L2 SV CORRIGE du SUJET REVISIONS On tudie quelques proprits de Streptococcus salivarius.

s. Se remmorer les caractristiques vues en cours sur cette bactrie (Streptococcus salivarius) : coque Gram positif, groupement en chanette, arobie-anarobie facultatif, immobile, forme des petites colonies translucides sur glose Trypticase soja, bactrie dite non groupable, appartient au groupe viridans (hmolyse cd verdtre), flore humaine, non pathogne le + souvent (peut donner des endocardites). 1) O trouve-t-on principalement ces bactries ? On trouve ces bactries dans la cavit buccale. 2) On place ces bactries dans 10 mL dune solution renfermant 5 g de sucre alimentaire. a) Quelles structures particulires Streptococcus salivarius pourra-t-il alors synthtiser ? b) Quel est le rle de ces bactries et de ces structures particulires ? c) Reprsentez laspect microscopique de ces bactries ltat frais. Sucre alimentaire = saccharose a. Elles peuvent synthtiser une pseudo-capsule ou zoogle ou glycocalix grce des enzymes quelles scrtent. Il y a hydrolyse du saccharose et polymrisation du fructose (= levane). Plus il y a de saccharose, plus il se forme une zoogle.

b. Ces bactries adhrent entre elles et sur les dents. Elles forment un biofilm dans lequel se mettent des aliments = plaque dentaire. Sil y a calcification, il y a formation du tartre et terme il y a formation de caries et risque de gingivite. La zoogle favorise ladhsion des bactries entre elles et aux surfaces des cellules. Elle favorise la colonisation des tissus et la virulence des bactries. Elle diminue la sensibilit aux phages, aux dsinfectants, aux antibiotiques, la dessication. Elle peut servir de rserve dnergie. c. A ltat frais, on devine la zoogle (rfringence). Dans la zoogle, les bactries sont en chanette et on compte jusqu environ 50 bactries/zoogle.

3) Afin de mettre en vidence le polyoside C parital, on soumet ensuite ces bactries laction du lysozyme. a) Reprsentez le mode daction du lysozyme. b) Donnez les rsultats de la coloration de Gram avant et aprs action du lysozyme. Commentez ces rsultats. c) Quel est lintrt de la mise en vidence du polyoside C dans ltude de ces bactries ? Polyoside C = antigne prsent au niveau du peptidoglycane des streptocoques. Il peut tre identifi par des Ac. a. Voir TD1. b. C+ devient un C- (voir TD1). c. Permet de typer (= grouper) les streptocoques grce un test utilisant des Ac reconnaissant spcifiquement un type de polyoside C (streptocoque de groupe A, B, D, G, ). Ce systme didentification est le systme de Lancefield. Cette classification sert diffrencier les streptocoques pathognes (ex : streptocoque A), les commensaux (ex : streptocoque B qui peut tre trs pathogne chez le nouveaun ; divers streptocoques non groupables de la cavit buccale) et les streptocoques utiles (streptocoques lactiques non groupables). S. salivarius est dit non groupable. 4) On ensemence une colonie de S. salivarius dans 5 mL de bouillon nutritif. On value le nombre de bactries par 2 mthodes : par observation microscopique de 0,2 L, on dnombre 120 bactries, par le dnombrement des bactries viables : on ensemence 0,1 mL dune dilution au millime sur glose nutritive ; aprs incubation, on dnombre 15 colonies. a) Calculez avec chacune des 2 mthodes le nombre de bactries prsentes dans le bouillon. Comparez et commentez ces rsultats.

Microscope. 0,2 l ----------> 120 bactries 5000l (5ml) -----------> ? do ? = 5000 x 120 / 0,2 = 3.106 bactries/5ml Isolement sur glose (dnombrement par la technique de la viabilit cellulaire). 0,1 ml au 1/1000 donne 15 colonies ==> nbre de bactries/5ml = 15 x inverse de la dilution x 5 ml / 0,1 ml = 15 x 1000 x 5 / 0,1 = 7,5.105 bactries/5ml Comparaison des chiffres. 3.106 divis par 7,5.105 = 4 ==> il y a 4 fois moins de bactries dnombres sur la glose que sous le microscope. Explications. - Erreur de dilution - Erreur dchantillonnage (tube non homognis lors du prlvement de 0,1 ml au 1/1000) - Erreur dtalement - 75% des bactries sont mortes (4 fois moins <=> il reste 25% de bactries vivantes) - peu probable - culture frache - Les bactries sassocient 4 par 4 (chanette) ==> 1 UFC (unit formant colonie) contient 4 bactries mais aprs culture ne donne quune colonie. Explication +++ vu le groupement des streptocoques. Pour les streptocoques, on vite le dnombrement par la technique de la viabilit cellulaire sur glose. b) Citez une autre mthode dvaluation du nombre de bactries. Turbidimtre, spectrophotomtre, compteur lectronique c) On incube 1 mL du bouillon nutritif 37C (tube a) et 1 mL 42C (tube b). Aprs 2 heures dincubation, on obtient les rsultats suivants par dnombrement microscopique des bactries : tube a : 240 bactries dans 0,1 L tube b : 480 bactries dans 0,05L Calculez le temps de gnration 37C et 42C. A t=0 h, on compte dans 0,2 l 120 bactries (mth microscopique) cd 0,1 l donne 60 bact. A 37C, on a 240 bactries dans 0,1 l au bout de 2h soit 120 min. On peut calculer n selon la formule N = 2n.N0 vue lors du TD2 en ramenant N et N0 un nombre de bactrie par mme unit de volume. On peut tout ramener 0,1 l et multiplier par 2 (<=> 1 gnration) t = 0 min, 0,1 l donne 60 bactries t = 120 min, 0,1 l donne 240 bactries ==> 60 x 2 = 1 gnration = 120 120 x 2 = 1 gnration = 240 do TG = 120 min / 2 gnrations = 60 min A 42C, on a 480 bactries dans 0,05 l cd 960 bactries pour 0,1 l aprs 2h soit 120 min. On peut calculer n selon la formule N = 2n.N0 vue lors du TD2 en ramenant N et N0 un nombre de bactrie par mme unit de volume. On peut tout ramener 0,1 l et multiplier par 2 (<=> 1 gnration) t = 0 min, 0,1 l donne 60 bactries t = 120 min, 0,1 l donne 960 bactries ==> 60 x 2 = 1 gnration = 120 120 x 2 = 1 gnration = 240 240 x 2 = 1 gnration = 480 480 x 2 = 1 gnration = 960 do tG = 120 min / 4 gnrations = 30 min Daprs ces rsultats, comment qualifie-t-on ces bactries ? Les bactries sont thermophiles.