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OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Nmero de publicacin: 51 Int. Cl.7: C07D

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ESPAA

405/06 C07D 493/08 A61K 31/445 A61K 31/335

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TRADUCCIN DE PATENTE EUROPEA

86 Nmero de solicitud europea: 02768642 .7 86 Fecha de presentacin : 21.08.2002 87 Nmero de publicacin de la solicitud: 1419154 87 Fecha de publicacin de la solicitud: 19.05.2004

T3

54 Ttulo: 29-enoles de rapamicina.

30 Prioridad: 22.08.2001 US 314211 P

73 Titular/es: Wyeth

Five Giralda Farms Madison, New Jersey 07940-0874, US

45 Fecha de publicacin de la mencin BOPI:

72 Inventor/es: Zhu, Tianmin y

16.02.2006

Fawzi, Mahdi, Bakir

45 Fecha de la publicacin del folleto de la patente:

74 Agente: Curell Suol, Marcelino

16.02.2006

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Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacin en el Boletn europeo de patentes, de
la mencin de concesin de la patente europea, cualquier persona podr oponerse ante la Ocina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposicin deber formularse por escrito y estar motivada; slo se considerar como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposicin (art. 99.1 del Convenio sobre concesin de Patentes Europeas).
Venta de fascculos: Ocina Espaola de Patentes y Marcas. C/Panam, 1 28036 Madrid

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DESCRIPCIN 29-enoles de rapamicina.
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La presente invencin se reere a 29-enoles de rapamicina que no son inmunosupresores, que son tiles como agentes neurotrcos, para el tratamiento de tumores slidos y enfermedades vasculares, a procedimientos para la preparacin de los mismos, y a composiciones farmacuticas que contienen los mismos. La rapamicina es un antibitico trinico macrocclico producido por Streptomyces hygroscopicus, que demostr tener actividad antimictica, especialmente contra Candida albicans, tanto in vitro como in vivo [C. Vezina et al., J. Antibiot. 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et al., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H. A. Baker et al., J. Antibiot. 31, 539 (1978); patente U.S. n 3.929.992 y patente U.S. n 3.993.749]. Adems, la rapamicina sola (Patente U.S. n 4.885.171) o en combinacin con picibanil (Patente U.S. n 4.401.653) ha demostrado tener actividad antitumoral. Los efectos inmunosupresores de la rapamicina se han descrito en FASEB 3, 3411 (1989). La ciclosporina A y el FK-506, otras molculas macrocclicas, han demostrado asimismo ser ecaces como agentes inmunosupresores, y, por consiguiente, tiles en la prevencin del rechazo de trasplantes [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R. Y. Calne et al., Lancet 1183 (1978) y patente U.S. n 5.100.899]. R. Martel et al. [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48 (1977)] describieron que la rapamicina era ecaz en el modelo de encefalomielitis alrgica experimental, un modelo de esclerosis mltiple; en el modelo de artritis con adyuvantes, un modelo de artritis reumatoide; e inhiba de forma ecaz la formacin de anticuerpos de tipo IgE. Se ha demostrado que el FK-506 y algunos ligandos sintticos que se unen a FKBP-12 son neuroprotectores y neuroregenerativos [US 5696135, US 5721256, US 5780484, US 5811434 y US 5840736]. La rapamicina es til tambin para la prevencin o el tratamiento del lupus eritematoso sistmico [Patente U.S. n 5.078.999], inamacin pulmonar [Patente U.S. n 5.080.899], diabetes mellitus dependiente de insulina [Patente U.S. n 5.321.009], trastornos dermatolgicos tales como psoriasis [Patente U.S. n 5.286.730], trastornos intestinales [Patente U.S. n 5.286.731], proliferacin de las clulas musculares lisas y engrosamiento de la ntima tras lesin vascular [Patentes U.S. n 5.288.711 y n 5.516.781], leucemia/linfoma de clulas T del adulto [Solicitud de patente europea 525.960 A1], inamacin ocular [Patente U.S. 5.387.589], carcinomas malignos [Patente U.S. n 5.206.018], enfermedad cardaca inamatoria [Patente U.S. 5.496.832], anemia [Patente U.S. n 5.561.138], y prolongacin de los axones [Parker, E. M. et al, Neuropharmacology 39, 1913-1919, 2000]. Se ha demostrado que un ster de rapamicina, el 42-ster de rapamicina con cido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)2-metilpropinico [descrito en la patente U.S. n 5.362.718], tambin conocido como CCI-779, presenta actividad antitumoral contra diversas lneas celulares tumorales, en modelos de tumores animales in vivo, y en ensayos clnicos en fase I. [Gibbons, J., Proc. Am. Assoc. Can. Res. 40: 301 (1999); Geoerger, B., Proc. Am. Assoc. Can. Res. 40: 603 (1999); Alexandre, J., Proc. Am. Assoc. Can. Res. 40: 613 (1999); y Alexandre, J., Clin. Cancer. Res. 5 (Supl. de noviembre): Resumen 7 (1999)]. Descripcin de la invencin La presente invencin proporciona 29-enoles de rapamicina que no son inmunosupresores, y procedimientos para la utilizacin de los mismos que se describen en la presente memoria. Tal y como se dene la presente memoria, el trmino un 29-enol de rapamicina dene una clase de compuestos neurotrcos que contienen el ncleo bsico del 29-enol de rapamicina (mostrado ms adelante). Estos compuestos carecen de las propiedades inmunosupresoras asociadas al ncleo de la rapamicina intacta. Los 29-enoles de rapamicina de la presente invencin incluyen compuestos que pueden ser modicados por tcnicas qumicas o biolgicas como derivados del ncleo del 29-enol de rapamicina, manteniendo al mismo tiempo las propiedades neurotrcas. Por tanto, el trmino un 29-enol de rapamicina incluye steres, teres, oximas, hidrazonas e hidroxilaminas de rapamicina, as como 29-enoles de rapamicina en los que se han modicado los grupos funcionales del ncleo del 29-enol de rapamicina, por ejemplo por medio de reduccin u oxidacin. El trmino un 29-enol de rapamicina incluye tambin las sales farmacuticamente aceptables, de 29-enoles de rapamicina, que son capaces de formar dichas sales debido a que contienen un grupo cido o bsico.

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Es preferible que los steres y teres de 29-enol de rapamicina se formen con los grupos hidroxilo en la posicin 42 del ncleo del 29-enol de rapamicina, y que las oximas, hidrazonas e hidroxilaminas se formen con una cetona en la posicin 42 (tras la oxidacin del grupo hidroxilo en 42) y una cetona en la posicin 27 del ncleo del 29-enol de rapamicina. Los 42-steres y teres de rapamicina preferidos, que sirven como materiales de partida para los correspondientes 29-enoles de rapamicina, se describen en las siguientes patentes, que se incorporan en la presente memoria a ttulo de referencia: steres alqulicos (Patente U.S. n 4.316.885); steres aminoalqulicos (Patente U.S. n 4.650.803); steres uorados (Patente U.S. n 5.100.883); steres de amida (Patente U.S. n 5.118.677); steres de carbamato (Patente U.S. n 5.118.678); teres sillicos (Patente U.S. n 5.120.842); aminosteres (Patente U.S. n 5.130.307); acetales (Patente U.S. n 5.151.413); aminodisteres (Patente U.S. n 5.162.333); steres de sulfonato y sulfato (Patente U.S. n 5.177.203); steres (Patente U.S. n 5.221.670); alcoxisteres (Patente U.S. n 5.233.036); teres O-arlicos, -alqulicos, -alquenlicos y -alquinlicos (Patente U.S. n 5.258.389); steres de carbonato (Patente U.S. n 5.260.300); carbamatos de arilcarbonilo y alcoxicarbonilo (Patente U.S. n 5.262.423); carbamatos (Patente U.S. n 5.302.584); hidroxisteres (Patente U.S. n 5.362.718); steres impedidos (Patente U.S. n 5.385.908); steres heterocclicos (Patente U.S. n 5.385.909); steres geminales disustituidos (Patente U.S. n 5.385.910); steres aminoalcanoicos (Patente U.S. n 5.389.639); steres de fosforilcarbamato (Patente U.S. n 5.391.730); steres de carbamato (Patente U.S. n 5.411.967); steres de carbamato (Patente U.S. n 5.434.260); steres de amidinocarbamato (Patente U.S. n 5.463.048); steres de carbamato (Patente U.S. n 5.480.988); steres de carbamato (Patente U.S. n 5.480.989); steres de carbamato (Patente U.S. n 5.489.680); steres impedidos de N-xido (Patente U.S. n 5.491.231); steres de biotina (Patente U.S. n 5.504.091); teres O-alqulicos (Patente U.S. n 5.665.772); y steres de PEG y rapamicina (Patente U.S. n 5.780.462). La preparacin de dichos steres y teres se describen en las patentes mencionadas anteriormente. La preparacin de los correspondientes steres y teres de 29-enoles de rapamicina puede lograrse utilizando la metodologa descrita en dichos patentes, comenzando con la rapamicina, seguido por las reacciones de apertura del anillo descritas en la presente memoria. Una sntesis mejorada de 42-steres y teres de rapamicina se describe la patente U.S. n 6.277.539, que se incorpora en la presente memoria a ttulo de referencia. Por tanto, ejemplos de 29-enoles de rapamicina incluyen el 29-enol de rapamicina y los compuestos que son 42-ster y ter de frmula (II):

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en la que RA se selecciona a partir de hidrgeno y grupos formadores de steres o teres como se describe en cual-

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quiera de las patentes US/EP mencionadas anteriormente (por ejemplo, grupos acilo y grupos alquilo opcionalmente sustituidos).
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Las oximas, hidrazonas e hidroxilaminas de rapamicina preferidas se describen en las patentes U.S. n 5.373.014, n 5.378.836, n 5.023.263, n 5.023.264 y n 5.563.145, que se incorporan en la presente memoria a ttulo de referencia. La preparacin de dichas oximas, hidrazonas e hidroxilaminas, que sirven como materiales de partida para los correspondientes 29-enoles de rapamicina, se describen en las patentes mencionadas anteriormente. La preparacin de las correspondientes oximas, hidrazonas e hidroxilaminas de 29-enol de rapamicina puede lograrse utilizando la metodologa descrita en dichas patentes, comenzando con la rapamicina, seguido por las reacciones de apertura del anillo descritas en la presente memoria. Los 29-enoles de rapamicina particularmente preferidos incluyen el 29-enol de rapamicina, 42-ster de 29-enol de rapamicina con cido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropinico [vanse las patentes U.S. 5.362.718 y 6.277.539 para la preparacin de 42-ster de rapamicina con cido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropinico], y 29-enol de 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina [vase la patente U.S. 5.665.772 para la preparacin de 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina]. Cuando sea aplicable, pueden formarse sales farmacuticamente aceptables con cidos orgnicos e inorgnicos, por ejemplo, actico, propinico, lctico, ctrico, tartrico, succnico, fumrico, maleico, malnico, mandlico, mlico, ftlico, clorhdrico, bromhdrico, fosfrico, ntrico, sulfrico, metanosulfnico naftalenosulfnico, bencenosulfnico, toluenosulfnico, canforsulfnico, y con cidos conocidos similares aceptables, cuando la rapamicina contiene un grupo bsico adecuado. Las sales pueden formarse tambin a partir de bases orgnicas e inorgnicas, preferentemente sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio, litio o potasio), sales de metales alcalinotrreos, sales de amonio, sales de alquilamonio que contienen 1-6 tomos de carbono o sales de dialquilamonio que contienen 1-6 tomos de carbono en cada grupo alquilo, y sales de trialquilamonio que contienen 1-6 tomos de carbono en cada grupo alquilo, cuando la rapamicina contiene un grupo cido. Tal y como se utiliza en la presente invencin, el trmino proporcionar, cuando se reere a proporcionar un compuesto o sustancia cubiertos por la presente invencin, signica bien la administracin directa de dicho compuesto o sustancia, o la administracin de un profrmaco, derivado o anlogo que se transformar en el interior del organismo en la cantidad ecaz del compuesto o sustancia. Los compuestos de la presente invencin pueden prepararse a partir de una rapamicina utilizando materiales de partida disponibles en el mercado o materiales de partida que pueden prepararse utilizando procedimientos de la literatura. El 29-enol de rapamicina deseado puede prepararse por tratamiento de la rapamicina con ozono, controlando el transcurso la reaccin, hasta que se haya formado el producto deseado. Por tanto la presente invencin proporciona un procedimiento para preparar un 29-enol de rapamicina como se ha denido en la presente memoria, que comprende una de las siguientes etapas:

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a) ozonolizar una rapamicina (por ejemplo, rapamicina, 42-ster de rapamicina con cido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropinico, o 42-O-(2-hidroxi)etilrapamicina) para producir un 29-enol de rapamicina (por ejemplo, 20-enol de rapamicina, 42-ster de 29-enol de rapamicina con cido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)2-metilpropinico, o 29-enol de 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina);
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o b) acilar el 29-enol de rapamicina, protegido opcionalmente en un grupo o grupos sustituyentes reactivos, con un agente acilante (por ejemplo, un agente acilante que contiene el grupo RA como se ha denido anteriormente), para dar lugar a un 29-enol de rapamicina, por ejemplo, un derivado 42-ster del mismo de frmula (II):

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en la que RA es un grupo formador de steres seleccionado (por ejemplo, radical acilo), y eliminar cualquier grupo protector; o
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c) etericar el 29-enol de rapamicina, opcionalmente protegido en un grupo o grupos sustituyentes reactivos, con un agente etericante (por ejemplo, un agente etericante que contiene el grupo RA como se ha denido anteriormente), para dar lugar a un 29-enol de rapamicina (por ejemplo, un derivado 42-ter del mismo, de frmula (II) como se ha descrito anteriormente, en el que RA es un grupo formador de teres seleccionado), y eliminar cualquier grupo protector. Adems de la produccin del 29-enol de rapamicina, se producen asimismo los correspondientes dialdehdos de rapamicina durante la oxidacin por ozonlisis. La estructura del dialdehdo de rapamicina se presenta a continuacin.

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Adems, durante la ozonlisis de la rapamicina se produjo el (2E,4S,6R)-6-[(5S,6R)-5-hidroxi-6-metoxi-4-metil2,3,7-trioxabiciclo[2.2.1]hept-1-il]-4-metilhept-2-enal, que tiene la siguiente estructura (Ejemplo 3):
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La actividad neuroregenerativa de los compuestos de la presente invencin se conrm en un procedimiento estndar de anlisis farmacolgico que evaluaba el dialdehdo de rapamicina (Ejemplo 1) y el 29-enol de rapamicina (Ejemplo 2), como compuestos representativos de la presente invencin, en clulas SH-SY5Y in vitro [Gold et al., Exp Neurol 147: 269-278,1997]. Brevemente, las clulas SH-SY5Y se colocaron en una placa de 6 pocillos y se incubaron con adicolina durante 5 das, seguido por tratamiento con los compuestos de prueba utilizando placas de 6 pocillos. Los testigos fueron pocillos que no haban recibido tratamiento, o que haban sido tratados slo con factor de crecimiento nervioso (NGF). Los pocillos del ensayo fueron tratados con NGF junto con el compuesto del Ejemplo 1, o el compuesto del Ejemplo 2, o rapamicina. Las clulas se fotograaron a las 168 horas. El anlisis de las longitudes de los axones se realiz en placas fotogrcas utilizando un tablero digitalizador HI-PAD de Houston Instrument conectado a un ordenador IBM XT con software apropiado (Bioquant IV, R & M Biometrics, Nashville, TN). Los valores medios de las zonas axnicas fueron comparados utilizando ANOVA (STATVIEW, Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA). La siguiente tabla resume los resultados obtenidos.

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TABLA I Longitud media de los axones tras 168 h
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Longitud de los axones () Clulas no tratadas 109,52,6a (n=115) 1967,7* (n=112) 261,413,1** (n=119) 229,89,5** (n=141) 239,710,0** (n=155)

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NGF Rapamicina + NGF Ejemplo 1 + NGF

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Ejemplo 2 + NGF
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Los valores corresponden a media ETM (en m). n, nmero de clulas. * p < 0,05 comparado con clulas no tratadas ** p < 0,05 comparado con NGF y clulas no tratadas

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Los resultados obtenidos en el procedimiento estndar de anlisis farmacolgico demuestran que los compuestos de la presente invencin son tiles como agentes neurotrcos, y son particularmente tiles para fomentar la regeneracin neuronal y la recuperacin funcional y para estimular la prolongacin de los axones, y por tanto para tratar varios trastornos neuropatolgicos, incluidas las lesiones de los nervios perifricos y del sistema nervioso central causadas por traumatismo (por ejemplo, lesin y traumatismo de la mdula espinal, lesin del dao en el nervio citico o facial), enfermedad (por ejemplo, neuropata diabtica), quimioterapia contra el cncer (por ejemplo, con alcaloides de la vinca y doxorrubicina), lesin cerebral asociada a ictus e isquemia asociada a ictus, y trastornos neurolgicos que incluyen, sin limitarse a los mismos, varias neuropatas perifricas, y trastornos neurolgicos relacionados con la neurodegeneracin, incluidos, sin limitarse a los mismos: neuralgia del trigmino, neuralgia glosofarngea, parlisis de Bell, miastenia grave, distroa muscular, esclerosis lateral amiotrca, atroa muscular progresiva, atroa muscular bulbar progresiva hereditaria, sndromes de hernia, ruptura o prolapso de discos intervertebrales, espondilosis cervical, trastornos de los plexos, sndromes de compresin del desladero torcico, neuropatas perifricas tales como las causadas por plomo, acrilamidas, gamma-dicetonas (neuropata por inhalacin de pegamento), disulfuro de carbono, dapsona, garrapatas, porria, sndrome de Gullain-Barre, demencia, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, y corea de Huntington. La actividad antineoplsica de los compuestos de la presente invencin se conrm evaluando la actividad antineoplsica de compuestos representativos de la presente invencin (Ejemplos 1 a 5) en seis lneas celulares tumorales in vitro. Brevemente, se colocaron clulas tumorales de seis lneas celulares en pocillos de una placa de microvaloracin de 96 pocillos. Se utilizaron las siguientes lneas celulares tumorales: 3T3 (ovario), 3T3/H2N (ovario, resistente a cisplatino), A431 (de origen epidermoide vulvar), SW620 (colon), SKBR3 (mama) y MDA-435 (mama). Las clulas tumorales se cultivaron durante 48 horas en presencia de diluciones sucesivas del compuesto que se iba a evaluar, y se determin la proliferacin celular utilizando un procedimiento colorimtrico (sulforrodamina B). La inhibicin de la proliferacin se calcul comparando el nmero de clulas con el presente en el momento de adicin del compuesto de prueba. Los resultados se expresan como CI50 (g/ml) y se presentan en la Tabla 2. TABLA 2

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Actividad antineoplsica (CI50 en g/ml) Lnea celular Ejemplo 1 0,72 0,68 0,91 0,52 1,23 1,41 Ejemplo 2 >5 >5 >5 >5 >5 >5 Ejemplo 3 4,11 >5 3,01 2,05 4,13 >4 Ejemplo 4 1,5 0,72 2,64 0,36 1,1 3,04 Ejemplo5 >5 4,96 >5 2,69 >5 >5

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3T3 3T3/H2N

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A431 SKBR3 MDA435

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SW620

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Los resultados de este procedimiento estndar de anlisis farmacolgico demuestran que los compuestos de la presente invencin son tiles como agentes antineoplsicos. En particular, los compuestos de la presente invencin son tiles contra tumores slidos, entre ellos sarcomas y carcinomas, y ms particularmente astrocitomas, cncer de prstata, cncer de mama, cncer de colon, cncer pulmonar de clulas pequeas y cncer ovrico; y leucemia/linfoma de clulas T del adulto. Los compuestos de la presente invencin son tambin tiles para el tratamiento o la inhibicin de enfermedades vasculares hiperproliferativas tales como reestenosis.
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Cuando se emplean para el tratamiento de la reestenosis, es preferible que los compuestos de la presente invencin se utilicen para tratar la reestenosis que sobreviene tras un procedimiento de angioplastia. Cuando se utilizan este tratamiento de la reestenosis tras la angioplastia, los compuestos de la presente invencin pueden administrarse antes del procedimiento, durante el procedimiento, despus del procedimiento, o en cualquier combinacin de los anteriores. Se entiende que la dosis ecaz de un 29-enol de rapamicina puede variar en funcin del compuesto particular utilizado, la forma de administracin, el trastorno en cuestin y su gravedad, o el trastorno tratado, as como de varios factores fsicos relacionados con el individuo tratado. Cuando se utiliza segn la presente invencin, pueden obtenerse resultados satisfactorios cuando el 29-enol de rapamicina se administra a una dosis diaria por va oral que correspondera aproximadamente a dosis diarias previstas del compuesto activo de 0,1 g/kg a 100 mg/kg, preferiblemente entre 0,001 y 25 mg/kg, y ms preferentemente entre 0,01 y 5 mg/kg. Se espera que las dosis diarias previstas varen con la ruta de administracin. Cuando el 29-enol de rapamicina se utiliza como parte de un tratamiento combinado, se administran dosis de cada uno de los componentes de la combinacin durante un perodo de tratamiento deseado. Los componentes de la combinacin pueden administrarse al mismo tiempo; bien en forma de dosis unitaria que contiene ambos componentes, o bien en forma de dosis unitarias independientes; los componentes de la combinacin pueden tambin administrarse a diferentes tiempos durante un perodo de tratamiento, o puede administrarse uno como pretratamiento del otro. Dichas dosis pueden administrarse de cualquier forma til para suministrar los compuestos activos de la presente memoria al torrente sanguneo del paciente, incluidas la va oral, por medio de implantes, por va parenteral (incluidas las inyecciones intravenosas, intraperitoneales, intraarticulares y subcutneas), rectal, intranasal, vaginal y transdrmica. Para los efectos de la presente descripcin, se entiende que las administraciones transdrmicas incluyen todas las administraciones a travs de la supercie corporal y los revestimientos interiores de los conductos corporales, incluidos los tejidos epiteliales y las mucosas. Dichas administraciones pueden llevarse a cabo utilizando los compuestos de la presente memoria, o las sales de los mismos farmacuticamente aceptables, en lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, soluciones y supositorios (por va rectal y vaginal). Las formulaciones orales que contienen los compuestos activos de la presente invencin pueden comprender cualquiera de las formas orales utilizadas habitualmente, entre ellas comprimidos, cpsulas, formas para administracin bucofarngea, tabletas, pastillas para chupar, y lquidos, suspensiones o soluciones orales. Las cpsulas pueden contener mezclas del compuesto o compuestos activos con rellenos inertes y/o diluyentes tales como almidones farmacuticamente aceptables (por ejemplo, almidn de maz, de patata o de tapioca), azcares, edulcorantes articiales, celulosas en polvo, tales como celulosas cristalinas y microcristalinas, harinas, gelatinas, gomas, etc. Pueden prepararse formulaciones tiles para comprimidos por mtodos convencionales de compresin, granulacin por va hmeda y granulacin por va seca, utilizando diluyentes, aglutinantes, lubricantes, disgregantes, agentes modicadores de la actividad supercial (incluidos los tensioactivos) dispersantes o estabilizantes, farmacuticamente aceptables, que incluyen, sin limitarse a los mismos, estearato de magnesio, cido esterico, talco, lauril sulfato de sodio, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa calcio, polivinilpirrolidona, gelatina, cido algnico, goma arbiga, goma xantana, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, dextrina, sacarosa, sorbitol, fosfato diclcico, sulfato de calcio, lactosa, caoln, manitol, cloruro de sodio, talco, almidones secos y azcar en polvo. Los agentes preferidos modicadores de la actividad supercial incluyen agentes modicadores de la actividad supercial no inicos e inicos. Ejemplos representativos de agentes modicadores de la actividad supercial incluyen, sin limitarse a los mismos, poloxmero 188, cloruro de benzalconio, estearato de calcio, alcohol cetoestearlico, cera emulsionante de cetomacrogol, steres de sorbitn, dixido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sodio, silicato de magnesio y aluminio, y trietanolamina. Es ms preferible que se utilice el poloxmero 188 como agente modicador de la actividad supercial. Las formulaciones orales descritas en la presente memoria pueden utilizar formulaciones estndar de retardo o de liberacin controlada para alterar la absorcin del compuesto o compuestos activos. Las formulaciones orales preferidas de rapamicina se describen en las patentes U.S. n 5.559.121; n 5.536.729; n 5.989.591 y n 5.985.325, que se incorporan a la presente memoria a ttulo de referencia. En algunos casos puede ser deseable administrar los compuestos directamente en las vas respiratorias en forma de aerosol.

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Los compuestos de la presente invencin tambin pueden administrarse por va parenteral o intraperitoneal. Las soluciones o suspensiones de estos compuestos activos en forma de base libre o de sal farmacuticamente aceptable pueden prepararse en agua mezclada de forma adecuada con un tensioactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones tambin pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles lquidos y mezclas de los mismos en aceites. En
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condiciones normales de almacenamiento y utilizacin, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir la proliferacin de microorganismos.
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Las formas farmacuticas adecuadas para su uso en inyecciones incluyen soluciones o dispersiones acuosas estriles y polvos estriles para la preparacin extempornea de soluciones o dispersiones inyectables estriles. En todos los casos, la forma debe ser estril y debe ser lquida, para que pueda administrarse fcilmente con jeringa. Debe ser estable en las condiciones de preparacin y almacenamiento, y debe protegerse de la accin contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un disolvente o un medio de dispersin que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol lquido), mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales. Las formulaciones parenterales preferidas para la administracin de rapamicina se describen en las patentes U.S. n 5.530.006; n 5.516.770 y n 5.616.588, que se incorporan a la presente memoria a ttulo de referencia. Las formulaciones de supositorios pueden prepararse con materiales tradicionales, entre ellos manteca de cacao, con o sin adicin de ceras para alterar el punto de fusin del supositorio, y glicerina. Tambin pueden utilizarse las bases hidrosolubles de supositorios, tales como polietilenglicoles de varios pesos moleculares. Cuando el 29-enol de rapamicina se utiliza para tratar o inhibir un trastorno vascular hiperproliferativo, tal como reestenosis, es preferible que se administre el dialdehdo de rapamicina por medio de una endoprtesis o derivacin vascular recubierta o impregnada con el 29-enol de rapamicina. A continuacin se presentan los procedimientos para la preparacin de compuestos representativos de la presente invencin.

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Ejemplo 1 (Procedimiento A) Dialdehdo de rapamicina

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Se disolvi rapamicina (5,0 g, 5,5 mmol) en 100 ml de dioxano y 35 ml de agua. Despus se aadieron 61 mg de OsO4 y la reaccin se llev a cabo a temperatura ambiente. Tras agitar durante 30 min (la solucin adquiri color verde oscuro), se aadi metaperyodato de sodio (2,34 g, 10,9 mmol) en porciones durante 30 min. La reaccin se agit durante toda la noche. La reaccin se par por extraccin de la mezcla de reaccin con 200 ml de CH2 Cl2 y se someti a tratamiento, para dar lugar a 5,1 g de producto crudo (66% del rea total del pico para WAY-181340, 12% de rapamicina si reaccionar). El producto crudo se puric por HPLC preparativa en una columna Prep Nova-pak HR C18 (300 x 19 mm) utilizando un mtodo de gradiente que empleaba 65% de A y 35% de B durante los primeros 5 min, y cambiando despus desde 65% de A y 35% de B hasta 10% de A y 90% de B en 30 min. El tampn A est formado por 90% de agua y 10% de acetonitrilo. El tampn B est formado por 10% de agua y 90% de acetonitrilo. El caudal es 20 ml/min. Se recogi la fraccin eluida a los 20-21 min y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgnica se sec con sulfato de sodio anhidro. El disolvente orgnico se elimin utilizando un sistema de evaporacin rotatoria. El residuo se disolvi en 3 ml cloruro de metileno y se precipit aadiendo 15 ml de hexano. Tras la ltracin, el slido blanco se sec en un aparato SpeedVac durante toda la noche. Si el producto no era sucientemente puro, se puricaba nuevamente utilizando 51% de B y 49% de A en la misma columna. Se recogi el pico eluido a los 13 min, y se trat otra vez como se ha descrito anteriormente. Se obtuvo un slido blanco.

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Asignacin de valores para el Compuesto I, DMSO-d6, 400 MHz (13 C: 100 MHz)

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Los iones pseudomoleculares fueron observados con el ion [M-H] a m/z 944 y con el ion [M+NH4]+ a m/z 963 con los modos de electronebulizacin negativa y positiva, respectivamente.
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Ejemplo 1 (Procedimiento B) 42-dialdehdo de rapamicina

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Se disolvi rapamicina (1,0 g, 1,09 mmol) en 250 ml de CH2 Cl2 . El matraz de fondo redondo se coloc en un bao de hielo seco. Se burbuje ozono gaseoso a travs de la solucin durante 6 min (6 l/min, ajuste 7 del botn de control). Despus se agit la mezcla de reaccin durante 1 h. Se aadi sulfuro de metilo (100 I) y la reaccin se agit durante otra hora. La reaccin se par aadiendo 200 ml de agua a la mezcla de reaccin. Se obtuvieron aproximadamente 0,97 g de producto crudo tras el tratamiento (slido blancuzco, 44% del rea total del pico para WAY-181340). Los resultados de CL/EM demuestran que el pico principal es WAY-181340. Ejemplos 2 y 3

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29-enol de rapamicina (Ejemplo 2) y (2E,4S,6R)-6-[(5S,6R)-5-hidroxi-6-metoxi-4-metil-2,3,7-trioxabiciclo[2.2.1] hept-1-il]-4-metilhept-2-enal (Ejemplo 3) Se trat la rapamicina (1,3 g, 1,40 mmol) siguiendo el mismo procedimiento del Ejemplo 1B, con la salvedad de que el ozono gaseoso se burbuje durante 50 min. Se obtuvieron aproximadamente 1,1 g de producto crudo tras el tratamiento (slido blancuzco, 44% del rea total del pico para el dialdehdo del Ejemplo 2). Se aislaron dos picos principales (9,5 min y 14 min) por HPLC preparativa. El Ejemplo 2 (14 min) se obtuvo en forma de slido blanco (50 mg) y el Ejemplo 3 (9,5 min) se obtuvo en forma de aceite transparente (23 mg).
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Asignacin de valores para el compuesto del Ejemplo 2 en DMSO-d6 a 30C, 400 MHz (13 C: 100 MHz)

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Los iones pseudomoleculares para el compuesto II fueron observados con el ion [M-H] a m/z 706 y con el fragmento de ion a 424.
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Para el Ejemplo 3, 1 H RMN (DMSO-d6 , 400 MHz) 9,5 (1H, -CHO), 6,8 (1H, C=CH), 6,1 (1H, C=CH), 5,07 (1H, OH), 3,88, 3,76, 3,3 (3H, -OCH3 ), 2,6, 2,2, 1,7, 1,5, 1,4, 1,10. 13 C RMN (DMSO-d6 , 100 MHz) 194,7, 163,5, 131,6, 112,0, 110,4, 81,1, 73,9, 59,0, 35,6, 28,0, 20,3, 14,0. Los iones pseudomoleculares para el Ejemplo 3 fueron observados con el ion [M-H] a m/z 301 y con el ion [M+NH4]+ a m/z 320 con los modos de electronebulizacin negativa y positiva, respectivamente.

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Estructura qumica del compuesto del Ejemplo 3, (2E,4S,6R)-6-[(5S,6R)-5-hidroxi-6-metoxi-4-metil-2,3,7-trioxabiciclo[2.2.1]hept-1-il]-4-metilhept-2-enal. Ejemplos 4 y 5

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Dialdehdo de 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina (Ejemplo 4) y 29-enol de 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina (Ejemplo 5) Se disolvi 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina (10 mg, 0,01 mmol) en 10 ml de CH2 Cl2 . El matraz de fondo redondo se coloc en un bao de hielo seco. Se burbuje ozono gaseoso a travs de la solucin durante 1 min (2 l/min, ajuste 7 del botn de control). Despus se agit la mezcla de reaccin durante 1 h. Se aadi sulfuro de metilo (5 l) y la reaccin se agit durante otra 0,5 h. Se obtuvieron aproximadamente 9 mg de producto crudo tras el tratamiento. Tras la HPLC preparativa, se obtuvieron 0,5 mg del Ejemplo 4 y 0,24 mg del Ejemplo 5. El modo de ion negativo para el Ejemplo 4 mostr el ion [M-H] a m/z 988,6. Utilizando rapamicina y 42-O-(2hidroxi)etil-rapamicina como patrones internos, la medida de la masa exacta del ion desconocido fue 988,5612 Da, o una composicin elemental de C53 H82 NO16 (masa terica = 988,5634, = 2,2 mDa). El compuesto del Ejemplo 4 contena dos oxgenos ms que la 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina. El peso molecular se conrm adicionalmente con electronebulizacin en modo positivo y permiti comprobar un prominente ion [M+NH4]+ a m/z 1007,6. El Ejemplo 5 present un ion pseudomolecular a m/z 769,4 ([M+NH4]+ ). La medida de la masa exacta fue 769,4487 Da, que corresponden a una composicin elemental de C39 H65 N2 O13 (masa terica = 769,4487, = 0,0 mDa).

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REIVINDICACIONES 1. Compuesto que es 29-enol de rapamicina o un 42-ster o 42-ter de 29-enol de rapamicina; o una sal farmacuticamente aceptable del mismo. 2. Compuesto segn la reivindicacin 1, que es 42-ster de 29-enol de rapamicina con cido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropinico.
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3. Compuesto segn la reivindicacin 1, que es rapamicina que consiste en 29-enol de 42-O-(2-hidroxi)etil-rapamicina. 4. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para estimular el crecimiento de las neuronas en un mamfero. 5. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para estimular la regeneracin nerviosa en un mamfero.

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6. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para estimular el crecimiento de los nervios perifricos daados en un mamfero. 7. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para tratar o inhibir un trastorno neurodegenerativo en un mamfero. 8. Utilizacin segn la reivindicacin 7, en la que el trastorno neurodegenerativo es demencia, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, o esclerosis lateral amiotrca.

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9. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para el tratamiento de lesiones de los nervios perifricos en un mamfero. 10. Utilizacin segn la reivindicacin 9, en la que la lesin de los nervios perifricos es causada por una lesin fsica o un traumatismo. 11. Utilizacin segn la reivindicacin 9, en la que la lesin de los nervios perifricos es causada por una lesin y un traumatismo de la mdula espinal, lesiones del o daos en el nervio citico o facial.

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12. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para el tratamiento de un tumor slido en un mamfero. 13. Utilizacin segn la reivindicacin 12, en la que tumor slido se selecciona de entre el grupo constituido por astrocitomas, cncer de prstata, cncer de mama, cncer de colon, cncer pulmonar de clulas pequeas y cncer ovrico; y leucemia/linfoma de clulas T del adulto. 14. Utilizacin de un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, en la preparacin de un medicamento para el tratamiento o la inhibicin de un trastorno vascular hiperproliferativo en un mamfero. 15. Utilizacin segn la reivindicacin 14, en la que el trastorno vascular hiperproliferativo es reestenosis.

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16. Utilizacin segn la reivindicacin 14, en la que el 29-enol de rapamicina se administra por medio de un extensor o derivacin vascular. 17. Composicin farmacutica que comprende un 29-enol de rapamicina segn cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacutico.

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18. Procedimiento para la preparacin de un 29-enol de rapamicina segn la reivindicacin 1, que comprende una de las siguientes etapas: a) ozonolizar rapamicina, o un 42-ster o 42-ter de rapamicina, para producir el correspondiente 29-enol de rapamicina; o

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b) acilar el 29-enol de rapamicina, protegido opcionalmente en un(os) grupo(s) sustituyente(s) reactivo(s), con un agente acilante, para producir un derivado 42-ster de 29-enol de rapamicina, y eliminar cualquier grupo protector;
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c) etericar el 29-enol de rapamicina, opcionalmente protegido en un(os) grupo(s) sustituyente(s) reactivo(s), para producir un derivado 42-ter de 29-enol de rapamicina, y eliminar cualquier grupo protector.

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