies sejam afetados. Alm de serem alimentos, as algas podem tambm se nutrir de bactrias, equilibrando o meio ambiente. As algas, juntamente com as plantas, participam dos processos de formao de muitos solos. Por serem produtores primrios, as algas se fixam nas rochas e, com o passar do tempo, tendo umidade e calor, comeam a liberar substncias orgnicas que quebram a estrutura das rochas formando os solos. Voc j deve ter visto, quando em viagem, uma rocha exposta, contendo muitos organismos verdes limosos na sua superfcie. De forma lenta e contnua essa rocha vai se desgastando, num processo chamado intemperismo, e os solos so formados de forma bem superficial. Com o passar do tempo, outros organismos chegam e as camadas vo ficando maiores nesses ambientes desbravados pelas algas. Um aspecto negativo das algas, do ponto de vista humano, que muitas delas, conforme j mencionado na introduo, podem se reproduzir em grande escala e contaminar as guas, atravs da produo de toxinas. Alm desse aspecto biolgico, que pode contaminar peixes, moluscos e crustceos, e inclusive o ser humano, h a poluio visual

Figura 3.1 Florao de algas verdes no lago Titicaca, Peru. (Fotografia de Viviane Mara Woehl arquivo pessoal julho de 2005).

Reino Protista

57

pela enorme produo de massa verde. Normalmente isso ocorre pelo desequilbrio nutricional nas guas pela descarga de esgotos ou fertilizantes, com destaque para os elementos nitrognio e fsforo. A eutrofizao esse fenmeno de crescimento desordenado de algas e plantas que pode atingir nveis preocupantes no ambiente. Com o excesso de massa verde, h uma grande deposio de matria orgnica, que exigir uma quantidade elevada de oxignio para a sua decomposio. A consequncia natural, em muitos casos, a mortalidade de peixes e outros seres vivos. Com certeza, voc j deve ter lido sobre isso em vrias partes do pas, como, por exemplo, na lagoa Rodrigo de Freitas, no Rio de Janeiro e em muitas represas do estado de So Paulo, principalmente no vero. Como voc pode notar, a microbiologia uma importante disciplina que, apesar de estudar microrganismos, tem uma dimenso maior pelo efeito desses no meio ambiente. No geral, os problemas esto todos envolvidos e atuando paralelamente. A poluio por fertilizantes pode causar um problema maior, pelo desbalanceamento nutricional nas guas, afetando muitos seres vivos. No aspecto biotecnolgico, estudado com mais detalhe em outro captulo desse livro, podemos ver a importncia das algas em vrias reas de atuao humana. Vrios produtos so feitos de algas como, por exemplo, na indstria farmacutica com a produo de cosmticos e medicamentos. H vrios produtos, como cremes para a pele e pasta de dentes, que so feitos a partir desses organismos. As algas podem tambm fazer parte de filtros, como vimos na introduo para as algas diatomatceas. Na indstria de alimentos h uma gama de produtos na culinria oriental que se destaca e que cresce a cada dia. Em macroalgas temos os exemplos de Nori, Wakame e Kombu, que podem ser utilizados para fazer o sushi e para o consumo em saladas e sopas. Derivados de algas, como, por exemplo, o alginato, pode ser utilizado na indstria de cerveja, estabilizantes e espessantes, e na preservao de frutas. A carragenina outra substncia que atua no clareamento de cerveja e , tambm, espessante e estabilizante. Outro produto de grande destaque o gar, um polissacardeo, extrado de algas marinhas do gnero Gelidium, e outros, e tem a

58

Microbiologia

funo de solidificar o meio, atuando como gelatinas. Esse gar bastante usado na produo de meios de cultura, em microbiologia e outras reas, como cultura de tecidos vegetais e animais. A agarose um produto mais refinado e que utilizada na composio do gel de anlises de biologia molecular. Curiosamente, quando algum vai fazer um exame de paternidade, as algas podem participar dessa importante atividade. Na microbiologia forense, para tentar desvendar crimes, materiais biolgicos so analisados e podem tambm utilizar a agarose. As microalgas podem ser utilizadas na dieta humana, com exemplos dos gneros Chlorella, Spirulina e Dunaliella. Alm de fornecerem vrias vitaminas, as algas so ricas em protenas, substncias antioxidantes, como o Omega-3, e apresentam vrios minerais, usualmente, no muito consumidos no cotidiano. Esses produtos, em forma de cpsulas, so encontrados em farmcias e supermercados, no mercado de produtos naturais e esto em franco crescimento, j que muitas pessoas esto aderindo a essas dietas alternativas. Em vrias partes do mundo h a produo dessas algas em tanques oxigenados, principalmente em pases com grande exposio ao sol, como o caso de Israel e nos Estados Unidos, na Califrnia. Nessa linha de produo de biomassa, recentemente, tem sido bastante estudado o potencial de algas na indstria de combustveis, os biocombustveis, muito na mdia mundial. A biomassa das algas, como ocorre em muitas partes do mundo, pode tambm ser utilizada para a fabricao de rao, adubos orgnicos e na produo de pigmentos como, por exemplo, a ficobiliprotena, empregada nas anlises de imunofluorescncia. Em resumo, a importncia das algas muito grande e est em fase de expanso, em diversas reas do conhecimento humano.

3.3 Protozorios
Alm das caractersticas que os incluem no reino Protista (clulas eucariticas e unicelulares), os protozorios so heterotrficos, geralmente mveis e sem parede celular. So unicelulares unos,

Reino Protista pseudpodes

Em grego: falsos ps - pseudo + podes) um termo para as extenses fludas do citoplasma de seres unicelulares, utilizadas para a alimentao e a locomoo. So evaginaes da membrana plasmtica que surgem por meio de deslocamentos do citoplasma e que movimentam a clula e englobam partculas.

59

ou seja, no formam agrupamentos ou filamentos, se apresentam sempre de forma celular isolada. A caracterstica de mobilidade foi responsvel pela sua denominao de primeiros animais (protos = primeiro, zoom = animal). Podem se locomover por pseudpodes, flagelos ou clios. Como heterotrficos podem atuar como saprgenos decompondo a matria orgnica, parasitas e predadores, incluindo os prprios protozorios (holozoicos) e simbiontes. Protozorios flagelados que vivem em associao com cupins, degradam a celulose (ingerida, mas no digerida) em substncia glicognica que assimilada pelo inseto. Apresentam dimenses variveis. Leishmania donovani, 10 m, Amoeba proteus, 400 m e alguns ciliados chegam a 2.000 m.

Eles podem produzir cistos, envoltrios temporrios que aumentam a proteo contra as agresses externas. Falta de alimento e desidratao favorece o encistamento. Ele tambm pode ocorrer durante a reproduo, como Fisso Binria forma de proteo quando transmitido de um Nome dado ao processo de reproduo assehospedeiro para outro.
xuada dos organismos unicelulares que consiste na diviso de uma clula em duas por mitose, cada uma com o mesmo genoma da clula-me (com o mesmo DNA ou material gentico da clula-me).

Fisso Mltipla
O ncleo se divide mltiplas vezes antes da clula se dividir. Aps a formao de vrios ncleos, uma pequena poro do citoplasma se concentra ao redor de cada ncleo e ento, uma nica clula se separa em clulas-filhas.

A reproduo pode ser sexuada ou assexuada. A reproduo assexuada pode ser por diviso ou fisso (binria ou mltipla) e gemulao. A sexuada pode ser por conjugao (unio temporria de dois indivduos para troca de material gentico) ou fuso de gametas (comparvel aos espermatozoides e vulos). Os protozorios possuem capacidade de regenerao de partes perdidas.

3.3.1 Classificao
Devido ao fato de serem heterotrficos e necessitarem buscar alimento, a principal caracterstica utilizada o modo de locomoo. Apesar de existirem inmeras espcies, as mais citadas so as causadoras de problemas para o homem. So divididos em quatro grandes grupos:

Gemulao
A gemulao, tambm chamada de gemiparidade ou brotamento, caracteriza-se pelo aparecimento de brotos ou gemas, que surgem e crescem ligados ao organismo inicial e que podem, ou no, dele se desprender em certa poca da vida.

60

Microbiologia

Mastigophora Locomoo por flagelos. O nmero, a posio e o tamanho so importantes na classificao. Exemplos: Trichonympha collaris - Simbionte de cupins. Trichomonas buccalis, T. hominis, T. vaginalis - Causadores de gengivites, inflamao no intestino e trato urogenital, respectivamente. Trypanossoma cruzi - Causador da doena de Chagas. O agente transmissor o barbeiro (Triatoma). Giardia lamblia - Causa diarreia, principalmente em crianas. um dos eucariotos mais antigos. No apresenta mitocndrias, no se sabe, entretanto, se nunca a tiveram ou se a perderam. Sarcodina Locomoo por pseudpodes. So conhecidos como amebas. Alm da locomoo os pseudpodes, servem para a ingesto. A Entamoeba histolytica a espcie caracterstica deste grupo. Ciliophora Locomoo por clios. Os clios tambm auxiliam na alimentao, conduzindo o alimento para o poro bucal. O grupo tem representantes como Paramecium, um ciliado comum na gua e o Balantidium coli, nico ciliado patognico ao homem. Sporozoa So pequenos, parasitas obrigatrios, formam esporos e as formas adultas no apresentam organelas de locomoo. Exemplos: Plasmodium vivax - Causador da malria e tem como agente transmissor os mosquitos. Coccdios que atacam a parede intestinal como as nosemoses. A Nosema apis ataca as abelhas, destruindo as colmeias. Alm de ocasionar problemas na produo de mel, prejudica outras atividades agrcolas pela falta de polinizao.

Reino Protista

61

3.3.2 Importncia
Grande importncia dada aos protozorios pelos problemas de sade causados ao homem. No entanto, outros atributos to ou mais importantes so normalmente esquecidos. A grande maioria dos protozorios no patognica ao homem. Alguns podem ser predadores, ou parasitas de outros organismos. Outros so decompositores de matria orgnica. H ainda os simbiontes, como os que vivem no rmen de determinados mamferos realizando a digesto da celulose. Como grupo um dos principais formadores do plncton, que a base da cadeia alimentar dos ambientes aquticos.

Resumo
Protistas so organismos eucariticos unicelulares, tradicionalmente divididos em fototrficos (algas) e heterotrficos (protozorios). As algas fazem fotossntese, produzindo uma significativa quantidade de oxignio para o planeta, e so divididas em dois tipos: as macroalgas e as microalgas. As algas so tambm muito importantes ecologicamente, por participar dos processos de formao do solo, ciclagem de nutrientes e fazem parte da alimentao de vrios seres vivos, incluindo o homem. Podem ser utilizadas na indstria em vrios produtos e, quando em desequilbrio ambiental, podem contaminar a gua e produzir toxinas. Os protozorios so microrganismos que apresentam reproduo sexuada ou assexuada e podem ser mveis ou no. Em termos ecolgicos so importantes por fazerem parte da cadeia de alimentao de vrios seres vivos, alguns so simbiontes, ajudam nos processos de decomposio da matria orgnica e podem ser patognicos ao homem e animais.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1.

c a p t u lo 4

Fungos
Neste captulo sero estudados os fungos, com destaque para as suas caractersticas, morfologia, reproduo e importncia.

c a p t u lo 4

Fungos

65

4.1 Introduo
O reino Fungi ocupa uma posio de interface com os reinos animal, vegetal e protista. Historicamente vem sendo comparado s plantas, mas apresenta clulas somticas sem diferenciao ou diviso de trabalho.

4.2 Caractersticas
Os organismos pertencentes ao reino Fungi so caracterizados por apresentarem: a) Clula eucaritica: Clulas com ncleo envolto por membrana, onde esto os cromossomos. O DNA linear e associado a histonas. O nmero de cromossomos superior a um e varivel com a espcie, apresentando, portanto, mais DNA que os procariticos. Apresenta nuclolo, local onde sintetizado o RNA ribossomal e mitocndrias, organelas responsveis pela respirao e fosforilao oxidativa. b) Metabolismo heterotrfico: No possuem clorofila, dessa forma no realizam fotossntese. So quimioorganotrficos que se nutrem por absoro. Podem ser saprgenos, parasitas, predadores ou simbiontes. Como saprgeno, libera as enzimas no meio as quais desdobram as macromolculas em subunidades que podem ser absorvidas. Muitos so parasitas de plantas, outros de animais e mesmos de fungos. Grande parte atua como facultativos, enquanto que alguns so obrigatrios. Eles podem

Quimioorganotrficos
Organismos que oxidam somente substratos orgnicos.

66

Microbiologia

usar suas enzimas para matar as clulas e depois us-las (Necrotrficos) ou podem produzir hifas especializadas denominadas de apressrios e haustrios para se fixarem nas clulas dos hospedeiros e absorverem os nutrientes (Biotrficos). Muitos fungos formam associaes com razes de plantas (micorrizas) favorecendo a absoro de nutrientes e gua. c) Parede celular: responsvel pela forma, protege o citoplasma e necessria nas associaes para reproduo, parasitismo e simbiose. constituda de um componente microfibrilar (esqueleto) localizado no lado interno da parede embebida por uma matriz que se estende para o lado externo. O componente microfibrilar constitudo de um componente cristalino insolvel em gua que inclui glicanas (polmeros de glicose de ligao variada) e quitina (polmeros de N-acetil-glicosaminas, tambm chamado de glicoaminoglicano). A matriz de polissacardeos solveis em gua (glicanas e glicoprotenas). Lipdeos e melaninas so outros compostos que podem estar presentes. A celulose geralmente est ausente nos fungos verdadeiros. Ela mais comum na Stramenopila (Oomycetos), que embora sejam morfologicamente parecidos com os fungos no esto filogeneticamente relacionados a eles. d) Geralmente imveis: Alguns grupos relacionados aos fungos podem apresentar flagelos e alguns so ameboides. e) Maioria aerbia: Principalmente os filamentosos. As leveduras so facultativas.

4.3 Morfologia
Os fungos apresentam formas diferenciadas nas estruturas somticas ou reprodutivas. Estas diferenas morfolgicas so a base dos sistemas de identificao.

4.3.1 Sistema somtico

constitudo por uma ou mais clulas. As formas unicelulares so conhecidas como leveduras. So ovais (esfricas alongadas) e

Fungos

67

maiores que as bactrias, com dimenses que variam de 1 a 5 m por 50 m. No tem mobilidade e formam em meios de cultura colnias lisas e brilhantes, semelhantes s das bactrias. As formas multicelulares ou filamentosas so conhecidas como bolores. As clulas so reunidas pelas extremidades formando um tubo denominado de hifa e o conjunto destas o miclio. As hifas so finas (5 a 10 m de dimetro), transparentes e rgidas. Elas crescem por alongamento pela ponta, pois, nesta regio, a ligao dos polissacardeos ainda no fixa o que permite a incluso de outras unidades. O crescimento tambm pode ocorrer em outras partes, produzindo ramificaes. Cada fragmento que contm ncleos capaz de gerar novos indivduos. Fungos dimrficos apresentam tanto a forma unicelular (leveduras) como a multicelular (filamentosa). Ocorrem principalmente entre os parasitas. Quando crescem fora do hospedeiro so filamentosos e dentro destes so leveduras.
Estruturas eletronicamente densas de forma esfrica, retangular ou hexagonal. Possui a funo de manter a integridade hifal. Ocorrem, provavelmente, em situaes tais como, envelhecimento e ataque por outros organismos, impedindo desta forma que haja extravasamento citoplasmtico com consequente morte do organismo.

Tipos de Hifas Muitas espcies de fungos apresentam interrupes nas hifas chamadas de septos (invaginaes entre as clulas) (Figura 4.1B). Algumas vezes estas invaginaes so produzidas em espaos regulares com 1, 2 ou mais ncleos, dividindo os filamentos em clulas distintas. No entanto podem existir poros que permitem a migrao de ncleos e outras organelas entre as clulas formando um protoplasma contnuo. No filo Ascomycota, os poros s vezes podem ser bloqueados por estruturas como corpos de Woronin. Em alguns casos como no filo Basidiomycota o septo pode tornar-se inflamado prximo ao septo, quando ento denominado de dolporo-parentossomo. Em outras espcies o septo raramente est presente (Figura 4.1A), surgindo apenas na base de estruturas reprodutivas ou em partes velhas formando miclios asseptados ou cenocticos. A clula cenoctica essencialmente uma clula com muitos ncleos. As hifas podem diferenciar-se formando estruturas mais complexas (Figura 4.2.): Rizoides: hifas especializadas que penetram no substrato apresentando forma de razes e servem para sustentao e nutrio.

68

Microbiologia

Anastomose: unio de hifas. Grampo de conexo ou fbula: caracterstico de miclio binucleado de Basidiomycota. Haustrios ou sugadores: hifas que penetram no hospedeiro para absorver nutrientes. As hifas podem se organizar em: Rizomorfos ou cordes miceliais: conjunto de hifas reunidas paralelamente podendo se entrelaar. Plectnquimas: reunio de hifas formando massas consistentes densas com fuso das paredes. Quando as hifas perdem a sua individualidade, o plectnquima denominado de esclercito, que muito resistente as condies adA A Hifa No septada B B Hifa septada

Ncleo

Septo Ncleo Figura 4.1 Tipos de hifas. (Modificado de PELCZAR et al.; 1996, p. 125).

Rizoides

Anastomoses

Grampo de conexo

Sugadores

Figura 4.2 Diferenciao de hifas. (Modificado de PELCZAR et al.; 1996, p. 125 e SILVEIRA; 1995, p. 10-11).

Fungos

69

versas. Quando as hifas depois de soldadas ainda conservam a sua individualidade a estrutura denominada de estroma. rgos reprodutivos podem ter origem nos estromas. Em alguns casos difcil diferenciar os dois tipos.

4.3.2 Sistema reprodutivo

As estruturas reprodutivas exibem uma diversidade de formas, que so utilizadas na classificao. Os fungos podem apresentar estruturas de reproduo assexuada (Figura 4.3) ou sexuada.

Artrsporos

Clamidsporos

Fisso binria

Brotamento ou gemulao

Figura 4.3 Reproduo assexuada. (Modificado de SILVEIRA; 1995, p. 34-35 e PELCZAR et al.; 1980, p. 318).

Reproduo assexuada Esta forma de reproduo tambm denominada de somtica ou vegetativa, pois no envolve a fuso de gametas, a chamada fase anamrfica (fase assexual) e pode ocorrer por diferentes procedimentos: a) Fragmentao b) Formas de resistncia como: Plectnquimas: esclercitos e estromas. c) Artrsporos: esporos que se formam pela quebra das extremidades da hifa (Figura 4.3A). d) Clamidsporos: esporos formados por clulas especiais de descanso (Figura 4.3B). e) Fisso binria: diviso da clula (Figura 4.3C).

70

Microbiologia

f) Brotamento ou gemulao: surgimento de protuberncia que vai aumentando at originar outra clula (Figura 4.3D). g) Esporos: Os esporos representam o mtodo mais comum de reproduo assexuada (Figura 4.4). Eles variam em cor (transparentes, verdes, amarelos, vermelhos, marrons, pretos) e forma (ovais, esfricos, globulosos, helicoidais). Algumas espcies podem produzir at quatro tipos de esporos. Os esporos podem estar no interior de estruturas (endgenos) ou externamente (exgenos), serem imveis (aplansporo) ou mveis (plansporos ou zosporos). Esporos endgenos imveis so denominados de esporangisporos, esto contidos num esporngio, que sustentado por uma hifa denominada de esporangiforo. Esporos endgenos mveis so denominados de zoosporangisporos, esto contidos num zoosporngio, que sustentado por um zoosporangiforo. Condias so esporos exgenos imveis localizados nas extremidades nas hifas. Os esporos dos fungos normalmente so imveis (aplansporos). Apenas um grupo, os quitrdios produzem zosporos. Reproduo sexuada A fase sexual tambm denominada de teleomrfica. H alta incidncia de recombinao e formao de novos gentipos. Envolve a unio de dois ncleos compatveis. Um indivduo pode produzir diferentes tipos de machos e fmeas, compatveis ou no. Ocorre em trs fases: a) Plasmogamia: unio de dois protoplastos que pode ocorrer de vrias maneiras, gametas mveis, imveis, iguais, diferentes, fuso de hifas ou clulas, fazendo com que os ncleos fiquem juntos na mesma clula. b) Cariogamia: fuso de dois ncleos. c) Meiose: diviso reducional, reduzindo outra vez o nmero de cromossomos ao estado haploide.

Fungos

71

Esporangisporos Esporos endgenos imveis Esporangisporo Esporngio

Zoosporangisporos

Zosporos

Zoosporngio

Esporos endgenos mveis Esporangiforo Esporangiforo

Condias Condias

Esterigma Esporos exgenos imveis Conidiforos Conidiforo Figura 4.4 Tipos de esporos assexuados. (Modificado de PELCZAR et al.; 1996, p. 263; 1980, p. 318-319).

Os rgos sexuais so chamados de gametngios e formam os gametas. Quando no se distingui a sexualidade (macho ou fmea) so denominados de isogametngio e isogametas. No caso de serem diferentes o macho chamado de anterdeo e a fmea de oogonia ou ascognio. Diferentes tipos de esporos sexuados so produzidos (Figura 4.5): Osporos: Esporos produzidos dentro da oognia (Figura 4.5A). Zigsporos: Esporos de parede espessa, produzidos a partir do contato de duas hifas (Figura 4.5B).

72

Microbiologia

Ascsporos: Esporos produzidos no interior de ascos (saco), geralmente em nmero de 8 (Figura 4.5C). Basidisporos: Esporos produzidos na extremidade de basdios (clava), geralmente em nmero de 4 (Figura 4.5D).

Osporo Gametngio

Zigsporos

Zigsporo

Gametngio Gameta

Osporo

Ascsporos Ascos com ascsporos

Basidisporos Basidisporos

Fios estreis Basdio

Figura 4.5 Tipos de esporos sexuados. (Modificado de PELCZAR et al.; 1980, p. 319; 324).

4.4 Sistemtica de fungos

utilizada uma classificao filogentica, ou melhor, monofiltica, e cada grupo contm um ancestral e todos os seus descendentes. Como o aspecto morfolgico foi determinante nesta classificao, o que outrora se classificou como fungo, hoje pode estar em

Fungos

73

outro grupo, pois indivduos que apresentam formas semelhantes podem no apresentar um histrico evolucionrio igual. Assim, hoje por questes de tradio e praticidade trs diferentes grupos so estudados pelos miclogos.

4.4.1 Reino Protista

Dentro deste reino h quatro filos que, embora no estejam relacionados so denominados de fungos limosos: Myxomycota, Acrasiomycota, Plasmodiophoromycota e Dictyosteleomycota. Myxomycota So denominados de fungos limosos acelulares, pois formam plasmdio verdadeiro (massa de protoplasma ameboide, multinucleada envolta por uma membrana citoplasmtica), ou seja, os ncleos no esto separados por membranas celulares em clulas individuais. No estgio vegetativo apresentam-se como amebas (protozorios) nutrindo-se por fagocitose (bactrias) ou absoro. A fase de crescimento formada por clulas haploides com dois flagelos. Estas clulas podem apresentar tipos sexuais e podem fundir-se formando um zigoto diploide. O zigoto pode dividir-se repetitivamente por meiose formando um plasmdio. Os plasmdios nutrem-se de materiais em decomposio (absoro). Quando as condies do ambiente tornam-se adversas (mais seco ou faltam alimentos), o protoplasma plasmodial torna-se concentrado surgindo um esporngio pedunculado. A meiose ocorre dentro dos esporos (esporangisporos) produzindo clulas haploides. Acrasiomycota So denominados de fungos limosos celulares, pois formam um pseudoplasmdio. No estgio vegetativo esto na forma de clulas isoladas (semelhantes a protozorios), alimentando-se de bactrias. Tem por habitat a gua doce, solo mido e vegetais em decomposio. Sob condies adversas agregam-se formando uma massa viscosa com muitos pseudoplasmdios (as amebas permanecem com suas membranas celulares). Os pseudoplasmdios assemelham-se

74

Microbiologia

as lesmas e podem migrar e transformar-se em corpos de frutificao produtores de esporos. Os esporos espalhados germinam e do origem as amebas completando o ciclo. Plasmodiophoromycota Durante a fase de crescimento apresentam-se como plasmdio multinuclear, sem parede celular. Apresentam zosporos com dois flagelos chicoteantes. So fungos limosos parasitas obrigatrios que provocam aumento anormal no tamanho (hipertrofia) e no nmero de clulas (hiperplasia). Plasmodiofora brassicae provoca hrnia das crucferas. Dictyosteliomycota Formam flagelados. pseudoplasmdios e produzem esporos no

O ciclo de vida dos fungos limosos sumarizado na Figura 4.6.

Esporos 5 7 Corpos de fruticao 8 11

Lesmas Esporo

Migrao do pseudoplasmdio Germinao Centro de agregao (formao do pseudoplasmdio)

Agregao

Amebas

Figura 4.6 Ciclo de vida de um Dictyosteliomycota. (Modificado de PELCZAR et al.; 1996, p. 260).

Fungos

75

4.4.2 Reino Stramenopila

um novo reino baseado na estrutura do flagelo que est sendo proposto a partir das algas. Apresenta trs filos: Oomycota, Hyphochytridiomycota e Labyrinthulomycota. Oomycota So reconhecidos como sendo diferentes do reino Fungi, pois, esto mais relacionados s algas, mas por tradio, bem como por consideraes prticas tm sido estudados pelos miclogos. Embora no filogeneticamente relacionados aos fungos, eles tm nutrio por absoro e morfologia semelhantes. Geralmente filamentosos com miclio cenoctico. Enquanto que os fungos apresentam parede de quitina, os oomicetos apresentam glicanas e/ou celulose. A reproduo sexuada ocorre por contato gamentangial produzindo osporos. Nas formas simples todo o talo age como um gametngio, em outros, os gametngios so diferenciados. O macho pequeno denominado de anterdeo e a fmea globosa denominada oognia. Aps a cariogamia ocorre a meiose e um ou mais osporos so produzidos. A reproduo assexuada ocorre pela produo de esporngio com zosporos biflagelados (ornamental e chicoteante). A figura 4.7 apresenta o ciclo de vida de um Oomycota. Muitos so aquticos vivendo como saprgenos, outros so parasitas, introduzindo suas hifas nos hospedeiros, onde liberam enzimas digestivas para depois absorverem os nutrientes. Espcies do gnero Saprolegnia so aquticos e saprgenos, Phytophthora infestans provoca doenas em batata, Plasmopora viticola nas videiras e Pythium provoca tombamento em mudas. Hyphochytriomycota Organismos semelhantes aos quitrdios, com clulas mveis com flagelos complexos (ornamentados). Possuem parede com quitina e celulose. Reproduzem-se somente assexuadamente pela produo de zosporos Labyrinthulomycota So conhecidos como fungos em malha.

76

Microbiologia

D
Cisto

Germinao

E F
Esporo Encistamento

C
Zosporo

G
Cisto Germinao

B
Zoosporngio Esporulao Crescimento

O
Germinao dos osporos

I A
Hifas somticas Formao de gametngios Meiose

N
Osporos

n) e (2 loid dip (n) ide Fase plo ha Fase

J
Gametngios aps meiose

M
Cariogamia

K L
Plasmogamia Diferenciao dos osporos

Figura 4.7 Ciclo de vida de um Oomycota. (Modificado de ALEXOPOULOS et al.; 1996, p. 705).

Fungos

77

4.4.3 Reino Fungi

So os fungos verdadeiros, nutrem-se por absoro e possuem miclio. constitudo de quatro filos (Chytridiomycota, Zygomycota, Ascomycota e Basidiomycota) e uma morfoclasse (Deuteromycota). Chytridiomycota So chamados de quitrdios. So os nicos fungos verdadeiros que possuem clulas mveis (esporos com um flagelo chicoteante). Apresentam miclio cenoctico com parede celular contendo quitina e glicanas, bem desenvolvido, ou de forma globuloide ou ovoide com uma nica hifa. As hifas podem diferenciar-se em rizoides. So saprgenos ou patognicos de plantas, animais e fungos (ascomicetos e basidiomicetos). Alimentam-se pelas hifas que penetram no hospedeiro ou material orgnico. Como saprgenos vivem no solo e gua decompondo celulose, quitina e queratina. Zygomycota Possuem miclio cenoctico (s existe septo separando partes reprodutivas, hifas velhas ou danificadas) bem desenvolvido (filamentoso). So divididos em duas classes: Zygomycetes e Trichomycetes. Os Zygomycetes apresentam esporos sexuados chamados zigsporos (esporo de repouso de paredes grossas). O zigsporo desenvolve-se dentro de um zigosporngio que formado de dois gametngios (compatveis e iguais ou diferentes). A reproduo assexuada por esporangisporos que se desenvolvem no interior de esporngios. Apresenta duas ordens: Mucorales e Glomales. A Mucorales representa fungos decompositores como o Rhizopus stolonifer, que apresentam rizoides e estolo. A Glomales inclui os fungos endomicorrzicos denominado de MVA, cujas hifas no interior do hospedeiro formam arbsculos para a realizao das trocas simbiticas e vescula onde so depositadas substncias de reserva. Ela apresenta os seguintes gneros: Glomus, Scutellospora, Entrophospora, Acaulospora, Gigaspora e Sclerocystis.

78

Microbiologia

Os Tricomycetes apresentam espcies que vivem em associao obrigatria com artrpodes. Organismos pertencentes a este filo so utilizados na produo de cidos orgnicos, drogas antiinflamatrias, produo de inoculantes (micorrizas) e produo de molho de soja (shoyu). Ascomycota So filamentosos, mas tambm podem ser unicelulares (leveduras) e dimrficos. O miclio septado, com um ou mais ncleos, com poro simples e corpo de Woronin. A parede celular constituda de quitinas e algumas vezes h a presena de celulose. Junto com os Basidiomycotas so considerados os fungos superiores e tiveram um ancestral comum. O filo apresenta a reproduo assexuada atravs de condias e sexuada por ascsporos. Na reproduo sexuada h a necessidade da presena de dois ncleos compatveis na mesma hifa que podem provir de clulas, hifas ou gametngios morfologicamente iguais ou diferentes (anterdio macho; ascognia fmea). Os dois ncleos podem permanecer na mesma hifa e sofrer sucessivas divises resultando em um grande nmero de clulas dicariticas. Aps a plasmogamia (fuso dos protoplastos), ocorre a cariogamia (fuso dos ncleos), geralmente nos ascos jovens. Seguida a fuso ocorre a meiose resultando em 4 ncleos haploides e aps uma mitose que dar origem aos oito ascsporos (ascoporognese). Os ascsporos so contidos nos ascos, que uma clula em forma de clava (contm 8 ascsporos, mas pode variar de 1 a centenas). Os ascos podem estar separados ou contidos em ascocarpos. H vrios tipos de ascomas (ascocarpos) (Figura 4.8), que so caractersticos de cada espcie. A reproduo assexuada pode ocorrer por fisso, fragmentao, sordias, clamidsporos e esporos. Os esporos assexuados so produzidos nas extremidades das hifas (condias) sustentados por uma hifa (conidiforo). Os conidiforos podem ser ns ou reunidos formando estruturas de frutificao (picndeos, acrvulos, esporodquios e sinemas) (Figura 4.9). Os ascomicetos apresentam diferentes ciclos de vida. Podem iniciar o ciclo com a germinao dos esporos (ascsporos ou co-

Apotcio

Cleistotcio

Peritcio

Figura 4.8 Tipos de ascomas. (Modificado de SILVEIRA; 1995, p. 130).

Fungos

79

ndias) por um ou mais tubos germinativos, desenvolvendo hifas e formando miclio. A produo de miclio pode levar a produo de condias providenciando um contnuo fornecimento de esporos durante uma estao ou ano. Quando determinadas condies ocorrem, inicia-se o processo de reproduo sexuada. Dependendo do caso h a necessidade do encontro de hifas compatveis, em outros, a ascognia e o anterdio diferenciam-se das clulas somticas. Os ncleos dos anterdeos passam para a ascognia pelo tricgeno. Aps a plasmogamia, a ascognia pode desenvolver hifas ascognicas (dicaritica) com os ncleos dividindo-se por mitose e em seguida ocorre a cariogamia, seguida de meiose produzindo 4 clulas haploides que por mitose daro 8. Os ascsporos maduros so liberados e dispersos e o ciclo se repete. As leveduras possuem reproduo assexuada por fisso ou brotamento e sexuada com produo de ascos com quatro ascsporos.

Sinmio

Esporodquio

Picndio

Acrvulo

Figura 4.9 Tipos de conidiforos. (Modificado de SILVEIRA; 1995, p. 25; 28).

80

Microbiologia

O filo apresenta espcies que atuam como saprgenos (degradadores de celulose, hemicelulose e lignina); parasitas, patgenos (Claviceps purpurea) e predadores (de nematoides); simbiontes de algas (formando os lquens) e plantas (micorrizas). A espcie Saccharomyces cerevisiae um importante fermentador de aucares produzindo bebidas (cerveja, vinho e cachaa) e combustvel (lcool). Basidiomycota So fungos superiores, apresentando miclio septado com grampo de conexo e doliporo. O filo apresenta a reproduo assexuada atravs de condias e sexuada por basidisporos. Os basdios so formandos aps plasmogamia, cariogamia e meiose (os dois ltimos ocorrem no basdio) dando origem a 4 basidisporos haploides dispostos sobre a sua superfcie. O ciclo de vida dos basidiomicetos pode ser resumido nos seguintes passos: Os esporos (condias e basidisporos) germinam dando origem a hifas e miclios haploides. O fungo pode reproduzir-se pela produo de esporos assexuados a partir do miclio ou hifas compatveis que se fundem, formando um miclio dicaritico (dois ncleos em cada clula). O miclio dicaritico desenvolve-se por diviso simultnea dos dois ncleos. O miclio dicaritico se diferencia em basidiocarpo (corpo de frutificao que produz basdios) ou em miclio produtor de basdio. Nos basdios so produzidos os basidisporos. Os basidiocarpos so as estruturas fngicas mais visveis a campo. Embora alguns permaneam imersos nos substratos (hipgenos) como as trufas, outros emergem a superfcie podendo permanecer fechados como os Gasteromycetos (Pisolithus) ou aberto como os cogumelos (Agaricus), apresentando chapu, lamela e estipe (Figura 4.10). O filo apresenta espcies que so utilizadas na alimentao (Agaricus, Lentinula edodes, Pleurotus), decompositoras de celulose, ectomicorrizas (Laccaria, Amanita, Scleroderma, Pisolithus) e patognicas (Armillaria). Patgenos vegetais que causam doenas como a ferrugem e o carvo tem ciclos complexos, passando por um ou dois hospedeiros e estgios sucessivos de esporulao, geralmente dependentes das condies climticas.

Fungos

81

Pleo ou chapu

A A

B B

C C

Lamelas

Anel

P ou Hastes

Volva Rizomorfas

Figura 4.10 Partes do basidiforo. (Modificado de SILVEIRA; 1995, p. 29).

Deuteromycota So fungos superiores, apresentando miclio septado. So conhecidos como fungos imperfeitos, pois no conhecida a fase sexual (fase teleomrfica), apenas a assexuada (anamrfica). Constitui-se ento de um grupo artificial ou uma morfoclasse. possvel que alguns representantes possam realmente no possuir a reproduo sexuada, podem ter perdido definitivamente esta caracterstica, mas tambm pode ocorrer que esta caracterstica no tenha sido descoberta. A descoberta muitas vezes difcil, pois alguns s se reproduzem sexuadamente em determinadas condies. Alm disso, pode ser difcil identificar as estruturas reprodutivas. Por isso, quando identificados, normalmente so pertencentes ao filo Ascomycota e mais raramente ao Basidiomycota. O gnero Arthrobotrys h muito conhecido dos miclogos, s foi identificado como pertencente Ascomycota em 1994. Muitas vezes a espcie reclassificada, isto cria muita confuso, pois o fungo pode receber nomes diferentes na fase teleomrfica e na anamrfica. No entanto, como o estgio sexual raro e o assexual mais conhecido, a espcie continua a ser referida como tal. O gnero Penicillium, conhecidos como Deuteromycota tpico, na realidade um Ascomycota pertencente ao gnero Talaromyces.

82

Microbiologia

Mesmo no conhecendo a fase sexuada, algumas caractersticas apresentadas no miclio facilitam a identificao. A presena de doliporo caracterstica de Basidiomycota, enquanto que poro simples tpico de Ascomycota. Diante da falta de reproduo sexuada, a identificao e a classificao deste grupo ficam restritas reproduo assexuada, que ocorre pela produo de conidiforos tendo nas extremidades as condias. O conidiforo constitudo de uma nica hifa ou pode ser ramificada, carregado as clulas conidiognicas (clulas das quais so formadas as condias, as filides). Os conidiforos podem ser simples ou agrupados formando estruturas especializadas como: Sinmias: Reunio de hifas (Figura 4.9. A). Esporodquio: Forma de almofada (Figura 4.9 B). Picndio: Forma de figo (Figura 4.9 C). Acrvulo: Formado em tecidos vegetais (Figura 4.9 D). A Deuteromycota pode apresentar, ainda, outras estruturas assexuais de propagao como; esclercios, estroma e clamidsporos. O grupo apresenta decompositores de matria orgnica (Aspergillus, Penicillium), produtores de antibiticos (P. notatum e P. Chrysogenum), e patognicos como a Candida albicans, uma levedura oportunista que provoca candidase na boca e vagina em humanos.

4.5 Disseminao
Geralmente ocorre atravs dos esporos, mas outras estruturas podem ser utilizadas como clamidsporos, esclercios e miclio. Os principais veculos utilizados so: a) Vento: Como os esporos so normalmente pequenos e leves, este o principal veculo utilizado. Alguns esporos, para facilitar o deslocamento, apresentam estruturas denominadas de fulcros. Cleistotcios apresentam fulcros com ganchos, que se unem uns aos outros aumentando a superfcie e facilitando a planagem. Outros esporos possuem fulcros higroscpicos.

Fungos

83

Quando as condies para a disseminao so adequadas, vento seco, eles ficam em p, caso contrrio, eles permanecem deitados, dificultando a disperso. b) gua: Para os fungos considerados superiores ela no um veculo importante. Mas para os que produzem zosporos, a presena de orvalho, gotas de chuva, a formao de pelculas de guas e corpos aquticos, fornecem as condies essenciais propagao. c) Solo: particularmente importante como reservatrio para espcies que sobrevivem como saprgenos ou como parasitas facultativos no solo. Desta forma, o deslocamento do solo por implementos agrcolas, veculos, mudas e pelo homem contribuem para a disseminao. d) Homem: Atravs de suas atividades e no trnsito, podem levar de vrias formas os fungos para outras regies. Os agricultores devem dar ateno especial aos funcionrios (boias-frias) que prestam servios em diferentes propriedades. e) Sementes: Sementes contaminadas, contendo miclio no seu interior ou mesmo esporos que esto juntos as sementes. Esclercios de Sclerotium rolfsii tem o tamanho das sementes de mostarda, couve e outras crucferas e, portanto, no so separadas durante o beneficiamento, sendo conduzidas junto com as sementes. f) Insetos: Podem carregar no seu corpo esporos e miclio ou ainda alimentando-se de plantas contaminadas podem eliminar os esporos atravs das fezes. g) Outros: Esporos ou miclio tambm podem ser transportados aderidos s penas e pelos de animais. Herbvoros ao se alimentarem de plantas podem consumir esporos que so liberados atravs das fezes.

4.6 Importncia
a) Decomposio da matria orgnica e ciclagem dos nutrientes: A principal funo dos fungos atuarem na decomposio

84

Microbiologia

da matria orgnica realizando a ciclagem dos nutrientes. Eles tambm podem provocar danos na decomposio de tecidos, madeiras e colheitas, pois eles no vo diferenciar uma fibra, um galho, ou uma semente invivel que cai ao solo, de um produto ou um bem til ao homem. b) Produo de alimentos: Cogumelos e biomassa. c) Sntese de substncias: lcool, bebidas, cidos orgnicos, enzimas, vitaminas, corantes e antibiticos. d) Parasitas de animais, plantas e microrganismos: Ocasionam danos nas criaes e culturas, como parasitas tambm podem ser utilizados no controle biolgico de ervas e insetos. e) Simbiontes: Como as micorrizas que favorecem o crescimento das plantas, ou com liquens que fornecem alimentos a uma gama de animais em regies de tundras.

Resumo
Os organismos pertencentes ao reino Fungi so caracterizados por serem eucariotos, heterotrficos que se nutrem por absoro. As caractersticas morfolgicas como tipo de miclio, esporos sexuados e assexuados so utilizados como base na classificao destes organismos. Por questes de praticidade e histricas so estudados pelos miclogos alm dos organismos pertencentes ao reino Fungi, os filos Myxomycota, Acrasiomycota, Plasmodiophoromycota e Dictyosteleomycota do reino Protista e os filos Oomycota, Hyphochytridiomycota e Labyrinthulomycota do reino Stramenopila. O reino Fungi apresenta quatro filos (Chytridiomycota, Zygomycota, Ascomycota e Basidiomycota) e uma morfoclasse (Deuteromycota). O Chytridiomycota apresenta miclio no septado e o nico grupo dos fungos verdadeiros que apresenta esporos mveis. O Zygomycota apresenta miclio no septado, esporos sexuados do tipo zigsporo e assexuados do tipo esporangisporos. Os filos Ascomycota e Basidiomycota e a morfoclasse Deuteromycota apresentam miclio septado e esporos assexuados nas extremidades das hifas denominados de condios. O Ascomycota apresenta

Fungos

85

esporos sexuados endgenos em ascos denominados de ascsporos. Os esporos sexuados do Basidiomycota so exgenos presentes nas extremidades de basdios, sendo denominados de basidisporos. Os fungos desempenham importantes funes no ambiente como a degradao de compostos orgnicos propiciando a ciclagem dos nutrientes, bem como podem trazer prejuzos na deteriorao de produtos e materiais. So responsveis pela sntese de inmeras substncias de interesse econmico como: antibiticos, lcool e bebidas. Na agricultura so responsveis pela associao com plantas que podem favorecer o crescimento vegetal ou ocasionar problemas como as doenas.

Referncias
ALEXOPOULOS, C. J.; MIMS, C. W.; BLACKWELL, M. Introductory Mycology. 4. ed. New York: John Wiley & Sons, Inc., 1996. 869p. MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2.ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. PELCZAR JR, M. J.; REID, R.; CHAN, E. C. S. Microbiologia. So Paulo: Mc Graw Hill Ltda, 1980. 566p. v. 1. SILVEIRA, V. D. Microbiologia. 5. ed. Rio de Janeiro: mbito Cultural, 1995. 336p.

c a p t u lo 5

Vrus
Neste captulo sero estudados os vrus, com destaque para as caractersticas gerais, taxonomia, ciclos de vida, cultivo, outros agentes infecciosos e as viroses.

c a p t u lo 5

Vrus

89

5.1 Introduo
Um dos agentes infecciosos mais interessantes estudados em microbiologia e que est diariamente na mdia so os vrus. De forma bastante comum ouvimos falar de doenas causadas por eles e que assolam milhares de pessoas mundialmente. Recentemente, esto em discusso os efeitos do vrus H1N1, inicialmente chamado de vrus da gripe suna. Muita gente ficou preocupada com a sua expanso e at chegou a utilizar mscaras de proteo. Na poca do inverno somos bombardeados com as informaes de vrus de gripe e de resfriados. Outro vrus que est sempre nas conversas do cotidiano o HIV, causador da AIDS. H os que causam a febre aftosa, em gado, por exemplo, e tm grande importncia econmica. Afinal, quem so os vrus? Curiosamente, a palavra vrus vem do latim e significa veneno. Isso mesmo. Veneno. Ser que os vrus so veneno? Por que eles tm esse estranho nome? Como voc j estudou, os microscpios mais rudimentares surgiram no faz tanto tempo assim e muitas doenas causadas por eles somente puderam ser identificadas mais recentemente. Pois bem, quando as pessoas no conseguiam associar uma determinada enfermidade com as bactrias ou outros seres vivos, logo diziam que era um veneno o agente causador. Dessa forma, vem a expresso: veneno, que acabou ficando at os dias de hoje.

90

Microbiologia

Outra questo interessante e que vale uma reflexo se os vrus so considerados seres vivos ou no. H quem diga que sim, pois, como vamos ver mais para frente, eles se multiplicam dentro de clulas, tanto animais como vegetais, e tm cidos nucleicos em sua constituio (o DNA ou o RNA). Entretanto, h quem defenda a ideia que no podem ser considerados seres vivos porque eles no possuem, como nos seres vivos, clulas organizadas com as diferentes organelas. A grande maioria dos microbiologistas segue esse argumento, de que no so seres vivos. Mas, como voc tambm pode ver e concordar, o assunto bastante polmico, j que eles causam grandes estragos. O importante que eles esto em nosso dia a dia e que merecem um lugar especial no estudo da microbiologia e de tantas outras cincias que eles esto presentes. H o lado benfico deles, claro, no sentido de que h um grande potencial da utilizao deles na produo de vacinas e medicamentos, entre tantos outros exemplos de aplicao discutidos na parte de biotecnologia da nossa disciplina. Historicamente, um qumico holands chamado Adolf Mayer mostrou, em 1886, que uma importante doena na planta de fumo podia ser propagada para outra planta, aparentemente sadia. Dmitri Iwanowski, um russo que estudava bactrias, em 1892, estudou a seiva dessas plantas e provou que a seiva pode, mesmo filtrada, contaminar outra planta. Inicialmente, pensou que era uma bactria mas, a partir de 1900, atravs de outros estudos cientficos, chegou-se a concluso de que eram organismos nicos, diferentes na estrutura de bactrias. Foi ento feita a distino entre esses dois tipos de agentes causadores de doenas. Em 1935, Stanley, um cientista norte-americano, isolou esse vrus e mostrou, com o auxlio do microscpio eletrnico, a sua estrutura bastante extica, diferente de bactrias. Como voc pode ver, o vrus do mosaico do fumo, ou tabaco, teve um importante papel no estudo desses organismos, hoje largamente estudado em relao s doenas em pessoas. Exemplos dessas enfermidades so: o vrus do HIV, identificado em 1983, atravs de isolados de macacos na frica. O hantavrus, que causa doenas severas em animais e seres humanos foi estudado em 1993, nos Estados Unidos. O vrus Ebola, causador da febre hemorrgica, em 1995, na frica.

Vrus

91

O estudo dos vrus chamado de virologia e os cientistas que estudam os vrus so os virologistas. Quem sabe um dia voc se torna um deles, nessa interessante rea da biologia, que cresce a cada dia, com novas descobertas.

5.2 Caractersticas gerais dos vrus

Os vrus so agentes infecciosos que variam de 10 a 100 vezes menores do que as bactrias (Figura 5.1). Seu tamanho mdio est na faixa de 20 a 300nm. So vistos apenas pelo microscpio eletrnico e tm uma estrutura que, em linhas gerais, uma capa de protena contendo, no seu interior, um cido nucleico, que pode ser o DNA ou RNA. Eles no crescem, de forma isolada, como muitos fungos e bactrias, em meios de cultura. Podem crescer em condies in vitro, em placas de Petri, mas apenas se clulas estiverem crescendo conjuntamente. Fora das clulas eles so inativos. Outra caracterstica desse grupo de organismos que eles so chamados de parasitas de mxima sofisticao porque enganam as clulas para produzirem o material gentico que deles. Em outras palavras, eles direcionam a maquinaria gentica microbiana para produzir o material que iro formar as partculas virais. Curiosamente, algumas enzimas acabam destruindo a prpria clula para que eles, os vrus, possam ser propagados e espalhados no meio ambiente e contaminar outros organismos. Veja que interessante e que forma inteligente de sobrevivncia. A estrutura bsica dos vrus chamada de vrion, que a partcula viral completa. Ela corresponde ao cido nucleico envolvido por uma membrana de protena e, s vezes, por outra camada externa chamada de envelope. Esta ltima composta de lipdeos, carboidratos e protenas. O termo capsdeo usado para descrever a capa de protena e o cido nucleico interno (Figura 5.2 e Figura 5.3). Os capsmeros so as unidades bsicas de protenas que formam os capsdeos. Os cidos nucleicos podem ser de fita simples ou dupla. As formas dos vrus so as mais variadas, de esfrico a poliedros, compostos por vrios vrtices. H tambm as formas alongadas, helicoidais, parecendo bastes, como o caso de muitos vrus de

92

Microbiologia

clulas vegetais (Figura 5.4., Figura 5.5. e Figura 5.6). Uma forma curiosa so as dos bacterifagos, que so os que atacam bactrias e apresentam um jeito diferente, contendo uma cabea, um corpo e unidades de fixao que parecem com pernas de animais. Os bacterifagos foram descobertos em 1915, na Inglaterra, pelo cientista Frederick Twort, e, posteriormente, em 1917, na Frana, por Felix dHrelle. Os colifagos so exemplos de vrus que atacam bactrias da espcie Escherichia coli.

225 nm Bacterifago T4 Clamdia 1.000 nm

Eritrcito humano com dimetro de 10.000 nm

Adenovrus 90 nm

Bacterifago M13 800 x 10 nm

Bacterifagos f2, MS2 24 nm

Vrus do mosaico do tabaco 250 x 18 nm

Poliovrus 30 nm

Vrus da vaccnia 300 x 200 x 100 nm

Vrus Ebola 970 nm

E. coli (bactria) 3.000 x 1.000 nm

Membrana plasmtica do eritrcito 10 nm de espessura

Figura 5.1 Tamanho comparativo de vrus e clulas. (Modificado de TORTORA et al., 2000, p. 361).

Vrus

93

Envelope lipoproteico

Espculas

Figura 5.2 Partes de uma partcula viral. (Modificado de PELCZAR et al., 1996, p. 380).

Capsmeros (aglomerado proteico)

cido nucleico (no cerne) Capsdeo (capa proteica)

Nucleocapsdeo Espiral de cido nucleico Capsmetro Capsmetro

Figura 5.3 Detalhes dos vrus. (Modificado de PELCZAR et al., 1996, p. 380).

Vrtices

94

Microbiologia

A B

Figura 5.4 Tipos de vrus gerais: (A) plio; (B) herpes; (C) mosaico do fumo; (D) influenza; (E) sarampo, caxumba; (F) raiva; (G) poxvrus; (H) bacterifago. (Modificado de PELCZAR et al., 1996, p. 383).

DNAfd

RNAfu

Poxviridae (vaccnia) Tipos de Vrus

Paramixoviridae (sarampo)

Orthomyxoviridae (gripe)

Rhabdoviridae (estomatite vesticular)

Retroviridae (sarcoma de Rous)

Herpesviridae (herpes simples)

Arenaviridae (coriomeningite linfocitria)

Coronaviridae (bronquite infecciosa aviria)

Bunyaviridae (Bunyamwera)

Togaviridae (Sindbis)

Figura 5.5 Tipos de vrus. (Modificado de PELCZAR et al., 1996, p. 399).

NO ENVELOPADOS ENVELOPADOS RNAfu RNAfu

DNAfd

Grupo dos vrus do mosaico da alfafa

Llarvirus (vrus da necrose branca do tabaco) Hordeivirus (vrus do mosaico da cevada) Tobravirus (vrus do rattle do tabaco) Cucumovirus (vrus do mosaico do pepino) Tobamovirus (vrus do mosaico do tabaco)

Caulimovirus (vrus do mosaico da couve-flor)

Bromovirus (vrus do mosaico do capim bromo)

RNAfd
Potexvirus (vrus X da batata)

Nepovirus (vrus da mancha anelar do tabaco) Comovirus (vrus do mosaico do feijo-de-corda) Grupo do vrus do mosaico da enao da ervilha Carlavirus (vrus latente do cravo)

Reoviridae (vrus do tumor de feridas)

(2 partculas?)

Rhabdoviridae (vrus da necrose amarela da alface)

Dianthovirus (vrus da mancha anelar dos craveiros)

DNAfu

Potyvirus (vrus Y da batata)

Tymovirus (vrus do mosaico amarelo dos nabos) Tombusvirus (vrus do nanismo do tomateiro) Sobemovirus (vrus do mosaico do feijoeiro) Grupo dos vrus da necrose do tabaco Grupo dos vrus da faixa clrica das nervuras do milho

Geminivirus (vrus do maize streak)

Grupo dos vrus vira-cabea do tomateiro

Vrus

100nm

Luteovirus ( vrus do nanismo amarelo da cevada)

Closterovirus (vrus da clorose da beterraba)

95

Figura 5.6 Tipos de vrus que infectam plantas. (Modificado de PELCZAR et al., 1996, p. 400).

96

Microbiologia

5.3 Taxonomia viral

Os virologistas formaram, em 1966, o Comit Internacional de Taxonomia Viral (CITV) que procurava agrupar os vrus por categorias ou famlias. Exemplos de famlias de vrus so: Adenoviridae, com os adenovrus; Herpesviridae e Picornaviridae, com os enterovirus e rinovirus. As famlias dos vrus so agrupadas com base no tipo de cido nucleico, na forma de replicao e na morfologia. O termo espcie viral um grupo de vrus, dentro da famlia, que apresenta a mesma informao gentica e nicho ecolgico. Enterovirus e rinovirus so exemplos de um gnero viral importante e bastante comum em vrias doenas humanas. A poliomielite um exemplo de enterovirus e os rinovirus so exemplos dos que causam resfriados.

Os Adenovirus so um grupo de vrus muito frequentes de genoma de DNA duplo (dupla hlice). No possuem envelope bilipdico e so extremamente resistentes.

5.4 Ciclo de vida dos bacterifagos

H dois tipos de ciclos de vida dos vrus que atacam as bactrias: o ciclo ltico, que destri a clula hospedeira (Figura 5.7) e o ciclo lisognico que no destri a clula hospedeira (Figura 5.8). O termo fago temperado usado para aqueles vrus que infectam a clula, mas no a matam. O vrus virulento o que causa quebra (lise) ou mata o hospedeiro. As fases do ciclo ltico so: adsoro, aps a fixao na superfcie da clula hospedeira, injeo do material gentico, transcrio das informaes genticas, sntese de protenas, montagem das estruturas virais e liberao. O ciclo lisognico apresenta uma variante que a clula no destruda, podendo o material gentico viral fazer parte do genoma da bactria. Aps um determinado ponto, pode ocorrer, paralelamente, o ciclo ltico, com a liberao dos vrus. Em clulas de animais e de plantas as etapas so, normalmente, parecidas e seguem uma fixao, penetrao, sntese de partculas virais, montagem e liberao.

Vrus

97

Bacterifago

Bactria

DNA no interior da cabea do fago

Adsoro

Injeo do DNA

mRNA Transcrio do fago DNA

Sntese da protena do fago; replicao do DNA do fago

Produo das estruturas do fago

DNA acondicionado na cabea do fago; montagem dos vrus

Figura 5.7 Ciclo ltico dos vrus. (Modificado de PELCZAR et al., 1996).

Fagos liberados por lise celular

98

Microbiologia

Bacterifago

DNA da clula

DNA de

Ciclo ltico (sntese insuciente de protena repressora)

Ciclo lisognico (sntese suciente de protena repressora)

Profago

Ciclo ltico

Replicao de DNA e diviso celular

Induo espontnea

Muitas geraes de clulas lisognicas

Figura 5.8 Ciclo lisognico dos vrus. (Modificado de PELCZAR et al., 1996).

Vrus

99

5.5 Cultivo dos vrus

Como citado, os vrus no se multiplicam sozinhos e, por essa razo, so de difcil estudo por no crescerem em meios de cultura tradicionais. Os bacterifagos crescem em culturas bacterianas, em formas slidas ou lquidas. Os vrus animais so estudados em partes animais, como clulas e ovos embrionrios. Os vrus crescem em partes ou clulas de plantas, com destaque para a seiva e formam, nas folhas, um sintoma tpico que chamado de mosaico, com vrias tonalidades de cores. H outros que atacam os vasos, bloqueando a passagem de lquido e de nutrientes para outras partes da planta.

5.6 Outros agentes infecciosos

Em adio aos vrus, que causam uma gama vasta de doenas, h outros agentes infecciosos que so, tambm, muito importantes na rea de sade animal e humana: pron e viroide. Os prons so agentes compostos de protenas infecciosas e o exemplo tpico o da doena da vaca louca que assolou grande parte do rebanho de gado na Gr-Bretanha em 1987. Os viroides so compostos de molculas de RNA em fita simples, em forma circular, e causam doenas em plantas.

5.7 Viroses
O termo virose empregado para descrever a doena causada por vrus. Alguns exemplos em pessoas, animais e plantas so dados a seguir, entre tantos j descritos na literatura. Exemplos de vrias doenas de grande importncia para os seres humanos so: dengue, raiva, caxumba, rubola, sarampo, catapora, hepatite, AIDS, resfriado, gripe e febre amarela. Em animais, h a bronquite infecciosa aviria, gripes, febre aftosa e mancha branca do camaro. Em plantas h a murcha do tomateiro, virose do mamoeiro, o vrus do vira-cabea em tomateiro, mosaico em alface e tristeza dos citros.

100

Microbiologia

Resumo
Os vrus so agentes infecciosos que esto numa classificao polmica. Para muitos no so seres vivos porque no possuem clulas mas, para outros, so porque tm material gentico e se multiplicam dentro de clulas. So vistos pelo microscpio e apresentam uma estrutura simples de capa proteica, com ou sem envelope externo, e o material gentico dentro, sendo DNA ou RNA. So chamados parasitas de mxima sofisticao porque enganam as clulas, conduzindo a sua maquinaria gentica para a prpria replicao. Os vrus que atacam as bactrias so os bacterifagos e ocorrem dois tipos de ciclos: o ltico, que destroi, e o lisognico, que no destri a clula. Os vrus no se reproduzem em meios de cultura sem a presena de clulas. Potencialmente, podem ser utilizados nos processos de engenharia gentica, na obteno de produtos e processos biotecnolgicos.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. PRESCOTT, L. M.; HARLEY, J. P.; KLEIN, D. A. Microbiology. 2. ed. Dubuque: W. C. Brown, 1993. 912p. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. 827p.

c a p t u lo 6

Interaes com microrganismos

Neste captulo sero estudadas as interaes que ocorrem entre os microrganismos e entre estes e as plantas e os animais.

c a p t u lo 6

Interaes com microrganismos

105

6.1 Introduo
Durante a evoluo da vida diversos tipos de relaes foram desenvolvidas entre os organismos. O presente captulo tratar apenas das interaes que ocorrem entre microrganismos e entre estes, as plantas e os animais. As interaes podem ser do tipo positivas ou negativas.

6.2 Interaes positivas

Entre as interaes positivas encontramos o neutralismo, o comensalismo, a protocooperao e a simbiose. Neutralismo O neutralismo se caracteriza pela inteira independncia de um indivduo, espcie ou populao. Diante da complexidade de relaes e atividades desenvolvidas pelos organismos muito difcil imaginar que este tipo de interao exista. Se ela acontecer, deve ser entre indivduos presentes em stios muito distintos e afastados. Simbiose Tambm relatada como parasitismo controlado ou mutualismo. A palavra tem origem grega (sim= juntamente; bios = vida), ou seja, uma relao existente entre dois seres de vida em comum. No uso geral, caracteriza-se como a relao em que h a convenincia para os dois, caracterizando por uma obrigatoriedade e especifici-

106

Microbiologia

dade, em que determinada atividade s exercida na presena dos dois. Em muitos casos ela necessria sobrevivncia de ambos. So exemplos de simbioses: a) Associao entre bactrias do grupo rizbio e leguminosas; b) Os lquens; c) Bactrias e protozorios do rmem; d) Micorrizas. Essas associaes sero discutidas de forma mais abrangentes nos captulos posteriores. Protocooperao A exemplo da simbiose, a protocooperao uma associao de benefcios mtuos, porm no exige dependncia obrigatria e especificidade. Um microrganismo pode estar realizando determinada atividade (fixao de nitrognio, degradao de um composto txico, liberao de determinado produto) que til a outro organismo, e este por sua vez tambm pode estar executando alguma atividade que beneficia o anterior. No entanto, por diversas causas uma destas atividades pode ser interrompida e o tipo de interao muda. Comensalismo a associao em que um indivduo beneficiado enquanto que o outro no sofre qualquer benefcio ou prejuzo. o tipo de interao mais comum que existe. So exemplos de comensalismo: a) Modificao do substrato nutritivo. Transformao da celulose por fungos celulolticos em cidos orgnicos que podem ser utilizados por bactrias e outros fungos no celulolticos. b) Produo de substncias e fatores de crescimento. Aminocidos, vitaminas e fitohormnios que so utilizados por outros organismos que no conseguem sintetiz-los. c) Decomposio de produtos metablicos ou substncias txicas. d) Mudanas nas propriedades fsicas ou qumicas do habitat. Alterao no pH, presso osmtica e composio atmosfrica.

Interaes com microrganismos

107

e) Fornecendo o habitat. Em ambientes naturais, ocorrem as chamadas simbioses nutricionais. Nestes casos ocorrem inmeras associaes comensalistas interligadas, de forma que a decomposio de um determinado material muito mais rpida, do que quando tratada de forma isolada com culturas puras. Isto ocorre devido a uma extensa rede de associao entre os decompositores, os que utilizam o material decomposto, os que sintetizam fatores de crescimento e os decompositores de substncias txicas.

6.3 Interaes negativas

Entre as interaes negativas encontramos a competio, o amensalismo, o parasitismo e a predao. Parasitismo Caracteriza-se por ser uma associao em que um dos membros obtm benefcios (parasita) em detrimento de outro (hospedeiro). uma interao especfica onde o parasita atinge um nmero limitado de espcies sendo que muitas vez, uma s. O hospedeiro permanece vivo pelo menos durante um determinado tempo, em que serve de habitat e fonte de nutrientes. Os parasitas provavelmente surgiram a partir de microrganismos adaptados as estruturas externas do hospedeiro, vivendo custa de excrees. Neste local h intensa competio. Quem tiver a capacidade de invadir a clula, obtm a vantagem da no competio. Os parasitas podem ser obrigatrios ou facultativos. Os obrigatrios so completamente dependentes do hospedeiro. Requerem requisitos nutricionais muito especializados, crescendo apenas em uma espcie ou variedade e s vezes em apenas uma parte do hospedeiro. Como parasitas obrigatrios tpicos temos os vrus. Os facultativos vivem tanto no hospedeiro como custa de material orgnico morto. Fora do hospedeiro, crescem vagarosamente podendo ser eliminados pela competio com saprfitos. Como exemplo, temos o Ophiobolus graminis, causador de doena nas razes do trigo.

108

Microbiologia

Embora os exemplos de parasitismo mais citados na literatura estejam relacionados a microrganismos com plantas e animais, eles tambm ocorrem entre os microrganismos. Devido ao seu tamanho reduzido parece difcil imaginar que uma bactria possa ser parasitada. O gnero Bdellovibrio parasita de rizbio. Bacterifagos so parasitas de bactrias. O termo patgeno no deve ser utilizado como sinnimo de parasita. Ele utilizado quando o organismo causa uma doena. Um microrganismo pode ser patognico sem ser parasita. O Clostridium botulinum causa danos sem ser um parasita. Ele se desenvolve por exemplo em conservas onde produz as toxinas, que ingeridas iro causar o botulismo. Predatismo A semelhana do parasitismo, o predatismo uma associao entre dois organismos em que um dos scios obtm vantagem (predador) enquanto que o outro prejudicado (presa). A presa menor, no serve de habitat e serve como alimento geralmente representando uma refeio. Exemplos de predao ocorrem entre os microrganismos. Muitos fungos capturam nematoides e protozorios, da mesma forma, os protozorios so os grandes predadores de bactrias do solo. Fungos do gnero Arthrobotrys produzem hifas que apresentam em sua extremidade trs clulas em forma de anel. Quando um nematoide penetra no anel, as clulas se inflamam em dcimo de segundo, prendendo-o. Aps, algumas hifas crescem atravs da vtima e digerem o seu contedo. Competio Associao entre organismos que disputam a mesma coisa. Ao nvel ecolgico, ela se torna importante quando o objeto em disputa no existe em quantidade suficiente para suprir as demandas, o que ocasiona prejuzos para ambas as partes. A competio pode ser interespecfica ou intraespecfica. Este tipo de interao negativa a mais comum e a mais importante no ambiente. Ela pode ocorrer por nutrientes (fonte de energia, carbono e nitrognio), espao, oxignio e elementos minerais.

Rizbio
Bactria heterotrfica com capacidade de formar ndulos simbiticos nas razes de plantas, principalmente da famlia leguminosa, fixando nitrognio atmosfrico que utilizado pela planta.

Botulismo
Forma de intoxicao alimentar, causada por uma toxina produzida pela bactria Clostridium botulinum, presente no solo e em alimentos contaminados e mal conservados. A intoxicao se caracteriza por um comprometimento severo do sistema nervoso e, se no tratada a tempo, mata.

competio interespecfica
Competio que ocorre entre indivduos de espcies diferentes.

competio intraespecfica
Competio que ocorre entre indivduos da mesma espcie.

Interaes com microrganismos

109

A competio por nutrientes a mais importante. Ophiobolus graminis, um patgeno que ataca o sistema radicular de gramneas, cresce no solo com boa disponibilidade de nitrognio. Quando nestas condies so realizados procedimentos que diminuam a disponibilidade do nutriente (cultivo de plantas com alta capacidade extratora) o fungo eliminado pela competio com a microbiota do solo. Amensalismo o tipo de interao em que um organismo prejudica o outro sem obter beneficio direto desta ao. Ela ocorre pela produo de substncias que afetam o crescimento do outro. Por exemplo:
Bactericida
Agente que controla bactrias.

a) Sntese de bacteriostticos, bactericidas ou antibiticos; b) Produo de cidos que afetam as espcies sensveis ao pH baixo; c) Produo de substncias inorgnicas tais como NH4+, CN, CO2 , NO2 ; d) Utilizao de oxignio. O caso mais estudado tem sido a produo de antibiticos (substncia que em baixa concentrao inibe o crescimento de outro organismo). A inibio do crescimento de microrganismos mediante produo de antibiticos denominada de antibiose. A produo de antibiticos nos ambientes naturais no tem sido bem comprovada por no se dispor de mtodos adequados para sua determinao e tambm devido a sua possvel rpida decomposio ou inativao qumica e biolgica (adsoro por partculas do solo). H ainda a suposio de que a produo de antibiticos seja devido a um erro metablico e que a quantidade produzida em condies naturais seria baixa. No entanto, esta caracterstica pode dar certa vantagem ao produtor e aos demais organismos que no so sensveis.

Inibio
Reduo do crescimento microbiano em um determinado meio.

6.4 Outras interaes

Existem ainda alguns termos utilizados nas discusses das interaes:

110

Microbiologia

Epfitas So organismos que vivem sobre as plantas (folhas e caules). Alguns utilizam as plantas apenas como suporte, pois so autotrficos (algas e bactrias fotossintetizantes). Outros so saprfitos, crescendo custa de exsudados das clulas e da epiderme. Estes organismos podem prejudicar ou favorecer as plantas. Os prejuzos podem ocorrer quando se tornam numerosos, diminuindo a incidncia de luz, impedindo a fotossntese, ou a respirao. Podem tornar-se simbiontes atacando parasitas como as cochonilhas. Saprfitas, saprgenos e saprbios So termos utilizados para organismos que se nutrem a partir de material orgnico morto. O termo saprfita utilizado quando o material orgnico tem origem vegetal. Saprgenos utilizado da forma mais geral, pois, o material orgnico poderia ser tanto de origem vegetal quanto animal e saprbios para qualquer material orgnico inclusive de origem microbiana.

Resumo
Em ambientes naturais um microrganismo no est isolado. Ele convive com vrios outros organismos com os quais estabelece interaes. Algumas interaes podem trazer benefcios ao seu crescimento e outras podem trazer prejuzo, podendo ocasionar at a morte. O conhecimento do funcionamento destas interaes permite o manuseio dos microrganismos permitindo a soluo de problemas e a obteno de produtos.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1.

c a p t u lo 7

Microbiologia do Solo
Neste captulo ser estudado o ambiente solo, suas caractersticas, a microbiota e sua atividade.

c a p t u lo 7

Microbiologia do Solo

115

7.1 O solo
O solo representa a fina camada que recobre a superfcie da terra. Ele o substrato e o ambiente para muitos organismos, entre eles os microrganismos. Antes de discutir a questo microbiolgica, h a necessidade do conhecimento de algumas caractersticas deste ambiente. O solo ideal apresenta metade do seu volume tomado por espaos. Este espao deve ser ocupado de forma proporcional pela gua e o ar. A parte slida constituda de 45% de matria mineral e 5% de material orgnico, do qual 0,5% correspondem a organismos. Como o ar e gua ocupam o mesmo espao, o predomnio de um acarreta na deficincia do outro. Assim, solos alagados apresentam condies de anaerobiose. Dessa forma, o efeito da umidade e da aerao dos solos sobre a microbiota tem de ser discutido de forma conjunta. O ar do solo apresenta um maior teor de CO2 e um menor teor de O2 em relao ao ar atmosfrico, alm de ser descontnuo. A gua do solo pode apresentar-se na forma lquida, slida ou gasosa. Na forma lquida, ela recobre as partculas do solo, sendo retida com diferentes intensidades. nela que esto dissolvidos os nutrientes necessrios s plantas e microrganismos. A matria mineral constituda de areia, silte e argila que provm ou so produtos do material de origem, que em grande parte

116

Microbiologia

oriundo das rochas utilizadas e alteradas no processo de formao do solo. O material orgnico constitudo dos resduos e organismos presentes no solo. Os resduos apresentam-se em diferentes estgios de decomposio. Desde os recentemente adicionados, com folhas, razes, caules, clulas, tecidos e corpos de organismos mortos, at a matria no seu estado mais avanado de decomposio, o hmus. Entre os organismos, encontram-se desde animais (tatu, roedores) e razes de plantas, at as forma microbianas (algas, protozorios, fungos, bactrias e at vrus). Embora o porcentual de 0,5% parea pequeno, em termos de biomassa, isto representa toneladas de matria viva por hectare. Ao observar os solos a partir de sua superfcie no se tem a ideia de que haja diferenas entre eles. Mas, observando-se um corte vertical no solo, so verificadas diferentes camadas, o perfil do solo. Estas diferentes camadas so denominadas de horizontes. A camada mais superficial, de cor escura (devido presena de matria orgnica) denominada de horizonte A. Em seguida, tem-se o horizonte B, conhecido como horizonte diagnstico, pois permite uma caracterizao do solo sem o efeito da matria orgnica. Por ltimo temos um horizonte C, horizonte de transio entre o solo e a rocha. A espessura de cada camada depende do tipo de solo, assim como as subdivises que podem ocorrer em cada camada ou mesmo a ausncia de camadas. Na medida em que se aprofunda no perfil aumenta o teor de CO2, diminui a quantidade de matria orgnica, o teor oxignio, a presena de razes e, consequentemente, a biota do solo. Depois destas informaes fica mais fcil o entendimento da microbiota do solo.

7.2 Microrganismos do solo

Os principais grupos de microrganismos encontrados no solo so: bactrias, fungos e protozorios. Tambm relatada, em procedimentos de contagem, a presena de actinomicetos, um grupo caracterstico de bactrias. Ecologicamente, estes organismos apresentam indivduos classificados em dois grupos:

Microbiologia do Solo

117

O grupo autctone ou indgena representado pela populao de microrganismos que so pouco afetados pela adio de nutrientes ao solo, vivem custa dos resduos em estgios mais avanados de decomposio. A populao estimulada pela adio de resduos ao solo denominada de zimgena ou fermentativa. medida que o resduo vai sendo decomposto ocorre uma sucesso na populao, que vai sendo substituda por organismos que atuam sobre os produtos de decomposio, resduos ou dos prprios organismos. O nmero de microrganismo presentes no solo da ordem de 10 a 109 por grama de solo. A populao de bactrias a mais numerosa variando de 100 mil a 100 milhes em contagem em placas a 100 milhes a um bilho em contagem direta. Apesar do maior nmero de bactrias, em termos de biomassa o domnio dos fungos com populaes de 20 mil a 1 milho de propgulos por grama de solo. Populaes menores so encontradas nos actinomicetos (100 mil a 1milho), protozorios (10 mil a 100mil) e algas (100 a 50 mil). Trabalho conduzido no Rio Grande do Sul indica que as populaes encontradas no Brasil so semelhantes s de outras partes do mundo (Tabela 7.1). Estas populaes no so fixas, e variam de acordo com fatores ambientais.
6

tabela 7.1- Mdia da contagem em placa da populao de microrganismos do solo. (Nmero de propgulos por grama de solo x 105) Local Santo ngelo Cruz Alta Coxilha Bonita Mdia Bactrias 460 455 365 438 Fungos 1,81 0,73 1,24 1,30 Actinomicetos 59,0 57,0 19,0 50,0

7.3 Efeitos dos fatores ambientais

A populao de microrganismos do solo afetada quantitativamente e qualitativamente por diversos fatores.

118

Microbiologia

7.3.1 Fatores primrios

So aqueles que afetam diretamente a populao. a) Aerao: Em condies de aerao as atividades metablicas so mais intensas devido ao metabolismo oxidativo resultando em populaes mais elevadas. Em condies de anaerobiose h restries na populao de bactrias e principalmente nos fungos. b) Umidade: Todos os organismos necessitam de gua, no entanto um excesso de umidade vai interferir com a aerao do solo. As maiores populaes so encontradas nos teores de 60 a 80% da capacidade de campo. Em baixos teores de umidade predominam as formas esporuladas. c) Temperatura: Cada organismo tem uma temperatura tima de crescimento. As maiores populaes so encontradas em solos com 25 a 30oC. Em determinadas condies, como no acmulo de material orgnico, as temperaturas so mais elevadas atingindo 50 a 60oC, o que favorece a presena de termoflicos. d) pH: As bactrias dominam em ambientes neutros e os fungos em ambientes cidos. No o caso dos fungos preferirem ambientes cidos, que nestas condies a competio com as baterias maior, prevalecendo os primeiros pela sua versatilidade bioqumica e altas taxas de crescimento. e) Matria orgnica: Teores elevados de matria orgnica favorecem a populao, pois ela representa a fonte de nutrientes, principalmente energia e carbono, para os microrganismos. Qualitativamente a matria orgnica tambm afeta a composio da biota. Resduos de fcil decomposio como adubos verdes favorecem a populao de bactrias em detrimento de fungos. J resduos com substncias mais complexas como celulose, hemicelulose e lignina favorecem os fungos. Os actinomicetos so os que surgem por ltimo, pois atuam sobre os compostos orgnicos mais estabilizados do solo. f) Relaes entre as populaes: Ocorrem no solo diversas interaes positivas (simbioses, protocooperao, comensalismo) e negativas (parasitismo, predatismo, amensalismo) que podem favorecer ou inibir determinada populao.

Microbiologia do Solo

119

g) Nutrientes inorgnicos: Os nutrientes inorgnicos podem afetar diretamente ou indiretamente a populao. A presena de nutrientes que favoream o crescimento vegetal contribui indiretamente pelo aporte de nutrientes orgnicos fornecidos pela vegetao. Mas tambm existem efeitos diretos. Se um solo pobre em fsforo, a adio do nutriente favorece a biota do solo. Efeitos negativos tambm podem ser encontrados quando da presena de altas concentraes ou de elementos txicos, como os metais pesados. h) Luz solar: Para os microrganismos fotossintticos, a incidncia de luz essencial para o desenvolvimento. No entanto, a incidncia de luz pode levar ao aquecimento e a desidratao do solo, assim como a presena de luz ultravioleta, prejudicando a microbiota.

7.3.2 Fatores secundrios

So aqueles que representam o somatrio de vrios fatores primrios. a) poca do ano: Durante o ano h variaes na temperatura, umidade e radiao que afetam diretamente e indiretamente a populao de microrganismos pelos seus efeitos no crescimento vegetal e na deposio de resduos orgnicos. As populaes tendem a ser menores no inverno, devido principalmente a baixa temperatura que limita a atividade bioqumica reduzindo o crescimento microbiano. Na primavera h um aumento da populao, motivada pela temperatura amena, boa disponibilidade de gua, excrees radiculares, acmulo de resduos depositados anteriormente e pouco decompostos e populao de predadores reduzida devido s condies do inverno. Com a chegada do vero, e temperaturas elevadas promovem a ocorrncia de dficit hdrico, a populao microbiana reduzida. No outono, quando as condies so semelhantes s da primavera, a populao torna a crescer. b) Tratos culturais: As atividades desenvolvidas no cultivo, tais como arao, gradagem, capinas, calagem, irrigao, adubao, controle sani-

120

Microbiologia

trio, afetam os fatores primrios como a aerao, o pH, os nutrientes, a umidade e a presena de substncias txicas. No inicio da agricultura o homem percebeu que o revolvimento do solo propiciava o desenvolvimento das plantas. Em parte este melhor desenvolvimento era promovido pela mineralizao ocasionada pela aerao do solo. Em pases de clima frio com inverno muito rigoroso, foi instituda na primavera a prtica da arao para o preparo do solo para o plantio. Esta prtica tinha como objetivo despertar a microbiota para realizar a decomposio dos resduos que ficaram acumulados durante o inverno e, assim, disponibilizar os nutrientes para a nova cultura. Com a colonizao, tal prtica foi introduzida no Brasil. No entanto, nas condies de clima do pas, em que a temperatura relativamente elevada, a decomposio alta durante todo ano. Como o aporte de resduos culturais relativamente baixo, h um empobrecimento contnuo do teor de matria orgnica, que vai se refletir na populao microbiana. Isto tem levado a mudana de prticas agrcolas, partindo-se para os sistemas de plantio direto e cultivo mnimo. c) Profundidade: Conforme comentado anteriormente, a populao de microrganismos diminui com a profundidade, devido diminuio do teor de matria orgnica, da presena de razes, do teor de oxignio e aumento do teor de gs carbnico. Alguns organismos podem ser particularmente prejudicados como as algas. Para organismos que produzem esporos como os actinomicetos, a reduo percentual menor. Pois a avaliao por mtodos de contagem em placas permite a avaliao dos esporos, que esto em formas inativas, que crescem no meio de cultura mas no no solo. d) Cobertura vegetal: A cobertura vegetal afeta fatores nutricionais e ambientais. A cobertura vegetal representa uma fonte de nutrientes, pela deposio dos resduos orgnicos na superfcie do solo e pelos exsudados das razes. A umidade e a temperatura so mais estveis, favorecendo o desenvolvimento dos microrganismos. A tabela 7.2 demonstra o efeito de diferentes sistemas de cobertura vegetal sobre a microbiota e sua atividade no solo.

Microbiologia do Solo

121

tabela 7.2 - Efeito de diferentes sistemas de manejo do solo sobre a populao e a atividade microbiana Sistemas de Manejo Convencional Plantio direto Rotao 1 Rotao 2 Pastagem cultivada Campo Nativo Bactrias
5

Actinomicetos (10 propgulos / g de solo)

Fungos

Liberao de CO2 (mg/100g de solo) 9,1 14,9 12,7 10,4 24,9 25,9

372 354 604 453 414 565

48,0 66,8 55,8 47,0 91,6 44,2

1,43 1,85 2,53 2,07 2,33 0,65

7.4 Funes dos microrganismos no solo

Os microrganismos desenvolvem inmeras atividades no solo que representam importantes funes na produtividade e sustentabilidade desse ecossistema. Decomposio da matria orgnica A principal funo dos microrganismos atuarem como intermedirios entre os consumidores e produtores. Todos os resduos que no so aproveitados pelos demais organismos so metabolizados pela microbiota, liberando os compostos primrios necessrios aos produtores. Eles participam ativamente da ciclagem dos nutrientes que ser discutido em captulo a seguir. Formao do Hmus O hmus formado durante o processo de decomposio da matria orgnica, por alterao ou formao de novos compostos que so polimerizados, constituindo a frao da matria orgnica do solo bastante estvel. Estes compostos representam uma fonte de energia e nutrientes para a microbiota e outros organismos, incluindo as plantas. Contribui ainda para importantes caractersticas do solo como a agregao, capacidade de reteno da gua e capacidade de troca de ction e nions.

122

Microbiologia

Disponibilizao de nutrientes As atividades dos microrganismos do solo alteram a disponibilidade de nutrientes para as plantas, afetam o crescimento, a produo e a produtividade das culturas. Mineralizao: Durante o processo de decomposio da matria orgnica so liberados na forma inorgnica de diversos nutrientes. Das protenas, por exemplo, liberado amnia, e de fosfolipdeos fosfatos. Oxi-redues: Diversos elementos como P, K, N, S, Ca, Mg, Cu, Zn, Mn, so essenciais s plantas. Mas, a simples presena do nutriente, no indicativo de que as necessidades das plantas sero atendidas. Estes elementos para serem utilizados pelos vegetais tm que estar em determinadas formas. O fsforo absorvido na forma de fosfato, o nitrognio na forma de nitrato ou amnio e o potssio na forma inica de K+. Elementos como o enxofre e mangans, por exemplo, so utilizados nas formas oxidadas e reduzidas, respectivamente. Se o enxofre for adicionado ao solo na forma elementar (S) ele oxidado por microrganismo como o Thiobacillus thiooxidans a cido sulfrico, quando ento poder ser utilizado na forma de sulfato. S0 + H2O + 1,5 O2 H2SO4 2 H+ + SO42

J o mangans predomina nos solos na forma de MnO2, para se tornar disponvel necessita passar para Mn2+. MnO2 + 4 H+ Mn2+ + 2 H2O

Solubilizao: Diversos elementos com o fsforo predominam nos solos em formas no disponveis para as plantas. Reaes e substncias produzidas por microrganismos podem disponibilizar os elementos. Um dos principais mecanismos de solubilizao de fosfatos a produo de cidos orgnicos. Os cidos orgnicos podem agir de duas maneiras. Pelo efeito cido e pela formao de complexos com o ction acompanhante.

Microbiologia do Solo

123

Ca5OH(PO4)3 + HR

CaR + H2O + 3 PO43

Fixao biolgica de nitrognio: O nitrognio um dos elementos essenciais a constituio de diversos componentes celulares, entre eles as protenas. Ele relativamente abundante na atmosfera. No entanto em sua forma elementar (N2) pouco reativo, no podendo ser utilizado pela maioria dos organismos, exceto alguns procariotos. Estes microrganismos podem fixar o nitrognio utilizando-o para a constituio de suas molculas. Algumas bactrias fixam nitrognio apenas para atender as suas necessidades, no entanto, quando so predadas ou morrem podem suprir este nitrognio para outros organismos. Outras podem formar associaes, entre elas, simbioses, fornecendo a seus parceiros o nitrognio fixado, tornando-os independentes da presena de nitrognio no meio. Maiores informaes sobre estes grupos sero apresentadas no capitulo sobre o ciclo do nitrognio. Micorrizas: Associaes de fungos com razes de plantas a regra e no a exceo no ambiente. A colonizao do solo pelas hifas do fungo aumenta, consideravelmente, o volume de solo explorado, contribuindo na absoro de gua e nutrientes, notadamente aqueles pouco mveis no solo como o fsforo. Imobilizao: A absoro de nutrientes do solo pela microbiota visando produo de seus compostos celulares representa uma perda temporria dos nutrientes do solo que pode comprometer o desenvolvimento vegetal. Isto ocorre normalmente quando h uma grande quantidade de energia disponvel no ambiente (adio de resduos), havendo uma competio pelos nutrientes pouco disponveis no solo. A reteno destes nutrientes temporria, pois a morte dos microrganismos, parasitismo, predatismo e com a decomposio dos resduos, h a reciclagem e os nutrientes so novamente liberados. Aparentemente a imobilizao pode ser prejudicial ao desenvolvimento das plantas, mas por outro lado, em pocas de ausncia de culturas ou vegetao, ou ainda de pouco crescimento vegetal, a atividade importante para a manuteno dos nutrientes no solo, evitando perdas, como por exemplo, lixiviao e desnitrificao.

124

Microbiologia

Agregao e estrutura do solo Um grama de solo (o volume da ponta de um dedo) pode conter de 10 a 100 m de hifas de fungos e at um bilho de bactrias. Imagine que aderncia estes microrganismos podem dar atravs de pelos ou pili, cpsulas (glicoclice) e seus prprios corpos s partculas do solo. Aerao de solos alagados A presena de microrganismos fotoautotrficos, cianobactrias e algas, podem promover a oxigenao de ambientes midos e alagados, favorecendo o metabolismo oxidativo. Equilbrio da populao A populao microbiana do solo resultado do efeito de vrios fatores fsicos, qumicos e biolgicos, como as interaes negativas (competio, parasitismo, predatrio e amensalismo) e positivas (simbiose, protocooperao e comensalismo), de forma que ela est em equilbrio dinmico. Esta condio pode favorecer ou impedir a introduo de microrganismos. No caso de organismos benficos como, por exemplo, fixadores de nitrognio, solubilizadores de fosfatos, fungos micorrzicos e outros promotores de crescimento vegetal para se estabelecerem no solo e produzirem os efeitos desejados precisam suplantar estas barreiras, o que na maioria das vezes no possvel levando ao fracasso as inoculaes. Solos com elevadas populaes de microrganismos podem ser um eficiente mecanismo de proteo as plantas contra organismos patognicos, pois quanto maior a populao, maiores so a chances de eles serem eliminados pelas relaes antagnicas. Por outro lado solos degradados, com baixo teor de matria orgnica, com repetitividade da mesma cultura, favorecem o estabelecimento de patgenos, pois se estes encontram condies de desenvolvimento, a baixa populao de microrganismos vai oferecer pouca resistncia ao seu estabelecimento. Parasitas de vegetais Apenas uma pequena parcela dos microrganismos apresenta patogenicidade s plantas e, mesmo entre estes, a grande maio-

Microbiologia do Solo

125

ria desenvolve sua atividade apenas em determinadas condies, principalmente quando as plantas esto debilitadas. Desta forma, no devemos imaginar estes microrganismos como inimigos, e sim como ferramentas de trabalho. Se uma planta esta debilitada, doente ou com alguma limitao nutricional, significa que ela tambm no um bom alimento, logo devemos encarar o surgimento das doenas como indicador de que alguma coisa no est bem. Pode ser que a variedade no seja adequada para aquelas condies, haja estresse hdrico ou deficincia de nutrientes. A correo destes fatores pode ser a soluo para o problema.

7.5 Rizosfera
A rizosfera compreende a rea do solo sob influncia das razes. Dentro desta rea existe o rizoplano, ou seja, a superfcie de contato entre a raiz e o solo. Na rizosfera, a atividade bioqumica e a populao so vrias vezes superiores ao do solo adjacente. So relatados casos de populaes de at 100 vezes maiores, sendo o mais comum ao redor de vinte e cinco vezes. A populao microbiana no estimulada como um todo, pois o efeito seletivo. Algumas espcies microbianas s so encontradas na rizosfera de determinadas plantas. Em geral, as bactrias, e em particular as Gram negativas so as mais estimuladas. As Gram positivas e as esporuladas geralmente no so estimuladas. O efeito sobre as bactrias se deve a sua maior versatilidade bioqumica e as altas taxas de crescimento. Os fungos, de uma forma geral, tambm no so estimulados, exceto certas espcies como as dos fungos micorrzicos. A populao da rizosfera afetada pela distncia da raiz, profundidade, espcie e idade da planta. Quanto mais prximo das razes maior o efeito rizosfrico, no entanto ele diminui na medida em que a raiz aprofunda-se no perfil do solo. As leguminosas tendem a ter um maior efeito rizosfrico por unidade de raiz, talvez pela riqueza nutricional dos produtos liberados. Por outro lado, as gramneas apresentam um sistema radicular mais avantajado, de forma que se podem considerar os solos de pastagens como solos

126

Microbiologia

rizosfricos. O efeito rizosfrico maior nas plantas em fase de florao, decrescendo a seguir tornando-se praticamente nula na senescncia. As alteraes na populao microbiana resultado das modificaes fsicas, qumicas e nutricionais promovidas pelas razes. A respirao das razes em ambiente aerbio diminui a quantidade de oxignio e aumenta o teor de CO2. Em ambientes alagados (condies de anaerobiose) a presena do sistema radicular de plantas como o arroz promove um teor maior de oxignio na rizosfera. As plantas ao absorverem os nutrientes criam diferentes gradientes nos teores de nutrientes na soluo do solo. H a tendncia de acmulo de ctions como o clcio e o magnsio nas proximidades das razes, enquanto que para o fsforo existe uma depleo. A absoro de determinadas formas de nutrientes podem ocasionar alteraes no pH do solo. As plantas podem absorver nitrognio tanto na forma de nitrato (NO3-) ou amnio (NH4+). Ao absorverem o nitrognio na forma de nitrato, para manterem sua eletronegatividade necessitam excretar um nion, no caso OH-, ocasionando a elevao do pH. Caso absorvam o amnio, excretam H+, diminuindo o pH. As razes representam, ainda, uma fonte de substncias orgnicas que so excretadas ou exsudadas. So disponibilizadas por elas substncias como, por exemplo, acares (glicose, frutose, maltose), aminocidos (valina, serina, glicina), cidos orgnicos (oxlico, mlico, ctrico), cidos nucleicos e enzimas. No s as plantas afetam a microbiota, mas tambm as alteraes promovidas pela microbiota afetam as plantas. Todas as funes que os microrganismos exercem no solo, tambm so realizadas na rizosfera, e com mais intensidade. No entanto, algumas so realadas. De 10 a 50 % da populao de microrganismos apresenta atividade de solubilizao de nutrientes. Embora os microrganismos solubilizadores no ocupem um nicho especfico, a rizosfera pode permitir a seu manejo para favorecimento na nutrio das plantas atravs da inoculao de microrganismos selecionados. So encontrados tambm na rizosfera microrganismos produtores de subs-

Microbiologia do Solo

127

tncias estimulantes ao crescimento vegetal, tais como os produtores de hormnios vegetais que sintetizam o cido indol actico. Microrganismos presentes na rizosfera podem produzir substncias txicas s plantas como cianeto e sulfetos. Tais microrganismos so denominados de deletrios, pois no demonstram normalmente sintomas de doenas. O cultivo continuado de uma nica espcie vegetal pode levar ao que denominado de solo cansado, ou seja, um solo que apresenta condies fsicas e qumicas adequadas ao crescimento vegetal e no entanto a produtividade baixa. A substituio desta populao atravs de manejo de plantas ou pela inoculao de microrganismos que colonizem a rizosfera impedindo o estabelecimento dos deletrios pode resolver o problema. Os microrganismos na rizosfera podem ainda atuar no controle de microrganismos patognicos. Devido intensa populao, o estabelecimento dos patgenos dificultado pela intensa competio, predatismo e amensalismo. A produo de substncias antimicrobianas, alm da proteo in loco podem ser transportadas para as partes areas das plantas amplificando seu efeito.

Resumo
O solo constitudo de material inorgnico e orgnico organizado em partculas apresentando espaos ocupados pela gua e o ar. Os principais grupos de microrganismo presentes so os fungos e as bactrias, atingindo populaes na ordem de 109 UFC (unidades formadoras de colnias) por grama de solo. A populao afetada por fatores ambientais, tais como o pH, aerao, umidade, temperatura, matria orgnica e interaes, que agem de forma isolada ou conjunta. O manuseio destes fatores permite o manejo da populao. As atividades desenvolvidas pela biota do solo representam importantes funes responsveis sustentabilidade do sistema. Ela responsvel pela decomposio da matria orgnica, formao do hmus, disponibilizao de nutrientes e agregao e estruturao do solo. Estas atividades so mais intensas na rizosfera onde a populao bem maior do que as populaes do solo adjacente.

128

Microbiologia

Referncias
CARDOSO, E. J. B. N. et al. Microbiologia do solo. Campinas: Soc. Bras. de Cincia do Solo, 1992. MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. SIQUEIRA, J. O. Biotecnologia do Solo. Fundamentos e perspectivas. Braslia: MEC, 1988.

c a p t u lo 8

Microbiologia da gua
Neste captulo ser estudada a microbiologia da gua, com destaque para os aspectos de sade humana e a biologia e mtodos de anlises dos coliformes.

c a p t u lo 8

Microbiologia da gua

133

8.1 Introduo
A gua um dos elementos mais importantes da natureza e essencial vida. Aproximadamente, 75% da superfcie terrestre so cobertas por gua e a maior parte do peso dos seres vivos composta por gua. Entretanto, apenas 3% da gua do planeta doce e apenas 0,3% do total no est na forma de geleiras e faz parte dos rios e lagos. H uma estimativa de que apenas 0,008% da gua est na forma potvel. Muito pouco, no? Apenas para a gente ver o quanto isso importante, se toda a gua do mundo coubesse dentro de uma garrafa de um litro, a gua potvel seria o equivalente a meia gota. Dessa forma, como a gua um bem renovvel, no ciclo da natureza, de suma importncia que ela seja preservada e tratada para que a vida no seja prejudicada e extinta. Numa cidade, estima-se que a o consumo de gua seja de 40% pelas residncias, 25% pelas indstrias e 15% pelo comrcio Desse montante, a maior parte da gua usada numa casa destinada para higiene em descarga (40%), banho (30%) e lavanderia (15%). Por esta razo, alm do aspecto renovvel citado acima, h a necessidade de que a qualidade da gua que entra numa tubulao seja limpa e no contaminada. Em adio, a gua que sai para os esgotos deve ser tratada para evitar problemas ambientais, inclusive a proliferao de doenas das mais diversas para os seres humanos e animais.

134

Microbiologia

A poluio da gua pode ter vrias origens, como, por exemplo, microrganismos, metais pesados, produtos qumicos industriais, defensivos agrcolas etc. A microbiologia da gua, foco do nosso estudo, ser tratada a seguir. Quando se fala em microbiologia da gua pensa-se em duas diferentes correntes: uma mais ampla, ecolgica, onde so estudadas as relaes dos microrganismos em ambientes aquticos e o aspecto de sade, de preveno e contaminao por microrganismos que podem ser patognicos. No lado ecolgico so abordados os tipos de microrganismos e os fatores ambientais que os afetam: temperatura, nutrientes, salinidade, aerao, pH, presso hidrosttica, luz, turbidez, as relaes entre os prprios microrganismos e as atividades humanas. Nessa rea da biologia so tambm estudados os organismos que so produtores primrios e os consumidores. Claro que esses itens podem tambm ter uma influncia na outra vertente que a da rea da sade.

8.2 Microrganismos e aspectos de sade

Segundo a Organizao Mundial de Sade (OMS), 80% das doenas que assolam os pases em desenvolvimento so causadas pela contaminao da gua. Apenas 30% da populao mundial tem gua tratada e, no Brasil, vrias regies apresentam srios problemas sanitrios, diminuindo a qualidade de vida da populao. Basta irmos s periferias das grandes cidades para que seja constatada a pobreza das pessoas que nelas habitam. Podemos aqui fazer uma rpida viagem ao passado para lembrar quantas pessoas perderam as suas vidas em tais ambientes contaminados e sujeitos s doenas de gastroenterites, uma das mais comuns, entre tantas outras. Na idade mdia, onde se vivia pouco, por questes de condies precrias de higiene, uma grande parcela da populao foi reduzida devido s contaminaes microbianas. Quais microrganismos so, potencialmente, patgenos aos seres humanos e que so provenientes de gua contaminada?

Microbiologia da gua

135

Transmisso da Clera
Entre os anos de 1849 e 1854, houve uma grande epidemia de clera na cidade de Londres, na poca da rainha Vitria, dizimando muitas pessoas. Em 1855, Jonh Snow, um cientista renomado, escreveu um trabalho sobre a transmisso da clera e, a partir da, vrios pases comearam a se preocupar com as formas de propagao da bactria Vibrio cholerae e de outras enfermidades veiculas pela gua (Figuras 8.1 e 8.2). Entre os fatores estudados na preveno de doenas, iniciou-se a ideia de tratamento da gua, com a colocao de cloro em suas estaes sanitrias.
Figura 8.1 Foto de Jonh Snow. (Fonte: <http://londonparticulars.files. wordpress.com/2009/07/john_snow1. jpg>. Acesso em: 20 maro 2010).

Figura 8.2 Microscopia eletrnica de Vibrio cholerae. (Fonte: <http:// www.technoinhome.com/ vspcite/site/wb03/gif/008/ wb0300865009cc4b.gif>. Acesso em: 15 maro 2010).

Em linhas gerais so vrus, bactrias, fungos, algas, protozorios e helmintos que podem causar problemas para a sade. Exemplos de vrus importantes so: adenovrus, enterovrus, de hepatites e os rotavrus que causam diarreia e podem ser adquiridos pelo consumo de ostras e moluscos contaminados, por exemplo. O grupo mais numeroso, em termos de nmero de espcies associadas com gastroenterites o das bactrias. Exemplos de bactrias e respectivas doenas com esse potencial so: Aeromonas hydrophila (diarreia aquosa), Escherichia coli (colite), Legionella spp. (legionelose), Mycobacterium spp (micobacterioses). Salmonella typhi (febre tifoide), Shigella spp. (shigelose) e Vibrio cholerae (clera). No aspecto de produo de toxinas e problemas para a sade so importantes os gneros Anabaena e Mycrocistis. Elas pertencem ao grupo das cianobactrias e apresentam potencial de contaminao para pessoas que consomem os animais que as carregam. Entre os protozorios podemos destacar: Entamoeba hystolitica (amebase), Giardia lamblia (giardase) e Cryptosporidium parvum (criptosporidiose). Nos helmintos temos o Schistosoma spp (esquistossomose) e Ascaris lumbricoides (ascaridase).

136

Microbiologia

8.3 Coliformes
Tendo em vista a vasta quantidade de microrganismos que podem causar doenas aos seres humanos e animais, fica bastante complicado, e voc deve concordar que todas as anlises de gua sejam feitas para cada grupo. Por esta razo, visando simplificao para identificar o problema de gua contaminada, tem-se estudado alguns microrganismos que so chamados de indicadores de poluio da gua. Normalmente, entre vrios indicadores, tambm chamados de bioindicadores, os organismos mais estudados so os que habitam o trato intestinal de seres humanos e de animais de sangue quente. Vale destacar que nas fezes humanas h um nmero elevado, na casa de 1011 bactrias por grama. Isso representa aproximadamente 25% do peso das fezes. Incrvel, no? Mais uma vez podemos ver a importncia do tratamento de gua j que, como j discutido anteriormente, essas bactrias podem contaminar pessoas que tenham contato com elas, quer bebendo ou tomando banho. Veja que interessante: os indicadores de poluio de gua podem ser benficos ou malficos, dependendo do ponto de vista. Benfico no caso de facilitarem o diagnstico de contaminao. Em adio, h algumas espcies que ajudam na regulao da flora intestinal, melhorando o nosso sistema imunolgico e ajudando na sntese das vitaminas K e B. o caso da Escherichia coli, que a espcie mais abundante e mais estudada no mundo. H dois tipos de coliformes: os coliformes totais e os fecais, ou termotolerantes. Os totais so aqueles que habitam as guas e solos do meio ambiente e que podem tambm ser oriundos de fezes. Os fecais ou termotolerantes so originados diretamente de fezes, vindos de esgotos domsticos, basicamente. As caractersticas dos coliformes so: bactrias aerbicas ou anaerbicas facultativas, na forma de bacilos Gram negativos, que fermentam a lactose em temperatura entre 35 e 37 graus, no formam esporos e so negativos para o teste da oxidase. Exemplos de gneros de coliformes totais so: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella. O principal representante dos coliformes fecais ou termotolerantes a Escherichia coli, que fermenta a lactose numa temperatura maior, 44,5 graus.
As principais caractersticas deles so: esto presentes em gua contaminada e ausentes em gua potvel, correlacionam-se com os patgenos, so estveis no meio ambiente e so quantificveis facilmente em laboratrios.

Microbiologia da gua

137

Tcnica de Gram
A tcnica de Gram ou colorao de Gram uma tcnica de colorao de preparaes histolgicas para observao ao microscpio ptico, utilizada para corar diferencialmente microorganismos com base na composio qumica e integridade da sua parede celular. Consoante a cor que adquirem, so classificados em gram positivos (roxo) ou gram negativos (vermelho). Tal mtodo se deve ao mdico dinamarqus Hans Christian Joachim Gram (1853-1938). Geralmente as bactrias gram negativo so mais patognicas, e possuem lipopolissacardeos na sua membrana exterior, que agravam a infeco.

8.4 Mtodos de anlises microbiolgicas de gua

Antes de se fazer a coleta para a anlise microbiolgica, alguns cuidados devem ser observados para a melhor interpretao dos resultados: a) A amostra deve ser representativa da rea. Em outras palavras, no adianta, por exemplo, pegar uma amostra de gua de um ponto isolado de uma praia e dizer que toda a praia foi analisada; b) Se for de praia ou lago, por exemplo, a coleta deve ser feita numa profundidade de, aproximadamente, um metro (simulando uma balneabilidade mdia de pessoas), pegando-se a amostra entre 15 e 30 cm da superfcie; c) A amostra deve ser coletada em recipientes limpos e esterilizados; d) Evitar a contaminao durante a coleta e no transporte; e) A anlise deve ser feita o mais rapidamente possvel, no mximo 24h da coleta, para evitar alteraes no crescimento dos microrganismos; f) Se necessrio, armazenar a amostra em temperaturas menores de 10C; e g) Certificar-se que a gua no clorada. Se for, adicionar uma soluo de 18 mg/litro de tiossulfato de sdio (Na2S2O3) para

138

Microbiologia

neutralizar o cloro que um agente oxidante e que pode matar as bactrias. Os dois mtodos mais comuns para se analisar as bactrias do grupo coliforme so: o dos Tubos Mltiplos ou Nmero Mais Provvel (NMP) e o da Membrana de Filtro (MF). A seguir sero descritas as metodologias bsicas de cada um.

8.4.1 Mtodo dos tubos mltiplos ou nmero mais provvel

Nesse mtodo h trs etapas: teste presuntivo, teste para coliformes totais e teste para coliformes fecais ou termotolerantes. Na primeira fase so empregados baterias de 9 ou 15 tubos de ensaio contendo um caldo lactosado, tambm chamado de caldo lauril triptose. Os tubos recebem alquotas de 10 ml; 1 ml ou 0,1 ml da gua a ser analisada. Dentro dos tubos h pequenos tubinhos de ensaio invertidos, tubos de Durham, que captam as bolhas produzidas quando da fermentao da lactose pelos microrganismos. O teste positivo tem bolhas bem visveis e o negativo no. Entretanto, esse teste apenas preliminar e no pode ser usado como certo para coliformes porque existem outros grupos de microrganismos que tambm fermentam a lactose, como o caso de bactrias do gnero Bacillus e de certos fungos, as leveduras. Em linhas gerais, o positivo um srio candidato a ser coliforme. A incubao do teste feita em estufa bacteriolgica numa temperatura de 35 graus por um perodo de 24 a 48 horas. No segundo teste, a partir dos tubos positivos do primeiro, so feitas as inoculaes para os tubos de ensaio contendo o caldo lactosado com bile verde brilhante a 2%. Os tubinhos de Durham inseridos dentro dos tubos maiores, se positivos, apresentam bolhas, numa temperatura de 35 graus por um perodo de 24 a 48 horas. Nesse caso, so chamados de coliformes totais. A terceira etapa consiste na inoculao de tubos de ensaio com o caldo EC (Escherichia coli), a partir dos positivos do primeiro teste. A incubao na temperatura de 44,5 graus, entre 24 e 48 horas. Os tubinhos de Durham positivos indicam a presena de coliformes fecais ou termotolerantes e so comparados com uma

Microbiologia da gua

139

tabela de Nmero Mais Provvel, que tem o nmero de coliforme por 100 mL de gua. Essa confirmao importante porque um resultado positivo de gua ou de um alimento, por exemplo, mostra que o material teve contato com fezes humanas ou de animais. E isso preocupante para a sade j que outros organismos podem tambm estar presentes e causar as mais variadas doenas como j discutido anteriormente. Para voc ter uma ideia, a gua potvel deve ser isenta de coliformes fecais, segundo resolues do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA), que apresenta os padres de qualidade das guas. Se a gua no for potvel ela pode ser enquadrada ou no em guas prprias para banho, como ocorre em anlises de vrias praias do Brasil, em diversos estados. Vale lembrar que os estados tm legislao prpria e os rgos ambientais locais complementam essas informaes de anlises e de interpretao dos resultados.

8.4.2 Mtodo da membrana de filtro

Este mtodo consiste, basicamente, na filtrao de uma amostra de gua com o auxlio de uma bomba de vcuo. A parte que no passa no filtro retida numa membrana com malha de 0,45m e colocada numa placa de Petri contendo meios de cultura onde as bactrias iro crescer. Para a determinao dos coliformes totais usa-se o meio M-Endo Agar LES, incubando o material em temperatura de 35 graus por 24 horas. Os coliformes termotolerantes crescem em meio gar MFC e incubado a 44,5 graus por 24 horas. A partir desses crescimentos contam-se os nmeros de colnias de bactrias e so feitos os clculos para a quantidade de gua amostrada e analisada. A vantagem do mtodo da membrana de filtro, em relao ao anterior, dos tubos, que muito menos vidraria de laboratrio utilizada. Entretanto, as membranas so caras e no todo tipo de gua que pode ser analisada. guas muito turvas, barrentas, tendem a entupir os poros da membrana de filtro. Nesse caso, melhor fazer as anlises com o mtodo mais trabalhoso, dos tubos.

140

Microbiologia

8.4.3 Outras anlises

Em adio aos mtodos mais usuais discutidos, outras anlises podem ser feitas, dando uma ideia geral da contaminao da gua: contagem de bactrias heterotrficas em placas de Petri, determinao de estreptococos e enterococos, presena ou ausncia de coliformes, bacterifagos e enzimas especficas (beta galactosidase e beta glucoronidase). Recentemente, mtodos moleculares como PCR (polimerase chain reaction) e rvores filogenticas podem dar uma avaliao mais ampla dos microrganismos que habitam nas guas. Vale lembrar que nem toda clula microbiana cresce nos tradicionais meios de cultura. Por outro lado, deve- se ter cuidado na interpretao desses resultados para se chegar concluso de quais, de fato, so os microrganismos que, naquele dado momento, esto em atividade e contaminando a gua. Outro aspecto a ser observado e salientado a praticidade e o custo das anlises envolvidas.

Resumo
A gua um dos mais importantes elementos da vida. Pelo seu carter renovvel e de baixa quantidade em termos de potabilidade, a microbiologia da mesma essencial para a sua qualidade. De um lado, os microrganismos podem ser estudados ecologicamente falando de certos microrganismos que podem contaminar a gua e causar doenas para os seres vivos, incluindo o homem. Vrios fatores afetam os microrganismos como: temperatura, nutrientes, luminosidade, pH, potencial redox, presso hidrosttica e interao com outros organismos. Na anlise microbiolgica da gua so estudados os organismos indicadores de poluio: os coliformes totais e os fecais (termotolerantes). Os mtodos mais empregados so: o de tubos mltiplos ou do nmero mais provvel (NMP) e o da membrana de filtro.

Microbiologia da gua

141

Referncias
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Microbiological examination of water. In: Standard methods for the examination of water and wastewater. 20 ed. Washington: APHA, 1998. CETESB. Anlises microbiolgicas da gua. Apostila de curso. So Paulo. Coordenao tcnica: HACHID, E. M. CETESB, 2005. 127p. HURST, C. J.; KNUDSEN, G. H.; McINENEY, M. J.; STETZENBACH, L. D.; WALTER, M. J. Manual of environmental microbiology. Washington: American Society of Microbiology, 1997. 894p. MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. PRESCOTT, L. M.; HARLEY, J. P.; KLEIN, D. A. Microbiology. 2. ed. Dubuque: W. C. Brown, 1993. 912p. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. 827p. <http://londonparticulars.files.wordpress.com/2009/07/john _snow1.jpg>. Acesso em: 20 maro 2010. <http://www.technoinhome.com/vspcite/site/wb03/gif/008/ wb0300865009cc4b.gif>. Acesso em: 15 maro 2010.

c a p t u lo 9

Microbiologia do Ar
Neste captulo sero abordados as fontes de contaminao, os fatores que afetam a microbiota, os mtodos de avaliao, o controle e a utilidade da microbiologia do ar.

c a p t u lo 9

Microbiologia do Ar

145

9.1 Introduo
O ar, diferentemente dos outros ambientes como o solo e a gua, no apresenta uma concentrao de nutrientes capaz de suprir o crescimento de microrganismos, portanto ele no pode ser considerado como um meio de cultura. Desta forma, surgem perguntas: Existem microrganismos no ar? Como provar que existem microrganismos no ar? Basta recordar os procedimentos adotados nos laboratrios de microbiologia para evitar a contaminao dos trabalhos executados. Se o ar no um meio de cultura para os microrganismos o que eles esto fazendo l? O ar um dos meios de disperso de muitos microrganismos. Eles podem permanecer no ar por tempo varivel, de segundos, horas, dias, semanas, meses ou anos. Assim como podem percorrer distncias variveis de milmetros a quilmetros ou milhares de quilmetros. Se os microrganismos no se multiplicam no ar, de onde eles surgem?

9.2 Fontes de contaminao

Se os microrganismos no se multiplicam no ar, sua origem tem de ser de outros ambientes. As principais fontes de contaminao so a poeira, acmulo de cadveres, depsitos de lixo e aerossis. Quando se fala em poeira a primeira ideia que se tem a de um veculo se deslocando em alta velocidade em uma estrada no

146

Microbiologia

pavimentada. Sim, realmente esta uma grande fonte de contaminao. Mas existem outras relacionadas como a poeira gerada pelo setor agrcola durante o processo de produo, como a arao, gradagem, colheita mecanizada, principalmente na trilhagem. Mas a maior contribuio provavelmente a da chamada poeira invisvel, ou seja, aquela que produzida pelas correntes areas sobre as superfcies do solo, de plantas e animais. Grandes centros urbanos, com sua alta populao, suas indstrias, trfego de veculos, edifcios altos, ruas estreitas, tambm colaboram para a contaminao. A concentrao excessiva de animais e plantas de uma mesma espcie nas criaes e plantaes, assim como a presena de cadveres e seres moribundos contribui para a contaminao do ar. Imagine, em tempos passados, onde as guerras eram realizadas com espadas, flechas, lanas, paus e pedras. Um indivduo ferido nestes combates, muitas vezes no vinha a falecer logo em seguida, ficava moribundo talvez durante dias. Estes indivduos, juntamente com os corpos de outros combatentes representavam um excelente meio de cultura para a proliferao de microrganismos, muitos deles inclusive patognicos. Nestas condies, muitas epidemias poderiam ser disseminadas por amplas regies. Situaes semelhantes ocorrem nas catstrofes, terremotos e inundaes. A presena de grandes quantidades de matria orgnica em decomposio como as pilhas de compostagem e os depsitos de lixo, principalmente se expostos ao cu aberto, representam uma grande fonte de contaminao para o ar. Muitos dos microrganismos presentes no ar podem ter suas origens a partir de ambientes aquticos e atravs dos aerossis. Pequenas gotculas podem ser lanadas a atmosfera pela ao dos ventos, pelo choque de ondas nas praias e rochedos, pela nvoa produzida pelas quedas dgua e pelo borbulhar de gases produzidos dentro dos corpos aquticos, como, por exemplo, na produo de oxignio durante a fotossntese. Estas gotculas podem sofrer desidratao ficando apenas o ncleo constitudo dos materiais orgnicos e inorgnicos e os prprios microrganismos.

Microbiologia do Ar

147

9.3 Fatores que afetam a populao

Uma vez presentes no ar os microrganismos so afetados por uma srie de fatores. A umidade constitui-se em um fator que tanto pode contribuir para o aumento como para a diminuio da populao. A chuva lava o ar depositando os microrganismos sobre as superfcies do solo, plantas e guas, diminuindo a populao do ar. Por outro lado, os microrganismos depositados nas superfcies, com a disponibilidade de gua, podem multiplicar-se e novamente ganharem o ar, aumentando a populao. A populao microbiana do ar aumenta com a elevao da temperatura ambiental. Nas regies frias, dependendo da temperatura, os microrganismos ao serem depositados sobre as superfcies, podem permanecer latentes ou terem baixas taxas metablicas, tornando a reproduo muito lenta, dificultando a reposio para o ar.
Desinfeco
Processo de eliminao de patgenos, mas nem todos os microrganismos, de um objeto ou superfcie so eliminados. Clulas com esporos podem resistir.

A altitude tambm afeta a populao. Nas regies mais altas, a incidncia de luz ultravioleta maior do que ao nvel do mar, propiciando assim uma maior desinfeco do ar. A populao do ar varia durante o dia e as pocas do ano. Estas so afetadas pela gerao de microrganismos pelas fontes e atividades desenvolvidas. Assim, as populaes nos ambientes naturais tendem a serem maiores no outono e primavera e nos ambientes urbanos nos horrios de pique. Imagine como deve ser a populao de microrganismos em um terminal urbano, as 5, 8, 13, 18 e s 24 horas.

9.4 Mtodos de avaliao

A populao de microrganismos do ar pode ser avaliada por diferentes procedimentos: sedimentao, impacto e filtrao. O procedimento mais simples conhecido como mtodo da sedimentao. Neste procedimento, placas contendo meio de cultura adequado (p. ex., gar nutriente para bactrias e gar dextrose para fungos) so colocadas com o meio de cultura em exposio nos

148

Microbiologia

ambientes a serem avaliados por determinado perodo de tempo (p. ex. 5 minutos para bactrias e 10 minutos para os fungos). Em seguida, as placas so colocadas para incubar e procede-se a contagem das colnias. Este procedimento apresenta as desvantagens de no se saber o volume de ar avaliado porque se contam apenas partculas e no os indivduos; e apenas as partculas maiores so coletadas. Apesar desses problemas, o mtodo bastante utilizado por ser de fcil execuo e por permitir a comparao de ambientes semelhantes. Outros procedimentos fazem uso do impacto. O impacto pode ser sobre o meio slido ou sobre meio lquido. No impacto em meio slido usa-se uma placa contendo meio de cultura, sobre a qual colocada uma tampa com fendas ou crivos acoplada a uma bomba de vcuo. O ar succionado para o interior da placa, chocando-se com a superfcie. Este procedimento permite o conhecimento do volume de ar avaliado, no entanto, os demais problemas do mtodo anterior permanecem. No impacto em meio lquido, o ar borbulhado no interior de um lquido, em seguida o material submetido agitao para dissoluo das partculas. Alquotas da suspenso so colocadas em meio de cultura e aps a incubao realizada a contagem. Este mtodo permite conhecer o volume de ar analisado, captar todas as partculas e contar os indivduos. Pode-se ainda filtrar o ar em uma membrana e coloc-la em contato com o meio de cultura ou em um tubo contendo algodo, que posteriormente poder ser lavado para retirar as partculas e a suspenso obtida ser submetida a contagem.

9.5 Controle da populao

A presena de microrganismo no ar de determinados ambientes indesejvel ou no mnimo necessita ser controlada. Entre estes podemos citar as salas de cirurgia, cmaras de inoculao, sala de preparo de alimento. Para tanto, podem-se fazer uso de filtros; radiao com luz ultravioleta, desinfetantes gasosos ou em aerossis.

Desinfetante
Agente antimicrobiano utilizado em materiais inanimados.

Microbiologia do Ar

149

9.6 Utilidade
Embora exista uma preocupao constante na rea da sade com os microrganismos patognicos que podem ser disseminados atravs do ar, a disperso dos microrganismos benficos de suma importncia. Na disperso das espcies vegetais existe a necessidade da colonizao de suas superfcies com espcies comensais e simbinticas, como no caso das micorrizas.

Resumo
Os microrganismos no se proliferam no ar. O ar apenas o meio de disperso. Portanto, eles tm origem a partir do solo, da gua e de outros organismos. Uma vez presentes no ar, os microrganismos so afetados pela umidade, temperatura e radiao. A avaliao da populao de microrganismos existentes no ar utiliza procedimentos de captura baseados na sedimentao, impacto ou filtrao para cultivo em meios adequados.

Referncias
PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1.

c a p t u lo 10

Ciclo dos elementos qumicos

Neste captulo sero abordados os ciclos do carbono, nitrognio, enxofre, fsforo e potssio, tratando-se especificamente dos microrganismos envolvidos, das condies e importncia na vida do planeta.

c a p t u lo 10

Ciclo dos elementos qumicos

153

10.1 Introduo
A terra foi formada com uma determinada quantidade de elementos e, exceto por pequenas perdas e ganhos, estas quantidades permaneceram inalteradas. Se estes elementos se acumularem em determinadas formas, as que so necessrias aos organismos podem se tornar escassas ou inexistentes, diminuindo o desenvolvimento dos organismos ou determinando a extino. A ciclagem dos nutrientes , portanto, essencial a vida no planeta. Neste contexto, os microrganismos desempenham papel importante e, muitas vezes, so a nica alternativa. A gua e o solo, como substratos de desenvolvimento de inmeras formas vivas, so os centros da maioria destas atividades. Atualmente, enfrentamos vrios problemas ambientais que, na sua maioria, esto relacionados ciclagem de nutrientes. Um maior conhecimento destes ciclos permitir a escolha de procedimentos que minimizem ou eliminem estes problemas.

10.2 Ciclo do Carbono

Os organismos autotrficos (produtores) absorvem da atmosfera o CO2 e por processos oxidativos (quimioautotrficos) ou fotossintticos (fotoautotrficos) fixam o C em suas molculas orgnicas (Figura 10.1). O carbono orgnico circula entre os seres sendo transferido para os organismos consumidores. Com a mor-

154

Microbiologia

te de produtores e consumidores, assim como os produtos de suas excrees, so depositados no ambiente, constituindo a matria orgnica. Os principais constituintes dos vegetais so a celulose, hemicelulose e a lignina. H ainda pores menores de amido, pectina e inulina. Mais raros, so as gorduras, protenas e ceras. Nos animais os principais constituintes so as protenas e gorduras, e nos insetos a quitina. Alguns destes constituintes tambm fazem parte das estruturas de fungos, bactrias, algas, protozorios e vrus. Esto ainda presentes em todos os organismos os cidos nucleicos (DNA e RNA).

90%

CO2 Fixao

10% Respirao

Respirao 2/3 Produtores 1/3 Assimilao Matria orgnica morta Consumidores

Microrganismos

Figura 10.1 Ciclo do Carbono.

A matria orgnica depositada no solo a fonte de energia e nutrientes para uma gama de organismos, entre eles os microrganismos. Assim, a matria orgnica metabolizada, dando origem a novo protoplasma microbiano, a compostos intermedirios e a liberao de CO2. Atravs de ciclos sucessivos, todo o carbono orgnico liberado para a atmosfera na forma de CO2, completando o ciclo. Do carbono metabolizado cerca de 1/3 assimilado pelos microrganismos para constituir o seu protoplasma. Durante o processo de decomposio da matria orgnica, h a formao no solo de substncias orgnicas denominadas genericamente de hmus.

Podemos entender o hmus como a matria orgnica bastante estvel no solo que fruto no s da decomposio, mas tambm de ressntese, pela polimerizao de compostos produzidos durante a decomposio.

Ciclo dos elementos qumicos

155

Decomposio dos compostos adicionados ao solo

Alm da presena de microrganismos, a decomposio afetada pelas condies fsicas, qumicas e nutricionais. Entre estes, destacam-se os seguintes fatores: a temperatura, a aerao, a umidade, o pH e os teores de nitrognio e fsforo. Observa-se que estes fatores so os mesmos que afetam a populao de microrganismos. Temperatura de 25 a 30C, teor de umidade de 60 a 80% da capacidade campo, pH neutro e baixas relaes C:N e C:P no resduo, favorecem a decomposio. a) Decomposio da Celulose A celulose o principal constituinte vegetal. formada de uma cadeia de glicose (ligaes 1,4). Devido ao seu tamanho, no pode ser transportada para dentro das clulas. H a necessidade inicial de que seja fragmentada em unidades de glicose para ser absorvida. Esta atividade realizada por enzimas hidrolticas, denominadas de celulases. Os principais microrganismos celulolticos so os fungos, principalmente em condies de aerobiose. Em condies de anaerobiose a atividade fica restrita a algumas bactrias e o processo de decomposio lento. A presena de outros compostos orgnicos de fcil decomposio favorece a decomposio da celulose, pois, enquanto os microrganismos se multiplicam so adaptados a decomposio da celulose. b) Decomposio da hemicelulose A hemicelulose um polmero de heterossacardeos e semelhana da celulose, necessita ser fragmentada. Esta atividade realizada por enzimas denominadas hemicelulases que esto presentes na microbiota. c) Decomposio da Lignina A lignina um polmero complexo de difcil decomposio e cuja estrutura se assemelha bastante a do hmus. A decomposio realizada por enzimas denominadas de lignases produzidas principalmente por fungos.

capacidade campo
Quantidade de gua retida pelo solo 24h aps sua saturao.

156

Microbiologia

d) Decomposio do Amido O amido tambm um polmero de glicose, mas diferentemente da celulose as ligaes so 1,4. As quebras nas unidades de amido so realizadas por enzimas denominadas de amilases. Grande parcela da microbiota tem a capacidade de degradar o amido, de 3 a 90% dos isolados de bactrias e a quase totalidade dos fungos (exceto as leveduras). e) Decomposio da pectina A pectina uma substncia de cimento intercelular sendo um polmero complexo constitudo de cidos poligalacturnicos. A quebra em unidades realizada pelas pectinases. f) Decomposio da quitina A quitina a substncia do exoesqueleto dos insetos e da parede de fungos. um polmero de N-acetil-glicosamina. Devido a presena de nitrognio (baixa relao C:N) uma substncia facilmente decomposta no solo, particularmente pelos actinomicetos. A decomposio de substncias orgnicas nitrogenadas (protenas e cidos nucleicos) ser melhor compreendida quando discutida no ciclo do nitrognio.

10.3 Ciclo do Nitrognio

Apesar da imensa reserva de nitrognio existente no ar (78 %), apenas uma parcela muito pequena encontra-se no solo em formas que possam ser utilizadas pelos organismos. Amnia e nitrato representam as formas utilizadas pelas plantas. O nitrognio atmosfrico torna-se disponvel aos organismos (microrganismos e plantas) atravs da fixao, que pode ser qumica, industrial ou biolgica. As perdas de nitrognio do sistema-solo podem ocorrer por lixiviao, volatilizao da amnia e desnitrificao. Dentro do sistema, o nitrognio pode ser transferido entre os organismos (animais alimentando-se de plantas, animais alimentando-se de animais, parasitas e predadores nutrindo-se de plantas, animais e outros microrganismos e decompositores metabolizando os resduos) ou passa por fases ou etapas como: mineralizao, imobilizao, nitrificao e desnitrificao (Figura 10.2).

Ciclo dos elementos qumicos

157

N2

Biolgica Qumica Industrial

Fixao Fi Fixao

NH3 Matria Orgnica Microrganismo Desnitricao Absoro Imobilizao NO 3

Mineralizao Volatilizao

NO 2

NH 4

Nitricao Lixiviao

Figura 10.2 Ciclo do Nitrognio.

10.3.1 Mineralizao
A mineralizao consiste na transformao do nitrognio orgnico contido em protenas, cidos nucleicos e uria em nitrognio inorgnico, mais precisamente em amnio. As protenas so inicialmente hidrolisadas por proteases em peptonas, peptdeos e finalmente a aminocidos. Os ltimos so utilizados pelos microrganismos ou ento so desaminados liberando o amnio. A biota responsvel pela mineralizao do nitrognio abundante e heterognea. Todos os microrganismos so capazes de metabolizar alguma forma de nitrognio orgnico. Assim, mesmo nas condies mais inadequadas para o crescimento de plantas e microrganismos (extremos de pH e condies de anaerobiose) a atividade ocorre. Uma vez no solo o amnio pode ser perdido para

158

Microbiologia

atmosfera por volatilizao, ser nitrificado, absorvido pelas plantas ou imobilizado por microrganismos. A volatilizao ocorre pela transformao do amnio amnia, pela combinao do amnio com oxidrila (OH), produzindo amnia e gua. Esta reao favorecida em condies de alcalinidade. NH4+ + OH NH3 + H2O

10.3.2 Nitrificao
Consiste na transformao do amnio em nitrato. Esta atividade realizada por microrganismos quimiolitotrficos aerbios. A reao promove a energia necessria para o metabolismo destes microrganismos. Na primeira etapa, realizada por bactrias do gnero Nitrosomonas, o amnio oxidado a nitrito (NO2). NH4+ + 1,5 O2 NO2 + 2 H+ + H2O

Em seguida o nitrito oxidado a nitrato (NO3) pelas bactrias do gnero Nitrobacter. NO2 + 0,5 O2 NO3

Embora o nitrito seja txico s plantas e outros organismos no h acmulo no solo porque o Nitrobacter mais rpido. Diversos fatores afetam a nitrificao. Condies de acidez e temperaturas baixas restringem a atividade dos microrganismos. A presena de germicidas tambm afeta a atividade, o que s vezes pode ser utilizado como mecanismo para evitar perdas de nitrognio no solo. Mas o fator mais importante a aerao. Sem a presena de oxignio a atividade no ocorre. Uma vez no solo, o nitrato pode ser absorvido pelas plantas, imobilizado pelos microrganismos, desnitrificado ou lixiviado.

Ciclo dos elementos qumicos

159

Eutrofizao
Aumento nos teores de nutrientes, notadamente N e P provocam crescimento excessivo de organismos autotrficos (cianobactrias, algas e vegetais). Quando da decomposio desses indivduos h o consumo de oxignio tornando o ambiente anaerbio provocando a morte da fauna especialmente dos peixes.

Como as partculas do solo apresentam cargas negativas, o nitrato permanece na soluo do solo, ao contrrio do amnio que atrado pelas cargas negativas. Assim sendo, qualquer excesso de gua no solo, carrega o nitrognio (lixivia). Caso o nitrognio permanea nesta forma, ele vai surgir nas fontes, lagos e lagoas podendo ocasionar a eutrofizao destes ambientes.

10.3.3 Desnitrificao
Consiste na transformao do nitrato a nitrognio elementar que retorna a atmosfera fechando o ciclo. 2 NO3 + C6H12O6 6 CO2 + 6 H2O + N2

Esta atividade realizada por bactrias anaerbias ou facultativas que utilizam o nitrato como fonte receptora de eltrons na respirao anaerbia. Isto representa uma perda de nitrognio para os organismos. Ambientes com suprimentos de compostos orgnicos e m drenagem (condio de anaerobiose) so propcios a esta atividade. Desta forma, o uso de adubos ntricos em sistemas de produo agrcola, como em lavouras de arroz irrigado, contra indicado, pois as plantas no tm condies de competir com a microbiota pelo nitrato, resultando em baixo aproveitamento do adubo.

10.3.4 Imobilizao
Consiste na absoro do nitrato ou amnio pelos microrganismos para constituio de seu protoplasma. Isto ocorre quando adicionado ao solo um substrato orgnico pobre em nitrognio. Os microrganismos ao metabolizarem o composto incorporam carbono as suas estruturas. Algumas molculas incorporadas contm nitrognio como, por exemplo, os aminocidos. Se o resduo decomposto apresenta pouco ou nenhum nitrognio os microrganismos vo competir com as plantas pelo nitrognio disponvel no solo. A relao de carbono e nitrognio nos microrganismos est em torno de 10:1 (relao C:N = 10:1), assim, para cada dez molculas de carbono incorporada, h a necessidade da incorporao

160

Microbiologia

de 1 molcula de nitrognio. Supondo que seja incorporado ao solo um resduo com uma relao C:N de 90:1, que este resduo possa ser prontamente metabolizado e que a taxa de assimilao de carbono seja de 1/3 do metabolizado, o que vai ocorrer? Se o resduo prontamente metabolizado, 30 molculas de carbono podero ser incorporadas ao protoplasma bacteriano. Mas para isto ter de ser incorporado 3 molculas de nitrognio. No entanto, o resduo apresenta somente uma e, os microrganismos, tero de retirar do ambiente (solo) as outras duas molculas (imobilizao). Podem ocorrer situaes em que no h nitrognio no meio. Nesta condio, a decomposio do resduo ser lenta, pois o nitrognio dever circular entre os microrganismos e atravs de ciclos contnuos haver a liberao de carbono. Neste caso, s poderiam ser metabolizadas 30 molculas de carbono, sendo 10 incorporadas e 20 liberadas como CO2. Neste ciclo a relao C:N seria reduzida para 70:1. Supondo que uma parcela equivalente de carbono incorporado aos microrganismos fosse metabolizada (aps morte ou predao), novamente o ciclo se repetiria e mais 20 molculas de carbono seriam liberadas reduzindo a relao C:N para 50:1. Um novo ciclo ocorre e a relao ser de 30:1 e em seguida 10:1. Nesta ltima condio, apenas 3,3 molculas de carbono sero incorporadas, necessitando de 0,33 molculas de nitrognio, havendo uma sobra de 0,67 molculas de nitrognio. Nesta fase j esta sobrando nitrognio, ele liberado para o solo (ambiente), portanto est ocorrendo mineralizao. Est claro que no ambiente a ciclagem do nitrognio continua, no ocorrendo da forma como foi demostrada, mas ela uma maneira prtica de entender-se o processo e demonstrar que resduo com relaes C:N superiores a 30:1 podem ocasionar a imobilizao trazendo problemas para os vegetais, ao passo que relaes inferiores a 30:1 favorecem a mineralizao, disponibilizando amnio para o meio. Isto tambm demonstra que no tratamento de resduos (lixo, esgoto ou outro composto orgnico) a adequao da relao C:N pela adio de fontes de nitrognio prontamente utilizveis (adubos) pode em muito favorecer o processo, diminuindo o tempo de reteno.

Ciclo dos elementos qumicos

161

10.3.5 Fixao de nitrognio

O nitrognio gasoso (N2) pode combinar-se com o oxignio e hidrognio formando compostos que so utilizados pelos organismos. Na fixao qumica as reaes ocorrem pela energia fornecida por descargas eltricas (relmpagos) e os compostos so depositados nos ambientes atravs das precipitaes. A fixao industrial exige alta demanda de energia das mais variadas fontes (hidrulica, carvo, petrleo) para obteno de temperatura e presso elevadas para romper a tripla ligao e obteno dos compostos nitrogenados. Assim, os fertilizantes so caros e seu valor fica atrelado demanda mundial de energia com flutuaes abruptas em curtos perodos. A fixao biolgica realizada por microrganismos procariticos (bactrias), pois so os nicos que possuem a enzima nitrogenase, capaz de utilizar o nitrognio atmosfrico (N2), produzindo aminas que sero incorporadas aos cidos orgnicos dando origem aos aminocidos. Utilizam a energia contida em compostos orgnicos em decomposio, ou de produtos da fotossntese quando em associao com plantas. Assim, vlido afirmar, que para as planta e animais, incluindo os humanos, a protena que hoje ostentam, j foi um dia protena bacteriana. Desta forma, a exuberncia de viva no planeta passa por este processo. A fixao biolgica constitui a forma mais barata, natural e sustentvel de suprimento de nitrognio para o ambiente e culturas. Existem vrios grupos de microrganismos capazes de realizar a fixao. O conhecimento destes sistemas de suma importncia ecolgica e econmica na produo e produtividade dos sistemas biolgicos. A fixao pode ocorrer de forma assimbitica, quando realizada por microrganismos de vida livre como as bactrias dos gneros Bacillus, Clostridium, Azotobacter, Beijerinckia e cianobactrias. Bacillus, Clostridium, Azotobacter e Beijerinckia que so organismos saprgenos habitantes do solo. As cianobactrias, como as dos gneros Anabaena e Nostoc so organismos fotoautotrficos presentes na gua e solos midos. As quantidades fixadas so para atender suas demandas metablicas. Isto no quer dizer que no

162

Microbiologia

contribuam para outros organismos. Com a sua morte ou predao o nitrognio fixado circula entre os organismos e pode ser mineralizado e disponibilizado para as plantas. Este tipo de fixao ficou relegada a um segundo plano e pouco se acreditava na sua contribuio no suprimento de N para o ambiente. Isto ocorreu em parte devido a pouca pesquisa existente nos pases de clima tropical e subtropical. A maioria das pesquisas nesta rea foi inicialmente realizada em pases de clima temperado e frio, onde foi dado mais nfase a sistemas de fixao simbiticos, pois as condies de clima limitariam a fixao assimbitica. Com o avano da pesquisa em pases de clima mais quente, percebeu-se a importncia deste sistema, levando-se em conta que as quantidades fixadas variam de 100 a 700 kg de N/ha/ano. As cianobactrias tm despertado a ateno para uso em ambientes alagados como as lavouras de arroz irrigado. No entanto, a suscetibilidade destes organismos a metais como, por exemplo, cobre e zinco, utilizados nos defensivos agrcolas, tem limitado a sua utilizao. Diversas bactrias fixadoras podem estabelecer associaes com diferentes graus de integrao com outros organismos. As cianobactrias, alm de fixarem em vida livre, podem realizar simbioses com plantas. Nostoc coloniza razes modificadas (coroloides) de plantas da famlia Cycadaceae e glndulas localizadas no caule de plantas do gnero Gunnera. Anabaena azollae coloniza a cavidade da folha de uma planta aqutica (Pteridfita) conhecida como azola. Devido s altas taxas de crescimento e ao nitrognio fixado esta associao tem despertado o interesse na utilizao em cultivos em solos alagados como na cultura do arroz, alm da sua utilizao na alimentao de peixes e animais domsticos. Fixadores de nitrognio podem ser estimulados na rizosfera de plantas constituindo associaes frouxas ou especficas como a do Azotobacter paspali com Paspalum notatum. Os Azospirillum spp. tm sido isolados da rizosfera e de razes esterilizadas externamente de gramneas (forrageiras, milho, sorgo, trigo e arroz) e Herbaspirillum seropedicae e Acetobacter diazotrophicus de cana de acar.

Ciclo dos elementos qumicos

163

A fixao biolgica em gramneas foi descoberta por uma brasileira a Dra Johanna Dbereiner. Ao observar os jardins do seu local de trabalho verificou que a grama era constantemente cortada e removida e o gramado permanecia exuberante sem nunca ter recebido qualquer forma de adubao. De onde estava vindo o nitrognio para aquele crescimento? Resolveu, ento, submeter s razes das gramneas tcnica de reduo de acetileno, detectando a fixao de nitrognio. O isolamento, a seleo e a produo de inoculantes contendo estes microrganismos em cultivos de gramneas podem tornar-se tcnicas muito importantes. Considerandose a rea de cultivo de cereais no mundo, qualquer ganho na fixao de nitrognio em gramneas pode gerar um grande impacto econmico e ecolgico. A simbiose com formao de ndulos caracterstica da associao entre rizbio e leguminosas (Figura 10.3) ou Parasponia, mas tambm ocorre com espcies vegetais como a Casuarina e Alnus com bactrias do gnero Franquia, uma actinomicetales. O termo rizbio refere-se bactria Gram negativa que participa da associao. No incio todas as bactrias que induziam a formao de ndulos em leguminosas foram includas no gnero Rhizobium. Assim, R. phaseoli nodulava com feijoeiro, R. japonicum com soja, R. leguminosarum com ervilha. Com um maior conhecimento de fisiologia e mais tarde com o sequenciamento gentico verificou-se que haviam grandes diferenas entre estas espcies e o gnero foi dividido. Bactrias que nodulam com feijoeiro e ervilha, por exemplo, so R. leguminosarum com biovariedades phaseoli e viceae. As que nodulam com soja Bradyrhizobium japonicum e as que produzem ndulos no caule de Sesbania, Azorhizobium caulinodans. Pode-se perceber que existe uma especificidade bastante definida entre o microssimbionte e as plantas. Podem existir casos em que um isolado de uma espcie de rizbio nodule com uma determinada variedade e no nodule com outra variedade da mesma espcie vegetal. No entanto, algumas espcies de rizbio so bastante promscuas, ou seja, nodulam com vrias espcies. Estes so principalmente rizbios de origem tropical como os do grupo caupi (Bradyrhizobium spp.) que nodulam com siratro, amendoim e Leucena.

164

Microbiologia

Pelo radicular

Parede do pelo radicular Lectina Rizbio

Citoplasma do pelo radicular Reconhecimento e xao Antgenos com reatividade cruzada

B
Periciclo Xilema Cordo de infeco Endoderme

Pelo absorvente Floema Invaso. Penetrao do rizbio no pelo radicular provocando encurvamento e multiplicao dentro de um cordo infeccioso

Crtex

Epiderme

Presena de ndulos no sitema radicular

Figura 10.3 Simbiose entre rizbio e leguminosas. (Modificado de MADIGAN, 1996, p. 595 e SIQUEIRA; FRANCO, 1988, p. 197).

Ciclo dos elementos qumicos

165

As quantidades fixadas variam com a espcie, isolado (estirpe), planta, variedade de planta e condies de solo. No cultivo de soja a quantidade fixada varia de 60 a 180, no feijoeiro de 3 a 110 e em Leucena at 600 kg de N h-1ano-1 ou ciclo-1. Portanto estes organismos apresentam potencial biotecnolgico para serem utilizados como inoculantes suprindo as necessidades de nitrognio da planta evitando-se o uso de fertilizantes industriais. O suprimento pode ser direto na cultura ou indiretamente atravs do cultivo de uma planta como a Leucena que pode ser incorporada ao solo e ira disponibilizar pela mineralizao o nitrognio para outras culturas, num processo conhecido com adubao verde. O processo de nodulao inicia-se pela atrao (quimotaxia) e estmulo rizosfrico da planta sobre os rizbios existentes no solo (naturais ou introduzidos pela inoculao das sementes). O microrganismo se liga ao sistema radicular, particularmente nos pelos radiculares, atravs de um processo de reconhecimento promovido pelas estruturas externas das plantas e do microssimbionte. Ocorre ento a multiplicao do microrganismo e a excreo de hormnios que levam ao dobramento de pelos radiculares, como que englobando os microrganismos. Em seguida, h a formao de um cordo infeccioso que penetra no tecido radicular depositando os rizbios no interior das clulas vegetais. As clulas vegetais so estimuladas a aumentarem de tamanho e nmero formando o ndulo. No interior do ndulo as bactrias esto dispostas dentro de envelopes em forma alterada, lembrado letras como x, y, denominadas de bacteroides. A fixao ocorre pela permeabilizao do nitrognio, atravs do solo e do ndulo. Como o rizbio aerbio e a enzima nitrogenase susceptvel ao oxignio, h a necessidade da presena de leghemoglobina, substncia que transporta o oxignio para os bacteroides a exemplo da hemoglobia nos animais. Assim, para verificarmos se um ndulo est fixando, basta partirmos e observarmos a colorao avermelhada no seu interior. A ocorrncia de um grande nmero de espcies de leguminosa com interesse econmico na produo de gros utilizados na alimentao humana e de animais domsticos, na produo de madeira, e mesmo na recuperao de reas degradadas ou contami-

166

Microbiologia

nadas, tem motivado os microbiologistas no desenvolvimento de inoculantes eficientes no suprimento de N. Este trabalho inicia-se com o isolamento dos microrganismos e processos de seleo e finaliza com a multiplicao e produo de inoculantes que so postos disposio dos produtores.

10.4 Ciclo do Enxofre

O enxofre apresenta um ciclo semelhante ao do nitrognio, incluindo mineralizao, oxidao, reduo e imobilizao. O enxofre presente nos compostos orgnicos na forma de aminocidos (cistina e metionina) e vitaminas (biotina e tiamina) mineralizado e liberado na forma de sulfato (SO4-2) em condies de aerobiose e sulfeto (H2S) em anaerobiose. Em condies de anaerobiose pode ocorrer tambm a liberao de produtos de mau cheiro como metil e dimetilmercaptanas. O enxofre pode apresentar-se no ambiente em diferentes estdios de oxidao, da forma mais reduzida (-2), o H2S, a mais oxidada (+6), o SO4-2. Participam do processo de oxidao bactrias quimiolitotrficas, quimioheterotrficas e fotoautotrficas. Bactrias como o Thiobacillus thiooxidans oxidam o enxofre elementar produzindo cido sulfrico conforme a reao: S0+ 1,5 O2 + H2O 2 H2SO4 2 H+ + 2 SO4-2

Esta reao pode ser de utilidade no controle de patgenos, na recuperao de solos alcalinos e na solubilizao de minerais. Doenas como a sarna da batata causada por Streptomyces scabies podem ser controladas pela diminuio do pH do solo ocasionada pela adio de enxofre. Solos extremamente alcalinos, apresentam problemas na disponibilidade de nutrientes, podem ter o pH reduzido favorecendo a nutrio e o crescimento das plantas. Minerais como as apatitas podem ser dissolvidos por cidos, liberando o fsforo em formas assimilveis pelas plantas.

Ciclo dos elementos qumicos

167

Bactrias fototrficas anoxignicas tambm pode reduzir H2S a S: CO2 + 2 H2S CH2O + H2O + 2 S

Em condies de anaerobiose, bactrias como o Desulfovibrio desulfuricans podem utilizar compostos de enxofre como receptor de eltrons reduzindo o enxofre. H2SO4 + 8 H + H2S + 4 H2O

Os microrganismos podem tambm imobilizar o enxofre existente no solo competindo com as plantas. Normalmente isto no to limitante quanto para o nitrognio, uma vez que s ocorre quando a relao C:S no resduo orgnico superior a 50:1.

10.5 Ciclo do Fsforo

Embora muitos pesquisadores considerem o N, o fator mais limitante a produtividade biolgica dos ambientes, isto deve ser creditado ao fsforo, uma vez que para o nitrognio sempre existe a possibilidade do suprimento via fixao biolgica. J para o fsforo isto no existe. A fonte primria de fsforo so os minerais como as apatitas, que ao serem dissolvidas disponibilizam o elemento para o solo onde pode ser utilizado pelas plantas. A partir da h uma constante perda, pois apesar de ocorrer uma ciclagem no solo atravs dos processos de mineralizao, solubilizao, imobilizao e reaes de oxi-reduo, ele lentamente lixiviado para o lenol fretico, com destino final os oceanos, onde precipitado nos sedimentos marinhos. Assim, na realidade, no temos um ciclo e, sim, uma linha reta, pois, as quantidades retiradas dos oceanos, atravs da pesca ou pelo consumo de peixes pelas aves so pequenas. O fsforo contido nos resduos orgnicos (fitina, cidos nucleicos e fosfolipdeos) so mineralizados pela ao de enzimas extracelulares denominadas de fosfatases. As fosfatases desempenham

168

Microbiologia

importante papel na ciclagem do P, uma vez que a maioria dos solos pobre no elemento e cerca de 50% do total est na forma orgnica. Problemas de imobilizao de P, normalmente no so observados nos solos, pois a relao C:P a qual ocorre, superior a 300:1. O fsforo inorgnico no solo encontra-se principalmente na forma de fosfatos de clcio, tais como os minerais primrios, as apatitas (hidroxiapatita, fluorapatita e clorapatita) e fosfatos de ferro e alumnio. Os primeiros so mais abundantes em solos neutros e os ltimos em solos cidos. O fosfato presente nestes compostos pode ser disponibilizado para os organismos atravs da ao de cidos orgnicos (actico, lctico, ctrico, oxlico) e inorgnicos (sulfrico e carbnico) produzidos pelos microrganismos. Ca5OH(PO4)3 + 4 H+ 5 Ca+2 + H2O + 3 HPO42

Alm do efeito cido, os cidos orgnicos podem disponibilizar o P pela combinao de seus radicais com os ctions acompanhantes dos fosfatos formando acetatos, lactatos, citratos, oxalatos de Ca, Fe e Al. A reduo de fosfato (H3PO4) a fosfina (H3P) s ocorre em condies extremas de reduo. Isto consiste em problemas no tratamento de guas residuais, se o fsforo no for removido, ser acumulado nos lagos, lagoas e rios ocasionando eutrofizao.

A microbiologia do folclore
A ocorrncia de fantasmas e boi-t-t no folclore brasileiro tem uma explicao na microbiologia do P. Imagine um cadver em decomposio em condies anaerbias em que propicie a produo e acmulo de metano e fosfina. Quando estes gases so liberados por fissuras no solo e entram em contato com o ar, a fosfina que inflamvel oxidada produzindo a queima do metano produzindo assim labaredas. Explicao semelhante se d pela presena de boi-t-t em pntanos.

Ciclo dos elementos qumicos

169

10.6 Ciclo do Potssio

Dos trs macronutrientes utilizados pelas plantas o potssio o que apresenta menos problemas e, portanto, o que dispe de menos conhecimento quanto a participao dos microrganismos na sua ciclagem. Isto se deve, em parte, riqueza natural dos solos no elemento devido aos materiais de origem, mobilidade, s quantidades inexpressivas para a imobilizao e ao fato de estar sempre na forma de K+, dispensando reaes de oxi-reduo. Percentagem expressiva do K existente nos compostos orgnicos est prontamente disponvel dispensando a mineralizao. Uma simples lavagem retira a maior parte do K presente, uma vez que geralmente ele faz parte do balano inico das clulas e dificilmente faz parte de compostos orgnicos. Alm disso, diversos organismos como Bacillus siliceus e Aspergillus niger so capazes de utilizar e disponibilizar o K existente em minerais como as micas.

Resumo
A quantidade de nutrientes presentes no planeta limitada, tornado necessrio a ciclagem para a continuidade da vida. Os problemas ambientais enfrentados pela nossa sociedade e que afetam diretamente a vida como a conhecemos, esto relacionados ao funcionamento dos ciclos. O conhecimento destes fenmenos permitir a escolha de procedimentos que visem a eliminar as falhas nos sistemas. O carbono fixado pelos organismos produtores para constituir os diferentes componentes orgnicos recircula entre os organismos. Mas os resduos que no so utilizados necessitam ser degradados e liberados novamente para utilizao pelos produtores. Nisto os microrganismos so especialistas, sendo responsveis por cerca de 90% do carbono liberado. O nitrognio, embora abundante na atmosfera, pouco disponvel para os organismos. Apenas um grupo seleto de procariotos capaz de realizar a fixao tornando-o disponvel. Devido a sua essencialidade importante que o nitrognio circule pelos sistemas atravs de processos como a mineralizao, nitrificao e imobilizao

170

Microbiologia

evitando perdas. No entanto, em determinadas circunstncias se faz necessrio o seu retorno atmosfera atravs do processo de desnitrificao. A participao dos microrganismos nos ciclo do enxofre e fsforo intensa e constituem em alternativas a soluo de problemas ambientais.

Referncias
CARDOSO, E. J. B. N. et al. Microbiologia do solo. Campinas, SP: Soc. Bras. De Cincia do Solo, 1992. MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. MADIGAN, M. T. et al. Brock Biology of Microorganisms. 8. ed. New Jersey. Prentice Hall, 1996. 986p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524p. v. 1. SIQUEIRA, J. O.; FRANCO, A. A Biotecnologia do Solo. Fundamentos e perspectivas. Braslia: MEC, 1988. 236p.

c a p t u lo 11

Patogenicidade
Neste captulo ser abordado o conceito de patogenicidade e as etapas do desenvolvimento da doena.

c a p t u lo 11

Patogenicidade

175

11.1 Introduo
Ao longo da histria, as doenas foram atribudas a diferentes causas. No incio elas eram supersties primitivas tidas como castigo dos deuses ou provocadas por demnios. Mais tarde se estabeleceu o conceito humoral de que a sade dependia do equilbrio entre sangue, catarro, bile amarela e bile negra e o desequilbrio provocava a doena. Assim, s vezes, para se restabelecer o equilbrio, os indivduos eram submetidos sangria. Por fim surgiu o raciocnio cientfico, em que se verificaram atravs de Robert Koch que os microrganismos eram responsveis por determinadas doenas. Patogenicidade a capacidade que o microrganismo tem de provocar doenas que so alteraes anatmicas ou fisiolgicas nos hospedeiros. Ela medida pela virulncia (grau de patogenicidade). A virulncia influenciada pelas caractersticas dos microrganismos, do hospedeiro e pelas condies ambientais. Pneumococos capsulados so virulentos, acapsulados, no. O homem susceptvel aos gonococos, os animais inferiores so resistentes. Existem microrganismos que em condies normais no so patognicos, mas com a diminuio da resistncia do hospedeiro podem trazer problemas, como no caso das relaes entre o uso de drogas imunossupressoras e a biota normal do homem. Na maioria dos casos a patogenicidade no est relacionada a um nico produto e as bases bioqumicas ou moleculares so difceis de serem identificadas. Isto porque a virulncia no de-

176

Microbiologia

pende apenas do patgeno, mas tambm do hospedeiro, logo sua expresso depende de certas condies ambientais, tais como nutrientes, O2 etc. No caso da brucelose em humanos o crescimento do microrganismo na placenta moderado, mas em vacas, cabras, ovelhas e sunos, devido presena de eritritol, o crescimento abundante, levando ao aborto.

11.2 Etapas do desenvolvimento da doena

Para que um microrganismo seja capaz de provocar uma doena necessrio o cumprimento de etapas: a) Infectar as superfcies do hospedeiro (pele e mucosas); b) Penetrar no organismo; c) Multiplicar-se; d) Interferir com os mecanismos de defesa; e) Causar danos. As etapas podem no ocorrer nesta mesma sequncia e algumas podem ser suprimidas. Os microrganismos podem ser introduzidos, por picadas ou mordidas. Alguns vo direto aos danos, como no caso do botulismo em que o microrganismo se multiplica e produz a toxina fora do organismo e a doena s se manifesta com a ingesto do alimento contaminado. O contato o primeiro quesito da invaso. Geralmente casual, o microrganismo chega normalmente em pequeno nmero e pode ser eliminado por vrios mecanismos de resistncia do hospedeiro tais como: mucosidades, clulas ciliadas, barreiras fsicas, substncias antimicrobianas, fagocitose, etc. Existe, portanto a necessidade imediata de se aderir s superfcies por meio de adesinas (pili, glicoclice) para evitar a remoo. Eles necessitam ainda sobreviver competio com a microbiota presente nas superfcies. Muitos processos de sobrevivncia e penetrao no so bem compreendidos. Uma vez no tecido, os microrganismos devem crescer, multiplicando-se na leso local ou disseminando-se pelos organismos pelas vias: linftica e hemtica. Para progredir, devem vencer os

Patogenicidade

177

sistemas de defesa dos hospedeiros. No incio da infeco os mecanismos de defesa so inespecficos, caso haja uma derrubada destas defesas, h em alguns dias uma resposta imunolgica. Os microrganismos podem interferir nos mecanismos de defesa do hospedeiro atravs da produo de cpsula, leucocidinas e agressinas. A cpsula protege contra a fagocitose, mas ainda no se sabe como. Os fagcitos no conseguem ingerir os microrganismos capsulados, exceto se existir um anticorpo ligado ele, caso contrrio, a bactria fica escorregadia. Algumas bactrias, alm de serem resistentes fagocitose, tambm destroem os leuccitos pela produo de leucocidinas. So bactrias denominadas de piognicas (produzem pus). Os microrganismos alm de resistirem s defesas dos organismos podem ainda produzir agressinas, substncias que favorecem a invaso. A produo de hialuronidase (enzima que hidrolisa o cido hialurnico) e colagense (hidrolisa o colgeno) promove a dissoluo dos constituintes do tecido conjuntivo facilitando a disseminao dos microrganismos. A coagulase precipita o sangue recobrindo as clulas microbianas (estafilococos) com fibrina protegendo-as da fagocitose. Lecitinase decompe a lecitina (substncia cimentadora de membranas celulares e mitocndrias). Hemolisinas lisam os eritrcitos liberando a hemoglobina. As plantas no possuem os sofisticados sistemas de defesa dos animais como a fagocitose e os anticorpos. Suas principais defesas esto relacionadas a barreiras mecnicas, a substncias antimicrobianas (leos e antibiticos) e ao baixo pH do suco celular. A principal barreira o cimento intercelular, pectina e protopectina. Muitos patgenos vegetais produzem enzimas (pectinases) que dissolvem estes constituintes e permitem a invaso dos tecidos. Algumas plantas podem reagir formando pectina. O progresso da doena vai depender da capacidade dos microrganismos de produzir as enzimas e o organismo de produzir pectinas. Outro mecanismo pode ser a produo de substncias inibidoras de pectinases. Finalmente, para provocar a doena o microrganismo deve produzir substncias (toxinas ou desencadeamento de reaes imu-

178

Microbiologia

nolgicas) que prejudiquem o hospedeiro. As toxinas podem ser de dois tipos: as exotoxinas e as endotoxinas. As exotoxinas so protenas cuja ao txica devido configurao espacial dos aminocidos. Estes arranjos podem ser alterados de forma a produzir toxoides que so atxicos e protegem os indivduos susceptveis. So solveis e eliminadas pelas clulas produtoras no ambiente (Botulismo em conservas) ou na corrente circulatria (difteria e ttano). So termossensveis e inativadas por cidos. Os microrganismos que possuem altas propriedades toxignicas tm baixo poder invasor. O Clostridium tetani no tem capacidade para invadir ou crescer em tecidos sadios, no entanto, quando introduzido em tecidos lesionados ou mortos, na ausncia de oxignio, produzem toxinas que provocam contraes musculares e at a rigidez das mandbulas. O C. botulinum raramente invade tecidos vivos ou mortos, mas em conservas (carnes e vegetais) produzem toxinas que quando ingeridas levam at a morte. Os mecanismos de ao de muitas exotoxinas ainda no so conhecidos. No entanto, alguns j foram identificados: a) Inibio da respirao das mitocndrias; b) Ao enzimtica, com a digesto de componentes celulares. Lecitinases decompem a lecitina que um lipdeo que forma a

Toxina Botulnica
Embora as toxinas provoquem danos nas clulas elas podem possuir outras aplicaes. Como por exemplo, a toxina botulnica uma protena de origem biolgica, comercializada e conhecida pelo nome de BOTOX, a qual tem mudado a vida de pacientes com distrbios neurolgicos e agora considerada uma grande aliada no tratamento de reabilitao, embora seus benefcios j tenham sido comprovados h anos no campo da esttica. A diferena entre o txico e o teraputico est na dose. Uma vez no organismo humano, esta toxina vai apresentar basicamente duas aes distintas, porm, que se complementam. Ela vai ligar-se aos receptores terminais encontrados nos nervos motores, gerando um bloqueio na conduo neuromuscular e; entrar nos terminais nervosos e inibir a liberao da acetilcolina. Dessa forma, quando injetada por via intramuscular, em doses teraputicas, ela produz uma paralisia muscular localizada, por denervao qumica temporria. A denervao qumica produz uma atrofia do msculo mas, posteriormente, o msculo acaba desenvolvendo novos receptores extrajuncionais para a acetilcolina e a debilidade que se instalara acaba se revertendo.

Patogenicidade

179

substncia cimentadora de membranas celulares e membranas das mitocndrias; c) Inibio da sntese proteica; d) Perda de fluido intestinal; e) Lise de clulas; f) Efeitos Vasculares; g) Neurotoxinas: so toxinas que atuam sobre o sistema nervoso, interferindo nos mecanismos pelos quais os nervos transmitem os estmulos aos msculos. A toxina botulnica mais txica do que a tetnica. A primeira provoca a paralisia dos msculos respiratrios e a segunda, contraes contnuas dos msculos. As exotoxinas dos patgenos de plantas podem provocar: a) Morte celular pela desagregao das clulas promovidas pelas pectinases ou interferindo com o metabolismo da metionina provocado pelo acido b- hidroxidiamino pimlico; b) Murchamento pelo bloqueio mecnico do transporte de gua por substncia viscosa como a pectina degradada ou polissacardeos degradados por pectinases e carboidrases excretadas pelos microrganismos; c) Crescimento anmalo provocado por substncias difusveis como etileno e cido indol actico que provocam epinastia (crescimento excessivo de um lado do tecido). As endotoxinas so lipopolissacardeos proteicos encontrados nas paredes de muitas bactrias Gram negativas, que so liberadas das clulas quando estas se desintegram. So menos txicas que as exotoxinas e no formam toxoides. So altamente pirognicas (produzem febre), algumas inibem a fagocitose e outras so agentes inflamatrios produzindo permeabilidade capilar e injria celular. A temperatura do corpo humano controlada pelo centro nervoso e inmeras substncias podem interferir nestes mecanismos reguladores e produzir febre. Os danos no organismo tambm podem ser produzidos por mecanismos imunopatolgicos. Quando numa infeco primria ou o incio de uma crnica, os microrganismos podem estimular

180

Microbiologia

uma resposta imunolgica. Ocorrendo uma infeco subsequente, poder haver uma interao da mesma com a resposta imunolgica que acarretar danos aos tecidos. Um exemplo a hipersensibilidade provocada pela liberao de histaminas e outras substncias vaso dilatadoras podendo provocar a morte instantnea.

Resumo
A capacidade dos microrganismos em provocarem doenas depende do tipo de microrganismos e do hospedeiro e das condies ambientais. Para um microrganismo provocar uma doena ele tem que ser capaz de entrar em contato, penetrar, multiplicar-se, interferir com os mecanismos de defesa e causar danos no hospedeiro. Nem todas as etapas so essenciais. Um microrganismo pode ser introduzido por uma picada, outros podem apenas provocar danos.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608 p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524 p. v. 1.

c a p t u lo 12

Controle de microrganismos
Neste captulo sero estudados os fatores que afetam os microrganismos e os agentes fsicos e qumicos do seu controle.

c a p t u lo 12

Controle de microrganismos

185

12.1 Introduo
Como voc sabe, os microrganismos existem, praticamente, em todos os ambientes terrestres. Apenas para a gente ter uma ideia, enquanto essa frase lida, h uma infinidade de bactrias, por exemplo, atuando no nosso processo de digesto. H uma vasta populao de fungos, pra citar outro exemplo, vivendo na superfcie de nossa pele e at dentro de nossos olhos. Nesse ltimo caso, curiosamente, esse nmero podia ser bem maior se no fossem as substncias qumicas das lgrimas que os controlam. Outro conceito que j foi estudado na introduo de nossa disciplina que vida vem apenas de vida, no fazendo sentido, mesmo, as ideias de gerao espontnea h muito defendidas e derrubadas pelo brilhante cientista francs Pasteur. Dessa forma, quem pretende estudar microbiologia, isolando alguns fatores em laboratrio, precisa aprender a controlar os microrganismos. Caso contrrio, o efeito que se investiga fica ainda mais difcil de entender se vrios tipos de organismos estiverem presentes. Outra importncia em se controlar microrganismos, est no entendimento das formas de eliminar microrganismos que causam doenas nos seres vivos. Quem que j no ficou preocupado com algumas epidemias que assolam, de vez em quando, a humanidade? Recentemente, a gripe que veio dos sunos, por exemplo, foi destaque na mdia do mundo todo e muita gente acabou comprando mscaras pra evitar o contgio. Voc pensou em usar uma?

186

Microbiologia

Na indstria de alimentos, que tambm utiliza microrganismos para produzir comida, o controle de clulas muito importante para evitar a proliferao de organismos indesejveis no processo. Alm de poderem atrapalhar, os microrganismos podem produzir toxinas que so muito malficas para muitas pessoas. Como fazer, ento, para controlar os microrganismos no meio ambiente e nesses locais? Quais os agentes que os inibem? Antes, porm, de entrarmos nos agentes fsicos importante definir alguns conceitos fundamentais e que muita gente faz confuso em termos de controle de microrganismos. Lembrando que a palavra controle se refere reduo de microrganismos, podendose eliminar ou inibir o crescimento de clulas, numa dada situao ou material.

12.2 Fatores que afetam os microrganismos

Em linhas gerais, visando o controle de microrganismos, h cinco fatores que vo definir o sucesso ou fracasso dessas medidas. Trs so ligados aos microrganismos em si e dois sobre o agente que est atuando. Os trs primeiros ligados aos microrganismos so: 1. O tamanho da populao de microrganismos. Obviamente, quanto maior for o nmero de clulas iniciais, com potencial de patogenicidade, por exemplo, maior ser a chance deles de causar doena e, talvez, menor o controle. 2. Caractersticas dos microrganismos. Quem so eles? Esto em culturas isoladas ou misturados com outras espcies? De que forma eles esto no meio? Forma esporulada? 3. Natureza do material que os contm. Se for um leite, por exemplo, que tipo de leite ? Leite lquido tipo A, B ou C? Leite em p ou condensado? E os dois ligados aos agentes de controle: 4. Intensidade ou concentrao do fator atuante. Se for calor, por exemplo, qual a temperatura? Se for uma substncia qumica, qual a concentrao e forma do produto?

Controle de microrganismos

187

5. Tempo de exposio do agente microbiano. Quanto tempo fica a alta temperatura atuando no processo? Ou quanto tempo fica o produto qumico em contato com o material que se quer controlar? Basicamente, h trs grandes formas de se controlar microrganismos: os mtodos fsicos, os mtodos qumicos e os mtodos biolgicos. Nesse captulo, discutiremos sobre os agentes fsicos, primeiramente, e, depois os agentes qumicos.

12.3 Agentes fsicos

Os principais agentes fsicos utilizados no controle de microrganismos em microbiologia so: calor (seco e mido), frio, filtrao, dessecao, presso osmtica e radiao.

Calor
A forma mais usual de destruir clulas microbianas nas indstrias e nos hospitais, por exemplo, o calor. Vale lembrar que todo ser vivo tem uma temperatura tima de crescimento, a partir da qual ele reduz o crescimento com o aumento da temperatura, antes da morte em si. Evidentemente, e voc concorda comigo, uma bactria que vive no Alasca, por exemplo, tem um timo maior do que outra clula microbiana vivendo na Jamaica. Fora essa questo bvia e geogrfica, h tambm diferenas genticas entre espcies do mesmo ecossistema, e at mesmo dentro do mesmo gnero. O calor pode ser mido ou seco e h vrios tipos de mtodos de calor, que discutiremos a seguir.

Calor seco
O calor seco pode ser a prpria chama, utilizada para esterilizar as alas de inoculao em laboratrios de microbiologia, com o auxlio do bico de Bunsen. A incinerao, com temperaturas de centenas de graus Celsius, feita por empresas especializadas no manuseio de certos tipos de materiais contaminantes, incluindo o lixo de clnicas e hospitais, acondicionados em sacos plsticos resistentes e brancos para diferenciar de outros tipos.

188

Microbiologia

Outra forma de calor seco o emprego de fornos ou estufas para destruir microrganismos em certas vidrarias no volumtricas, como placas de Petri, bastes de vidro e bquers. O tempo de exposio normalmente de duas horas, com uma temperatura de 160-180C. Esse mtodo bastante usado em consultrios odontolgicos e deveria ser tambm mais empregado por pessoas que trabalham em sales de beleza, pelo potencial de contaminao dos instrumentos de trabalho para cortar cabelos e unhas.

As vidrarias volumtricas so descalibradas com o excesso de calor.

Calor mido
O calor mido pode ser feito com fervura e no vapor, tambm com o uso de autoclave, que , em linhas gerais, uma panela de presso maior. A fervura da gua bastante usada em meios rurais, mas no um mtodo totalmente seguro porque existem bactrias, Clostridium botulinum, por exemplo, que tm esporos que podem resistir gua fervente at por mais de uma hora. Obviamente, isso uma exceo e a maioria das bactrias morre em temperaturas bem menores e em menos tempo. O vapor pode ser utilizado na indstria para ajudar no cozimento e, ao mesmo tempo, controlar os microrganismos. Nesse caso podemos citar o exemplo do milho cozido no vapor e em potes de doces ou de conservas, antes do fechamento das tampas. A forma mais usada em laboratrios de microbiologia, em indstria de alimentos e em ambientes hospitalares, a autoclave. O processo de autoclave nada mais do que o aquecimento da gua, em condies de presso, por um determinado tempo. Normalmente, a temperatura chega a 121 C, em um tempo que vai de 10 a 15 minutos, com uma presso de 15 libras por polegada quadrada. O material que sai, se for um meio de cultura, por exemplo, estril e pronto para ser usado. Vrios materiais podem ser autoclavados, como vidrarias, plsticos, panos e instrumentos cirrgicos. Se os objetos forem sujos, aps a utilizao com prticas de microbiologia, recomenda-se que o tempo de autoclave seja de, no mnimo, 30 minutos. Hoje em dia h diferentes formas de autoclave, desde equipamentos grandes, computadorizados, bastante caros, como os de menor porte, de bancada, de consultrios. bastante importante que a pessoa que vai trabalhar com autoclave siga as

Controle de microrganismos

189

normas de segurana do laboratrio para evitar acidentes. Outro ponto fundamental sempre observar se a manuteno do aparelho est em dia, com os manmetros funcionando bem, e se a gua foi colocada dentro do mesmo. Em alguns modelos, trabalhar de forma seca causa a queima de resistncia, ocasionando atrasos e problemas ao laboratrio.

Pasteurizao
Este processo bastante utilizado na indstria alimentcia e foi dado em homenagem aos importantes trabalhos de Pasteur, na Frana, no controle de microrganismos. H, basicamente, dois tipos de pasteurizao: uma com temperatura de 72C, por 15 segundos, e outro com 63C por 30 minutos. Bebidas alcolicas, leite, sucos e at mesmo ovos podem ser empregados no processo. Vale lembrar que, no caso do leite, nem todos os microrganismos morrem, j que o objetivo geral da pasteurizao destruir os patgenos, sem afetar muito a qualidade do produto. Bactrias benficas como, por exemplo, as dos gneros Streptococcus e Lactobacillus, so usadas na fabricao de iogurte e queijo e so importantes para a sade humana.
Esterilizao
Processo de eliminao total de microrganismos, incluindo as formas esporuladas.

Vale destacar que, no caso do leite e em certos sucos, existe outro processo parecido e muito confundido com as pessoas: o UHT (ultra high temperature), que um processo de esterilizao. Nesse caso a temperatura empregada de 140-150C, por 1-2 segundos.

Filtrao
o processo que utiliza membranas filtrantes de vrios materiais, como, por exemplo, o acetato de celulose que tem capacidade de separar, via uma bomba de vcuo, os microrganismos da parte lquida, de produtos sensveis ao calor. Na anlise microbiolgica de gua de coliformes so tambm usadas essas membranas no mtodo da membrana de filtro (MF), bastante empregado em pases desenvolvidos pela facilidade de se obter esses materiais e o alto custo de mo de obra para lavar vidrarias (muito comum no mtodo alternativo dos tubos mltiplos). O inconveniente de se utilizar

190

Microbiologia

o mtodo das membranas quando a amostra de gua bastante suja e barrenta, o que causa um entupimento da material filtrante.

Frio
Normalmente, o frio mais usado para manter o produto aps a destruio pelo calor ou outro agente. H o frio de refrigerao, comum nas geladeiras domsticas e que tem cerca de 4C, e o congelamento, em grandes freezers de empresas que trabalham com alimentos, que variam de 0C a 20C. Em ambos os casos pode haver a reduo dos microrganismos, pela reduo da atividade deles, mas, normalmente, no so mtodos que matam todas as clulas microbianas. Uma carne congelada, por exemplo, pode ter vrias espcies de bactrias que so destrudas, mas algumas resistentes permanecem e crescem quando as condies ambientais so favorveis. Por essa razo, no se deve comer alimentos que ficaram descongelados ou congelar novamente carnes ou outros produtos que ficaram fora da geladeira por um longo tempo. Potencialmente, microrganismos patognicos se proliferam rapidamente em condies de temperatura ambiente.

Radiao
Uma interessante e, relativamente, nova forma de controlar microrganismos a utilizao de radiao eletromagntica. Como voc j estudou em fsica, quanto menor o comprimento de onda, maior a energia (Figura 12.1). Normalmente, as radiaes de alta energia so as que apresentam potencial na destruio de clulas bacterianas. As principais, e que esto abaixo do comprimento de onda da luz visvel, so: Ultra Violeta (UV), Raios X e Raios Gama. Sendo que essas duas ltimas so chamadas de ionizantes e a primeira, UV, no ionizante. A unidade de radiao chamada de roentgen e, em biologia, corresponde dose de radiao absorvida. Essa dose expressa em rad ou gray (1 Gy = 100 rad). Quanto mais difcil o microrganismo para ser eliminado, como o caso de bactrias que formam esporos, maior ser a energia necessria. Um fungo, bolor ou levedura, precisa de aproximadamente 6 vezes menos radiao do que

Wilhelm Konrad Roentgen descobriu os raios X e preferiu no patentear qualquer aparelho ou processo relacionado com os raios X, pois desejava que a humanidade se beneficiasse com sua descoberta.

Controle de microrganismos

191

10-5 nm Luz ultravioleta (UV) 295nm 330nm 280nm Luz UV na luz solar Bronzeamento 300nm 350nm 400nm

10-3 nm Raios X

1 nm UV

103 nm

106 nm

1m (109 nm)

103 m

Raios gama

Infravermelho Microondas

Ondas de rdio

Luz visvel

Bactericida 200nm 200nm

450nm

500nm

550nm

600nm

650nm

700nm

750nm

Comprimento de onda aumenta Energia aumenta

Figura 12.1 Comprimentos de ondas. (Modificado de TORTORA et al., 2000, p. 189).

a necessria para destruir os esporos de Clostridium botulinum, uma bactria que causa intoxicao alimentar. A luz UV, que tambm tem na luz solar em menores doses, tem o potencial de danificar o DNA das clulas causando mortes ou danos para a reproduo do mesmo, levando a mutaes bastante discutidas recentemente. Lmpadas UV so colocadas dentro de cmaras de fluxo laminar, usadas para inocular microrganismos, em laboratrios. Elas ficam acesas por um perodo antes dos trabalhos e depois, durante as inoculaes, so desligadas para no danificar a pele e olhos dos operadores. Outros locais onde se podem ver essas luzes so salas asspticas e centros cirrgicos. No entanto, so de baixa penetrao e apresentam mais um efeito desinfetante do que esterilizante. As radiaes ionizantes de maiores aplicaes nas indstrias de produtos nas reas de sade e de alimentos para esterilizar microrganismos so as de raios gama. Os dois radioistopos mais empregados so o 60Co e 137Cs. Vale realar que esse mtodo para alimentos deve ser bastante estudado e controlado pelas empresas e rgos governamentais para evitar que formas residuais prejudiquem as pessoas que vo consumir esses produtos. Com certeza, como j se verifica, mundialmente, essa forma de esterilizao crescer bastante nos prximos anos.

Quando se fala em radiao, logo a gente pensa nos microondas. Vale salientar que essas ondas de microondas, aqueles aparelhos domsticos para aquecer alimentos, so bem maiores e tem pouco efeito no controle de microrganismos. Nesse processo, as microondas fazem com que as molculas de gua dos alimentos vibrem, aquecendo os mesmos. Se houver algum controle, este ser pelo calor ao longo do tempo.

192

Microbiologia

Presso osmtica
Um dos mtodos mais antigos na preservao de alimentos a utilizao de altas doses de sais ou acares, causando um efeito hipertnico, retirando gua das clulas dos microrganismos. Vale lembrar que, por osmose, a gua vai de um meio menos concentrado para um mais concentrado. O emprego de sais normalmente feito em carnes e em vegetais fermentados, os picles. O acar utilizado em doces e geleias e apresenta grande eficcia nas indstrias alimentcias, incluindo as caseiras. Curiosamente, esse mesmo efeito de desfavorecer o crescimento de microrganismos indesejveis usado, desde tempos remotos, em machucados e feridas. Os fungos, comparados com as bactrias, so menos sensveis e podem crescer em meios mais cidos e midos, na presena de acares. Por essa razo, eles que deterioram mais esses tipos de alimentos.

Ressecamento
Outra forma prtica de controlar microrganismos atravs da reduo de gua nos alimentos, a desidratao. Obviamente, entre outros fatores, isso depende tambm de cada tipo de clula e das condies ambientais. No faz muito tempo, voc deve lembrar, foi encontrado o corpo de um homem na regio dos Alpes suos, que estava quase intacto, preservado pela ao da secagem e frio. Este processo de secagem ocorre na conservao de carnes e vrios vegetais, incluindo as frutas secas. Na indstria, isso feito em fornos e, de forma caseira, em fogo ou microondas. Quem j no comeu uma batatinha ou ma daquelas bem fininhas e secas? A liofilizao uma forma de secagem de produtos atravs do frio e apresenta grande aplicao e potencial na indstria alimentcia. Dessa forma, comparando um produto de grande consumo, como o caso do leite, por exemplo, podemos concluir que a sua forma seca, leite em p, mais difcil de estragar do que o leite comum. No entanto, mais raro, mas no impossvel, de o leite em p ter bactrias na forma de esporos e estar contaminado. H alguns anos atrs, isso foi noticirio de jornal, de um lote importado, e pode ocorrer tambm para outros produtos.

Controle de microrganismos

193

12.4 Agentes qumicos

Vrias substncias qumicas podem ser utilizadas no controle de clulas patognicas ou no, em tecidos vivos ou materiais inanimados. Conforme j foi visto no glossrio, agentes microbianos so aqueles que matam ou inibem o crescimento de microrganismos. Em termos de bactrias, por exemplo, o termo bactericida o que mata, enquanto que bacteriosttico o que inibe o crescimento do microrganismo. Nem todos os produtos so esterilizantes, pela complexidade de se destruir microrganismos em superfcies e grandes reas. Vale lembrar que as caractersticas das clulas microbianas tambm afetam a eficincia e eficcia dos agentes. Dessa forma, o termo desinfetante mais usual e significa uma substncia que mata apenas as partes vegetativas das clulas patognicas. Normalmente, as estruturas de esporos so mais resistentes e dificilmente morrem com produtos qumicos. Vrias substncias qumicas podem ser utilizadas para matar ou inibir os microrganismos. Uma soluo ideal seria a que tivesse as seguintes caractersticas: 1. Ao antimicrobiana, de preferncia em baixas concentraes; 2. Ser solvel em gua ou em outro solvente; 3. Ser estvel para que o seu princpio no se perca ao longo do tempo; 4. No ser txica aos seres humanos, animais e outros seres vivos; 5. Ser de fcil preparo; 6. Ter um bom poder de penetrao na superfcie que ir ser empregada; 7. No ser corrosiva nem de forte colorao que fica impregnada; 8. Ter capacidade detergente para remover sujeira e microrganismos; 9. Ter um aroma agradvel; e 10. Ter um baixo custo.

194

Microbiologia

Os principais grupos de produtos qumicos no combate aos microrganismos: substncias fenlicas (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol e clorexidina), halognios (iodo e cloro), lcool (etanol e isopropanol), metais pesados, gua oxigenada, oznio, detergentes, xidos de etileno, formaldedo, glutaraldedo e conservantes de alimentos. Alguns dos grupos de agentes qumicos sero discutidos a seguir, enfocando tambm o lado histrico deles.

Fenol e compostos fenlicos

Uma das primeiras substncias estudadas no controle de microrganismos foi o fenol ou cido carboxlico. Em meados de 1800, um mdico ingls chamado Joseph Lister empregou o produto antes de cirurgias para prevenir ou amenizar os problemas de infeces decorrentes dos procedimentos. Acima de 1% o fenol age de forma bactericida, mas, pelo seu odor forte, pode irritar a pele. Lysol, cresis e hexaclorofeno so exemplos de compostos fenlicos. Normalmente, esses produtos exercem atividade antimicrobiana lesando as membranas plasmticas, inativando e destruindo as protenas.

Halognios
Esse grupo de substncias um dos mais empregados no controle de microrganismos, com destaque para o iodo e o cloro, que so dois agentes oxidantes. O iodo um dos mais antigos produtos utilizados pela humanidade, reconhecido em 1830, nos Estados Unidos, e utilizado para tratar de feridas. A maioria das partes vegetativas das bactrias morre com o iodo e at alguns esporos. Sua ao contra fungos e alguns vrus tambm so notveis. O modo de ao de compostos de iodo em protenas. Normalmente, a tintura de iodo, que uma combinao de iodo 2% e etanol 70%, utilizada em hospitais e clnicas. Produtos base de iodo so grandemente utilizados para a assepsia de partes vivas, tanto de seres humanos como em animais. Na ordenha de vacas, por exemplo, comum mergulhar as tetas do bere bovino em uma substncia mais concentrada de iodo, de cor marrom,
assepsia
Processo que reduz significativamente a contaminao de microrganismos.

Controle de microrganismos

195

aps a coleta do leite, para evitar o aparecimento de mamite, que uma doena das mamas. Outro agente oxidante muito utilizado o cloro, na forma lquida, de gs comprimido e que atua no tratamento de guas para abastecimento e de piscinas. Sua concentrao efetiva que esteja entre 0,5 e 1 partes por milho ou mg por litro de gua. A ao germicida do cloro, que um gs, atravs do cido hipocloroso que se forma em contato com a gua. Outros exemplos de produtos clorados so as cloraminas e o hipoclorito de sdio, este ltimo usado como produto de limpeza domstico, com 1% de hipoclorito de sdio, e que o princpio ativo da gua sanitria que tem cerca de 2% a 2,5% de cloro ativo. Concentraes maiores do que 1% de hipoclorito de sdio, de 5% a 12%, so usadas como alvejantes industriais e em zonas rurais. O modo de ao dos clorados, pela sua forte reao oxidante, na destruio de compostos celulares em paredes e membranas. Pastilhas de cloro podem ser usadas para matar microrganismos em poos e cisternas e so de grande utilidade para pessoas que vo acampar em reas onde no existe gua potvel.

lcool
Um dos produtos mais utilizados para destruir formas vegetativas de microrganismos o lcool, com o etanol e isopropanol, como exemplos. Normalmente, o etanol 70% o que apresenta maior eficcia, pois, a gua ajuda a espalhar o produto. Outro aspecto importante que concentraes prximas do lcool puro so bastante volteis e se perdem no ar. O modo de atuao desses produtos desnaturando membranas, atravs da ao em lipdeos e protenas.

Modo de ao dos agentes qumicos

Os modos de ao dos produtos qumicos em microrganismos podem ser diversos e listados a seguir com alguns exemplos: 1. Agente oxidante (iodo, cloro, gua oxigenada e oznio); 2. Solvente de lipdeos ou desnaturante de protenas (lcool, compostos fenlicos e vrios detergentes);

196

Microbiologia

3. Precipitao de protenas (nitrato de prata, sulfato de cobre); e 4. Agente alquilante (xidos de etileno, formaldedo).

Avaliao dos agentes qumicos

A avaliao de novas substncias qumicas pode ser testada atravs de duas tcnicas: avaliao em tubos e em placas de Petri. No caso de tubos, estudada a concentrao mnima que inibe o crescimento em meios de cultura lquidos. No outro mtodo, em placas contendo meios de cultura slidos, so feitos orifcios que funcionam como pequenos poos onde so preenchidos com as solues a serem testadas. Na superfcie das placas inoculado o microrganismo a ser avaliado e, aps um perodo de incubao, so medidos os halos de inibio ao redor dos furos. Quanto maior o halo maior a sensibilidade do microrganismo ao produto qumico testado.

Resumo
Os microrganismos habitam praticamente todos os ambientes. Para estud-los e fazer o controle deles so empregados mtodos fsicos, qumicos e biolgicos. Os mtodos fsicos empregados so: calor, frio, filtrao, ressecamento, presso osmtica e radiao. Os mtodos qumicos so: substncias fenlicas (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol e clorexidina), halognios (iodo e cloro), lcool (etanol e isopropanol), metais pesados, gua oxigenada, oznio, detergentes, xidos de etileno, formaldedo, glutaraldedo e conservantes de alimentos.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 524 p. v. 1.

Controle de microrganismos

197

PRESCOTT, L. M.; HARLEY, J. P.; KLEIN, D. A. Microbiology. 2. ed. Dubuque: W. C. Brown, 1993. 912p. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. 827p.

c a p t u lo 13

Microbiologia Industrial Biotecnologia

Neste captulo ser estudada a Microbiologia Industrial, com destaque para os microrganismos, produtos, processos e aplicaes da Biotecnologia.

c a p t u lo 13

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

201

13.1 Introduo
Se voc conversar com muitas pessoas do seu cotidiano sobre micrbios, bactrias, fungos, vrus etc. bem provvel que a maior parte delas vai realar os aspectos negativos da microbiologia. Com certeza doenas das mais diversas e contaminao de alimentos, talvez, sejam os temas mais citados na preocupao de gente normal, rodeada de notcias alarmantes e que, no geral, assustam mesmo. Quem no ficou grilado com a vaca louca, a gripe aviria ou suna? Sem falar de tuberculose, de brucelose, de febre aftosa e de tantas outras. Mas voc sabia que o lado benfico da microbiologia muito maior do que esses negativos citados? Poucos so capazes de lembrar que vrios alimentos so feitos por microrganismos, como o caso do po que comemos no caf da manh. As bebidas como a cerveja e o vinho, so outros exemplos tpicos da ao dos microrganismos. Se formos para o lado ambiental, toda vez que abastecemos nossos carros o fazemos graas tambm aos microrganismos que ajudam na produo dos combustveis, tanto do lcool, como da prpria gasolina que tem o etanol misturado nela. Na questo do tratamento de esgotos, to importantes em uma cidade, as bactrias e fungos fazem um papel fundamental na qualidade de vida da populao. No faz muito tempo, foi perguntado para o Bill Gates, um dos homens mais ricos do mundo, o que ele faria se no atuasse na rea de informtica. Ele, sem vacilar, disse que trabalharia com

202

Microbiologia

biotecnologia, uma das reas mais interessantes do conhecimento atual. Voc conseguiria definir o que biotecnologia? Pare e pense e veja onde isso existe ao seu redor. Pois bem, biotecnologia, entre tantas definies, uma cincia que utiliza o potencial dos microrganismos para fazer produtos em escala industrial. Em outras palavras, uma parte aplicada da microbiologia para fabricar alimentos, medicamentos, processos industriais, produtos agropecurios e de meio ambiente. Desde tempos remotos h relatos de que alguns desses produtos j eram feitos, como o caso da fabricao do po e da cerveja no antigo Egito (4.000 anos a.C.) e do vinho, na bblia, por No, aquele cara que, segundo o relato, fez uma enorme arca para colocar os animais dentro, quando do dilvio. Podemos imaginar que desde que o mundo mundo, toda vez que uma fruta caa do p de uma rvore, os microrganismos faziam as fermentaes das mais diversas que estudamos, com detalhes, hoje. A biotecnologia atual tem uma nfase mais cientfica e uma parte do conhecimento de ao multidisciplinar (Figura 13.1). Vrias reas so estudadas em biotecnologia como, por exemplo, a microbiologia em si, a imunologia, a gentica, a bioqumica, as engenharias e tecnologias na fabricao de produtos e os assuntos de ordem tica que discutiremos mais pra frente. Vale citar que a biotecnologia tem uma parte que a engenharia gentica, onde as caractersticas contidas nos genes de um organismo podem ser introduzidas em outro, alterando o seu material gentico. Um exemplo curioso disso, entre tantos outros, o caso da soja transgnica, que recebe genes de bactrias do solo tolerantes a certos herbicidas, substncias que matam o mato que compete com a planta de soja, e que acaba ficando tambm tolerante a esses produtos. Outro inusitado exemplo o da utilizao de genes do peixe linguado, que tolera baixas temperaturas de armazenamento, e que passam para a planta de morango, normalmente bastante suscetvel ao frio. Hoje em dia h estudos biotecnolgicos sobre o potencial do uso de rgos de animais transplantados para os seres humanos. Voc concorda com tais mudanas? Acha que isso afeta o meio ambiente e eticamente correto?

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

203

Aplicaes comerciais

Indstria f armacutica e de cosmticos

Indstria de alimentos

Agricultura e melhoramento de plantas Agropecuria

Tecnologia de fermentaes

Diagnsticos Manejo ambiental e energtico

Engenharia gentica
engenharia de protenas imunoqumica cultivo de clulas in vitro tecnologia de bioprocessos

Princpios fundamentais
Fisiologia

Engenharia qumica

Biologia celular e molecular Bioqumica Imunologia Microbiologia

Gentica

Figura 13.1 reas do conhecimento em biotecnologia. (Modificado de SMITH, 1996, p. 15).

204

Microbiologia

13.2 Substratos em biotecnologia

H uma gama imensa de produtos fabricados ou com potencial de fabricao, pelos microrganismos. Para que essas clulas microbianas possam crescer e fazer o seu trabalho importante que haja substrato, que so os materiais de origem animal e vegetal. Estimativas de biomassa de produtos fotossintetizantes so da ordem de 120 bilhes de toneladas de matria seca por ano em terras e cerca de 50 bilhes nos oceanos, com o grande potencial de crescimento para a explorao das algas nessa enorme superfcie de gua no planeta. Os produtos que podem ser utilizados como substratos so provenientes da agricultura e das indstrias florestais, de alimentos, da sade e do meio ambiente. No ramo agrcola h a biomassa de plantas cultivadas em larga escala (soja, trigo, milho, cana de acar, cevada, arroz, feijo, caf, algodo etc.) e outros vegetais como o caso de frutas e produtos de hortas (legumes e hortalias). Na indstria florestal h as cascas, serragem e demais materiais provenientes da fabricao de papel e celulose. Outras biomassas de grandes destaques so as advindas da indstria de alimento, incluindo as atividades de pesca e de produo animal. No meio ambiente podemos citar os enormes volumes de lixo e esgotos, tanto domsticos como industriais, produzidos nas cidades.

13.3 Produtos e processos da biotecnologia

Aps a escolha dos microrganismos, dos substratos e dos processos industriais, vrios produtos so elaborados e listados a seguir, em diferentes reas de aplicao:

Indstria de alimentos
A fermentao ltica que feita a partir da transformao do acar do leite, a lactose, em cido ltico, atravs da enzima lactase, uma das mais antigas e importantes em biotecnologia em termos econmicos. Os microrganismos associados nesse grupo so: Lac-

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

205

tococcus lactis, Lactobacillus bulgaricus e Lactococcus thermophilus e so de grande importncia na indstria de laticnios, com produo dos derivados do leite (queijos, iogurtes e manteiga). Recentemente, bactrias do gnero Bifidobacterium tm sido empregadas em certos iogurtes com timos benefcios para a sade humana, como regulao da flora intestinal e potencial de ajudar no sistema imunolgico. Em queijos maturados, dos tipos gorgonzola e roquefort, o fungo (Penicillium roqueforti) utilizado no processo de maturao, dando realce ao sabor e aparncia esverdeada. Outros exemplos interessantes de produtos fermentados e de grande consumo so as azeitonas verdes e o chucrute, este ltimo a partir do repolho, por Leuconostoc mesenteroides e Lactobacillus plantarum. Os picles, feitos de vrios vegetais, so fermentados por Lactobacillus plantarum e Pediococcus cerevisiae. Outros produtos na indstria de alimentos incluem o molho de soja, pelos microrganismos Aspergillus orizae, Aspergillus soyae e Lactobacillus delbrueckii. O aminocido, cido glutmico, para realar sabores em diversos produtos feito via vrias bactrias, como, por exemplo, a Corynebacterium glutamicum. O cido ctrico, um antioxidante natural das frutas, pode tambm ser elaborado atravs da utilizao do fungo Arpergillus niger. A vitamina B12 produzida por espcies de Pseudomonas e Propionibacterium. Vitamina C pode ser feita pela bactria Acetobacter. Enzimas podem tambm ser produzidas via microrganismos em fermentadores e alguns exemplos so listados: Beta-amilase por Bacillus subtilis, na produo de cerveja; Celulase por Trichoderma viride, em sucos de frutas e caf; Invertase por Saccharomyces cerevisiae, em doces; Pectinase por Aspergillus niger, em sucos de frutas; Proteases por Aspergillus orizae, em amaciador de carne; e Renina por Mucor e Escherichia coli, em queijos.

206

Microbiologia

Indstria de bebidas alcolicas

Vrios microrganismos esto presentes na fermentao alcolica que feita a partir da glicose e com produo de etanol. Na produo de cerveja, que tem como base a fermentao dos gros de cevada em uma substncia chamada malte, os microrganismos de destaque so as leveduras Saccharomyces cerevisiae e Saccharomyces carlsbergensis. Vale lembrar que leveduras so fungos, organismos mais evoludos, e no bactrias como muita gente confunde. O malte produzido na germinao dos gros libera amido e a enzima amilase para ajudar a fermentar os acares pelas leveduras que convertem o acar em lcool e dixido de carbono. O sabor amargo, caracterstico das cervejas, pela adio de lpulo, uma planta. Normalmente, as cervejas tm uma concentrao de lcool que varia entre 4% e 6%. Curiosamente, a levedura Saccharomyces cerevisiae tambm a responsvel pelo po caseiro. Os tabletes de fermentos biolgicos so clulas desse organismo que esto compactas e acondicionadas em ambientes refrigerados. Em temperatura de meio ambiente elas crescem e fazem com que a massa de trigo e gua estufe, atravs de sua respirao. Outras bebidas de grande consumo e feitas por essas leveduras so o vinho, o conhaque e o usque. No caso do vinho, que tem de 12% a 14% de lcool, os acares das uvas, ou de outras frutas, so convertidos em etanol. O vinagre , em linhas gerais, um subproduto do vinho, azedado pela ao de bactrias do gnero Acetobacter, com a produo de cido actico. O conhaque e o usque so, aps o processo de fermentao, destilados e o lcool concentrado de tal forma a ter entre 40-43% e 50-95% de lcool, respectivamente. A cachaa, que tem entre 4055% de lcool, uma bebida destilada e feita por leveduras a partir da glicose da cana de acar. A vodka feita a partir da fermentao e destilao de cereais e tubrculos (batata ou beterraba) e tem cerca de 40% de lcool. O saqu, uma famosa bebida japonesa, feito pela fermentao de arroz pelo microrganismo Aspergillus orizae e tem de 14-16% de lcool.

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

207

A fermentao alcolica tem, alm das bebidas citadas, a produo de etanol para a indstria de combustveis que uma das mais rentveis e de grande impacto na sociedade. A gasolina brasileira tem aproximadamente 24% de etanol e tende a crescer pelo lado mais econmico e menos poluente desse produto da fermentao de Saccharomyces cerevisiae.

Indstria farmacutica
Uma das mais rentveis atividades econmicas da indstria de produtos de biotecnologia a utilizao de microrganismos na produo de medicamentos, vacinas e hormnios. Em 1929, com a descoberta de penicilina pelo mdico escocs Alexander Fleming, ocorreu um marco que modificou grandemente a ideia do controle de doenas infecciosas. At ento, muitas pessoas morriam com ferimentos e tiros, como o foi na Primeira Guerra Mundial. Atravs de estudos em placas de Petri, verificou-se que o fungo Penicillium notatum inibia o crescimento de clulas bacterianas. Essa substncia antibitica foi isolada e publicada, dando o prmio Nobel ao relevante cientista. A partir desse caso, muitos outros antibiticos tm sido produzidos pelos mais variados microrganismos e empregados mundialmente. Alguns exemplos de produtos e respectivas bactrias so listados a seguir: estreptomicina, por Streptomyces griseus; novobiocina, por Streptomyces niveus; bacitracina, por Bacillus licheniformis; e cefalosporina, pelo fungo Cephalosporium acremonium. Em adio aos antibiticos, exemplos de medicamentos produzidos por clulas microbianas so: enzima estreptoquinase, por bactrias do gnero Streptococcus, e empregada em pacientes que tiveram ataques cardacos. Temos tambm a glicose polimerase, por bactrias dos gneros Streptomyces e Bacillus, no emprego de xaropes e estirpes de Escherichia coli na produo de insulina, um importante hormnio humano no combate de diabetes. Muitas doenas como: tuberculose, por Mycobacterium bovis; coqueluche, por Bordetella pertussis; ttano, por Clostridium tetani; e pneumonia, por Streptococcus pneumoniae so combatidas atravs do uso de vacinas que so fabricadas com tecnologias biotecnolgicas.

208

Microbiologia

Indstria agropecuria
Outra rea de grande aplicao de microrganismos em biotecnologia a de produtos agropecurios. Um dos primeiros exemplos de estudos no controle biolgico de insetos na agricultura. O emprego de genes da bactria Bacillus thuringiensis em plantas transgnicas foi pioneiro e se estendeu para outros exemplos. Essa bactria tem genes que produzem uma toxina que controla a cigarrinha em pastagens. Fungos podem tambm atuar em controle biolgico, como o caso de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae em pragas de batata e cana de acar. Outros exemplos de duas bactrias largamente utilizadas na agricultura so as dos gneros Rhizobium e Bradyrhizobium. Elas fazem a fixao biolgica de nitrognio, economizando adubos nitrogenados em lavouras de leguminosas como feijo e soja. Vale lembrar que, alm desse aspecto econmico, h o benefcio ambiental da no utilizao (ou da reduo) de fertilizantes base de nitrognio que podem contaminar o solo e a gua subterrnea. Os fungos micorrzicos, que fazem associao simbitica com as plantas, so tambm exemplos do potencial de produtos na agricultura. Eles ajudam as plantas na absoro de nutrientes, como o caso do fsforo, um elemento qumico muito importante para o desenvolvimento vegetal, mas de pouca mobilidade e disponibilidade nos solos. As hifas desses fungos atuam aumentando a rea de explorao radicular e o potencial de emprego da biotecnologia de produtos ocorre nas culturas que tm produo de mudas, como o caso de plantas frutferas, plantas ornamentais e florestais. O estudo de microrganismos, de forma semelhante ao que ocorre nos seres humanos, tem uma vasta aplicao na fabricao de vacinas em animais. o caso, por exemplo, da febre aftosa que transmitida por vrus e cuja preveno muito importante para a comercializao de carnes. Vale lembrar que pases que esto livres dessa doena podem vender seus produtos para mercados exigentes e lucrar com essa atividade de grande rentabilidade.

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

209

13.4 Aplicaes em meio ambiente

Uma das reas de maior potencial de crescimento nos prximos anos a da biotecnologia no meio ambiente. Com o aumento da poluio pelas mais variadas atividades humanas imprescindvel que os estudos de microrganismos no controle dessas fontes poluidoras sejam intensificados.

Figura 13.2 Tanque de biorremediao de gua contaminada com petrleo que chega dos navios, no porto de Valdez, Alasca. Aps o tratamento a gua de lastro lanada ao mar. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal Alasca, EUA, junho de 2001).

O termo biorremediao empregado quando organismos vivos so utilizados nos processos, como o caso de bactrias do gnero Pseudomonas, entre tantas outras estudadas.

Um exemplo interessante e de grande repercusso mundial, e que causou grande impacto ambiental, foi o vazamento de petrleo pelo navio Exxon Valdez, em 1989, no Alasca, nos Estados Unidos (Figuras 13.2; 13.3; 13.4 e 13.5). Apenas para voc ter uma ideia, a quantidade de leo que foi derramada nesse acidente, de dimenses catastrficas, daria para encher 125 piscinas olmpicas. Voc pode imaginar os danos ambientais nas praias, regies de pesca e os animais mortos. Sem falar dos prejuzos econmicos, tanto das pessoas que deixaram de trabalhar, como do dinheiro empregado para os trabalhos de despoluio (Figura 13.6). A partir desse caso, vrios cientistas, em todo o mundo, intensificaram os estudos para se entender o papel de microrganismos na recuperao de reas contaminadas. Esse processo, que tambm inclui outras formas de descontaminao, chama-se remediao (Figuras 13.7 e 13.8). Outra tcnica muito estudada, e que se utili-

210

Microbiologia

za de plantas e de microrganismos, o da fitorremediao, em reas contaminadas por petrleo, metais pesados e outros poluentes.

Figura 13.3 Petroleiro no porto de Valdez, Alasca. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal Alasca, EUA, junho de 2001).

Figura 13.5 (acima) Boia do petroleiro Exxon Valdez, no Alasca. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal Alasca, EUA, junho de 2001).

Figura 13.4 ( esquerda) Equipamentos utilizados nos trabalhos de remediao quando do vazamento do petroleiro Exxon Valdez, em 1989, no Alasca. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal Alasca, EUA, junho de 2001).

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

211

Figura 13.7 (acima) Experimento de biorremediao de solo contaminado com petrleo em Saskatchewan, Canad. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal maio de 2002).

Figura 13.8 (abaixo) Experimento de biorremediao de solo contaminado com petrleo em Saskatchewan, Canad, com destaque para plantas leguminosas e gramneas sobreviventes. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal maio de 2002).

Figura 13.6 Solo contaminado com petrleo prximo cidade de Fairbanks, Alasca. (Foto de Alexandre Verzani Nogueira arquivo pessoal Alasca, EUA, junho de 2001).

Basicamente, h dois tipos de biorremediao: uma natural, com recursos do prprio local, e outra com a introduo de microrganismos exticos, com grande potencial de descontaminao, atravs de clulas isoladas e avaliadas em condies de laboratrio. No primeiro caso, que tambm recebe o nome de atenuao natural,

212

Microbiologia

o estudo de microrganismos no ambiente natural importante para se saber quais os tipos presentes e quais os fatores fsicos e qumicos que os afetam. No caso do Alasca, que bastante frio, a temperatura um fator importante e que limita a atividade dos microrganismos de degradar compostos poluentes. de se esperar que um derramamento de petrleo, nessas condies, leve muito mais tempo para ser remediado do que em uma rea tropical, por exemplo. Outro fator limitante, e que pode ser corrigido, o da adio de nutrientes, como o nitrognio, o fsforo e o potssio. Em reas de baixa oxigenao, a introduo desses elementos facilita a descontaminao, uma vez que a maior parte dos microrganismos que fazem esse trabalho aerbica. Outro exemplo da utilizao de microrganismos no meio ambiente o emprego das bactrias Thiobacillus thiooxidans e Thiobacillus ferrooxidans. Elas, em contato com certos minrios, produzem cidos e causam oxidao, ajudando na liberao e aproveitamento de ferro, cobre e zinco. Um exemplo mais recente e tambm interessante o da utilizao da bactria Caulobacter crescentus, que vive em rios e se aloja em rochas. Ela produz substncias fixadoras e que podem ser usadas como colas cirrgicas. Em outras aplicaes, estudos recentes mostram o potencial de algas na produo de combustveis menos poluentes, como o caso do biodiesel, que est em franca fase de desenvolvimento. Outros exemplos do potencial de microrganismos na biotecnologia so os ligados engenharia sanitria, no desenvolvimento de produtos que aceleram a decomposio da matria orgnica dos esgotos e fossas asspticas. Alguns deles esto sendo testados para reduzir os odores caractersticos e indesejveis dessas transformaes bioqumicas. Outra rea interessante nessa linha biotecnolgica a do estudo de microrganismos na corroso de encanamentos e degradao de esttuas, prdios e monumentos. Nesse caso, a ideia evitar que eles danifiquem essas estruturas e preservem os patrimnios industriais, residenciais e culturais.

Microbiologia Industrial - Biotecnologia

213

Em concluso, as aplicaes da microbiologia em biotecnologia so inumerveis e iro crescer muito nos prximos anos. Com certeza, ser difcil citar exemplos onde os microrganismos no podero atuar.

Resumo
Desde tempos remotos os microrganismos participam de vrios processos na obteno de alimentos e nas transformaes do meio ambiente. A biotecnologia uma cincia multidisciplinar que agrega conhecimentos para explorar o potencial dos microrganismos nas indstrias: alimentcia, de bebidas, farmacutica e de produtos ambientais. Produtos transgnicos e engenharia gentica so duas reas de grande crescimento e com potencial de desenvolvimento nos prximos anos.

Referncias
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2004. 608p. PELCZAR JR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia. Conceitos e Aplicaes. 2. ed. So Paulo: Makron Books, 1996. v. 1 e 2. PRESCOTT, L. M.; HARLEY, J. P.; KLEIN, D. A. Microbiology. 2. ed. Dubuque: W. C. Brown, 1993. 912p. SMITH, J. E. Biotechnology. 3. ed. Cambridge: Cambridge University Press, 1996. 236p. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. 827p.