EVALUACIN DE LA VIABILIDAD EN EL TIEMPO PARA MUESTRAS DE ESPORAS PURAS Y EN FORMULACIN LQUIDA DE Paecilomyces lilacinus.

AREQUIPA - 2011 Vargas Blanco, Diego Alonso Laboratorio de produccin, Novagri S.A.C, Arequipa Per e-mail: novagrisac@gmail.com

RESUMEN. Se realiz un estudio para determinar la viabilidad de las esporas puras almacenadas en refrigeracin a 4-6C a travs del tiempo, los resultados indicaron que a los 5 meses aun conservan una viabilidad superior al 91.85%. Un segundo estudio se realiz en formulaciones lquidas de Paecilomyces lilacinus producidas por Novagri S.A.C., se evalu la viabilidad en dos tratamientos: En refrigeracin a 5 C (A) y en lugar fresco y seco a una temperatura de 21-26C (B). Los resultados mostraron que en A el formulado puede almacenarse refrigerado hasta 6 meses sin mostrar un valor de viabilidad menor al 91.2% en el sexto mes; mientras que bajo el tratamiento B, luego de 4 meses la viabilidad disminuy hasta un 90.0%. ABSTRACT. A study was performed to determine the viability of spores stored in pure refrigeration at 4-6 C over time, the results showed that after 5 months they still had a viability higher than 91.85%. A second study was performed over liquid formulations of Paecilomyces lilacinus produced by Novagri SAC, viability was measured in two treatments: In refrigeration at 4 - 6 C (A) and in a cool, dry place at 21-26 C (B). The results showed that the formulations in A treatment can be stored until 6 months without reducing its viability less than 91.2% in the sixth month; while under treatment B, after 4 months the viability decreased to 90.0%.

INTRODUCCIN
Paecilomyces lilacinus, es el enemigo natural de muchos gneros de nemtodos y algunos insectos como mosca blanca y chinches. Es efectivo para nematodos de los gneros Meloydoginae, Pratelynchus y Radophulus (Plantisana vegetal), adems Paecilomyces lilacinus acta como un buen colonizador de raz y competidor de rizsfera (Chen, Dickson, & Mitchell, 2000). Debido la elevada demanda de este controlador biolgico en nuestro pas, es que ha surgido la necesidad de adicionarlo como producto comercial. En estudios realizados en Trichoderma spp, se determin que el mejor mtodo para el secado del sustrato es la que involucra el uso de un equipo aire acondicionado para regular la temperatura y humedad ambiental a valores promedio de 19C y 40% respectivamente (Vargas Blanco, 2011). Se adopt la misma metodologa para el secado de este hongo sobre el sustrato, as como el mtodo de recoleccin de esporas haciendo uso de cernidores metlicos. En este trabajo de investigacin se evaluar la viabilidad a travs del tiempo para muestras de esporas puras y en formulados en aceites minerales; ambos mtodos fueron seleccionados por su capacidad para reducir el metabolismo del hongo (Centro Internacional de la Papa (CIP), 2004). El primer objetivo de este trabajo es llevar a cabo el control mensual de viabilidad en 3 lotes de esporas de Paecilomyces lilacinus (A,B y C), cuyos valores de humedad al momento de la recoleccin fueron de 13.3% y que fueron almacenados bajo refrigeracin a una temperatura entre 4 - 6 C. Debido a que es mucho mejor la aplicacin de formulados lquidos (mayor facilidad en la tarea de suspensin de esporas en el agua), pero no se conocen las mejores condiciones para el almacenamiento de estos formulados, se plantea un segundo, el cual es determinar el tiempo mximo de almacenamiento de formulados de Lilanova bajo refrigeracin a una temperatura de 4 - 6 C (A) y en un

Novagri S.A.C.

ambiente fresco ambiente de (B).

seco

temperatura

MATERIALES Y MTODOS Obtencin de la cepa:

Para la primera parte se utiliz una cepa de Paecilomyces lilacinus previamente probada, la cual pertenece al cepario del laboratorio Novagri S.A.C.

y se adicion una gota de azul de lactofenol por cada uno, luego se llev a observacin bajo el microscopio, se contaron 200 conidias anotando cuantas haban germinado y cuantas no; finalmente se obtiene un promedio de los cuadrantes para hallar el porcentaje de viabilidad (Gmez Ramrez, 2007). Se trabajaron 4 repeticiones por cada muestra.

Determinacin de la viabilidad de las muestras en formulado:

Para determinar la viabilidad en formulados lquidos se prepar diluciones tomando1 mL de la muestra lquida para suspenderla en 10 mL de ADE y se llev hasta diluciones de hasta 10-3. Luego se repite el mismo procedimiento utilizado para muestras de esporas puras. Se trabajaron 4 repeticiones por cada muestra.

Preparacin de las muestras:

Se seleccionaron esporas puras de Paecilomyces lilacinus, se tomaron tres muestras representativas correspondientes a 3 lotes: A, B y C. Dichas esporas fueron obtenidas bajo el proceso de secado y recoleccin bsico de Novagri S.A.C. (Vargas Blanco, 2011). La humedad de todas las muestras es de 13.3% al momento de la recoleccin, fueron almacenadas de forma adecuada y bajo refrigeracin a 5 C por el tiempo que requiera el ensayo. Para el segundo objetivo, se prepararon 4 formulaciones lquidas de Lilanova (Paecilomyces lilacinus + inertes). Las formulaciones fueron de 50 mL y actuaron como muestras representativas del producto comercial. Las muestras sometidas al primer tratamiento (A) se mantuvieron bajo conservacin en refrigeracin a 5 C, mientras que las muestras sometidas al segundo tratamiento (B) se mantuvieron en un ambiente fresco y seco a una temperatura entre 21 26 C.

Tiempos de anlisis:
Se evaluar la viabilidad una vez por mes.

RESULTADOS
Para la primera parte se demostr que el mtodo de secado en combinacin con el de recoleccin de esporas, ms una conservacin bajo refrigeracin, pueden conservar las esporas puras con una viabilidad promedio de 91.9% luego de 5 meses de controles. La Tabla 1 muestra los valores de viabilidad por cada mes de anlisis. En el Grfico 1 se muestra una representacin de la viabilidad de las tres muestras en el tiempo. Para la segunda parte, se consiguieron notables diferencias entre el tratamiento A y B. En la tabla 2 se muestran los valores de viabilidad luego de 6 meses de estudios. Se comprob que la viabilidad de Lilanova puede mantenerse en 91.2% hasta por seis meses, mientras se conserve en refrigeracin entre 4 - 6 C; sin embargo, si no es as, la viabilidad sera de 90% luego de transcurridos 4 meses, para finalmente llegar a menos del 50% luego del quinto mes. En el Grfico 2 se muestra la disminucin de la viabilidad luego de 4 meses de anlisis.

Determinacin de la viabilidad de las muestras de esporas puras:

Para determinar la viabilidad se tomaron muestras de 0.1 gramos, se suspendieron en 10 mL de Agua Destilada Estril (ADE) y se llev hasta diluciones de hasta 10-3. Se dej reposar la suspensin por 72 horas, luego se procedi a verter 0.1 mL en una placa Petri conteniendo medio PDA (Potato Dextrose Agar) y a extenderlo con un asa de Digralsky. A las 24 horas se retir 5 cuadrantes de 1 cm2 por placa, se posicionaron sobre cubreobjetos

Novagri S.A.C.

ANEXO 1 TABLAS

TABLA 1. VALORES DE VIABILIDAD PARA ESPORAS CONSERVADAS EN REFRIGERACIN POR 5 MESES.

PURAS

DE

Paecilomyces lilacinus

Paecilomyces lilacinus
0 30 60 90 120 150 A 95.6% 95.0% 94.7% 93.8% 92.7% 91.9% B C

95.5% 95.0% 94.7% 93.7% 92.7% 91.8%

95.5% 95.1% 94.8% 93.9% 92.8% 92.0%

Viabilidad, %

TABLA 2. VALORES DE VIABILIDAD HASTA 120 DAS DESPUS DE LA FORMULACIN DEL PRODUCTO BASADO EN Paecilomyces lilacinus.

Viabilidad, %

TRATAMIENTO TIEMPO, das

0 30 60 90 120 150 180 A B

Con refrigeracin
96.8%
96.4% 94.3% 93.9% 92.2% 91.9% 91.2%

Sin refrigeracin
96.8%
96.2% 94.0% 93.7% 90.0% 49.0% 40.0%

Viabilidad, %

Viabilidad, %

Novagri S.A.C.

ANEXO 2 GRFICOS

GRFICO 1. Grafico de lnea para esporas puras de Paecilomyces lilacinus, mostrando la disminucin en el porcentaje de viabilidad a lo largo de 5 meses de conservacin en refrigeracin a 5C.

GRFICO 2. Grafico de lnea para los tratamientos A (con refrigeracin) y B (sin refrigeracin), mostrando la disminucin en el porcentaje de viabilidad a lo largo de 6 meses desde la preparacin del formulado.

Novagri S.A.C.

BIBLIOGRAFA
Centro Internacional de la Papa (CIP). (2004). Manual de Laboratorio para el Manejo de Hongos Entomopatgenos. (V. Caedo, & T. Ames, Edits.) Lima, Per. Centro Nacional de Investigaciones del caf. (2008). Tcnicas para el control de calidad de formulaciones de hongos entomopatgenos. (P. Vlez, F. Posada, P. Marin, M. Gonzalez, E. Osorio, & A. Bustillo, Edits.) Boletn Tcnico No. 17 , 35. Chen, S. Y., Dickson, D. W., & Mitchell, D. J. (2000). Viability of Heterodera glycines exposed to fungal filtrates. Journal of Nematology , 32 (2), 190-197. Gmez Ramrez, H. (2007). Manual De Produccin y Uso De Hongos Antagonistas. , Arequipa, Per. SENASA, Laboratorio de Antagonistas SCB, Arequipa - Per. Morales Mallery, R. (2006). Manejo de nemtodos fitoparasticos utilizando productos naturales y biolgicos. Tesis, Universidad de Puerto Rico, Mayagez. Plantisana vegetal. (s.f.). Microorganismos benficos: Paecilomyces lilacinus. Recuperado el noviembre de 2011, de http://www.doctor-obregon.com Rosero lvarez, M. E., & Olivarez Yachimba, L. J. (2010). Diseo y construccin de un equipo mixto de tamizado y secado para la separacin de esporas de hongos del amaranto y su uso como bioplaguicida. Escuela superior politcnica de chimborazo, facultad de ciencias, Riobamba - Ecuador. Roussos, S., Bagnis, C., Rodriguez, W., Aquihauatl, M.-A., Besnard, O., & Duponnois, R. Control biolgico de plagas del cafeto: Produccin y secado de biopesticidas en fermentaciones en medio slido. The University of Adelaide. (2011). Micology online: Lactophenol Cotton Blue. Recuperado el noviembre de 2011, de http://www.mycology.adelaide.edu.au/ Vargas Blanco, D. A. (2011). Evaluacin del proceso convencional de propagacin, esporulacin y recoleccin de esporas d euna cepa del hongo Trichoderma harzianum. Parte II. Novagri S.A.C., Arequipa.

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