PARTICIPACIN DE LOS ASTROCITOS DE LA REGIN CA1 DEL HIPOCAMPO EN LA FORMACIN DE LA MEMORIA DE LARGO PLAZO FACILITADA POR NICOTINA Salgado

Puga, K. G.(1); Garca Colunga, J.(2); Lpez Hidalgo, M.(2); Medina Fragoso, A. C.(2)
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Facultad de Qumica / Universidad Autnoma de Quertaro Instituto de Neurobiologa / Universidad Nacional Autnoma de Mxico

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RESUMEN
Evidencias recientes han mostrado que los astrocitos participan en los procesos de aprendizaje y memoria. De igual forma, el uso de sustancias exgenas como la nicotina y sus anlogos se ha mostrado que facilitan el aprendizaje y la memoria. En este trabajo se propone evaluar la participacin de los astrocitos en el aprendizaje y la memoria facilitada por nicotina. Para este propsito, se estudi la facilitacin del aprendizaje y la memoria con nicotina. Un grupo de ratas fue inyectado con nicotina (1 mg/kg), i.p., otro grupo con solucin salina (1 ml/kg), i.p., ambos durante 7 das dos veces al da en un intervalo de 10 h. Las ratas fueron entrenadas en la tarea de evitacin inhibitoria con 0.4mA. La evaluacin de la memoria de largo plazo se realiz a las 48 h. Los resultados indican hasta el momento que el tratamiento crnico con nicotina, en estas condiciones experimentales, no produce una facilitacin en la formacin de la memoria de largo plazo. Debido a estos resultados, se pretende realizar cambios en el diseo experimental para poder lograr el objetivo fijado.

INTRODUCCIN La memoria y el aprendizaje son procesos complejos que han sido asociados a diversas estructuras cerebrales como la amgdala, la corteza temporal y el hipocampo. Se ha definido el aprendizaje como el proceso por el cual un organismo adquiere conocimiento acerca de su entorno, mientras que la memoria es el proceso por el cual el conocimiento es codificado, guardado y posteriormente recuperado (Kandel y col, 1991). Durante estos procesos es necesario que el sistema nervioso central tenga cambios morfolgicos y funcionales (plasticidad sinptica) que le permita adquirir y almacenar la informacin (Kandel y col, 1991). Los astrocitos son capaces de detectar la actividad sinptica mediante receptores especficos (Fellin y col, 2006) y responder a ella con la liberacin de transmisores (gliotransmisores) los cuales pueden tener efectos sobre las neuronas (Fellin y col, 2006). La interaccin entre neuronas (pre y postsinpticas) y astrocitos se ha denominado sinpsis tripartita (Araque y col, 1999). En el hipocampo aproximadamente el 60% de las sinpsis son tripartitas (Fellin y col, 2006). As, los astrocitos adems de participar en la transmisin sinptica, participan en diversos tipos de plasticidad sinptica, como el aprendizaje y la memoria (Panatier y col, 2006). De esta manera, ODowd y cols. (1994) utilizando la prueba de evitacin inhibitoria en pollos, mostraron que la inhibicin selectiva de los astrocitos con monofluoroacetato (MFA) era capaz de reducir la memoria de largo plazo. Por otro lado, se ha mostrado que la nicotina y diversos anlogos facilitan el aprendizaje y la memoria (Levin y col, 2006). En este sentido, la administracin de nicotina crnica facilita la memoria en el laberinto radial; mientras que en ratas viejas mejora el desempeo en el laberinto acutico de Morris (Levin y Rose, 1990; Socci y col, 1995). Teniendo como base la evidencia del uso de nicotina y sus anlogos para mejorar funciones cognitivas, como el aprendizaje y la memoria; y teniendo en cuenta la evidencia de la participacin de los astrocitos en estos procesos, este estudio pretende analizar la participacin de los astrocitos en los procesos de aprendizaje y memoria en ratas tratadas crnicamente con nicotina.
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Para alcanzar este objetivo general, se requieren diferentes fases experimentales, por lo que en esta estancia de verano se trabajar slo con una fase, que tiene como objetivo determinar si la administracin crnica intraperitoneal (i.p.) de nicotina producir un efecto de facilitacin en la memoria de largo plazo en ratas entrenadas en la tarea de evitacin inhibitoria. MTODO Se utilizaron ratas macho, de la cepa Wistar, con un peso entre 250 a 350g en el momento de la ciruga. Todas las ratas se mantuvieron de manera individual en cajas habitacin, con alimento y agua ad libitum, en el bioterio del laboratorio con temperatura controlada (24C 1) y un ciclo de 12:12 h luz y oscuridad. Se implantaron cnulas de 10 mm en la regin CA1 del hipocampo (bilateral) segn las siguientes coordenadas: AP -4.0 mm; ML, 2.7 mm; y DV, -2.7 mm de la superficie del crneo. Las cnulas fueron sujetadas a la superficie del crneo utilizando cemento dental y tornillos pequeos. Una vez colocadas las cnulas se les coloc un tapn que ser retirado posteriormente para la administracin de drogas. Antes del entrenamiento, las ratas recibieron crnicamente nicotina o solucin salina (i.p.) durante 7 das, dos veces al da (8:00 am y 6:00 pm). La dosis de nicotina fue 1 mg/kg en peso y de solucin salina 1 ml/kg en peso. Durante este periodo las ratas fueron manipuladas los das 2, 4 y 6 antes de empezar el entrenamiento, siguiendo el mismo horario de las sesiones de entrenamiento y de prueba (9:00 am y 3:00 pm). Una hora antes del entrenamiento se inyect 0.5ml de vehculo de MFA. Despus, el entrenamiento y la prueba se llevaron a cabo en una caja de evitacin inhibitoria (61 cm x 30 cm x 30 cm) dividida en dos compartimientos del mismo tamao separados por una puerta tipo guillotina. El compartimiento de seguridad (iluminado) tiene una rejilla en el piso. Mientras que el otro compartimiento de castigo (oscuro) tiene las paredes laterales en forma de V que llegan al piso del compartimiento. Estas lminas son electrificadas con un estimulador acoplado a una unidad de corriente constante. La duracin de los estmulos, las latencias de entrada, de escape y de retencin fueron medidas automticamente con la ayuda de una computadora. Durante el entrenamiento cada rata fue colocada en el compartimiento de seguridad durante diez segundos, despus la puerta (tipo guillotina) se abri; la latencia para pasar al compartimiento oscuro fue medida (latencia de entrada). Una vez que la rata pas al compartimiento de castigo se cerr la puerta y se aplic un choque elctrico (0.4 mA) durante 5 s, posteriormente se abri la puerta y se permiti que la rata escapara (latencia de escape), se mantuvo el choque 5 s ms. Una vez que la rata pas al compartimiento de seguridad se mantuvo 30 s, posteriormente fue regresada a su caja habitacin. Despus de 48 h del entrenamiento, se evalu la memoria de largo plazo. Esta sesin se realiz como ya fue descrito, sin aplicar el choque elctrico. Se midi el tiempo que la rata tard en pasar al compartimiento de castigo (latencia de retencin), se realiz un corte arbitrario de 600 s en los cuales si la rata no pas al compartimiento de castigo se dio por terminada la sesin. Los resultados de las latencias de entrada, de escape y de retencin, se ilustran como el promedio el error estndar. Estas latencias, se analizaron con la prueba ANOVA no paramtrica de Kruskal Wallis y se utiliz como prueba post hoc la U de Mann-Whitney o Wilcoxon en caso de grupos relacionados. La hiptesis fue evaluada con un nivel de significancia 0.05. RESULTADOS Se entrenaron 20 ratas en la tarea de evitacin inhibitoria, de las cuales 10 fueron tratadas crnicamente con nicotina durante 7 das dos veces al da previos al entrenamiento. La evaluacin de la memoria de largo plazo se realiz 48 h despus del entrenamiento. Se analizaron las latencias de entrada contra las latencias de retencin de cada grupo
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(nicotina y solucin salina), as como la diferencia entre latencias de retencin entre los dos grupos. El grupo tratado crnicamente con solucin salina mostr una latencia de retencin mayor en relacin con su latencia de entrada (*p<0.05, Wilcoxon). Del mismo modo el grupo tratado crnicamente con nicotina mostr mayor latencia de retencin comparada con la latencia de entrada del mismo grupo (*p<0.05, Wilcoxon) (Fig. 1). Sin embargo, la comparacin de las latencias de retencin entre el grupo tratado con solucin salina y el grupo tratado con nicotina no mostr una diferencia significativa (#p<0.1, U de Mann-Whitney) (Fig. 1).

Fig.1. Efecto del tratamiento crnico con nicotina en la memoria de largo plazo. Se grafica el promedio y el error estndar de las latencias de entrada y de retencin de los grupos tratados crnicamente con nicotina o solucin salina, entrenados en la tarea de evitacin inhibitoria con 0.4 mA. El grupo tratado con solucin salina mostr una latencia de retencin mayor en comparacin con su latencia de entrada (*p<0.05, Wilcoxon). De igual manera, el grupo tratado con nicotina mostr una latencia de retencin mayor en relacin a su latencia de entrada (*p<0.05, Wilcoxon). Ntese que la comparacin entre las latencias de retencin de los grupos tratados con solucin salina y nicotina no mostr diferencias estadsticamente significativas (#p<0.1, U de Mann-Whitney).

De igual manera se analizaron las latencias de escape entre los grupos tratados crnicamente con nicotina y solucin salina, donde no hubo diferencias estadsticamente significativas (p<0.1, U de Mann-Whitney) (Fig. 2).

Fig.2. Efecto de la nicotina sobre la latencia de escape. Los datos son el promedio el error estndar. La comparacin entre las latencias de escape de los dos grupos no mostraron diferencias estadsticamente significativas (p<0.1, U de Mann-Whitney).

DISCUSIN En este trabajo se estudi el efecto del tratamiento crnico con nicotina sobre la formacin de la memoria de largo plazo en la tarea de evitacin inhibitoria. Dado que la latencia de retencin fue mayor que la latencia de entrada en ambos grupos (Fig. 1), sugiere que los dos grupos tuvieron una memoria de largo plazo a las 48 h. No obstante la comparacin de las latencias de retencin entre los dos grupos (nicotina y solucin salina) no mostr una diferencia estadsticamente significativa (#p<0.1, U de Mann-Whitney), lo que sugiere que el tratamiento con nicotina, en estas condiciones experimentales, no facilit la formacin de la memoria de largo plazo. Respecto a la comparacin entre las latencias de escape de los dos grupos, no mostr una diferencia estadsticamente significativa (p<0.1, U de Mann-Whitney), lo cual indica que el tratamiento con nicotina no afect la actividad motora ni la capacidad de sensopercepcin de las ratas. CONCLUSIONES De acuerdo con los resultados obtenidos y teniendo en cuenta que diversos trabajos muestran que la administracin de nicotina facilita el aprendizaje y la memoria (Levin y Rose, 1990; Levin y col, 2006; Socci y col, 1995), la administracin crnica de nicotina va intraperitoneal, requiere de mayor tiempo y dosis ms altas. Esta propuesta est basada en el estudio de Levin y Torry (1996), donde mostraron que la administracin crnica de nicotina (5 mg/kg en peso) de tres a cuatro semanas, mejora significativamente la memoria de trabajo en el laberinto radial. Lo que nos sugiere que al hacer estas modificaciones, el realizar una curva dosisrespuesta nos permitira determinar, en la tarea de evitacin inhibitoria, a qu dosis de nicotina hay una mayor facilitacin de la formacin de memoria de largo plazo. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Araque, A.; Parpura, V.; Sanzgiri, R.P.; Haydon, P.G. Tripartite synapses: glia, the unknowledged partner, Trends Neuroscience, 22, 208-215, 1999. Fellin, T.; Pascual, O.; Haydon, P.G. Astrocytes coordinate synaptic networks: balanced excitation and inhibition, Physiology, 21, 208215, 2006. Kandel, E.R., Principles of neuronal science. McGraw Hill, 1991. Levin, E.D.; McClernon, F.J.; Rezvani, A.H. Nicotinic effects on cognitive function: behavioral characterization, pharmacological specification, and anatomic localization, Psychopharmacology, 184, 523-539, 2006. Levin, E.D. y Rose, J.E. Anticholinergic sensitivity following chronic nicotine administration as measured by radial-arm maze performance in rats, Behav. Pharmacol., 1(6),511-520,1990. Levin E.D. y Torry, D. Acute and chronic nicotine effects on working memory in aged rats, Psychopharmacology, 123(1), 88-97, 1996. ODowd, B.S.; Gibbs, M.E.; Sedman, G.L.; Ng, K.T. Astrocytes implicated in the energizing of inmediate memory processes in neonate chicks, Cognitive Brain Research, 2, 93-103, 1994. Panatier, A.; Theodosis, D.T.; Mothet, J.P.; Touquet, B.; Pollegioni, L.; Poulain, D.A.; Oliet, H.R. Glia-derived D-serine controls NMDA receptor activity and synaptic memory, Cell, 125, 775-784, 2006. Socci, D.J.; Sandberg, P.R.; Arendash, G. W. Nicotine enhances morris water maze performance of young and aged rats, Neurobiology of Aging, 16 (5), 857-860, 1995.
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