Extraccin del aceite de las microalgas para la produccin de biodiesel

RESUMEN Este estudio examina el desempeo de dixido de carbono supercrtico (SCCO2) la extraccin y la extraccin de hexano de los lpidos de la marina Chlorococcum sp. para la produccin de biodiesel a escala de laboratorio. Si bien la cepa de Chlorococcum sp. utilizado en este estudio tuvieron un rendimiento mximo de lpidos de baja (7,1% en peso de biomasa seca), los lpidos extrados muestran un perfil de cidos grasos adecuada para C18 [biodiesel: 1 (63% en peso), C16: 0 (19wt%), C18: 2 (4% en peso), C16: 1 (4% en peso), y C18: 0 (3% en peso)]. Para la extraccin SCCO2, la temperatura disminuye y la presin creciente de los rendimientos como resultado del metabolismo lipdico. El coeficiente de transferencia de (k) para su extraccin en condiciones supercrticas, detectndose un incremento de lquido constante dielctrica, as como la densidad del fluido. Para la extraccin de hexano, un funcionamiento continuo con un aparato de Soxhlet y la inclusin de isopropanol como los rendimientos de los lpidos cosolvente mejorada. extraccin de hexano de cualquiera en polvo o en pasta de microalgas microalgas hmedo obtenido rendimientos comparables de los lpidos.

1. Introduccin

La tasa de agotamiento de los combustibles fsiles y el efecto de invernadero las emisiones de gases sobre el cambio climtico global est creando mucho inters de biodiesel (Lang et al., 2001; Lee et al., 2010). La produccin comercial de biodiesel o ster metlico de cidos grasos (FAME) por lo general implica transesterificacin alcalina catalizada de triglicridos encontrado en los cultivos de semillas oleaginosas (principalmente la colza en Europa y la soja en los EE.UU.) con metanol. Sin embargo, la demanda creciente de estos cultivos como fuente de alimento junto con la disponibilidad limitada de tierras cultivables hace que su cultivo para biocombustibles sostenibles (Chisti, 2007). Las microalgas han sido reconocidos como una alternativa prometedora fuente de lpidos biodiesel convertibles. Ellos son un grupo de diversos organismos fotosintticos que se pueden acumular importantes cantidades de lpidos - hasta el 50% del peso seco de clulas de ciertas especies (Chisti, 2007; Sheehan et al., 1998). Muchas especies de microalgas puede

crecer en agua salobre o agua de mar, evitando as la demanda de agua dulce, un recurso limitado en muchas partes del mundo (Umdu et al., 2009). A pesar del uso rutinario de la extraccin a escala de laboratorio para determinar contenido en lpidos de las microalgas, las variables que afectan a la extraccin de los lpidos a partir de microalgas no se conocen bien, haciendo escala en marcha de produccin comercial de biodiesel de microalgas difcil. Por otra parte, la mayora de los estudios acerca de la composicin lipdica de las microalgas no para evaluar la idoneidad de los lpidos extrados para la produccin de biodiesel ya que en lugar de centrarse en nutracuticos y aplicaciones maricultura (De Angelis et al., 2005; Herrero et al., 2006; Ramadn et al., 2008; Sajilata et al., 2008). Un proceso de extraccin de lpidos ideal para la produccin de biodiesel de microalgas tiene que ser no slo de lpidos especficos con el fin de minimizar el co-extraccin de lpidos no contaminantes sino tambin selectiva hacia las fracciones lipdicas deseable (neutro lpidos que contienen cadenas de cidos grasos mono-, di-, y trienoic cido) (Fajardo et al., 2007; Medina et al., 1998). Las microalgas son cultivadas en un ambiente acuoso y la eliminacin de contenido de agua ms all de una consistencia de la pasta (normalmente 10-30% en peso de biomasa seca) es la energa intensiva. Como consecuencia, la tecnologa de extraccin de lpidos seleccionados debe ser eficaz cuando se aplica directamente a una materia prima hmeda. dixido de carbono supercrtico (SCCO2) la extraccin es una prometedora tecnologa verde que potencialmente puede desplazar el uso de los conocimientos tradicionales disolventes orgnicos para su extraccin. Ventajas asociadas con la extraccin de SCCO2 incluyen la energa sintonizable solubilidad, baja toxicidad del fluido supercrtico, equilibrio favorable a la transferencia de masa debido a la difusin intermedia / propiedades de viscosidad del fluido, y la produccin de extracto libre de solvente (Macas-Snchez et al., 2007; Mendes et al., 2006; Pourmortazavi y Hajimirsadeghi, 2007; Taylor, 1996; Thana et al., 2008). La principal desventaja del proceso de es alto costo asociado con su infraestructura y funcionamiento. A pesar de que el cloroformo basado en el clsico de extraccin de lpidos Folch protocolo es efectiva para la mayora de los anlisis de los lpidos de las microalgas, un mtodo alternativo de disolvente orgnico que es ms fcil de usar es necesarios para la expansin. Hexano, a pesar de ser denunciadas a ser menos eficiente que el cloroformo en la extraccin a partir de microalgas, es menos txicos, tiene afinidad mnima hacia los contaminantes no lipdicos, y selectivo que muestran ms hacia fracciones de lpidos neutros (Lee et al., 1998; Medina et al., 1998). En este estudio, el rendimiento de la extraccin

SCCO2 y hexano de extraccin se evalu con base en el rendimiento y el cido graso composicin de los lpidos extrados de microalgas bajo diferentes condiciones. La idoneidad de los lpidos extrados de microalgas para la produccin de biodiesel y se evalu la cintica de extraccin de los dos sistemas se compar. Los estudios preliminares que evaluaron la viabilidad de la aplicacin de cada sistema de extraccin de mojar miroalgal Tambin se realizaron pasta. Por ltimo, un modelo de transferencia de masa se ajusta la extraccin de datos SCCO2 para comprender el efecto del proceso variables sobre la cintica de extraccin.
2. Mtodos

2.1. Productos qumicos reactivos FAME normas y los catalizadores de metilacin (10% en peso de H2SO4 en metanol y 25% en peso KCH3O en metanol) se obtuvieron de Sigma-Aldrich Pty. Ltd. (Australia). Todos los disolventes orgnicos (n-hexano, isopropanol y metanol) fueron de grado analtico. 2.2. Colar y cultivo La cepa de microalgas utilizadas para este estudio fue un Chlorococcum sp. cultivadas en biorreactores bolsa de aire libre. La especie tena una alta tasa de crecimiento, bien en condiciones de sobrevivir al aire libre (al Danquah et al., 2009), y se muestran las tolerancias de temperatura durante el perodo del estudio. Un medio de F fue utilizada en este estudio. El medio se compuesto de 150,0 mg / L NaNO3, 22,7 mg / L Na2SiO3? 5H2O, 11,3 mg / L NaH2PO4? 2H2O, 9,0 mg / L C6H8O7? XFE, 9,0 mg / L C6H8O7, 0,360 mg / L MnCl2? 4H2O, 0,044 mg / L ZnSO4? 7H2O, 0,022 mg / L CoCl2? 6H2O, 0,020 mg / L CuSO4? 5H2O, 0,013 mg / L Na2MoO4? 2H2O, traza la vitamina B12, biotina, tiamina y disuelto en sntesis agua de mar. Cada biorreactor tena aproximadamente 100 L de microalgas la cultura y fue aireado con aire comprimido. La temperatura y la intensidad de la iluminacin eran dependientes de las condiciones meteorolgicas del da a da condiciones.

2.3. Desage Microalgas culturas de biorreactores mltiples (? 1200 L con un concentracin de 0,7 g microalgas secas / L) han sido recolectados en el mismo tiempo y deshidratados con un disco de Westfalia pila de centrfuga. El concentrado (10 L con una concentracin de? 80 g secos microalgas / L) se mezcl bien para promediar las discrepancias potenciales en el contenido de lpidos entre las culturas de la cosecha biorreactores diferentes. Una parte del concentrado (2,5 L) se deshidratan ms utilizando una centrfuga de mesa (Heraeus Multifuge 3 SR, Kendro, Alemania) a 4500 rpm durante 10 min. El trarse fue descartado y la pasta resultante de microalgas (? 0,67 L con una concentracin 300 g de microalgas secas / L) se lav una vez con agua desionizada para eliminar las sales residuales. La pasta de microalgas proporcionado toda la biomasa necesaria para el estudio (? 200 g de microalgas secas). 2.4. Extraccin de pre-tratamiento En experimentos en los secos microalgas se utiliz, la de microalgas pasta se seca a 85 C en un horno (Modelo UNE 500 PA, Memmert GmbH + Co., Alemania) durante 16 h. Un molino de anillo fue utilizado para moler la biomasa seca en polvo. En experimentos con microalgas hmeda, la pasta obtenida de banco de microalgas centrifugacin arriba fue utilizado directamente sin ningn tratamiento adicional. El slido concentracin de la pasta fue de 30% en peso. Esto fue determinado por una porcin de secado de la pasta y la comparacin de su masa antes de la seca a la de la biomasa correspondiente secado. Ambas microalgas polvo y pasta se almacenaron a 5 C durante no ms de 1,5 meses antes de ser utilizado para su extraccin. 2.5. La extraccin supercrtica de lpidos de CO2

Velocidad SFE-2 de Applied separaciones, Inc. (EE.UU.) se utiliz para SCCO2 extraccin (Fig. 1). La unidad de extraccin se puede dividir en tres partes separadas. Parte I consiste en una bomba de alimentacin que

comprime y entrega de CO2 lquido en el recipiente de extraccin. Parte II comprende un buque de 24 mL de acero inoxidable instalado en el interior de extraccin de un mdulo de horno. Una vez que el horno se calienta, el CO2 comprimido entra el buque en estado supercrtico y realiza la extraccin de los lpidos procedente de la microalga. Parte III de la unidad consiste en una climatizada micromedicin de la vlvula para despresurizar SCCO2 entrante. Una vez completamente descomprimido, se evapora el CO2 como gas a la temperatura ambiente, lo que oblig los lpidos extrados de precipitar en los lpidos adyacentes tubo de recoleccin de vidrio (Sajilata et al., 2008). Microalgas en polvo (20 g) o en pasta (8 g) se mezcl con inertes tierra de diatomeas (DE) en las razones (en polvo: de = 02:01 w / w y pegar: D.E. = 1:2 w / w). La adicin de D.E. o celites (Dimetro = 3.5 ml, superficie especfica = 30720 cm2/cm3) como un anclaje co-matriz de una mayor rea de superficie de contacto entre el las clulas de microalgas y el fluido supercrtico liberador. El resultado mezcla homognea se llen con fuerza en el recipiente de extraccin y el buque fue sellado con fritas de metal en ambos extremos para evitar la arrastre de la biomasa de microalgas. Una vez que el buque fue puesto en el horno, la unidad de extraccin fue operado como ya se ha descrito. Todas las extracciones se llevaron a cabo SCCO2 en modo dinmico con una tasa constante de descomprimen flujo de CO2 de 400 mL / min (residencia tiempo entre 4,9 y 14,1 minutos en funcin de la densidad del fluido). El la presin se vari desde 10 hasta 50 MPa entre los experimentos y la temperatura se establece en 60 80 C. Extracciones dur entre 80 y 120 min. Para cada extraccin, una nueva prepesado vial de vidrio para la recoleccin de los lpidos se utiliz cada 20 minutos. El lpidos crudos en cada vial se cuantific gravimtricamente y se analizaron para los perfiles de FAME. 2.6. Esttica de extraccin de lpidos hexano Para la extraccin de hexano recta, a 300 mL de n-hexano se aadi ya sea a 4 g de polvo de microalgas o 13,3 g de pasta de microalgas (Equivalente a 4 g de polvo de microalgas). Para la extraccin de la evaluacin la adicin de alcohol en la extraccin de hexano, un v 3 / 2 / v monofsicos una mezcla de n-hexano e isopropanol (tambin 300 mL) se aadi a

4 g de polvo de microalgas. Los frascos fueron sellados con forma cnica de aluminio papel de aluminio para reducir la evaporacin de disolventes de extraccin y todas las mezclas se agitaron a 800 rpm en condiciones ambientales de 7,5 h. Celda residuo se elimina por filtracin a travs de Whatman GF / C de papel.

En el caso de la extraccin de hexano recta de pasta de microalgas, el filtrado se transfiri a un embudo de separacin para dividir la hexano en el agua. Para hexano / isopropanol extraccin de secado microalgas, el filtrado se transfiri a un embudo de separacin y hexano y agua suficientes (aproximadamente 40 ml cada uno) agregado para inducir capas bifsica. Una vez instalado, la mezcla del solvente dividido en dos fases distintas: una hexano superior de color verde oscuro capa que contiene la mayor parte de los lpidos extrados y una parte inferior lightgreen capa acuosa de isopropanol-contiene la mayor parte de los co-extrados contaminantes no lpidos. La fase de hexano de cada extraccin se recoge en un matraz previamente pesado antes de que fuera calienta hasta la sequedad en el horno (60 C) para permitir la cuantificacin gravimtrica del extracto lipdico. El crudo de lpidos se volvi a disolverse en hexano (ml aproximadamente 20) y se introducen en un vaso cerrado vial para el almacenamiento. 2.7. Dinmica de extraccin de lpidos hexano Para comparar el rendimiento de la extraccin de hexano con SCCO2, un aparato de Soxhlet se utiliz. Descripcin de una tpica unidad de Soxhlet se puede encontrar en otro lugar (Wang y Weller, 2006). Microalgas en polvo (4 g) ha sido envasado en un dedal de celulosa en el interior de la extraccin cmara de la unidad de Soxhlet. N-hexano puro (300 ml) se utiliz para extraer los lpidos durante 7,5 horas a razn de 10 reflujos por hora. El extrajeron lpidos se cuantific gravimtricamente a 5,5 y 7,5 h. El lpidos crudos Fue entonces cuando vuelve a disolver en hexano (aproximadamente 20 mL) y se introducen en un frasco de vidrio sellado para el almacenamiento. 2.8. El almacenamiento de lpidos extractos

Los viales que contienen los extractos de lpidos en seco o el extracto lipdico soluciones se almacenaron en la oscuridad a 5 C durante menos de un mes. 2.9. Metilacin del cido graso lpidos secas de la extraccin SCCO2 se vuelve a disolver en 20 ml de hexano con el fin de mejorar la cintica de reaccin durante metanlica alquilacin. Un protocolo en dos fases se utiliz para el proceso de metilacin de todos los lpidos extrados (tanto de la extraccin SCCO2 y hexano extracciones) y todos los reactivos se aadieron en exceso estequiomtrico. El primer paso utiliza un catalizador cido para metilato cidos grasos libres (FFA) y transmethylate acylglycerols (Christie, 2007). Veinte metanol y 10 ml de H2SO4% en peso en 1 ml de metanol se aadido a la solucin de hexano en lpidos almacenados en cada vial. La mezcla se transfiri a un frasco, una temperatura de 50 C, y moderadamente agitacin durante 2 h. metanol evaporada se repone con frecuencia. En el segundo paso, el 25% en peso KCH3O en metanol se aadi gota a gota a la agit suavemente la mezcla de reaccin hasta un valor de pH de 13 se logr. La inclusin de un catalizador alcalino se pretenda para servir a cuatro objetivos (Lang et al., 2001): (1) para neutralizar los cidos del paso anterior, (2) para apagar cualquier tipo de contaminante del agua de interferencia; (3) a ms transmethylate acylglycerols, y (4) para transmethylate fosfolpidos. La mezcla se calienta a 55 C y moderadamente agitado por 2 h. metanol evaporada era con frecuencia reposicin. La mezcla se evapor en el horno (60 C) para obtener el lpido secos post-metilados extracto. Cundo el lpido se vuelve a disolver en 20 ml de hexano para el anlisis de FAME, algunas fracciones se haba convertido en insoluble y forma precipitados (Que comprende principalmente el glicerol y la clorofila). 2,10. Los mtodos de anlisis Los anlisis de la composicin extractos se realizaron mediante unidad equipada con un detector de Company, EE.UU.). Una de las DBWax polietilenglicol columna de los lpidos FAME post-metilados una cromatografa de gases HP 5973 espectrometra de masas (Hewlett-Packard muestras microlitro se inyect en un capilar (30 m? 0,25 mm id

y 0,25 de espesor de pelcula lm). Se utiliz helio como gas portador con un caudal constante de 1,5 mL / min y una relacin de divisin de 20:1. Un solvente perodo de demora de 1,5 minutos se le asign. Tanto el inyector y detector de temperaturas se mantuvieron a 150 C. La temperatura del horno se elev de 140 C a 5 C / min a 240 C y mantenerse durante 5 min. Cada muestra se analiz por triplicado. Individual FAME fue identificado por comparacin de su tiempo de retencin con la de las normas FAME mixto, as como el espectro de masa positiva la identificacin de la biblioteca GC-MSD. Las concentraciones de FAMEs (g / mL) en la solucin de hexano inyectadas fueron cuantificados por comparando sus reas de los picos con los obtenidos de las normas de concentracin conocida. Misa de FAME en el post-metilados extracto lipdico (g) se calcul como el producto de la suma de concentraciones de FAMEs individual (g / mL) y el volumen de hexano utilizados en el restablecimiento de la disolucin. rendimiento de FAME (FAME g de extracto / g secos microalgas) midieron la cantidad real de biodisel producido de una unidad de masa de microalgas secas. el rendimiento de extraccin fue evaluada por dos indicadores clave: rendimiento y composicin lipdica de la FAME lpidos post-metilados extracto. Lpidos rendimiento medido la eficacia de la extraccin fue calcula dividiendo la masa de lpidos con extracto crudo de masa de microalgas secas. Cuando una pasta hmeda se utiliz el correspondiente cantidad de biomasa seca fue determinada. FAME es la composicin obtiene dividiendo la masa de FAME individuales con colectivos FAME en masa, y es un indicador de la selectividad del proceso de extraccin. 2,11. Transferencia de masa de modelado para la extraccin de SCCO2 secos microalgas Con el fin de describir el comportamiento de transferencia de masa de las molculas de lpidos durante la extraccin SCCO2, el siguiente modelo cintico se utiliz: dme dt kms; t? m? s; TTerm 1 donde mi es el rendimiento de lpidos en el tiempo t (g extracto lipdico / g microalgas secas), t es el tiempo de extraccin (min), k es el coeficiente de transferencia de lpidos de las clulas de microalgas en el SCCO2 (min? 1), m, t es el cantidad de lpidos intracelulares extrables que permanece sin extraer en el tiempo t (g de lpidos / g microalgas secas), y m * s, t es la cantidad de sin extraer los lpidos intracelulares cuando hay equilibrio en el lpido concentracin entre las clulas de microalgas y la SCCO2 (g de lpidos / g

microalgas secas). Este modelo es un''globalizado "versin de la ley de Fick de Difusin en los perfiles espaciales han hecho un promedio de al hacer una amalgama stos en el coeficiente de transferencia. La diferencia entre ms; t m? s, t sirve como la fuerza motriz para la difusin de molculas de lpidos desde la fase celular en la fase slida a granel lquido y representa la salida del equilibrio. 3. Resultados y discusin 3.1. La extraccin supercrtica de lpidos de CO2 3.1.1. Efectos del tiempo de extraccin y la temperatura extracciones de lpidos se llevaron a cabo durante 80 min a 60 y 80 C. La presin se mantuvo constante a 30 MPa y 20 g de hojas secas de microalgas en polvo se utiliz en cada experimento. Tabla 1 (bajo 'Experimental lpidos rendimiento ) muestra que los lpidos se extrajeron con mayor rapidez en la comienzo de la extraccin (antes de 20 min) y que la tasa de lpidos extraccin disminuy con el tiempo de experimentacin. El asinttica perfil obtenido es caracterstica de la mayora de extraccin SCCO2 inform en otros estudios de microalgas (Cheung, 1999). El modelo de correlacin lpidos y con los datos experimentales de la evolucin (Comparar los niveles de rendimiento terico de lpidos "con" el rendimiento de lpidos Experimental, r2 60 C 0:93, r2 80 C 0:92) y que corresponda a la espera de difusin la naturaleza del proceso impulsado SCCO2, donde la extraccin tasa fue directamente proporcional a la cantidad de sin extraer intracelular lpidos (Ozkal et al., 2005). Los rendimientos finales experimentales lpidos (0.058 g de extracto lipdico / g secos microalgas para 60 C y 0,048 g de extracto lipdico / g secos microalgas de 80 C) estn de acuerdo con los reportados para Chlorococcum sp. en estudios anteriores (Ota et al., 2009). Sin embargo, el contenido en lpidos de la cepa de Chlorococcum sp. utilizado en este estudio es considerablemente inferior a la reportada para otras especies de microalgas oleaginosas, tales como Nannochloropsis sp. (Presentados en 0,250 g lpido extraer / g secos

microalgas) y Botryococcus braunii (presentados en 0,286 g de lpidos extraer / g microalgas secas) (Andrich et al., 2005; Lee et al. 1998). Como tal, el uso de esta cepa en particular de Chlorococcum sp. para la produccin de biodiesel comerciales parece poco atractivo. Un aumento en la temperatura de extraccin fue SCCO2 observ a disminuir el coeficiente de transferencia (K60? C = 0,052 / min frente a K80? C = 0.019/min). Un aumento de la temperatura durante el extraccin supercrtica resultados en dos efectos simultneos de la competencia. La disminucin de la densidad del fluido reduce la tasa de transporte de fluidos que retarda la cintica de extraccin, mientras que el aumento de la volatilidad del soluto mejora la transferencia de masa (Cheung, 1999; Taylor, 1996). Desde de las extracciones se llevaron a cabo a una presin relativamente baja, donde el fluido supercrtico fue altamente compresible (Q60 = 0,83 g / ml mientras que Q80 = 0,74 g / ml), aumento de la temperatura experimental conducir a una considerable reduccin de la densidad que compensan con creces el aumento de la volatilidad resultante de lpidos en una masa de lpidos general ms bajo velocidad de transferencia. Tanto para las extracciones, los importes de la fama despus de la metilacin del los lpidos crudo se encontraron aproximadamente entre 0,23 y 0,44 de las masas de los lpidos extrados en bruto (Cuadro 1 bajo "rendimiento FAME / experimental del rendimiento de lpidos). A pesar de que este resultado estuvo de acuerdo con el anlisis reportado por Cheung (1999), la mayora de los anteriores trabajar en la extraccin de los lpidos de las microalgas, no aport informacin sobre la pureza de los lpidos extrados. A pesar de la baja afinidad de SCCO2 para polares compuestos, la alta concentracin de lpidos polares sabe que hacer la membrana celular (hasta un 90% de lpidos) se lixiviacin concurrentes durante la extraccin supercrtica de lpidos neutros inevitable. Como lpidos tales, polares que fueron esterificados, sin xito, con la aplicar tcnicas de metilacin (fosfolpidos complejos y glicolpidos) se supone que los principales componentes de los contaminantes en los lpidos extrados. La parte no identificada del crudo lpidos tambin podra estar compuesto por lpidos neutros no saponificable (hidrocarburos, alcoholes, aldehdos y) y no los lpidos (protenas y carbohidratos). La aparicin de color verde oscuro de los lpidos extrados tambin sugiri la presencia de clorofila. Como tal, sin refinacin posterior

para quitar estos componentes inservibles, los lpidos extrados no puede ser considerada una materia prima de biodiesel viable.

En trminos del total de las composiciones de FAME (cuadro 1 del 0 80 min (generales) '), C18: 1 (? 63,2% en peso de la fama), C16: 0 (? 19,0% en peso de FAME), C18: 2 (? 4,3% en peso de la fama), C16: 1 (? 3,7% en peso de la fama), y C18: 0 (? 2,5% en peso de FAME) fueron identificados como los principales grasos cidos en los lpidos SCCO2-extrado. Los dems cidos grasos, como el C14: 0, C16: 1t, C16: 2, C17: 0 y C20: 5, tambin estuvieron presentes en menor cantidades. Los lpidos extrados pareca tener un adecuado composicin de cidos grasos para el biodiesel. Los lpidos slo contena pequeas cantidades de cidos grasos poliinsaturados (AGPI), con 4 o ms dobles enlaces (C20: 5 es el nico en? 1,3% en peso de FAME). Altamente insaturados PUFAs son conocidos por ser responsables de la volatilidad pobres, de baja resistencia a la oxidacin, y la tendencia de formacin de gomas se observa en algunos biodiesel de semillas oleaginosas derivadas. Adems, la proporcin relativamente baja de cidos grasos saturados

(? 22,7% en peso de la fama) junto con una presencia mnima de transconjugated cidos grasos insaturados (C16: 1t ser el nico en ? 2,5% en peso de la fama) es preferible. La capacidad de embalaje de cristal estas clases de cidos grasos produce biodiesel con indeseables fro propiedades de flujo, como punto de nube alta y alta punto de gota (Christie, 2007; Lang et al., 2001). La composicin de cidos grasos muestra en la Tabla 1, sin embargo, es diferente a la del perfil presentado por Ota et al. (2009). A pesar de resultados similares en relacin con los respectivos proporcin de C16: 0, C16: 1 y C18: 2, los autores reportaron Chlorococcum sp. para contener los niveles particularmente altos de C16: 4 (%> 20 wt de FAME) y C18: 3 (> 30% en peso de la fama), con su correspondiente reduccin de C18: 1 (<13% en peso de la fama). Perfil de cidos grasos de microalgas especie es conocida por ser una funcin de sus condiciones de cultivo (Andrich et al., 2005; Guzmn et al., 2010; Rao et al., 2007). La coleccin de los lpidos extrados a un vial de nuevo cada 20 minintervalos facilit la evaluacin de la composicin FAME como una funcin del intervalo de tiempo (Tabla 1). Los cambios observados en el FAME proporciones de los lpidos despus de quemar en funcin de duracin de la extraccin (la ausencia de C18: 2 antes de 20 min y el desaparicin de C16: 1 despus de 40 min) sugieren un posible timefacilitated variacin de la selectividad SCCO2 (al Ozkal et al., 2005; Pourmortazavi y Hajimirsadeghi, 2007; Soares et al., 2007). Sin embargo, la variacin de la solubilidad de cidos grasos parecido bastante fractionspecific y que no existe correlacin basada en la longitud de la cadena o el grado de insaturacin an puede ser identificado. De acuerdo con Andrich et al. (2006) quienes realizaron la extraccin de SCCO2 de Spirulina platensis, ninguna diferencia significativa se encontr en la composicin general de FAME de los lpidos extrados a los 60 y 80 C. 3.1.2. Efecto de la presin y la constante dielctrica Con el fin de evaluar el efecto de la presin sobre la eficacia de extraccin SCCO2, dos configuraciones diferentes intensificado la presin (30, 40 y 50 MPa contra 10, 20 y 30 MPa) se sigue juicio. Para la extraccin de alta presin, la presin inicial de 30 MPa fue ha aumentado a 40 MPa a 80 min, seguido de un incremento ms a 50 MPa a 100 min. La extraccin de baja presin se llev a

en un acuerdo similar, aunque los incrementos de presin ocurren en momentos diferentes: 40 min y 80 (ver fig. 2a). Cada extraccin se realiz a 60 C durante 120 minutos con 20 g de hojas secas microalgas. La figura. 2a muestra el efecto positivo de la presin sobre la extraccin rendimiento, cuando el rendimiento final de los lpidos de alta presin extraccin (0,060 g de extracto lipdico / g microalgas secas) era casi dos veces el rendimiento final de los lpidos de baja presin de extraccin (0,034 g extracto lipdico / g microalgas secas). Se espera que el dielctrico constante o la polaridad del disolvente de un fluido supercrtico depende directamente en la densidad del fluido que aumenta con la elevacin de la presin a una temperatura constante (ver Tabla 2) (Cheung, 1999; Taylor, 1996). El pronunciado aumento en los rendimientos de los lpidos de las dos configuraciones con la presin de rampa ha demostrado que un cambio repentino en el poder de solvatacin lquido podra provocar la solubilizacin de los lpidos fracciones que son insolubles a presin reducida. La primera presin cambio (luego de 80 minutos para la extraccin de alta presin y despus de 40 min para la extraccin de baja presin) slo fue llevado a cabo cuando el rendimiento de lpidos en la presin original haba llegado a una asntota. Slo ligeras variaciones en la composicin de cidos grasos de los lpidos extrados en diferentes niveles de presin se observaron (Fig. 2b). El mismas molculas de cidos grasos dominantes fueron identificados en todos los extractos de lpidos, con C18: 1 y C16: 0 es el ms abundante. La ligera cambios en las composiciones FAME aluden a la selectividad diferencial SCCO2 que se sabe que manifiestan para fracciones de lpidos especficos en diferentes presiones (Cheung, 1999). La constante dielctrica o la polaridad del solvente de una supercrticos medidas fluido el grado de interaccin entre el solvente y las molculas orgnicas (Zhang et al., 2005). La Tabla 2 muestra la exponencial dependencia del coeficiente de transferencia de lpidos (k) durante nuestra extracciones SCCO2 el fluido dielctrico constante a lo largo una isoterma. Este comportamiento se prevea desde una polaridad creciente disolvente aumentara la interrupcin de la bicapa lipdica de membrana y facilitar la la extraccin de los lpidos de membrana.

3.1.3. El rendimiento en pasta hmeda de microalgas Para que la tecnologa de extraccin SCCO2 para tener alguna posibilidad de ser aplicado en la prctica para el biodiesel de microalgas a escala industrial produccin, se ha de extraer los lpidos efectivamente de deshidratados de microalgas pasta (30% en peso de slidos) igual que lo hace a partir de biomasa seca. En esta seccin, un protocolo idntico al de la extraccin en seco se utiliz para estudiar la extraccin SCCO2 proceso hmedo (T = 60 C, P = 30 MPa). Sin embargo, la inmiscibilidad del agua y el CO2 como resultado altamente lecho de partculas que fluyen compactado restringida del fluido a travs de la columna. diferentes proporciones de pasta D.E. se pusiera a prueba y cantidad cada vez mayor de D.E. en la mezcla se observ para mejorar flujo de CO2. El D.E. absorbe el agua y proporciona la porosidad adicionales necesarios para la penetracin de CO2. En una pasta a d.e. proporcin de 1:2, una de CO2 caudal igual a la utilizada para la extraccin en seco (400 mL / min) alcanzados. En esta relacin, el buque contiene un equivalente de pegar para 2,4 g de microalgas secas, mucho menos que el G-20 utilizado anteriormente de extraccin en seco. De la figura. 3 bis, de la extraccin de la pasta hmeda obtenido un mayor rendimiento de los lpidos final que a partir de biomasa seca (yieldwet lpidos = 0,071 g extracto lipdico / g microalgas secas, mientras que los lpidos yielddry = 0,058 g de lpidos extraer / g microalgas secas). A pesar de la opinin comn de que residual agua en las clulas de los actos como una barrera que impide la transferencia de masa de las molculas de analito en el lquido a granel, unos pocos estudios sobre SCCO2 extraccin de analitos diversos a partir de muestras hmedas (cafena de los granos de caf verde y aceite esencial de Origanum vulgare hojas) han demostrado que el agua residual en la materia prima no reduce el rendimiento de extraccin. Se encontr el agua a las ayudas la extraccin a travs de su inflamacin de la matriz extracelular y de los recursos papel como co-solventes polares (Pourmortazavi y Hajimirsadeghi, 2007; Schwartzberg, 1997). El lpido extractos de la pasta hmeda

compuesto por mayores cantidades de C16: 0, C16: 1, C18: 0 y C18: 2 que los extractos correspondientes a partir de la biomasa seca (Fig. 3b). El una mayor cooperacin de extraccin de los lpidos polares debido a la presencia de agua en las clulas potencialmente podra haber contribuido a esta composicin discrepancia. 3.1.4. La comparacin con la extraccin de lpidos dinmica hexano (Soxhlet) La figura. 3a muestra la extraccin SCCO2 a ser ms eficiente que extraccin con hexano dinmico. Ochenta minutos de la extraccin SCCO2 lograr un rendimiento ms alto de lpidos de 5,5 h de la extraccin de Soxhlet (lpidos rendimiento de SCCO2 despus de 80 min = 0,058 g de extracto lipdico / g secos microalgas, rendimiento de los lpidos de Soxhlet despus de 5,5 h = 0,032 g de extracto lipdico / g microalgas secas). Esta observacin se esperaba debido a la propiedades fisicoqumicas de la favorable fluido supercrtico (Cheung, 1999; Mendes et al., 2003). A pesar de demostrar que dos extracciones finalmente obtuvo rendimientos equivalentes de lpidos Nannochloropsis sp., Andrich et al. (2005) tambin mide una menor transferencia de masa coeficiente de extraccin con hexano que con SCCO2. futuras comparaciones entre los dos mtodos debe tomar en cuenta la energa necesaria para cada extraccin respectivos. compresin del fluido representa el requisito de energa ms grande para la extraccin de SCCO2 (Taylor, 1996), mientras que extraer aguas abajo purificacin de la energa sigue siendo el obstculo principal a gran escala extraccin con disolventes orgnicos. 3.2. Esttica de extraccin de lpidos hexano Los efectos del modo de operacin y la adicin de alcohol en el rendimiento de extraccin con hexano de microalgas secas fueron evaluados. La viabilidad de aplicar inmediatamente la extraccin de hexano de pasta de microalgas hmeda tambin fue evaluado. El rendimiento final de los lpidos para cada uno de los sistema de extraccin de hexano es discutido en el texto. La

figura. 4 muestra los perfiles de cidos grasos de los lpidos extrados por los diferentes sistemas de extraccin de hexano junto con el condiciones de funcionamiento de cada sistema. 3.2.1. Efecto de la operacin dinmica Funcionamiento del sistema de extraccin de un modo dinmico (B) y no de un modo esttico (A) increment el rendimiento de lpidos en aproximadamente 280% (final rendimiento de los lpidos de A = 0,015 g lpido extraer / g secos miroalgae, lpidos final rendimiento de B = 0,057 g de extracto lipdico / g microalgas secas). Esta mejora que se esperaba ya que la ejecucin de Soxhlet, a travs de disolvente reflujo, expuestos constantemente un nuevo lote de hexano a la la matriz extracelular y permiti continua re-creacin de la masa equilibrios de transferencia (Wang y Weller, 2006). A pesar de su mayor rendimiento, procedimiento de Soxhlet es improbable que sea implementado en un entorno industrial escala debido a la necesidad continua de alta energa para destilacin. 3.2.2. Efecto del alcohol, adems Al final de hexano / isopropanol extraccin, la mezcla del solvente dividido en dos fases distintas: una hexano superior de color verde oscuro capa (C1) y una capa inferior acuosa de isopropanol de color verde claro (C2). A pesar de que la mayora de los lpidos pareca ser transferidos a la fase del hexano, las dos fases se han recogido y gravimetra cuantificados. Slo la fase de hexano (C1) fue, sin embargo, analizadas para FAME composicin. Se prev que la produccin de lpidos final aumentara sustancialmente con la adicin de isopropanol como co-extractante. El triple aumento en el rendimiento de lpidos hexano (rendimiento final de los lpidos A = 0,015 g de extracto lipdico / g microalgas secas, el rendimiento final de los lpidos C1 = 0,048 g de extracto lipdico / g microalgas secas) se vea ampliada por un rendimiento adicional de los lpidos secos acuosa de isopropanol fase (el rendimiento final de los lpidos C2 = 0,020 g de extracto lipdico / g secos

microalgas). Dado que los lpidos polares (fosfolpidos, glicolpidos y colesterol) son en su mayora vinculados a las molculas de protena en la membrana de la clula a travs de fuertes lazos de hidrgeno o electrostticas, que requieren la presencia de un disolvente polar (como isopropanol) para interrumpir la complejas interacciones lpido-protena antes de que se extraen a cabo por el hexano. Adems, hexano, aunque no polares fcilmente interacta con las molculas de lpidos neutros, las estructuras de tipo micela triglicridos que con frecuencia forman en su estado natural prevenir extraccin de lpidos cuantitativos y con frecuencia requieren la ayuda de un el alcohol por su rpida destruccin (Medina et al., 1998). 3.2.3. El rendimiento en pasta hmeda de microalgas extraccin de hexano de pasta hmeda (D) result en un 33% menos lpidos el rendimiento que su contraparte en seco (A) (el rendimiento final de los lpidos Un lpido = 0,015 g extraer / g microalgas secas, el rendimiento final de los lpidos D = 0,010 g de lpidos extraer / g microalgas secas). A pesar de su reducido rendimiento hmeda, hexano extraccin sigue siendo una opcin prometedora para el biodiesel de microalgas en particular desde su protocolo de extraccin hmeda, a diferencia de proceso SCCO2, no requiere el paso adicional de pre-tratamiento de costos de obra . 4. Conclusiones El Chlorococcum sp. utilizado en este estudio se encontr que tena una baja el rendimiento mximo de los lpidos (7,1% en peso de biomasa seca) en comparacin con otros especies de microalgas ricas en lpidos, por ejemplo, Nannochloropsis sp. (Presentados en 25,0% en peso de biomasa seca) y B. braunii (presentados en un 28,6% en peso de biomasa seca). Para la extraccin SCCO2, lpidos rendimiento fue encontrado para disminuir con la temperatura y aumentar la presin. N significativa

se encontraron diferencias en la composicin lipdica de la FAME extractos obtenidos bajo diferentes parmetros de extraccin SCCO2. El xito del modelo propuesto en la correlacin de la evolucin de lpidos durante la extraccin SCCO2 (r2> 0,92) habilitado el nuevo anlisis que demostrado coeficiente de transferencia de lpidos (k) a aumentar con la polaridad del solvente. extraccin Soxhlet con hexano se encontr que mucho menos eficaz que la extraccin SCCO2, logrando una comparables rendimiento de los lpidos (? 0,058 g de extracto lipdico / g microalgas secas) en 5,6? el tiempo requerido.