I.

TITULO :

DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO

II. INTROUDCCION :

Casena La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, cido pantotico y vitaminas A, D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fsforo y metales en pequeas cantidades), protenas (incluyendo todos los aminocidos esenciales), carbohidratos (lactosa) y lpidos. Los nicos elementos importantes de los que carece la leche son el hierro y la vitamina C. Las protenas se pueden clasificar de manera general en protenas globulares y fibrosas. Las protenas globulares son aquellas que tienden a agregarse en formas esferoidales y no establecen interacciones intermoleculares como son los puentes de hidrgeno (caractersticos de las protenas fibrosas) siendo solubilizadas en suspensiones coloidales. En la leche hay tres clases de protenas: casena, lacto albminas y lacto globulinas (todas globulares). La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoproteinas son un grupo de protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido fosfrico. En la casena la mayora de los grupos fosfato estn unidos por los grupos hidroxilo de los aminocidos serina y treonina. La casena en la leche se encuentra en forma de sal clcico (caseinato clcico). La casena representa cerca del 77% al 82% de las protenas presentes en la leche y el 2,7% en composicin de la leche lquida. La casena est formada por alpha alpha(s2)casena, -casena, y kappa-casena formando una micela o unidad soluble. Ni la alfa ni la beta casena son solubles en la leche, solas o combinadas. Si se aade la kappa casena a las dos anteriores o a cada una de ellas por separado se forma un complejo de casena que es solubilizado en forma de micela. Esta micela est estabilizada por la kappa casena mientras que las alfa y beta son fosfoprotenas que precipitan en presencia de iones calcio.

Punto isoelctrico Todas las macromolculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan en agua. Una caracterstica de las protenas y otros biopolmeros es que la carga total que adquieren depende del pH del medio. As, todas las protenas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se encuentren y de los aminocidos que la componen, as como de las cargas de cualquier ligando que se encuentre unido a la protena de forma covalente (irreversible). Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos. Cualquier protena tendra una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente cido debido a que los grupos COOH de los aminocidos asprtico y glutmico estaran en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estaran protonados (-NH3 +). De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH muy alto estara cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estaran desprotonados (COO-) y los grupos amino estaran en su forma neutra (NH2) De lo anterior se deduce que las protenas tienen un pH caracterstico al cual s carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoelctrico (pI) En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas por lo que la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregacin Si suponemos una protena formada nicamente por aminocidos sin grupos laterales ionizables la carga neta de la protena dependera exclusivamente de la protonacin / desprotonacin de los grupos amino y carboxilo terminal. En la realidad las protenas estn formadas por multitud de aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos y la carga va a depender de los grupos ionizables que poseen los aminocidos que la componen (anexo I) y del pH del medio.

III. MATERIAL Y METODOS

IV. PROCEDIMIENTO

Preparacin de la casena

Se utilizaron 9 tubos de ensayo en el primer tubo se agrego 3.2 de acido actico y 6.80 ml de agua haciendo un total de 10 ml y de esta solucin se saco 5 ml y se agrego al segundo tubo y se completo con 5 ml de agua y as sucesivamente has llegar al noveno tubo y tambin se saco los 5 ml y se elimin.

Se agreg 1 ml c/t casena con acetato de sodio 0.1N y observar

Luego de 30 minutos observar

Calentar y observar

Se agreg gotita de fenolftalena y se neutraliza con NaOH.

V. RESULTADOS 1. Primer tubo de ensayo : cido Actico 1.6 mL pH = 4.7 + log 1 16 pH = 3.4959

2. Segundo tubo de ensayo : cido actico 0.8 mL pH = 4.7 + log 1

8 pH = 3.7969
3. Tercer tubo de ensayo : cido actico 0.4 mL

pH = 4.7 + log 1 4 pH = 4.0979

4. Cuarto tubo de ensayo : cido actico 0.2 mL

pH = 4.7 + log 1 2 pH = 4.399

5. Quinto tubo de ensayo : cido actico 0.1 mL

pH = 4.7 + log 1 1 pH = 4.7

6. Sexto tubo de ensayo : cido actico 0.05 mL

pH = 4.7 + log 1 0.5 pH = 5.001

7. Stimo tubo de ensayo : cido actico 0.025 mL

pH = 4.7 + log 1 0.25

pH = 5.3020

8. Octavo tubo de ensayo : cido actico 0.0125mL

pH = 4.7 + log 1 0.125 pH = 5.6031

9. Noveno tubo de ensayo : cido actico 0.00625 mL

pH = 4.7 + log 1 0625 pH = 5.9041

VI. DISCUSION Cul es el punto isoelctrico de la casena? El punto isoelctrico (pI) de la casena es 4.6. A este pH, la casena se encuentra en su punto de menor solubilidad, debido a la reduccin de repulsiones intermoleculares, por lo que precipita.

Por qu las protenas tienen solubilidad mnima en el pH?

Aparenta deberse a un exceso de grupos catinicos o aninicos expuestos en la superficie de la protena. Si la protena est negativamente cargada a pH mayores de su punto isoelctrico, cuando dos protenas chocan una con la otra las cargas negativas se repelen y no se aglomeran como se esperara de molculas grandes. Sin embargo, en el punto isoelctrico de la protena no existe carga neta. Cuando un extremo negativo de una protena se encuentra de frente con el extremo positivo de otra protena, la atraccin electroesttica causa que las dos protenas se peguen. Otras protenas tropiezan con el dmero y se unen al grupo. Eventualmente, un nmero grande de protenas formaran un agregado tal, que la protena precipita. En este experimento, casena (pI = 4.6) se precipitar a partir de de la leche (pH _7) por adicin de cido actico glacial.

VII.CONCLUSIONES

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS

http://www.ehu.es/biomoleculas/1b/pdf/proteinas.pdf http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Unidad_2_Aminoacidos,_peptidos_y_protein as_1887.pdf

http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-mol/pdfs/07%20MEDIDA %20pH.pdf

http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/biotec_FQbiomol/Practica3FQB.pdf http://html.determinacion-de-proteinas.html