Gas chromatography (GC), is a common type of chromatography used in analytical chemistry for separating and analyzing compounds that

can be vaporized without decomposition. Typical uses of GC include testing the purity of a particular substance, or separating the different components of a mixture (the relative amounts of such components can also be determined). In some situations, GC may help in identifying a compound. In preparative chromatography, GC can be used to prepare pure compounds from a mixture. In gas chromatography, the mobile phase (or "moving phase") is a carrier gas, usually an inert gas such as helium or an unreactive gas such as nitrogen. The stationary phase is a microscopic layer of liquid or polymer on an inert solid support, inside a piece of glass or metal tubing called a column (an homage to the fractionating column used in distillation). The instrument used to perform gas chromatography is called a gas chromatograph (or "aerograph", "gas separator"). The gaseous compounds being analyzed interact with the walls of the column, which is coated with different stationary phases. This causes each compound to elute at a different time, known as the retention time of the compound. The comparison of retention times is what gives GC its analytical usefulness. Gas chromatography is in principle similar to column chromatography (as well as other forms of chromatography, such as HPLC, TLC), but has several notable differences. Firstly, the process of separating the compounds in a mixture is carried out between a liquid stationary phase and a gas mobile phase, whereas in column chromatography the stationary phase is a solid and the mobile phase is a liquid. (Hence the full name of the procedure is "Gasliquid chromatography", referring to the mobile and stationary phases, respectively.) Secondly, the column through which the gas phase passes is located in an oven where the temperature of the gas can be controlled, whereas column chromatography (typically) has no such temperature control. Thirdly, the concentration of a compound in the gas phase is solely a function of the vapor pressure of the gas. Gas chromatography is also similar to fractional distillation, since both processes separate the components of a mixture primarily based on boiling point (or vapor pressure) differences. However, fractional distillation is typically used to separate components of a mixture on a large scale, whereas GC can be used on a much smaller scale (i.e. microscale). http://en.wikipedia.org/wiki/Gas_chromatography

Jenis HPLC
Terdapat 4 jenis utama teknik HPLC, yaitu jenis HPLC fase normal [Normal-Phase Chromatography (NP)], jenis HPLC fase terbalik [Reversed-Phase HPLC ( RP HPLC, RPLC)], jenis HPLC penukar Ion [ Ion-Exchange Chromatography (IEC)] dan terakhir jenis HPLC Size-Exclusion Chromatography (SEC). Normal-Phase Chromatography (NP) Normal phase HPLC (NP HPLC) merupakan metode yaang mengeksplorasi perbedaan kepolaran antara analit dalam campuran dengan fase diam. semakin kuat interaksi fase diam

dengan analit, semakin lama retensi analit. Seperti halnya teknik kromatografi cair, pemisahan NP HPLC adalah proses kompetisi. Molekul analit bersaing melakukan adsorpsi dengan molekul fase gerak pada permukaan fase diam. Semakin kuat fase gerak berinteraksi dengan fase diam, maka semakin rendah interaksi antara fase diam dengan analit, dan dengan demikian semakin rendah retensi analit. Fase gerak NP HPLC didasarkan pada pelarut nonpolar (seperti heksana, heptana, dll) dengan sedikit penambahan senyawa polar. Senyawa polar yang biasa digunakan adalah alkohol (metanol, etanol, atau isopropanol). Variasi konsentrasi senyawa polar pada fase gerak dimaksudkan untuk mengontrol retensi analit dalam kolom. Karena kepolarannya yang dominan, penambahan senyawa polar ke dalam fase gerak relatif sedikit, meskipun hanya 1 %v/v variasi senyawa polar pada fase gerak biasanya menghasilkan perubahan retensi analit yang signifikan. Bahan yang digunakan pada fase diam dalam normal phase HPLC biasanya berpori oksida seperti silika (SiO2) atau alumina (Al2O3). Permukaan fase diam ditutupi dengan gugus OH, yang membuat permukaan menjadi sangat polar. Retensi analit pada permukaan semacam ini sangat sensitif terhadap variasi komposisi fase gerak. Modifikasi kimiawi fase diam juga dapat digunakan dalam HPLC fase normal. Trimethoxy glycidoxypropyl silanes (nama umum: diol-fase) adalah bahan dengan polaritas permukaan lebih rendah yang digunakan untuk memodifikasi silika. Kepadatan permukaan Kelompok OH pada fase diol adalah pada tingkat 3-4mol/m2, sedangkan pada silika silanols kepadatan permukaannya adalah pada tingkat 8mol/m2. Dengan menggunakan fase diam jenis diol dan pengubah polaritas eluen [ester (etil asetat) bukan dari alkohol] memungkinkan untuk meningkatkan pemisahan analit dan meningkatkan reproduktifitas dibandingkan dengan menggunakan silika. http://sanagory.blogspot.com/2012/02/jenis-hplc.html The opposite of normal phase, or Reversed Phase Chromatography, results from the adsorption of hydrophobic molecules onto a hydrophobic solid support in a polar mobile phase. Decreasing the mobile phase polarity by using organic solvents reduces the hydrophobic interaction between the solute and the solid support resulting in de-sorption. The more hydrophobic the molecule the more avidly it will adsorb onto the solid support. This requires a higher concentration of organic solvent to promote de-sorption. Reversed phase chromatography is another very powerful technique and it is effective for the separation of a very wide range of molecules. However, at process scale it is not typically used for proteins, due to the presence of the organic solvent which denatures many proteins and destroys their biological activity. Reversed phase chromatography is used very frequently as an analytical technique and there are many different stationary phases available for method optimization. http://www.separations.eu.tosohbioscience.com/ServiceSupport/TechSupport/ResourceCente r/PrinciplesofChromatography/ReversedPhase/ Ion Exchange Chromatography The most popular method for the purification of proteins and other charged molecules is ion exchange chromatography. In cation exchange chromatography positively charged molecules are attracted to a negatively charged solid support. Conversely, in anion exchange chromatography, negatively charged molecules are attracted to a positively charged solid support.

Mechanism To optimize binding of all charged molecules, the mobile phase is generally a low to medium conductivity (i.e., low to medium salt concentration) solution. The adsorption of the molecules to the solid support is driven by the ionic interaction between the oppositely charged ionic groups in the sample molecule and in the functional ligand on the support. The strength of the interaction is determined by the number and location of the charges on the molecule and on the functional group. By increasing the salt concentration (generally by using a linear salt gradient) the molecules with the weakest ionic interactions start to elute from the column first. Molecules that have a stronger ionic interaction require a higher salt concentration and elute later in the gradient. The binding capacities of ion exchange resins are generally quite high. This is of major importance in process scale chromatography, but is not critical for analytical scale separations. Varying pH Many chromatographers also use changes in pH to affect a separation. In cation exchange chromatography, raising the pH of the mobile phase buffer will cause the molecule to become less protonated and hence less positively charged. The result is that the protein no longer can form a ionic interaction with the negatively charged solid support, which ultimately results in the molecule to elute from the column. In anion exchange chromatography, lowering the pH of the mobile phase buffer will cause the molecule to become more protonated and hence more positively (and less negatively) charged. The result is that the protein no longer can form a ionic interaction with the positively charged solid support which causes the molecule to elute from the column. http://www.separations.us.tosohbioscience.com/ServiceSupport/TechSupport/ResourceCenter /PrinciplesofChromatography/IonExchange Size Exclusion Chromatography Size Exclusion Chromatography (SEC) is the separation technique based on the molecular size of the components. Separation is achieved by the differential exclusion from the pores of the packing material, of the sample molecules as they pass through a bed of porous particles. The principle feature of SEC is its gentle non-adsorptive interaction with the sample, enabling high retention of biomolecular activity. http://www.separations.us.tosohbioscience.com/ServiceSupport/TechSupport/ResourceCenter /PrinciplesofChromatography/SizeExclusion/ The factors that affect retention time depends on the separation mode that you are using. If you're using a polar stationary phase (like bare silica) then you are probably running Normal Phase or HILIC. In that case your retention is going to be based largely on the polarity of your compound. More hydrophilic (polar) compounds will stay on the column longer and have a larger retention time. Reversed phase is the opposite (hence the name). The stationary phase is hydrophobic, so hydrophilic compounds spend less time on the column and come out sooner. If you're looking to separate based on molar mass then SEC is your best bet, but it doesn't have great resolution, especially for small molecules (less than 2,000-4000 Amu). http://answers.yahoo.com/question/index?qid=20090314045116AADs2lD

2.2

APLIKASI HPLC

Beberapa aplikasi HPLC dalam kehidupan : HPLC dengan prinsip kromatografi banyak digunakan pada industri farmasi dan pestisida. Zat- zat dengan kepolaran berbeda yaitu antara sedikit polar sampai polar dapat dipisahkan dengan HPLC berdasarkan partisi cair-cair. Asam-asam nukleat dapat dipisahkan dengan kolom penukar ion yang dikombinasikan dengan kolom butiran berlapis zat berpori Morfin, heroin dan semacamnya telah dapat dipisahkan dengan rezin Zipax-SAX. Dapat memisahkan vitamin-vitamin yang larut dalam air.
2.2.1

Analisis Anion Nitrat (NO3-)

Nitrat sebagai hasil proses alami atau industri akan bisa memasuki bahan alam atau bahan industri seperti air yang sangat dibutuhkan manusia atau untuk kebutuhan industri. Kandungan dalam jumlah tertentu akan sangat mempengaruhi kualitas air tersebut. Untuk itu diperlukan suatu metode analisis yang teruji untuk mengukur kandungan nitrtat tersebut. Dengan menggunakan HPLC sebagai instrumen analisis dan dengan pengembangan metode dapat diketahui validitas penggunaan HPLC untuk analisis anion nitrat. Dari beberapa model pemutakhiran HPLC diketahui metode analisis HPLC dengan kolom IC Pak Anion serta eluen campuran Na-Borat glukonat : Butanol : Asetonitril (1:1:10) dan detektor Konduktivitas dapat menganalisis ion nitrat dalam air tangki reaktor, dengan batas deteksi 3,661 ppm dan sensitivitas 0,01 ppm serta uji recovery 110,41+ 1,59%.
2.2.2

Analisis Vitamin C

Metode HPLC juga dapat digunakan sebagai dasar dari analisis vitamin C, yakni dalam menentukan susunan kimianya.Susunan kimia vitamin C ditemukan pada tahun 1933 oleh ilmuwan Inggris dan Swiss. Isolasi asam askorbat mula-mula ditemukan oleh King dari USA dan Szent-Gyorgy dari Hungaria. Vitamin ini mempunyai dua bentuk, yaitu bentuk oksidasi (bentuk dehydro) dan bentuk reduksi. Kedua bentuk ini mempunyai aktivitas biologi. Dalam makanan bentuk reduksi yang terbanyak. Banyak dehydro dapat terus teroksidasi menjadi diketogulonic acid yang inaktif.
2.2.4

Pengukuran Tingkat Kematangan Buah Manggis

Mutu buah-buahan segar saat ini umumnva masih dievalusi secara manual yang menggunakan tanda-tanda visual seperti warna kulit. Hasil evaluasi visual yang hanya menilai sifat fisik bagian luar ini tidak selalu mencerminkan tingkat kematangan dan kerusakan bagian dalam buah. Bila ingin menentukan mutu bagian dalam buah harus digunakan cara kimia basah (HPLC) yang bersifat merusak. Dalam menanggulangi masalah ini perlu dilakukan suatu penelitian mengenai teknologi tertentu yang dapat dimanfaatkan untuk menentukan mutu bagian dalam buah-buahan secara tidak merusak. http://rafizanisa.blogspot.com/2009/12/analisis-hplc-dan-aplikasinya.html

Aplikasi kromatografi gas Kromatografi gas telah digunakan pada sejumlah besar senyawa-senyawa dalam berbagai bidang. Dalam senyawa organic dan anorganik, senyawa logam, karena persyaratan yang digunakan adalah tekanan uap yang cocok pada suhu saat analisa dilakukan. Berikut akan kita lihat beberapa kegunaan kromatografi gas pada bidang-bidangmya adalah : a. Polusi udara Kromatografi gas merupakan alat yang penting karena daya pemisahan yang digabungkan dengan daya sensitivitas dan pemilihan detector GLC menjadi alat yang ideal untuk menentukan banyak senyawa yang terdapat dalam udara yang kotor, KGCdipakai untuk menetukan Alkil-Alkil Timbal, Hidrokarbon, aldehid, keton SO , H S, dan beberapa oksida dari nitrogen dll Obat Diklinik kromatografi gas menjadi alat untuk menangani senyawa-senyawa dalam klinik seperti : asam-asam amino, karbohidrat, CO , dan O dalam darah, asam-asam lemak dan turunannya, trigliserida-trigliserida, plasma steroid, barbiturate, dan vitamin Bahan-bahan pelapis Digunakan untuk menganalisa polimer-polimer setelah dipirolisa, karet dan resinresin sintesis Minyak atsiri Digunakan untuk pengujian kulaitas terhadap minyak permen, jeruk sitrat, dll Bahan makanan Digunakan dengan TLC dan kolom-kolom, untuk mempelajari pemalsuanatau pencampuran, kontaminasi dan pembungkusan dengan plastic pada bahan makanan, juga dapat dipakai unutk menguji jus, aspirin, kopi dll Perminyakan Kromatografi gas dapat digunakan unutk memisahkan dan mengidentifikasi hasilhasildari gas-gas hidrokarbon yang ringan http://ariffadholi.blogspot.com/2009/10/oleh-najiullah-2007-kromatografi-gasi.html

b.

c.

d. e.

f.