CARACTERIZAO QUMICA DA FOLHA DE Ilex paraguariensis St. Hil.

(ERVA-MATE) E DE OUTRAS ESPCIES UTILIZADAS NA ADULTERAO DO MATE

EUNICE VALDUGA * RENATO J. SOSSELA DE FREITAS ** CARLOS B. REISSMANN ** TOMOE NAKASHIMA **

A Ilex paraguariensis St. Hil. (erva-mate) uma espcie nativa da Amrica do Sul. As suas folhas e ramos finos, secos e triturados so utilizados como chimarro, terer, mate solvel, ch mate e em preparaes farmacuticas. Em funo da alta demanda do produto, o mercado ervateiro freqentemente vtima de falsificaes, principalmente por misturas com outras espcies nativas. O presente trabalho teve como objetivo identificar, mediante tcnicas analticas qumicas e instrumentais, a presena de diferentes compostos qumicos existentes na folha de erva-mate e de algumas espcies (Ilex theezans Mart., Ilex dumosa Reiss., Campomanesia xantocarpa Berg., Capsicodendrum dinisii Sch., Prunus sellowii Koeh.) utilizadas na adulterao do mate. Os resultados demonstraram que a I. dumosa apresentou, entre outros compostos, saponinas de ao hemoltica (destri as clulas que transportam o oxignio ao sangue) e o P. sellowii, cido ciandrico (0,032% na planta seca), substncia com toxidez comprovada. Constatou-se tambm, que a composio qumica das folhas est intimamente relacionada com a espcie, poca de coleta do material, posio e idade das mesmas, alm das condies de solo e clima.

Professora da Universidade Regional Integrada (URI) do Alto Uruguai e Misses, Erechim-RS. ** Professores da Universidade Federal do Paran, Curitiba-PR.

B.CEPPA, Curitiba, v. 15, n. 1, p. 25-36, jan./jun.1997

INTRODUO

Espcie nativa da Amrica do Sul a erva-mate tem marcante importncia na economia e vida cultural da Regio Sul do Brasil e pases limtrofes, como Argentina, Uruguai e Paraguai. No Paran, em razo da criao de cidades e da evoluo dos negcios ervateiros em vrias regies, tornouse co-responsvel pela sua emancipao poltica da provncia de So Paulo. A utilizao dessa planta na fabricao de bebida tnica e estimulante j era conhecida pelos aborgenes antigos da Amrica do Sul. Os primeiros cultivos datam dos sculos XVII e XVIII, durante a dominao dos padres da Companhia de Jesus sobre os ndios guaranis. Os jesutas passaram a dedicar maior ateno ao desenvolvimento do cultivo, a produo foi organizada e estabeleceram-se as primeiras prticas de manejo dessa planta, incluindo a estratificao de sementes (REITZ & EDWIN, 1967). Atualmente, as folhas da erva-mate so utilizadas como chimarro, terer, mate solvel e ch mate. Alm das tradicionais bebidas, a erva-mate tambm utilizada em preparaes farmacuticas, tendo sido incorporada por vrias farmacopias. No Ministrio da Sade brasileiro esto registradas quatorze preparaes derivadas de I. paraguariensis St. Hil., em funo das propriedades teraputicas, sendo recomendada como estimulante, antinflamatrio, anti-reumtico, tnico e diurtico (GOSMANN, 1989). Da erva-mate podem ser obtidos corantes e detergentes, especialmente para uso em hospitais. No Brasil, esses produtos esto sendo pesquisados em nvel laboratorial, porm, no exterior (especialmente nos pases do Hemisfrio Norte), a planta j conquistou mercado em funo de suas amplas possibilidades de aproveitamento. A sua produo no Brasil sofreu grandes variaes nas duas ltimas dcadas. No incio de 1970, a produo paranaense que era de 31.000 t passou para 44.000 t em 1980 e continuou a crescer at a mdia de 55.000 t/ano de erva-mate, perfazendo cerca de 37% do total da produo do pas. O Paran tambm o principal exportador, com cerca de 5.000 t/ano de mate cancheado e 4.000 t/ano de mate beneficiado (PARAN, 1993). Apesar de ser uma espcie utilizada h muito tempo e de grande importncia econmica para o pas, ainda hoje o setor ervateiro enfrenta srios problemas, principalmente os relacionados com o controle de qualidade da erva-mate. Tal fato decorre das indstrias serem na sua maioria rudimentares e conservarem os processos produtivos como tradio. Alm disso, os ervais brasileiros so predominantemente nativos, em consrcio com outras espcies florestais, tais como: congonha, cana, guavirova, alfeneiro, capororoca, pimenteira, pessegueiro bravo e outras espcies.
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Para que a erva-mate continue a representar item importante nas exportaes do Paran considera-se necessrio aliar a qualidade dos produtos com o incremento da produo, garantindo dessa forma a ampliao do mercado externo. O presente trabalho teve como objetivo identificar a presena de diferentes compostos qumicos nas folhas de I. paraguariensis (erva-mate), var. paraguariensis e das seguintes espcies nativas utilizadas na adulterao do mate: Ilex theezans Mart. (cana), Ilex dumosa Reiss. (congonha), Campomanesia xantocarpa Berg. (guavirova), Capsicodendrum dinissi Sch. (pimenteira) e Prunus sellowii Koeh. (pessegueiro bravo).

2 2.1

MATERIAL E MTODOS MATERIAL

O material foliar de I. paraguariensis (erva-mate) foi coletado em dois plantios de oito anos de idade, a cu aberto, da ervateira CAPIMAR, localizada nos municpios de Unio da Vitria - PR (UV) e Paula Freitas PR (PF). Em ambos plantios foram selecionadas quinze rvores e separadas em trs grupos, simulando blocos de cinco rvores em cada grupo. A coleta, realizada no ms de maio/93, foi padronizada, selecionando-se as brotaes primavera-vero, do tero mdio da copa, sendo dois ramos de cada face (Norte, Sul, Leste e Oeste), para obter amostras relativamente homogneas. As amostras foliares das espcies nativas de I. theezans (cana); I. dumosa (congonha); C. xantocarpa (guavirova); C. dinissi (pimenteira) e P. sellowii (pessegueiro bravo), citadas como adulterantes da erva-mate, foram coletadas nos meses de agosto/93 e maio/94, na EMBRAPA, da regio de Colombo - PR. A identificao das espcies foi realizada pelo Dr. Gert Hatsch, botnico da Prefeitura Municipal de Curitiba - PR.

2.2

MTODOS

Para caracterizao bsica das amostras foliares das diversas espcies, inicialmente o material foi seco em estufa de ar circulante (FABBE), a temperatura de 50C, pelo perodo de aproximadamente 10 horas. A seguir foi modo em moinho Willey Mill, com peneira de 1 mm, recolhido e conservado em frascos de vidro at a realizao das anlises.

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 Ensaios preliminares Os testes de umidade, resduo mineral fixo, resduo mineral fixo insolvel em HCl 10%, extrato aquoso, alcalides, esterides e/ou triterpenos, flavonides, cumarinas, fnois, cidos orgnicos, heterosdeos cianogenticos (HCN) e saponinas hemolticas foram realizados com material foliar, extratos aquoso e alcolico das espcies em estudo, nas quantidades e conforme procedimentos tcnicos descritos por COSTA (1972), FREITAS et al. (1979), MOREIRA (1979) e IAL (1985). Alcalides Para anlise qualitativa dos alcalides por cromatografia em camada delgada foram preparados extratos com 2 g de material foliar para cada amostra e extrados de acordo com as normas analticas do IAL (1985). Posteriormente, realizou-se ensaios cromatogrficos para determinar a melhor visualizao entre os eluentes (diclorometano-etanol, 99:1; benzeno-diclorometano-metanol, 70:10:5; tolueno-acetona-etanol-hidrxido de amnia, 40:40:6:2; acetato de etila-metanol-gua, 50:7:5) e reveladores (fosfomolbdico; dragendorff; iodo- iodeto de potssio) (WAGNER et al., 1983). Na anlise quantitativa da cafena, a extrao ocorreu conforme procedimento descrito anteriormente. A seguir a soluo clorofrmica foi dessecada com sulfato de sdio anidro. Posteriormente, determinou-se a absoro das solues em estudo, no comprimento de onda mximo de 276,5 nm, em espectrofotmetro ultravioleta - visvel. Polifenis Na anlise dos polifenis por cromatografia em camada delgada foram preparados extratos das espcies em estudo por decoco. Aplicou-se em placas os extratos e as amostras padres de rutina e cido clorognico. Utilizou-se como fase mvel soluo de acetado de etila-cido frmicocido actico-gua (100:11:11:27) e como revelador o reativo de NEU (WAGNER et al., 1983). Efetuou-se de acordo com os procedimentos descritos em BRASIL (1986) a anlise quantitativa dos taninos. Em seguida, determinou-se espectrofotometricamente a absorbncia das solues em estudo e do padro (cido tnico), no comprimento de onda de 760 nm.

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 Componentes minerais A determinao do contedo de minerais (N, P, K, Ca, Mg, Mn, Cu, Zn e Fe) das amostras foi realizada na matria seca das folhas modas. Determinou-se o nitrognio pelo mtodo macro-kjeldahl, conforme descrito por FREITAS et al. (1979). Para anlise do contedo de fsforo, potssio, clcio, magnsio, mangans, cobre, zinco e ferro, inicialmente submeteuse o material a incinerao em mufla a 550C e solubilizao em HCl a 10%. Nas solues obtidas analisou-se o fsforo por espectrofotometria com molibdato-vanadato de amnia, o potssio por fotometria de emisso e clcio, magnsio, mangans, cobre, zinco e ferro (Ca, Mg, Mn, Cu, Zn e Fe) por absoro atmica, de acordo com metodologia de HILDEBRAND (1977).

3 3.1

RESULTADO E DISCUSSO ANLISES QUMICAS PRELIMINARES

Os resultados da abordagem qumica preliminar das amostras foliares das espcies de I. paraguariensis (erva-mate - UV, PF); I. theezans (cana); I. dumosa (congonha); C. xantocarpa (guavirova); C. dinisii (pimenteira) e P. sellowii (pessegueiro bravo) encontram-se no Quadro 1. Os ensaios qumicos preliminares, em folhas de erva-mate, demonstraram a presena de alcalides, esterides e/ou triterpenos, flavonides, compostos fenlicos e cidos orgnicos, alm da ausncia de cumarinas, heterosdeos cianogenticos e saponinas hemolticas. A espcie I. dumosa (congonha) apresentou, alm de outros compostos, atividade hemoltica. A constatao de substncias hemolticas foi visualizada pela formao de pequena mancha branca, contra o fundo vermelho do gar-sangue (halo de hemlise), cuja ao est relacionada com a presena de saponinas hemolticas. HEINZMANN (1991) avaliou a atividade hemoltica da espcie I. dumosa, em placa cromatogrfica, no a tendo detectado nas fraes butanlicas na concentrao de 100 g. No entanto, em precipitado de saponinas com diclorometano a partir de folhas secas detectou atividade hemoltica na mesma concentrao. O P. sellowii (pessegueiro bravo) apresentou resultado positivo no teste de heterosdeos cianogenticos (HCN), constatando-se teor de 0,032% de HCN em folhas secas.

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QUADRO 1 - PESQUISA QUMICA PRELIMINAR EM FOLHAS

COMPONENTES
ERVAMATE *UV ERVAMATE **PF CAN A CONGONHA GUAVIROV A PIMENTEIRA PESSEGUEIRO BRAVO

Umidade, % 7,77 Resduo mineral 5,05 fixo, % Resduo min. 0,29 insolvel HCl 10%, % Ext. aquoso, % 33,90 Alcalodes + Esterides e/ou + triterpenos Flavonides + Cumarinas Fenis com + posio O e M livres Fenis com + posio P livre Fenis em geral + cidos + orgnicos Heterosdeos cianogenticos Sap. hemolticas *UV = Unio da Vitria. **PF = Paulo Freitas.

6,18 5,14 0,68

8,08 4,14 0,14

7,43 2,26 0,13

9,01 4,05 0,26

7,45 4,73 0,01

5,79 4,61 0,32

29,43 22,06 + + + + + + + +

18,18 + + -

23,62 + +

31,34 + +

35,79 + +

+ + + -

+ + + -

+ + +

+ + + -

+ + + -

+ + + -

3.2 ALCALIDES Anlise qualitativa Testou-se diversas fases mveis e reveladores para a pesquisa de alcalides conforme literatura consultada. Os resultados foram considerados satisfatrios com a fase mvel constituda de diclorometanoetanol (99:1), em cmara saturada com hidrxido de amnia e visualizada com reativo de iodo-iodeto de potssio. Apenas os extratos de erva-mate revelaram presena de alcalides com caractersticas cromatogficas semelhantes ao padro cafena.

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 Anlise quantitativa Na Tabela 1 encontra-se o resultado da anlise quantitativa por espectrofotometria, especificamente para a cafena.

TABELA 1 - CONCENTRAO DE CAFENA NAS FOLHAS DE ERVAMATE AMOSTRAS MNIMO Erva-mate UV PF 1,08 0,74 1,66 0,99 1,38 0,82 CAFENA (%) MXIMO MDIA

Observou-se que a erva-mate do plantio de Unio da Vitria (UV) apresentou teor mais elevado de cafena. Acredita-se que a diferena esteja associada s condies do solo ou idade da folha. PAULA (1968) constatou que a riqueza relativa em alcalides diminui com a idade da folha. Assim, amostras de erva-mate de quatro estgios diferentes de idade (2-3 ltimas folhas do broto; 3-4 seguintes mais desenvolvidas; folhas plenamente adultas - 1 ano; folhas velhas - mais de 3 anos) apresentaram teores mdios de 2,39; 2,05; 1,60 e 0,68 % de cafena, respectivamente. Os teores de cafena obtidos por BALTASSAT et al. (1984) e VERGNES & ALARY (1986), nas amostras de erva-mate, foram de 0,78-1,2% e 0,61,6%, respectivamente, resultados que se enquadram na faixa de variao registrada neste trabalho. No entanto, tudo indica que h a possibilidade de se encontrar na erva-mate beneficiada, que constituda de folhas de mais ou menos 1, 2 e 3 anos, alm de quantidade varivel de talos, teores menores que os citados acima.

3.3

POLIFENIS

Na anlise cromatogrfica de polifenis, amostras autnticas de rutina (flavonide) e cido clorognico (tanino), foram aplicadas em soluo volumtrica sobre a placa cromatogrfica. As amostras com resultados positivos foram detectadas por manchas de tamanho e intensidade de colorao semelhante s substncias de referncias, aps a revelao.
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Os cromatogramas indicaram a presena de rutina apenas nas amostras de erva-mate e congonha. A presena de compostos derivados do cido clorognico foi detectada em todas as amostras. A concentrao de taninos (acido tnico) nas espcies estudadas encontra-se na Tabela 2.

TABELA 2 - CONCENTRAO DE TANINOS NAS FOLHAS DAS ESPCIES ESTUDADAS AMOSTRAS MNIMO Erva-mate UV PF Cana Congonha Guavirova Pimenteira Pessegueiro bravo 10,23 6,46 5,20 3,72 21,71 6,85 13,74 11,78 7,69 5,24 3,76 21,75 6,89 13,78 11,10 7,17 5,22 3,74 21,73 6,87 13,76
CIDO TNICO (%)

MXIMO

MDIA

Observou-se diferenas significativas nas concentraes de taninos entre as espcies, bem como nos dois plantios de erva-mate (UV e PF). No entanto, tudo indica que as diferenas estejam associadas s caractersticas das espcies, posio e idade das folhas, condies de solo, clima e poca de coleta. Segundo COSTA (1972) a riqueza relativa de taninos varia em funo do rgo da planta, idade e estagio de desenvolvimento. PAULA (1968) constatou que o teor de taninos nas folhas de erva-mate aumenta com a idade at estas tornarem-se adultas, diminuindo em seguida nas folhas mais velhas e variando tambm em funo da poca de coleta do material. O referido autor encontrou resultados similares aos do presente trabalho para o mesmo perodo de coleta do material (outono/inverno).

3.4

COMPONENTES MINERAIS

As concentraes dos macronutrientes (N, P, K, Ca e Mg) encontram-se na Tabela 3.

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TABELA 3 -

TEORES DE MACRONUTRIENTES NAS FOLHAS DAS ESPCIES ESTUDADAS

AMOSTRAS

Ca

Mg

(%)
Erva-mate UV PF Cana Congonha Guavirova Pimenteira Pessegueiro bravo 2,74 2,04 0,99 1,29 1,18 1,39 1,96 0,12 0,11 0,04 0,05 0,05 0,08 0,10 0,83 0,80 0,72 0,24 0,62 1,16 0,43 0,89 1,10 1,24 0,88 1,32 1,18 1,76 0,28 0,91 0,55 0,40 0,39 0,31 0,66

Observou-se que a erva-mate do plantio de Unio da Vitria (UV) apresentou a mesma relao obtida por REISSMANN et al. (1992) nos mesmos plantios, isto , teores mais elevados de N e P, e menor teor de Mg. As concentraes obtidas neste trabalho, quando comparadas s do referido autor, so inferiores para o N, P e K, e superiores para Ca e Mg, em ambos os plantios. No entanto tudo indica que o teor baixo de K esteja associado ao perodo de baixa atividade fisiolgica da planta (outono/inverno) e tambm em funo das intensas chuvas que ocorreram neste perodo, o que pode ter acarretado lavagem das folhas. O Ca ao contrrio do K, sendo um elemento pouco mvel, menos suscetvel a lixiviao. Na Tabela 4 encontram-se os teores dos microelementos (Mn, Fe, Cu e Zn) analisados nas folhas das espcies em estudo. Observou-se que a erva-mate do plantio de UV apresentou teores mais elevados de Fe e Cu e baixo teor de Mn, quando comparado ao de PF. No entanto, no apresentou a mesma disperso e heterogeneidade dos resultados obtidos por REISSMANN et al. (1992) nos mesmos locais de coleta. Estas variaes provavelmente esto associadas poca de coleta do material, absoro desses elementos pela planta e condies do clima.

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TABELA 4 - TEORES DE MICRONUTRIENTES NAS FOLHAS DAS ESPCIES ESTUDADAS AMOSTRAS Mn Fe ppm Erva-mate UV PF Cana Congonha Guavirova Pimenteira Pessegueiro bravo 433,0 732,0 336,0 838,0 98,0 306,0 400,0 83,3 69,0 100,6 85,4 99,6 66,4 74,2 18,2 13,9 10,8 8,6 18,8 7,2 11,6 31,4 36,7 46,0 34,0 20,0 22,0 43,0 Cu Zn

4 CONCLUSO Os resultados obtidos no presente trabalho permitem concluir que: A constituio qumica das folhas de I. paraguariensis, var. paraguariensis (UV, PF), I. theezans, I. dumosa, C. xantocarpa, C. dinisii e P. sellowii demonstrou, de modo geral, a presena de alcalides, polifenis, flavonides, triterpenos e cidos orgnicos. Somente as espcies I. theezans, I. dumosa e P. sellowii apresentaram cumarinas, saponinas hemolticas e heterosdeos cianogenticos (0,032% de HCN em planta seca), respectivamente; A anlise quantitativa de cafena indicou teor mais elevado para o plantio UV (1,38%), quando comparado ao PF (0,82%), cuja diferena pode estar associada s condies do solo ou idade das folhas; A anlise cromatogrfica de polifenis indicou a presena, na amostra de I. paraguariensis, de substncia com comportamento semelhante rutina, e traos da mesma na amostra de I. dumosa. A presena de compostos derivados do cido clorognico foi detectada em todas as amostras em estudo; Diferenas significativas foram observadas nas concentraes de taninos (cido tnico) entre as espcies em estudo, com teores que variaram de 3,74 a 21,73%. No entanto, tudo indica que as diferenas estejam associadas s caractersticas das espcies, posio e idade das folhas, condies de solo, clima e poca de coleta do material;
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 Na interpretao dos nveis de nutrientes (N, P, K, Ca, Mg, Mn, Fe, Cu e Zn) constatou-se teores mais elevados de N, P e K, e baixos de Mg e Mn em folhas de erva-mate do plantio de Unio da Vitria, quando comparado ao de Paula Freitas. Nas espcies I. theezans, I. dumosa, C. xantocarpa, C. dinisii e P. sellowii, de modo geral, verificou-se elevados teores de Mn e Cu e baixos de P, quando comparados ao teor de outras folhosas.

Abstract
The Ilex paraguariensis St. Hil. (mate) is a native species of South America. Its leaves and fines, dry and triturated are used to prepare chimarro as well as for terere, soluble tea, tea and for pharmaceuthical applications. Due to the high demand of the product, adulteration with other native species is frequent. This paper deals with the identification of different chemical compounds in the leaves of mate and in some other species, commonly used in the adulteration of it, by means of chemical and instrumental analyses. The results indicated that I. dumosa contained, among other compounds, saponins of hemolitic action while P. sellowii presented cianidric action (0,032% in the dry plant). It was also verified that the chemical composition is highly related to the species, to the harvest time, to the position and age of leaves and to climate and soil conditions.

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