1 1.1 1.1.1 1.1.2 1.1.3 1.2 1.3 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.3.5 2 2.1 2.2 2.3 2.3.

1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.4 3 3.1 3.2 3.3 3.4

MEMBRANA CITOPLSMICA COMPOSICIN QUMICA CARENCIA, EN GENERAL, DE ESTEROLES LPIDOS PROTENAS ESTRUCTURA FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMICA PARTICIPACIN EN PROCESOS BIOENERGTICOS PARTICIPACIN EN BIOSNTESIS DE POLMEROS DE LAS ENVUETAS PUNTO DE ANCLAJE DEL CROMOSOMA Y DE ALGUNOS PLSMIDOS BARRERA SELECTIVA EXPORTACIN DE MOLCULAS DE SUPERFICIE TRANSPORTE DE NUTRIENTES TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO O DIFUSIN SIMPLE TRANSPORTE PASIVO ESPECFICO O DIFUSIN FACILITADA TRANSPORTE ACTIVO TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE PROTONES TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE IONES SODIO TRANSPORTE ACTIVO DIRIGIDO POR ATP TRANSPORTE ACOPLADO A TRANSLOCACION DE GRUPOS TRANSPORTE DE HIERRO ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS INTRACITOPLSMICAS MESOSOMAS CROMATFOROS OTRAS INVAGINACIONES TILACOIDES

BIBLIOGRAFA

ENLACES

1 1.1

MEMBRANA CITOPLSMICA COMPOSICIN QUMICA

La membrana citoplsmica bacteriana es la estructura de tipo bicapa proteo-lipdica que delimita al protoplasto. Su proporcin protenas: lpidos es superior a la de las membranas celulares eucariticas, llegando a alcanzar valores relativos de 80:20. 1.1.1 CARENCIA, EN GENERAL, DE ESTEROLES

Las membranas procariticas, a diferencia de las de eucariotas, carecen de esteroles (con las salvedades de Cianobacterias, ciertas bacterias metilotrofas; adems, los micoplasmas presentan colesterol, pero lo secuestran de las clulas eucariticas a las que parasitan). Pero en cambio, en muchas bacterias existe una peculiar clase de compuestos policclicos, denominados hopanoides (triterpenoides pentacclicos) que parecen condicionar parte de la rigidez de las membranas citoplsmicas. Los hopanoides se sintetizan a partir del mismo tipo de precursores que los esteroles. (Por cierto, como dato curioso diremos que los sedimentos de combustibles fsiles como el petrleo presentan cantidades gigantescas de hopanoides, lo que confirma el papel que tuvieron las bacterias en su formacin). 1.1.2 LPIDOS

Abundan sobre todo los fosfolpidos derivados del cido fosfatdico: fosfatidiletanolamina fosfatidilglicerol cardiolipina (difosfatidilglicerol) En bacterias Gram-positivas, adems se encuentran glucolpidos y glucofosfolpidos. La composicin y proporcin concretas de los distintos tipos de lpidos son variables entre distintas cepas bacterianas, y dentro de cada cepa, en funcin de las condiciones de cultivo (temperatura, pH, etc.). Los cidos grasos esterificados con el glicerol en los fosfolpidos son principalmente: 1) a) b) c) 2) saturados, como p. ej.: palmtico (16:0) mirstico (14:0) de cadena ramificada (muy frecuentes en muchas bacterias Gram-positivas) monoinsaturados (sobre todo en Gram-negativas), como p. ej.:

a) b)

palmitoleico (cis-9, 16:1) cis-vaccnico (cis-11, 18:1)

A diferencia de eucariotas, no existen cidos grasos poliinsaturados, con la excepcin de las Cianobacterias. Este grupo de bacterias fotosintticas tiene, adems, la capacidad de modificar mediante desaturasas el grado de saturacin de sus cidos grasos, lo que representa un mecanismo adaptativo frente a cambios de temperatura. Las bacterias pueden modificar la proporcin entre cidos grasos insaturados y saturados, con objeto de mantener un estado de fluidez adecuado en la membrana, como adaptacin a cambios de temperatura: a altas temperaturas, aumenta la proporcin de cidos grasos saturados, a bajas, aumenta la de los insaturados. Las bacterias psicrfilas (amantes del fro) presentan casi todos sus cidos grasos de tipo insaturado. En Arqueas, en lugar de los habituales lpidos a base de steres de cidos grasos con glicerol, existen lpidos a base de teres de alcoholes de cadena larga con glicerol (p. ej., difitanil-glicerol-diteres). Los alcoholes suelen ser derivados poliisoprenoides. Este tipo de membranas son ms rgidas que las de eubacterias. Incluso existen arqueas con membranas a partir de tetrafitanil-diglicerol-tetratereres, que consituyen bicapas monomoleculares. Como ya vimos en el tema anterior, la membrana citoplsmica alberga un transportador lipdico de tipo politerpenoide, llamado undecaprenil-fosfato, presente en pequea cantidad (<1%). Igualmente se dan quinonas isoprenoides (como la menaquinona o la ubiquinona) que, como veremos en otro captulo, participan en cadenas de transporte de electrones. En algunas bacterias existen igualmente variedades de pigmentos carotenoides. 1.1.3 PROTENAS

Constituyen la mayor parte de la membrana bacteriana (hasta el 80% en peso seco). Existe una gran variedad de tipos de protenas en una misma bacteria (hasta 200), pero la composicin y proporcin concreta vara segn las condiciones de cultivo. Segn su localizacin en la membrana, y su grado de unin con la porcin lipdica, se distingue entre: protenas integrales de membrana (=endoprotenas): son protenas estrechamente unidas a la membrana, por lo general atravesadas en plena bicapa lipdica. Son difciles de extraer, tenindose que recurrir a detergentes y/o disolventes orgnicos para separarlas respecto de los lpidos. Las protenas integrales pueden desplazarse lateralmente en la bicapa lipdica, pero no son capaces de rotar, por lo que siempre presentan una determinada orientacin o polaridad. Algunas presentan hidratos de carbono que sobresalen hacia la superficie externa (glucoprotenas). Protenas perifricas (= epiprotenas): unidas a la superficie de la membrana, de forma ms dbil, por lo que son ms fciles de extraer y purificar. Incluso algunas establecen contactos

slo transitorios con la membrana.

1.2

ESTRUCTURA

Mtodos de observacin y estudio A microscopio ptico, se recurre a la tincin con Azul Victoria. A microscopio electrnico, en cortes ultrafinos, se observan una estructura de unos 7 nm de grosor, con dos capas externas densas a los electrones limitando una capa central transparente. Los estudios mediante difraccin de rayos X y de resonancia magntica nuclear (RMN) demuestran una estructuracin bsica a base de cadenas de fosfolpidos en una bicapa, segn se describe a continuacin. Estructura Consiste en una bicapa lipdica, con los grupos polares (hidrfilos) hacia afuera, y las cadenas hidrofbicas de cidos grasos (o, en el caso de Arqueobacterias, de alcoholes) hacia adentro, ajustndose al modelo de mosaico fluido de Singer y Nicholson. Inmersas en esta bicapa se encuentran las abundantes protenas, que pueden moverse lateralmente en el mosaico de molculas de lpidos, igualmente dotados de una rpida movilidad. Parece ser que no existe movilidad de lpidos entre las dos capas.

La membrana citoplsmica es asimtrica (aunque no tanto como la membrana externa de Gram-negativas). Esto se traduce en el hecho de que muchos de los procesos que tienen lugar en la membrana sean vectoriales (tengan una direccin determinada). 1.3 FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMICA

La membrana citoplsmica de los procariotas es una notable estructura multifuncional (como uno podra esperar de la constatacin del gran nmero de tipos de protenas), siendo el sitio donde se producen muchos procesos metablicos complejos, en un grado desconocido en el resto del mundo vivo. Citemos brevemente las principales funciones de la membrana procaritica (aunque en este y otros temas las estudiaremos en detalle): Barrera osmtica (que mantiene constante el medio interno), impidiendo el paso libre de sales y de compuestos orgnicos polares Es el lmite metablicamente activo de la clula: establece la frontera entre el protoplasto y el medio externo, impidiendo la prdida de metabolitos y macromolculas del protoplasto. Ahora bien, merced a sistemas de transporte, permite selectivamente el paso de sustancias entre el exterior y el interior (y viceversa). Interviene, adems, en procesos bioenergticos (fotosntesis, respiracin) Participa en la biosntesis de componentes de membrana, de pared y de cpsulas, En la secrecin de protenas. Desglosaremos brevemente estos diversos tipos de papeles de la membrana. 1.3.1 PARTICIPACIN EN PROCESOS BIOENERGTICOS

Contiene todos los componentes requeridos para la transduccin de energa y la produccin de ATP, por procesos respiratorios. En el caso de una bacteria quimiotrofa, esto incluye: deshidrogenasas cadenas de transporte de electrones (con quinonas, citocromos, etc.) ATP-asas (ATP sintasas/hidrolasas) Algunas bacterias fotosintticas anaerobias tambin incluyen este tipo de componentes en la membrana citoplsmica. En un captulo posterior veremos en ms detalle cmo explica la teora quimiosmtica de Mitchell el acoplamiento entre el funcionamiento de las cadenas de transporte electrnico (o de la ATP-hidrolasa) y la generacin de un gradiente de protones a travs de la membrana (potencial electroqumico o fuerza protn-motriz), el cual a su vez puede:

generar ATP (desarrollo de un trabajo qumico) promover transporte de ciertos nutrientes (trabajo osmtico) promover movimiento flagelar (trabajo mecnico). 1.3.2 PARTICIPACIN EN BIOSNTESIS DE POLMEROS DE LAS ENVUETAS

Como ya hemos visto en temas anteriores, la membrana alberga transportadores (como el undecaprenil-P) y enzimas relacionados con fases de la biosntesis de polisacridos de la cpsula, peptidoglucano, cidos teicoicos y teicurnicos y lipopolisacrido. Igualmente en ella se localizan los enzimas implicados en la sntesis de los lpidos de la propia membrana. 1.3.3 PUNTO DE ANCLAJE DEL CROMOSOMA Y DE ALGUNOS PLSMIDOS

Como veremos, sigue estando debatido si un tipo de invaginacin de la membrana, llamado mesosoma (ver ms adelante, en este captulo, apartado 3.1) es o no un artefacto, pero parece fuera de duda que el cromosoma se ancla de alguna manera a la cara interna de la membrana (sea a los mesosomas, o como proponen otros, a la cara interna de los anillos perispticos). En la zona de anclaje parecen residir algunos de los enzimas encargado de la replicacin. La membrana tiene igualmente un papel en la separacin (segregacin) de las dos copias del cromosoma replicado a las clulas hijas. 1.3.4 BARRERA SELECTIVA

Mantiene la constancia del medio interno (impidiendo la salida de iones, metabolitos y macromolculas), pero simultneamente permite o promueve activamente la entrada de nutrientes y la salida de los productos de desecho o de ciertas molculas excretadas. La funcin de transporte de nutrientes ser tratada en detalle ms adelante en este captulo. 1.3.5 EXPORTACIN DE MOLCULAS DE SUPERFICIE

Se trata de un sistema por el que ciertas protenas son trasladadas a su localizacin definitiva en la membrana citoplsmica, por la intervencin de la protena YidC, que interacciona con zonas hidrofbicas de aquellas. Un ejemplo de protenas insertadas de este modo lo constituye la ATP-sintasa de eubacterias. Este sistema, al parecer filogenticamente primitivo, aparece en eubacterias, parte de arqueas (euriarqueas) y en mitocondrias (donde se denomina Oxa1) y cloroplastos (Alb3), pero no en eucariotas. 2) SISTEMA Sec El sistema Sec es un sistema universal para la secrecin de protenas, es decir, aparece en los tres dominios de la vida, aunque con variantes en cada uno de ellos. Nosotros vamos a describir el caso de las eubacterias. Las protenas secretadas se sintetizan como pre-protenas dotadas en el extremo Nterminal de un pptido seal, de unos 20-30 aminocidos. Dicha zona consta a su vez de un extremo N-terminal cargado positivamente, seguida de un trecho hidrofbico, y termina con una zona ms polar dotada al final del sitio que va a ser roto por la peptidasa del lder.

Cuando an est en el citoplasma, la pre-protena naciente se une a la protena SecB (una chaperona especfica de esta ruta), la cual impide que la pre-protena se pliegue totalmente. La protena SecA, que forma un homodmero, reconoce el complejo SecB-preprotena, y lo traslada al complejo de protenas de membrana SecYEG, que tiene un canal interior de unos 20-30 . (Al parecer el canal consta de 3-4 complejos SecYEG). Ahora, la protena SecA, con gasto de ATP, logra que los primeros 20-30 aminocidos de la pre-protena entren a travs del canal Sec, con lo que el pptido seal aparece por el lado exterior de la membrana. Una vez que el pptido seal asoma por el otro lado de la membrana, es cortado en el sitio especfico por la peptidasa lder, lo que ayuda a liberar al exterior la parte madura de la protena secretada. 3) SISTEMA SRP El sistema SRP procaritico es mucho ms sencillo que el homlogo SRP que se encuentra en la membrana del retculo endoplsmico de eucariotas. En este sistema, el extremo N-terminal de la protena naciente es reconocido por la partcula de reconocimiento de seal, conocida por sus siglas SRP. La SRP eubacteriana consta de un pequeo ARN y una protena (Ffh). Una vez que la SRP reconoce el extremo N-terminal de la protena naciente, parece que provoca la detencin momentnea de la traduccin, y conduce a esa protena naciente hasta el receptor de la partcula SRP (SR), a nivel de membrana citoplsmica. A su vez esto provoca la interaccin del pptido naciente con el complejo Sec, que ser el que logre la secrecin o insercin en membrana de la protena madura. 4) SISTEMA Tat Este sistema se ha empezado a caracterizar recientemente, y solo se ha descubierto en procariotas y en cloroplastos, pero no en mitocondrias ni en eucariotas. Se caracteriza por trasladar al exterior (o al espacio periplsmico de Gram-negativas) protenas ya en su configuracin nativa, y en su caso, dotadas ya de sus cofactores (grupos FeS, molibdopterina, cofactores nucleotdicos, etc.). Es decir, a diferencia de los anteriores, las protenas se pliegan /y en su caso adquieren los cofactores) antes de ser trasladadas. Este sistema se llama Tat debido a que reconoce una secuencia seal en la que existen dos argininas gemelas (una a continuacin de otra, twin arginine transport). Consta de al menos tres tipos de protenas de membrana: TatA, TatB y TatC. Varias unidades de TatA atraviesan la membrana formando una empalizada que deja un gran canal de unos 60 . Cmo se logra el transporte a travs de este gran agujero en la membrana sin que se pierda su capacidad de barrera selectiva es una hazaa que se est investigando. 2 TRANSPORTE DE NUTRIENTES

Lo primero que tiene que hacer un microorganismo a la hora de su nutricin es captar los nutrientes que necesite desde el medio exterior. Debido a que la bicapapa lipdica acta como barrera que impide el paso de la mayor parte de las sustancias, esto significa que deben existir mecanismos especficos para lograr la entrada de los nutrientes. Adems, teniendo en cuenta que las bacterias suelen vivir en medios diluidos, deben realizar un trabajo para trasladar muchos de esos nutrientes en contra del gradiente de concentracin. Tradicionalmente se viene considerando tres mtodos principales de transporte de sustancias a travs de la membrana: transporte pasivo inespecfico (= difusin simple); transporte pasivo especfico (= difusin facilitada); transporte activo. Como veremos, los ms importantes en procariotas son los sistemas de transporte activo. 2.1 TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO O DIFUSIN SIMPLE

Este transporte consiste en la difusin pasiva de ciertas sustancias para las que la membrana es impermeable, debido a la diferencia de concentracin (C) a ambos lados de dicha membrana (la sustancia tiene mayor concentracin fuera que dentro de la clula). Aparte de esta diferencia de concentracin, en la difusin pasiva influyen: la constante de permeabilidad (P), es decir, el grado de permeabilidad de la membrana a la sustancia en cuestin; el rea o superficie total (A) a travs de la que se produce el transporte. Las membranas citoplsmicas son impermeables en s mismas a la mayor parte de las molculas. Slo se da en el caso de O2, CO2, NH3, agua y otras pequeas sustancias polares no ionizadas. La difusin simple se produce por el paso de estas sustancias a travs de poros inespecficos de la membrana citoplsmica. 2.2 TRANSPORTE PASIVO ESPECFICO O DIFUSIN FACILITADA

Es un proceso que permite el paso de compuestos por difusin a travs de transportadores estereoespecficos y (al igual que en el caso anterior) sobre la base de un gradiente de concentracin (en la direccin termodinmicamente favorable). El transportador suele ser una protena integral de membrana (permeasa o facilitador), cuya conformacin determina un canal interior, y por el cual un determinado sustrato puede alcanzar el interior, sin gasto de energa. Se piensa que cuando el soluto se une a la parte de la permeasa que da al exterior, esta protena sufre un cambio conformacional que libera la molcula en el interior. Como al entrar la molcula, enseguida entra en el metabolismo y desaparece como tal, esto basta para mantener el gradiente de concentracin

que permite esta difusin. La difusin facilitada exhibe propiedades similares a las de las reacciones enzimticas: Especificidad de sustrato: cada permeasa transporte un solo tipo de sustratos qumicamente parecidos. Cintica de saturacin de tipo Michaelis-Menten, es decir, la velocidad de transporte aumenta con la concentracin de sustrato, hasta un valor lmite (Vmax) por encima del cual ulteriores aumentos del soluto no aumentan dicha velocidad (debido a que todas las porinas disponibles estn ya totalmente ocupadas): Velocidad de entrada: Vent = Vmx [Sext] /Km + [Sext] Velocidad de salida: Vsal = Vmx [Sint] /Km + [Sint]

Aunque este sistema de transporte es muy comn en eucariotas, es muy raro encontrarlo en bacterias. La explicacin evolutiva es que los procariotas suelen vivir en ambientes con pocas concentraciones de nutrientes, y por lo tanto no es frecuente que se den gradientes adecuados. Una de las pocas excepciones la constituye el glicerol, que es transportado por difusin facilitada en una amplia gama de bacterias, tanto Gram-positivas como Gram-negativas. Conforme el glicerol entra, es rpidamente convertido a glicerolfosfato; por lo tanto, la concentracin interna de glicerol como tal es prcticamente nula, lo que facilita esta difusin incluso a bajas concentraciones exteriores de esta sustancia. En Zymomonas existe un facilitador de membrana que transporta glucosa.

2.3

TRANSPORTE ACTIVO

Consiste en el transporte de sustancias en contra de un gradiente de concentracin, lo que requiere un gasto energtico. En la mayor parte de los casos este transporte activo (que supone un trabajo osmtico) se realiza a expensas de un gradiente de H+ (potencial electroqumico de protones) previamente creado a ambos lados de la membrana, por procesos de respiracin y fotosntesis; por hidrlisis de ATP. Los sistemas de transporte activo son los ms abundantes entre las bacterias, y se han seleccionado evolutivamente debido a que en sus medios naturales la mayora de los procariotas se encuentran de forma permanente o transitoria con una baja concentracin de nutrientes. Los sistemas de transporte activo estn basados en permeasas especficas e inducibles. El modo en que se acopla la energa metablica con el transporte del soluto an no est dilucidado, pero en general se maneja la hiptesis de que las permeasas, una vez captado el sustrato con gran afinidad, experimentan un cambio conformacional dependiente de energa que les hace perder dicha afinidad, lo que supone la liberacin de la sustancia al interior celular. Estudiaremos los siguientes tipos de transporte activo: transporte activo ligado a simporte de protones; transporte activo ligado a simporte de iones Na+ transporte activo dirigido por ATP transporte acoplado a translocacin de grupos. 2.3.1 TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE PROTONES

Como se recordar, el simporte se puede definir como el transporte simultneo de dos sustratos en la misma direccin, por un mismo transportador sencillo. En el caso del transporte activo ligado a simporte de protones, lo que ocurre es que uno de los sustratos (H+) ha creado previamente un gradiente de concentracin, cuya disipacin es aprovechada por el otro sustrato para entrar con l. Este otro sustrato puede ser: una molcula de carga negativa: en este caso, su simporte ligado a protones tiende a disipar slo el gradiente de concentracin. Ejemplos: transporte de iones fosfato, de glutamato, etc. una molcula neutra: en este caso, su simporte tiende a disipar no slo el gradiente de concentracin, sino tambin el gradiente elctrico. Ejemplo: en Escherichia coli, la lactosa usa una -galactsido-permeasa, que es una de las permeasas bacterianas ms intensamente estudiadas. Por otro lado, ciertas molculas catinicas (iones K+, lisina), son transportadas directamente a travs de permeasas, en ausencia de simporte de protones.

2.3.2

TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE IONES SODIO

Se puede considerar una versin modificada del anterior: algunas sustancias no son transportadas activamente de forma directa por el potencial electroqumico de protones, sino indirectamente, a travs de un gradiente de Na+ que a su vez se origina a expensas de dicha fuerza protn-motriz (fpm). El sustrato entra por una permeasa, junto con iones Na+, pero a su vez este sodio se recicla por un sistema de antiporte, a expensas de la disipacin del potencial de protones. Ejemplo: el azcar melibiosa, en el caso de la enterobacteria E. coli. Estos dos tipos de transporte activo ligados a simporte quedan inhibidos si tratamos las clulas con algn agente ionforo (p. ej., el antibitico valinomicina), que destruye el potencial electroqumico de protones. El transporte activo ligado a simporte de iones (H+, Na+) resulta muy econmico, ya que slo se gasta un protn por cada molcula transportada, mientras que por cada ATP sintetizado se suelen gastar 3 protones que se disipan en las ATPasas. Las permeasas que realizan este transporte suelen ser protenas integrales de membrana provistas de unos 12 segmentos transmembranosos en configuracin de -hlice. 2.3.3 TRANSPORTE ACTIVO DIRIGIDO POR ATP

El tipo paradigmtico de este tipo de transporte se denomina de transportadores ABC o ATPasas de trfico, y se conocen muchos ejemplos en eubacterias y arqueas. Vamos a describir el caso de un sistema ABC en enterobacterias (como E. coli). Se trata de un sistema de varios componentes, en el que existen protenas periplsmicas que captan el sustrato con gran afinidad, y lo llevan hasta unas protenas de membrana, las cuales acoplan el paso de dicho sustrato hasta el citoplasma (sin alteralo qumicamente) con la hidrlisis de ATP. La denominacin de "transportadores ABC" se debe a que en todos ellos existe una o dos protenas perifricas de membrana citoplsmica que poseen un dominio (de unos 200 aminocidos) conservado evolutivamente, denominado "cassette de unin a ATP" (las iniciales de ATP-binding cassette generan la sigla "ABC"). Al parecer este dominio ABC conservado es muy antiguo, y parece que ya exista antes de la divergencia evolutiva entre procariotas y eucariotas. Existen muchos ejemplos de protenas ABC, tanto en procariotas como eucariotas (de hecho constituyen la mayor familia de protenas filogenticamente relacionadas de todo el mundo vivo). Los primeros ejemplos de esta gran familia estaban implicados en transportar sustancias a uno u otro lado de la membrana. En otro tema veremos ejemplos de transportadores ABC que funcionan "al revs" de los de este tema: son "exportadores" de protenas recin sintetizadas que deben insertarse en las envueltas bacterianas o ser excretadas al medio. Pero se ha descubierto que la gran familia de protenas ABC est implicada en otros procesos (regulacin gentica, reparacin de ADN, patogenicidad, etc). Elementos de este tipo de sistema: Porinas u otras protenas de membrana externa para lograr la difusin del sustrato desde el

medio hasta el espacio periplsmico. Protena(s) solubles de espacio periplsmico que se unen al sustrato con gran afinidad. Un heterodmero formado por dos protenas integrales de membrana (cada una de ellas posee 5 o 6 trechos en a-hlice que atraviesan la membrana citoplsmica), que son la permeasa propiamente dicha del sistema (el canal por donde pasa el sustrato). Dos protenas perifricas de membrana citoplsmica, adosadas al lado citoplsmico, que incluyen el mdulo conservado ABC que acopla la hidrlisis de ATP con el transporte unidireccional del sustrato a travs de la membrana. Modelo del mecanismo de este sistema: 1. El sustrato exgeno normalmente entra al periplasma a travs de algn canal inespecfico o porina de membrana externa (por ejemplo, en enterobacterias se pueden usar las porinas generales conocidas como OmpF y OmpC). 2. La protena periplsmica especfica, antes de su unin al sustrato tiene una determinada configuracin (denominada abierta), con dos grandes lbulos globulares unidos formando un ngulo (la forma recuerda una almeja a medio abrir). Cuando el sustrato pasa al periplasma, la correspondiente protena de unin periplsmica se une a l con gran afinidad (0.1-1 M), y al unirse cambia de conformacin. En esta configuracin, llamada cerrada, el sustrato se encuentra enterrado entre los dos lbulos de la protena (almeja cerrada). 3. Mientras tanto, el dmero de protenas integrales de membrana (antes de la unin con la protena periplsmica) se encuentra en un estado energizado pero incapaz de transportar sustrato. En esta situacin, puede unirse (por la parte que da al periplasma) al complejo formado por la protena periplsmica (en configuracin cerrada) ligada al sustrato. Al hacer esto, el heterodmero de membrana cambia de conformacin, de modo que ahora muestra mayor afinidad hacia la protena periplsmica y se abre su canal para dejar entrar el sustrato. 4. Entonces, el complejo de membrana alcanza su estado de mnima energa, y con ello descarga el sustrato en el citoplasma y se logra la separacin de la protena periplsmica (que vuelve a su configuracin abierta). 5. Finalmente, la hidrlisis de ATP catalizada por las protenas perifricas ABC (adosadas a la membrana y asociadas a las protenas integrales) suministra la energa para que el heterodmero de membrana vuelva a su estado energizado inicial, preparado as para otro ciclo de transporte.

El sistema ABC de bacterias Gram-negativas, queda puesto de manifiesto cuando lo impedimos por algn procedimiento que altere o elimine la membrana externa (conversin a esferoplastos): Por ejemplo: tratemos E. coli con el quelante EDTA en una solucin tamponada isotnica (con un 20% de sacarosa). Centrifugamos y el sedimento de clulas lo resuspendemos en una solucin de MgCl2 en fro (0C). El resultado es que las protenas del periplasma escapan al medio externo. Esto es un caso de tratamiento por choque osmtico que origina prdida de contenidos del periplasma. Se comprueba que ciertos sistemas de transporte quedan inutilizados, debido a que requieren para su funcionamiento, amn de protenas de membrana citoplsmica, otras especficas del espacio periplsmico. Por contra, este sistema no se ve afectado por los agentes ionforos. Por esta razn, a este sistema en Gram-negativas se le ha llamado durante mucho tiempo transporte activo sensible a choque osmtico. Los sistemas ABC de bacterias Gram-positivas estn menos estudiados, pero en general se parecen a los de Gram-negativas, salvo que carecen del transportador libre periplsmico. En su lugar existe una protena con funciones equivalentes (captar el nutriente del exterior), pero que est anclada al lado externo de la membrana citoplsmica, cerca del heterodmero integral de membrana (la unin es mediante su cistena N-terminal, que se une a un fosfolpido). Existen muchos ejemplos de transportadores procariticos de tipo ABC, y cada uno de ellos est especializado en transportar un sustrato especfico o varios sustratos parecidos. Ejemplo de sustratos transportados de esta forma: Monosacridos como arabinosa, galactosa, maltosa, ribosa, xilosa, etc. Oligosacridos Iones orgnicos e inorgnicos

Aminocidos como histidina, glicina, leucina, etc. Oligopptidos Algunas vitaminas y metales. Siderforos con hierro 2.3.4 TRANSPORTE ACOPLADO A TRANSLOCACION DE GRUPOS

Es un sistema de transporte que acopla la entrada del sustrato con su modificacin qumica por unin covalente con un grupo qumico. Estrictamente hablando, no es un transporte activo, porque no funciona en contra de un gradiente de concentracin, pero se considera de hecho como activo, ya que la concentracin del sustrato modificado dentro de la clula supera con creces a la del sustrato sin modificar en el exterior. Este sistema supone un ahorro de energa metablica: aunque en el transporte se gasta un enlace rico en energa, el sustrato queda modificado en su paso a travs de la membrana en la forma que la bacteria emplea como primer intermediario de su ruta metablica. Es decir, con un solo proceso se cumplen dos funciones distintas: transporte y preparacin qumica para la ruta, que de todas formas habra que realizar. No es de extraar que este tipo de transporte haya sido seleccionado frecuentemente en la evolucin bacteriana, y que hoy lo encontremos en muchos procariotas, especialmente en bacterias anaerobias o aerobias facultativas que recurren a fermentaciones (recordar que las fermentaciones tienen un rendimiento energtico menor que los procesos respiratorios; por lo tanto, es lgico que se seleccionen mecanismos ahorradores como el descrito). El caso mejor estudiado de esta clase de transporte lo constituye el llamado sistema de fosfotransferasa de azcares (segn las casi inevitables iniciales inglesas: PTS). En E. coli el sistema PTS permite el transporte de glucosa, manosa, fructosa y los polioles sorbitol y manitol. Consta de varios componentes que funcionan como una cadena de transportadores del grupo fosfato de alta energa del fosfoenolpirvico (PEP) hasta el azcar a transportar en cuestin. Las dos primeras protenas son inespecficas respecto del azcar (son comunes a los diversos sustratos a transportar), tienen localizacin citoplsmica y su sntesis es constitutiva. Se conocen como Enzima-I (EI) HPr (esta ltima es una pequea protena termoestable, rica en histidina). El otro componente, llamado Enzima II (EII) es especfico de cada azcar, y su sntesis es inducible por el correspondiente sustrato: Suele estar compuesto por tres subunidades o dominios:

EIIA (hasta hace poco llamado EIII) es citoplsmico y soluble; EIIB es un dominio perifrico de membrana: aunque es hidrfilo, se liga al lado citoplsmico de la membrana a travs de EIIC. EIIC es una protena integral de membrana Veamos cmo funciona el sistema: 1. Por un lado, el azcar se une al enzima EIIC especfico, pero ste por s mismo no puede liberar al azcar sin modificar en el interior celular. 2. Mientras tanto, la EI cataliza (en presencia de Mg++) la transferencia del fosfato de alta energa del PEP a la HPr. 3. La HPr fosforilada (HPr-P) transfiere el fosfato al enzima IIA especfico del azcar [p. ej., la glucosa (EIIAGlc ) o el manitol (EIIAMtl)]. 4. La EIIA-P rpidamente, y en presencia de Mg++, transfiere el fosfato a la enzima-IIB especfica con la que se asocia (p. ej., EIIBGlc), que a su vez fosforila el azcar (en el caso de la glucosa convirtindola en glucosa-6-P): en este momento la EIIC pierde su afinidad por el azcar modificado, que de esta forma entra en el citoplasma, preparado ya para actuar como sustrato de la primera reaccin del catabolismo de este azcar. Otros ejemplos de transporte acoplado a translocacin de grupos: Entrada de cidos grasos mediante un sistema de transferencia de Coenzima A, que los transforma en acil-CoA. Entrada de purinas y pirimidinas, mediante un sistema de fosforribosil-transferasas: purina o pirimidina (exterior) + PRPP NMP (interior) + P (PRPP = fosforribosil-pirofosfato) (NMP = nuclesido monofosfato) En bacterias es frecuente encontrar varios sistemas de transporte para un mismo nutriente (p. ej., Escherichia coli posee cinco sistemas para transportar la galactosa y tres sistemas para algunos de los aminocidos. Los diversos sistemas se diferencian en cuanto a su requerimiento energtico, su afinidad, su regulacin, etc. Lgicamente, la evolucin ha debido seleccionar esta redundancia de sistemas de transporte con objeto de permitir que el microorganismo sobreviva bajo diversas circunstancias ambientales. 2.4 TRANSPORTE DE HIERRO

El hierro es un cofactor de muchas enzimas y citocromos, por lo que las bacterias necesitan captarlo. La captacin de hierro se complica porque el in frrico (Fe3+) es muy insoluble. Adems, las bacterias que viven dentro de animales superiores tienen un problema: en los fluidos y tejidos de sus patrones el hierro libre es muy poco abundante (el hierro suele

estar acomplejado con protenas), por lo que se vuelve vital aprovisionarse con este elemento de alguna manera. Muchas bacterias secretan unas molculas de bajo peso molecular llamadas en general siderforos, que son capaces de formar quelatos (complejos) con el hierro frrico. Por ejemplo, Escherichia coli secreta un siderforo llamado enterobactina. Cuando la enterobactina se une al hierro, forma un complejo octadrico, que luego se engarza con un receptor especfico de la membrana externa, tras lo que el hierro se libera al espacio periplsmico, desde donde entra al citoplasma por medio de una protena de unin periplsmica acoplada a un sistema ABC similar al visto ms arriba. 3 3.1 ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS INTRACITOPLSMICAS MESOSOMAS

Son estructuras membranosas intracitoplsmicas que se observan en la mayor parte de las bacterias, constituidas por invaginaciones de la membrana citoplsmica. Observacin: A microscopio ptico se pueden detectar con tincin negativa con cido fosfotngstico. A microscopio electrnico se observa que, por lo general, el mesosoma se ubica en determinadas localizaciones: sitios donde se inicia la divisin celular; tabiques transversales en crecimiento (incluyendo los que delimitan el compartimento de la endospora); zonas cercanas a los nucleoides (cuerpos nucleares). Desde hace mucho tiempo se viene discutiendo si los mesosomas son en realidad estructuras autnticas de la bacteria, o como dicen otros, meros artefactos de las tcnicas microscpicas empleadas. El debate an no est apagado, segn algunos destacados microbilogos. Estructura y composicin: Los mesosomas ms caractersticos y patentes son los de bacterias Gram-positivas. Su aspecto al microscopio electrnico es el de repetidas invaginaciones de la membrana: una invaginacin primaria en forma de sculo irregular, de la que surge una invaginacin secundaria, llamada tbulo mesosmico, que rellena el hueco de la invaginacin primaria. El tbulo mesosmico suele consistir en un conjunto de pequeas vesculas arrosariadas, o tbulos, conectados entre s, a veces con aspecto de cebolla. Los mesosomas de Gram-negativas son menos conspicuos y menos complejos: se manifiestan como pequeas invaginaciones de la membrana, con forma laminar o a base de tubos dispuestos de forma verticilada. Funciones: La porcin de membrana del mesosoma correspondiente a la invaginacin primaria (pero no as a la secundaria) posee una composicin semejante a la de la membrana citoplsmica, por lo que se le pueden aplicar los papeles que ya hemos estudiado (transporte de electrones, sntesis de componentes de las envueltas...).

Probable papel en la sntesis del septo transversal, quiz regulando las autolisinas implicadas en la divisin celular (vase tema 5bis). Puntos de anclaje del cromosoma bacteriano (y quiz de algunos plsmidos), actuando en la segregacin de los cromosomas hijos a las clulas hermanas (y en el caso de las bacterias esporuladas, en la segregacin de los cromosomas a los compartimentos de la clula madre (esporangio) y de la preespora. Zonas de secrecin de ciertas exoenzimas (p. ej., penicilinasa en Bacillus). 3.2 CROMATFOROS

Son invaginaciones de la membrana citoplsmica de las bacterias purpreas (un grupo de bacterias fotosintticas anoxignicas) que albergan su aparato fotosinttico. Dependiendo de las especies, pueden adoptar formas variadas: A modo de vesculas huecas; capas de repliegues concntricos, a modo de lminas paralelas, cercanas a la membrana citoplsmica; formando tbulos, aislados o en haces. Los cromatforos suponen obviamente una adaptacin para aumentar la superficie de membrana til capaz de realizar las funciones propias de la fotosntesis. 3.3 OTRAS INVAGINACIONES

En muchas bacterias quimiolitoautrofas (especialmente las nitrificantes) existen invaginaciones de la membrana (a menudo denominadas citomembranas) que permiten una mayor superficie para la realizacin de sus actividades respiratorias. Sus formas y disposiciones son igualmente muy variadas (vanse fotomicrografas). En Azotobacter, una bacteria aerobia fijadora de nitrgeno atmosfrico, y que presenta una altsima tasa respiratoria, se pueden detectar tambin invaginaciones de membrana que aumentan la superficie disponible para sus intensos procesos de oxidacin. 3.4 TILACOIDES

Son sacos membranosos aplastados presentes en las cianobacterias, que no estn en continuidad con la membrana citoplsmica; en su cara externa se disponen filas de ficobilisomas (vase captulo 7). El conjunto de membrana tilacoidal + ficobilisomas es el responsable de la fotosntesis oxignica en este grupo de procariotas.