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INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPIA

Los instrumentos utilizados para el estudio de la absorcin o emisin de la radiacin electromagntica como funcin de la longitud de onda, son llamados Espectrmetros o ms frecuentemente Espectrofotmetros. Los principios pticos y electrnica empleados en los instrumentos son los mismos para espectroscopa UV, Visible o IR, sin embargo hay ligeras diferencias en componentes especficos del instrumento para cada regin del espectro electromagntico. Los componentes esenciales de un espectrofotmetro son : 1. Una fuente estable de energa radiante 2. Un sistema de lentes, espejos y aberturas (Slits ), que definan, colimen (hagan paralelo) y enfoquen el haz de radiacin y un monocromador que separe la radiacin de bandas estrechas de longitud de onda. 3. Un componente transparente a la radiacin que contenga la muestra 4. Un detector de radiacin o transductor que recibe la seal de radiacin electromagntica y la convierte en una seal elctrica de magnitud proporcional a la intensidad de la radiacin recibida. 5. Un sistema amplificador que produzca o genere una seal elctrica mucho mayor a la seal recibida 6. Un sistema de lectura tal como: Una escala de aguja, un registrador, un sistema de dgitos o una computadora, que transforme la seal elctrica en una seal que el operador pueda interpretar. 7. El diagrama de estos componentes es el siguiente:

Figura 1: Diagrama de bloques para los componentes de un espectrofotmetro

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FUENTES DE RADIACION: Estas consisten de materiales que son excitados a niveles de mayor energa, por medio de descargas elctricas de alto voltaje o por calentamiento. Cuando los electrones del material regresan del estado excitado al estado basal, emiten energas caractersticas correspondientes a E, la diferencia en energa entre el estado basal y el estado excitado. Una fuente de radiacin ideal, sera aquella que emitiese un espectro de igual intensidad sobre la regin de inters, sin embargo la intensidad de sta vara con la longitud de onda. S el voltaje que suministra energa elctrica a la fuente vara, la intensidad en la relacin emitida por sta fuente tambin se altera, y esto afecta las lecturas las cuales son efectuadas a intervalos. En instrumentos de doble haz la radiacin que emerge de la fuente es dividido en dos: El haz de referencia y el haz de muestra. El transductor, el cual recibe las dos seales compensa por los efectos de variacin de voltaje o de intensidad en la fuente misma cancelando de sta manera los efectos inherentes a la misma. Las fuentes de radiacin utilizadas en espectroscopa son continuas o de lneas. Las primeras tienen amplio campo de aplicacin en mtodos espectroscpicos basados en absorcin molecular. Las fuentes de lnea son empleadas en espectroscopia de absorcin atmica. FUENTES DE RADIACIN ULTRAVIOLETA: Las lmparas de hidrgeno y deuterio son las fuentes ms comunes de radiacin UV. Estas consisten de un par de electrodos en un tubo de vidrio con ventanas de cuarzo, y que adems contiene hidrgeno o deuterio gaseoso. Cuando se aplica un alto voltaje a los electrodos, ocurre una descarga de electrones, lo cual excita las molculas de gas y stas pasan a niveles energticos superiores. Cuando los electrones de los tomos del gas regresan a su estado basal emiten radiacin, la cual es continua en el rango de 180 a 350 nm. Para UV es posible tambin utilizar la lmpara de xenn, la cual emite una radiacin ms intensa, sin embargo sta no es tan estable como la lmpara de hidrgeno y de deuterio, adems de que emite radiacin visible lo cual interfiere en las aplicaciones en espectroscopia UV. FUENTES DE RADIACIN VISIBLE: La lmpara de tungsteno es la fuente ms barata y ms satisfactoria en espectroscopia visible e infrarroja. El filamento de tungsteno es calentado por medio de una fuente de corriente directa o por una bateria. Los filamentos de tungsteno, los cuales alcanzan una temperatura de aproximadamente 2900C, emiten radiacin continua de 350 a 2500 nm. El arco de grafito emite una radiacin ms intensa, sin embargo es muy raro que sta fuente sea utilizada en ste tipo de espectroscopa. FUENTES DE RADIACIN INFRARROJA: El Globar y la lmpara de Nernst son las fuentes primarias de radiacin infrarroja. El Globar es una barra de carburo de silicio que se calienta aproximandamente a 1200C. Este emite radiacin en el rango de 1 a 40 m y es muy estable. La lmpara de Nernst es una barra hueca de xidos de itrio y de zirconio calentados aproximadamente a 1500C. Esta lmpara emite radiacin continua entre 0.4

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y 20 m y no es tan estable como el Globar, pero ste ltimo requiere de enfriamiento con agua. MONOCROMADORES Como se indic anteriormente, las fuentes de radiacin emiten en forma continua sobre un determinado rango de longitudes de onda. El uso de bandas angostas de longitudes de onda de radiacin tienen las siguientes ventajas: a) La radiacin en bandas angostas permite la resolucin de bandas de absorcin que son muy cercanas entre s. b) Con bandas angostas un pico puede ser medido a su mximo de absorcin incrementando as la sensibilidad. c) Las bandas angostas de absorcin tienden a seguir en mayor aproximacin la Ley de Beer. Con la finalidad de resolver el haz policromtico en bandas angostas de longitudes de onda se emplean filtros y monocromadores. FILTROS.- Los filtros y monocromadores son utilizados para obtener radiacin de un rango angosto de longitudes de onda (radiacin casi monocromtica). Los filtros son materiales de un vidrio especial, el cual contiene sustancias que le dan color al vidrio y que absorben una parte de la radiacin y transmiten otra. Estos filtros transmiten radiacin en anchos de bandas de 20 a 50 nm aproximadamente. MONOCROMADORES.- Los monocromadores tienen capacidad de resolucin de ancho de banda 35 a 0.1 nm. Los componentes de un monocromador son: 1. Una abertura que permita el paso de la radiacin policromtica de la fuente. 2. Un colimador que puede ser una lente o un espejo. 3. Un medio de dispersin que puede ser un prisma o una rejilla. 4. Lentes de enfoque o espejos. 5. Una abertura de salida. Todos los moncromadores tienen: una abertura de entrada; unos lentes colimadores o un juego de espejos para producir un haz paralelo de radiacin; un prisma o rejilla como elemento de dispersin y un elemento de enfoque, el cual proyecta una serie de imgenes sobre una superficie plana (el plano focal). Adicionalmente, la mayora de los moncromadores tienen ventanas en las aberturas de entrada y salida para proteger los componentes del moncromador del polvo y los humos corrosivos que puedan existir en el ambiente. En la Figura 2 se muestra el diseo ptico de dos monocromadores tpicos, uno empleado como medio de dispersin de la radiacin de un prisma y el otro una rejilla de dispersin.

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Con propsitos de ilustracin se muestra una fuente de radiacin que solo emite dos o tres longitudes de onda 1> 2>3. La radiacin llega al monocromador a atravs de una abertura rectangular (slit de entrada), es colimada y posteriormente incide con un cierto ngulo sobre la superficie del elemento dispersor (prisma o rejilla). En el prisma la refraccin en las dos caras de ste, genera la dispersin angular de la radiacin. En la rejilla la dispersin ocurre como consecuencia del fenmeno de difraccin. En ambos casos, la radiacin ya dispersada se enfoca sobre el slit de salida, pero nicamente sale del monocromador radiacin de longitud de onda 1. De sta manera, de la radiacin policromtica generada por la fuente, solamente una porcin de sta incidir sobre la muestra. Sera deseable tener un ancho de banda sumamente pequeo (y un monocromador puede hacerlo), sin embargo, mientras menor sea el ancho de banda menor ser la cantidad de fotones que lleguen al detector y consecuentemente la sensibilidad del instrumento se ve disminuida. El ancho de banda se puede seleccionar con la abertura (slit width) y esto generalmente se hace en forma emprica.

Figura 2: Dos tipos de monocromadores. (a) Monocromador de prisma tipo Bunsen. (b) Monocromador de rejilla tipo Czerney-Turner. 1>2.

PRISMAS.- El prisma, tal y como se ha mencionado con anterioridad separa la radiacin policromtica en bandas angostas y a diferentes ngulos. Para dirigir la radiacin de longitud de onda seleccionada a la abertura de salida (slit) se hace girar el prisma por medio de un mecanismo acoplado para este fin. Para una alta resolucin de la radiacin prolicromtica (buena separacin angular de la radiacin de diferentes longitudes de onda), se requiere que la dispersin sea lo mayor

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posible. La dispersin se defina como d/d la variacin en ngulo de dispersin con respecto a la variacin en longitud de onda. Esta es la mayor desventaja de un prisma; la dispersin en un prisma es mayor para longitudes de onda cercanas a sus bandas de absorcin, y como la mayora de los primas absorbe radiacin UV, la dispersin se incrementa para longitudes de onda cortas. Por ejemplo el prisma de cuarzo exhibe excelente dispersin a longitudes de onda cercanas a 200 nm, sin embargo la dispersin y la resolucin es baja en la vecindad de los 700 nm. En forma general, mientras menor sea la longitud de onda que incide en el prisma mayor es su resolucin. La Figura 3 es una grfica de ndice de refraccin -lo cual es una medida de la capacidad de dispersin de un prisma- en funcin de longitud de onda. En trminos de resolucin, el prisma es ms efectivo a longitudes de onda cercanas a su banda de absorcin, sin embargo bajo estas circunstancias la energa transmitida por el prisma se ve disminuida, y los requerimientos del detector pueden no satisfacerse, siendo necesaria incrementar la abertura de la ventana del monocromador (slit) y se pierde resolucin en el anlisis. Todo lo anterior sirve para hacer comprender el equilibrio que debe existir entre el prisma y los dems componentes del espectrofotmetro. MATERIALES DEL PRISMA.- El material del que est hecho el prisma debe ser trasparente a la radiacin utilizada y un excelente medio dispersor. Para el UV pueden ser utilizados prismas de slice o de cuarzo. Para el Visible e Infrarrojo cercano, el vidrio ordinario con plomo muestra buenas cualidades. Para el Infrarrojo se utilizan slidos inicos cristalinos, siendo uno de los ms utilizados el Cloruro de Sodio.

Figura 3: ndice de Refraccin como una funcin de la longitud de onda, para diferentes materiales.

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REJILLAS.- Las rejillas como medio de dispersin de la luz son muy superiores a los prismas. Hasta hace poco aos una de las desventajas de este tipo de dispersor era su costo. Actualmente se ha desarrollado la tecnologa para la elaboracin de rejillas de difraccin en grandes cantidades y con aceptable calidad, lo cual ha trado como consecuencia un menor precio y un desplazamiento casi total a la utilizacin de rejillas de difraccin como elementos de resolucin de haces policromticos. Una de las desventajas de las rejillas dispersoras es la produccin de radiacin extraa, as como de espectros de segundo y tercer orden, pero estos efectos pueden ser minimizados con el uso de filtros y una adecuado diseo del instrumento. En los instrumentos ms modernos y de mejor calidad la rejilla de difraccin han sustituido casi por completo el uso de los prismas como monocromadores. LENTES Y ESPEJOS.- La radiacin es colimada y enfocada por lentes y espejos. El material de los lentes debe ser por supuesto trasparente a la radiacin utilizada. En el Infrarrojo se utilizan espejos, ya que la mayora de los materiales no son suficientemente trasparentes a la radiacin Infrarroja y causan significantes prdidas de energa. Tambin en espectroscopa Visible y UV se emplean con frecuencia los espejos como elementos o partes del monocromador. MANEJO DE LA MUESTRA RECIPIENTES DE MUESTRA.- Las muestras para espectroscopia UV, Visible o IR pueden ser lquidas o gaseosas. Para UV es necesario utilizar celdas de cuarzo, ya que el vidrio absorbe radiacin UV; para Visible pueden utilizarse cuarzo o vidrio comn. Las celdas en UV y Visible pueden ser cilndricas o cuadradas, y se prefieren stas ltimas por tener mejor ptica. Las celdas deben de estar marcadas para que el paso del haz de radiacin sea siempre en el mismo lugar de la celda y de sta manera compensar por imperfecciones pticas en las paredes de la celda. SOLVENTES.- El solvente de la muestra, la cual es responsable de la absorcin de la radiacin, debe disolver completamente la especie y ser trasparente a la regin que se est estudiando. En espectroscopia de flama el recipiente de muestra se puede considerar la flama misma, la cual adems de proporcionar la energa necesaria para la atomizacin de los elementos tiene la funcin de sustentar momentneamente los tomos formados. El solvente en una flama son los gases ah producidos y que simultneamente aparecen con la especie absorbente.

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SISTEMAS DE DETECCIN Los detectores modernos general una seal como resultado de los fotones que llegan y chocan con l. Esta seal activa una aguja, enva una seal digital a un microprocesador y/o activa un graficador. El ruido, como ya se ha mencionado anteriormente, se refiere a una seal de fondo generada por la vecindad del instrumento con otros aparatos y/o por cambios mismos en el sistema electrnico en el detector. Un buen instrumento debe reunir los siguientes requerimientos: a) b) c) d) El ruido debe ser mnimo para que no interfiera con la seal recibida. El tiempo de respuesta debe ser corto. Debe ser estable durante un largo perodo de tiempo. La seal percibida debe ser fcilmente amplificada.

DETECTORES PARA UV Y VISIBLE.- Los fotones con radiacin de longitud de onda en visible y UV, poseen suficiente energa para causar la fotoeyeccin de electrones cuando chocan en superficies que han sido tratadas con compuestos especficos. La absorcin de estos fotones tambin puede causar que los electrones que se encuentran en la banda no conductora pasen a la banda de conduccin, si el material sobre el que inciden los fotones es un semiconductor. Ambos procesos general una corriente elctrica que es directamente proporcional al pode radiante de los fotones absorbidos. Los detectores que utilizan este sistema se denominan detectores fotoelctricos y son clasificados como fototubos y celdas fotovolticas. FOTOTUBOS.- Un fototubo consiste de:

a) un cilindro al alto vaco (con una ventana de cuarzo para UV), b) un ctodo semicilndrico, el cual tiene en su superficie un compuesto, con
propiedades tales que los electrones de sa substancia se pueden desprender con relativa facilidad. Este compuesto generalmente es un xido de un metal alcalino (litio, sodio, potasio, etc.) o alcalinotrreos (calcio, bario, estroncio, etc.) y c) un nodo que es un alambre metlico. A este sistema se le aplica una diferencia de potencial de aproximadamente 90 volts. La Figura 4 representa un sistema de deteccin a base de fototubo. La radiacin que atraviesa la celda de muestra o de referencia pasa a travs de una ventana de vidrio pyrex o cuarzo del cilindro, y choca con la superficie fotoemisiba del ctodo. Los fotones son absorbidos y transfieren su energa a los electrones dbilmente ligados a la superficie del material. Estos electrones son desprendidos del ctodo y son colectados por el nodo, generndose un flujo de corriente en el circuito y la corriente generada es directamente proporcional al poder radiante de la radiacin incidente.

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Figura 4: Diagrama esquemtico de un fototubo

La corriente en el fototubo es funcin de la diferencia de voltaje entre el ctodo y el nodo y de la longitud de onda de la radiacin incidente. Si este llega en un amplio rango de longitudes de onda la corriente generada en el fototubo se desva de la linearidad. La intensidad de corrriente en el fototubo es de alrededor de 10-11 amperes, por lo que se coloca una resistencia para aumentar la seal que entra al amplificador. El ruido en el fototubo se produce debido a la emisin de fotones del ctodo al nodo que siempre existe, an y cuando no llegue energa radiante al fototubo. Este ruido aumenta con la temperatura y con el rea del ctodo. TUBO FOTOMULTIPLICADOR.- Cuando incide radiacin sobre una superficie fotoemisiba se genera un desprendimiento de electrones de dicha superficie. Si estos electrones desprendidos se aceleran por medio de un campo elctrico y chocan con otra superficie fotoemisiba, se desprenden ms electrones que el primer caso. Si este proceso se repite una y otra vez, se tendr un efecto multiplicador de los fotones. Este es el principio de un tubo fotomultiplicador el cual se representa en la Figura 5. Despus de 9 pasos de amplificacin, un fotn original ha originado un desprendimiento de aproximadamente 106 electrones. Los fototubos son utilizados primordialmente para percibir seales de baja intensidad. Su desventaja ms grande es el costo elevado de este componente electrnico.

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Figura 5: Seccin transversal de un tubo fotomultiplicador.

FOTOCELDAS.- Las celdas fotovoltaicas son utilizadas para detectar y medir la radiacin en la regin visible y su rango de deteccin es aproximadamente el del ojo humano. Estas consisten de una hoja de cobre o hierro, la cual sirve como electrodo, sobre la cual est depositada una capa de un material semiconductor tal como xido de cobre (I) o selenio (Figura 6). La superficie exterior del semiconductor es cubierta por una capa trasparente de oro, plata o plomo, el cual sirve como segundo electrodo o electrodo colector. El sistema est protegido por una cubierta trasparente. Cuando incide radiacin de suficiente energa sobre el semiconductor, los enlaces covalentes de este son rotos con el resultado de que se forman huecos y electrones en el semiconductor. Para compensar este efecto los electrones emigran hacia la pelcula metlica y los huecos a el electrodo que sirve de base al semiconductor. Los electrones liberados emigran a travs del circuito externo para interaccionar con los huecos del segundo electrodo y el resultado es el flujo de una corriente, cuya magnitud es proporcional a la intensidad de la radiacin recibida. Esta corriente es lo suficientemente grande para ser medida con un galvanmetro o microampermetro, por lo cual en estos instrumentos generalmente el sistema de lectura es una aguja conectada a un galvanmetro.

El uso de fotoceldas adolece de las desventajas de que no tiene buenos lmites de sensibilidad, adems de que se desgasta por fatiga con el tiempo y pierde sus caractersticas originales. Cuando los requerimientos de sensibilidad no sean muy estrictos y para trabajo ordinario es recomendable equipos con este sistema de deteccin debido a su bajo costo.

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Figura 6.-Construccion de una celda capa-barrera o fotovoltaicas

AMPLIFICACIN Y LECTURA DE LA SEAL La seal electrnica generada por un detector de radiacin, debe ser convertida a una seal que el operador del instrumento pueda leer e interpretar fcilmente. Este proceso se efecta con amplificadores, ampermetros, potencimetros y graficadores potenciomtricos. AMPLIFICADORES.- Un amplificador toma una seal de entrada del detector y por medio de una serie de procesos electrnicos produce una seal de salida que es mucho mayor a la de la entrada. El factor de amplificacin que es llamado la ganancia del amplificador, es la relacin entre la seal de salida y la seal de entrada. Generalmente esta seales son voltajes. SISTEMA DE LECTURA.- Una vez que la seal de energa radiante ha sido trasformada en una seal elctrica y amplificada posteriormente, dicha seal pasa a un sistema de lectura. En algunos equipos, la seal elctrica amplificada se procesa para darle movimiento proporcional a una aguja, la cual indica la absorbancia o trasmitancia registrada, en una escala que contiene el aparato. En esta escala, la absorbancia tiene como lmites de 0 a infinito, mientras que la transmitancia vara de 0 a 100%; la escala de absorbancia es logartmica y la de transmitancia es lineal (Figura 7).

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Figura 7: Relacin entre trasmitancia y absorbancia.

En instrumentos ms modernos, la escala de absorbancia o de transmitancia se presenta en nmeros digitales. Tambin es posible a travs de algunas funciones que el procesador contiene, obtener la lectura directamente en concentracin. El sistema digital ms moderno, tiene la ventaja de que la lectura de a la seal est libra de errores de criterio e interpretacin del operador. Frecuentemente es conveniente obtener un registro de la seal en funcin del tiempo o al hacer variar la longitud de onda por ejemplo, para obtener un espectro de absorcin de una especie qumica. En este caso, lo ms conveniente es registrar la seal continuamente y obtener de ella una grfica que indique la variacin de la propiedad en funcin de: el tiempo, la longitud de onda, etc. RUIDO El factor limitante final en la precisin y sensibilidad de cualquier mtodo analtico instrumental, es la presencia de extraa seales no deseadas que se sobreponen a la seal generada por la substancia determinada analticamente estas extraas seales son llamadas RUIDO, siendo derivada la terminologa de la radioingeniera, donde la presencia de dichas seales es reconocible en forma audible (esttica). En la Figura 8 se representa el registro de un instrumento en el tiempo. El detector siempre est recibiendo seales debido al ruido. Estas seales deben ser mnimas comparadas con la seal del analito para as poder observar y medir esta con precisin.

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Figura 8: Registro en el tiempo de las diferentes seales (analito y ruido) en un instrumento analtico.

FUENTES DE RUIDO.- El ruido est asociado con cada componente de un instrumento,

esto es: la fuente, el transductor, el procesador de seal, y el sistema de lectura. Adicionalmente el ruido generado por cada uno de estos componentes puede ser de diferentes tipos y generado de diferentes formas. Por lo tanto, el ruido observable es una mezcla compleja de seales indeseables, el cual no puede ser totalmente caracterizado. El ruido instrumental puede ser dividido en cuatro categoras generales: el ruido Jhonson o ruido trmico; el ruido por golpeteo de electrones; el ruido Flicker y el ruido ambiental. INSTRUMENTOS DE DOBLE HAZ Y DE HAZ SENCILLO INSTRUMENTO DE HAZ SENCILLO.- En este tipo de instrumentos se requiere de calibrar el aparato a cero de absorbancia (o 100% de transmitancia) con el blanco. Una vez ajustado se retira la celda con el blanco y se colocan las muestras y estndares que s contienen la especie absorbente y se efecta la lectura correspondiente. Estos equipos requieren de componentes estables y de alta calidad en la fuente, detector y amplificador. Los parmetros de ajuste iniciales (cero y 100% de transmitancia o cero a de absorbancia), deben permanecer estables durante periodos ms o menos largos y hacer reajustes de estos parmetros peridicamente, si el instrumento se va a utilizar ms de 30 minutos. Este tipo de espectrofotmetros es ms barato que los de doble haz, y se pueden utilizar ampliamente si los resultados que se desean obtener no requieren de muy alta precisin. Un instrumento tpico de haz sencillo o de un solo haz es el representado en la Figura 9:

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Figura 9: Sistema de espectrofotmetro de haz sencillo.

INSTRUMENTOS DE DOBLE HAZ.- En estos aparatos el haz es dividido, e incide tanto en la celda que contiene el blanco como en la celda que contiene la muestra. El detector compara estas dos seales continuamente o muchas veces en un segundo y efecta la lectura relacionando la lectura de la muestra con la lectura del blanco. De esta manera se compensan las fluctuaciones que pudiesen existir por: ruido, variacin de voltaje, variacin en la intensidad de la fuente luminosa, etc. Obviamente estos instrumentos son ms complicados y costosos. En la Figura 10 se muestra un diagrama de un espectrofotmetro de doble haz.

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Figura 10: Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de doble haz.