Interpretacin de resultados de serologa para el diagnstico de enfermedades de los cerdos El diagnstico definitivo de las enfermedades es basado en una combinacin

de la historia y observaciones clnicas, pruebas de laboratorio y necropsias, incluyendo la revisin en el rastro. La valoracin del nivel de enfermedad y el efecto de medidas teraputicas o preventivas puede ser obtenida por el monitoreo de los niveles de enfermedad en un punto en el tiempo (prevalencia) o durante perodos (incidencia). Datos muy tiles para el diagnstico pueden ser obtenidos de exmenes de laboratorio hechos en suero, secreciones y tejidos. Es conveniente combinar el examen clnico con las pruebas de laboratorio en el monitoreo del estado de salud de los hatos. Para la vigilancia, los anlisis serolgicos son frecuentemente realizados en muestras tomadas de los hatos mensual o trimestralmente. Para la verificacin final en los hatos, son requeridos mtodos como aislamientos o cultivo de agentes, PCR o ELISA de captura, los cuales demuestran la presencia del agente patgeno. Las pruebas de laboratorio son usadas para: - Detectar agentes patgenos o toxinas responsables de brotes de enfermedad y evaluar el estado de infeccin o exposicin de los animales en forma individual. - Determinar que un hato fue infectado con o expuesto a un patgeno, y cual edad o grupos de produccin (subpoblaciones) fue afectada. - Estimar el porcentaje de cerdos con anticuerpos a un patgeno. - Monitorear la respuesta serolgica del hato posterior a la vacunacin. - Monitorear el progreso y xito de los programas de control y erradicacin de enfermedades. Cuando los ensayos de laboratorio son usados para monitorear un hato, la sensibilidad y especificidad de las pruebas necesitan ser conocidas para poder interpretar los resultados. Sensibilidad: probabilidad de que la prueba identifique correctamente los animales infectados, verdaderos positivos/(verdaderos positivos + falsos negativos). Especificidad: probabilidad de que la prueba identifique correctamente los cerdos no infectados, verdaderos negativos/(falsos positivos + verdaderos negativos). Una forma de determinar el estado sanitario de la granja puede ser mediante la realizacin de perfiles serolgicos, con el objetivo de conocer el grado de infeccin de la poblacin. Se denomina perfil serolgico al muestreo de grupos de animales y etapas reproductivas de una granja para detectar la presencia de anticuerpos. Con este mtodo se puede determinar a cuales microorganismos patgenos ha sido expuesta la piara, cuando se infecta, cuanto tiempo tardan en desaparecer los anticuerpos maternos, el nmero de animales con anticuerpos inducidos por infecciones naturales o por vacunas y las posibles interacciones entre los diferentes grmenes.

Para este tipo de monitoreo se deben obtener muestras de sangre de animales de diferentes grupos con intervalos de dos, tres o cuatro semanas de edad, siendo este ltimo la forma mas prctica. En el caso de los animales reproductores se obtienen muestras de las hembras de reemplazo y del primero al sexto o ms partos. En el caso de los sementales el diagnstico puede ser de tipo individual. Para la interpretacin de los seroperfiles se debe considerar el tipo de sistema de produccin, observaciones clnicas, resultados anteriores de serologa y de otras pruebas de laboratorio, as como conocer las caractersticas de cada prueba y su interpretacin de acuerdo al agente infeccioso, por el tipo de respuesta serolgica que induce y el tiempo que tardan en aparecer y desaparecer los anticuerpos, adems de las posibles interacciones entre los grmenes y la duracin de la inmunidad materna. La presentacin de los resultados en forma grfica facilita su interpretacin y muestra un panorama general del estado sanitario del hato. El mtodo tiene una amplia aplicacin en investigaciones epizootiolgicas, investigaciones de campo y control de la calidad. Pueden establecerse perfiles de base como objetivos para la vacunacin o como una base a partir de la cual pueden demostrarse desviaciones del perfil normal cuando se encuentre un problema de campo y control de la calidad. La confirmacin de una infeccin viral puede ser obtenida comparando los ttulos de anticuerpos en sueros colectadas en la fase aguda de la infeccin contra los ttulos de anticuerpos en sueros obtenidos en la fase convaleciente (2 a 4 semanas despus de la fase aguda). Un aumento de cuatro veces o ms en el ttulo de anticuerpos determinantes en la fase convaleciente es indicativo de un proceso infeccioso activo. La presencia de anticuerpos en una muestra nica de suero no tiene valor diagnstico para determinar una infeccin reciente, ya que algunos anticuerpos persisten mucho tiempo despus de haberse presentado el problema infeccioso. Los mtodos serolgicos ms comunes que se utilizan en los laboratorios de diagnstico son los siguientes: - Aglutinacin rpida en placa (ARP) - Microaglutinacin (MA) - Doble inmunodifusin o precipitacin en gel agar (PGA) - Inhibicin de la hemoaglutinacin (HI) - Virus suero neutralizacin (VSN) - Inmunoensayo enzimtico (ELISA) - Inmunofluorescencia indirecta (IFA) - Inmunoperoxidasa indirecta (IPX) Actinobacillus pleuropneumoniae El Actinobacillus pleuropneumoniae (App) es el agente etiolgico de la pleuroneumona en cerdos, del cual se reconocen 15 serovares. No hay inmunidad cruzada entre los diferentes serotipos cuando se utiliza inmunizacin con bacterinas, aunque se considera que la infeccin natural por cualquier serotipo genera inmunidad clnica hacia otros. Las pruebas serolgicas mas utilizadas son la aglutinacin en tarjeta con los serotipos 1, 3, 5, 7, la prueba de ELISA especfica para grupos afines de serotipos ya que detecta anticuerpos contra las toxinas y contra los lipopolisacridos de la pared celular de la bacteria. La identificacin de anticuerpos a una serovariedad especfica o sus toxinas puede indicar una medida de proteccin.

Mediante el anlisis de los resultados se puede determinar cul es el serotipo que afecta a los animales, Se ha encontrado que los serotipos 1 y el 5 son los ms frecuentes y patgenos en Amrica. La presencia de anticuerpos indica que los animales se infectaron entre tres a cuatro semanas antes. La deteccin de anticuerpos es de poco valor diagnstico en brotes recientes pero provee una importante herramienta en investigaciones epidemiolgicas. La determinacin de anticuerpos en el suero puede ser usada para determinar los perfiles de hatos o para demostrar la presencia de anticuerpos obtenidos en el calostro. Brucelosis La Brucelosis es causada en los cerdos por Brucella suis, que afecta tambin a caballos, bovinos y perros. Otras especies del gnero relacionadas antignicamente, corresponden a B. abortus, B. melitensis, B. ovis y B. canis. B. suis tiene 5 biovares y el husped ms comn de los biovares 1 y 3 es el cerdo, y se distribuyen en todo el mundo. La prueba serolgica que se utiliza es la aglutinacin en tarjeta con un antgeno que consiste de una suspensin coloreada de Brucella abortus cepa 119-3 inactivada al calor. La prueba detecta anticuerpos aglutinantes de la clase IgG e IgM. En una granja infectada se puede encontrar un alto porcentaje de animales con anticuerpos, debido a que la Brucella es muy infecciosa y fcilmente infecta un elevado nmero de animales. En una granja libre es posible encontrar algunos sueros positivos por la prueba de aglutinacin en tarjeta, debido a una reaccin cruzada con Yersinia enterocolitica que es relativamente apatgena. Erisipela porcina La Erisipela Porcina se manifiesta por septicemia aguda o subaguda y lesiones proliferativas crnicas en los cerdos y es causada por la bacteria Erysipelothrix rhusiopathiae. Se reconocen al menos dos serovares designados como 1 y 2, aunque algunos autores han descrito hasta 26 diferentes. El ms importante reservorio de la bacteria es probablemente el cerdo domstico. Para el diagnstico serolgico se utilizan pruebas como la IFA, HI y ELISA, siendo sta la ms comn actualmente. En la mayora de las granjas hay animales con anticuerpos en ttulo de 1:200 probablemente debido a infecciones endmicas y se consideran ttulos de 1:800 ms debido a una infeccin aguda. Enteropata Proliferativa Porcina (EPP) La EPP es un grupo de condiciones agudas y crnicas que difieren en los signos clnicos pero que comparten un cambio patolgico visible a la necropsia que es el engrosamiento de la mucosa del intestino delgado y colon. El agente etiolgico desencadenante de este cuadro es la Lawsonia intracellularis (Li), que es una bacteria intracelular obligada. Las prueba serolgicas de laboratorio incluyen la IFA que detecta anticuerpos IgM e IgG contra la bacteria y no en todos los casos hay seroconversin, y la prueba de ELISA. Los resultados positivos proporcionan informacin del momento en que ocurre la infeccin por el mayor nmero de reactores seropositivos en alguno de los grupos, tomando en cuenta que la seroconversin se genera tres semanas despus de la infeccin clnica.

Leptospirosis La Leptospirosis causa prdidas reproductivas en el pie de cra y ha sido reportada en cerdos en todo el mundo. La infeccin endmica en una piara genera poca evidencia de enfermedad clnica, pero cuando es introducida por primera vez o en perodos de estrs, puede causar apreciables prdidas por abortos, nacimiento de lechones muertos a trmino, nacidos dbiles de reducida viabilidad o infertilidad. La prueba de MA es ampliamente utilizada y requiere de las diferentes serovariedades como antgenos. A partir de ttulos de 1:100 se considera la prueba especfica para la serovariedad infectante y detecta anticuerpos IgG e IgM. Las bacterinas rara vez inducen ttulos de anticuerpos mayores de 1:50 por lo que la prueba no los detecta. La presencia de anticuerpos en suero fetal es diagnstico de aborto por Leptospira sp. Ttulos del suero entre 1:100 a 1:400 son indicativos de que los animales sufrieron una infeccin hace tiempo o en algn momento de su vida. Ttulos de 1:800 ms, podran sugerir que ocurri un brote agudo recientemente. Para demostrar que hubo un brote, se deben tomar muestras pareadas con un mes de intervalo, y demostrar que hubo incremento de por lo menos cinco diluciones en el ttulo. Se considera que los animales seropositivos son portadores y estn excretando leptospiras, y las bacterinas rara vez inducen ttulos mayores de 1:20. Micoplasmosis La Neumona Enzotica causada por Mycoplasma hyopneumoniae ha sido considerada una de las enfermedades econmicamente ms importantes del cerdo. Otros micoplasmas patgenos para el cerdo son M. hyorhinis que causa poliserositis y artritis en cerdos jvenes, M. hyosynoviae causa artritis en cerdos en crecimiento y finalizacin, y aquellos no asociados con patologas o poco comunes donde se incluyen el M. flocculare, M. sualvi, M. hyopharyngis. Para el diagnstico serolgico se utiliza principalmente la prueba de ELISA indirecta y otra competitiva. Los anticuerpos pueden tardar en aparecer entre cuatro a seis semanas aunque se ha reportado que la prueba de ELISA detecta anticuerpos tres semanas despus de la exposicin a Mh y persisten por un periodo largo de 52 semanas. Salmonelosis Existen muchos serotipos de Salmonella que tienen un amplio rango de huspedes y estn distribuidos mundialmente, hay varios que estn completamente adaptados a un solo husped como es la S. typhi (humanos), S. dubln (bovinos) y S. choleraesuis (cerdos). Muchos serotipos no estn asociados con enfermedad manifiesta y parecen tener limitados huspedes y rango geogrfico. La prueba de aglutinacin en placa que detecta anticuerpos contra Salmonella spp es poco usada para el diagnstico en cerdos y actualmente la prueba de ELISA detecta anticuerpos de manera ms precisa pero incluyendo los que son inducidos por una o varias especies, lo que indica que los animales se infectaron con alguna especie. Enfermedad de Aujeszky La Enfermedad de Aujeszky (EA) es causada por un Herpesvirus subfamilia alphavirus del cual el cerdo es el nico husped natural, donde puede generar infecciones subclnicas y latentes. Puede infectar tambin bovinos, ovinos, caprinos, gatos, perros, ratas, ratones, y en raras ocasiones a equinos, donde la enfermedad es letal. La prueba de ELISA indirecta detecta anticuerpos contra el virus completo, por lo que no se puede diferenciar entre animales infectados con virus de campo o vacunados y se

puede utilizar para determinar la respuesta de los animales a la vacuna siempre y cuando no estn infectados con virus de campo. La ELISA competitiva G1 se utiliza para diferenciar animales inmunizados con vacunas que contienen virus atenuado (gI-) y que no producen anticuerpos contra el antgeno gE (gI), de los cerdos infectados con virus de campo, que si tienen anticuerpos contra gE (gI). Las pruebas de ELISA son muy sensibles y especficas para el diagnstico. Se puede detectar a un animal infectado con 95% de confianza cuando la prevalencia es entre el 2 al 3%, dependiendo del nmero de animales en la granja. Si los resultados son negativos no se puede asegurar que no existan animales infectados. La IPX indirecta detecta anticuerpos contra el virus completo y no se puede diferenciar entre animales infectados con virus de campo o vacunados. Con el resultado del porcentaje de las hembras de cra seropositivas, se puede estimar la prevalencia y tomar medidas para reducirla o tratar de erradicar la enfermedad de la granja. Para conocer la prevalencia real se deben muestrear a todos los animales del pie de cra, sementales y machos celadores. Con los resultados de los cerdos de desarrollo y engorda se puede determinar si el virus de la EA se est multiplicando en este grupo de animales y existe una relacin directa entre la seroprevalencia en las hembras de cra y la infeccin en los cerdos jvenes. Enfermedad del Ojo Azul La Enfermedad de Ojo Azul (EOA) es causada por un virus de la familia Paramixoviridae, genero Rubulavirus relacionado con el virus de las paperas humana. Se asocia con problemas nerviosos, falla reproductiva en cerdas, orquitis y epididimitis en machos, y ocasionalmente opacidad de la cornea. No se han detectado diferencias serolgicas entre los diferentes aislamientos. La prueba de laboratorio mas usada para detectar anticuerpos es la HI, y otras pruebas son la ELISA y la IPX indirecta. La dilucin del suero considerada positiva o con anticuerpos puede variar en zonas libres donde los sueros son negativos a una dilucin de 1:2; Sin embargo, en zonas endmicas se considera un suero positivo a partir de 1:40 y ttulos elevados de ms de 1:60, son sugerentes de una infeccin aguda. Fiebre Porcina Clsica La Fiebre Porcina Clsica (FPC) es causada por un virus del gnero Pestivirus, familia Flaviviridae, relacionado antignicamente con los virus de la Diarrea Viral Bovina y la Enfermedad de la Frontera, los cuales infectan a bovinos, ovinos, caprinos y al cerdo. La FPC puede seguir un curso agudo, subagudo, crnico, atpico o inaparente, dependiendo de la virulencia del virus infectante y a la situacin inmunolgica de la piara, si est vacunada o no. El cuadro agudo es causado por virus de alta virulencia en animales susceptibles, y generalmente resulta en alta morbilidad y mortalidad, mientras que la infeccin por virus de baja virulencia o en animales con alta inmunidad puede pasar desapercibida. No es posible diferenciar los anticuerpos vacunales de los anticuerpos generados por el virus de campo. Muchos animales respondern serolgicamente aproximadamente un mes y medio despus de la infeccin por el virus de campo de la FPC, e incluso es posible encontrar un alto porcentaje de animales que no responden serolgicamente a la infeccin,

Por medio de las pruebas serolgicas se busca la deteccin de anticuerpos y determinar el porcentaje de animales con anticuerpos vacunales debe ser ms del 80% dos meses despus de haber sido vacunados, y en ms del 80% de las hembras de cra. Los anticuerpos maternos deben tener por lo menos una vida media de un mes aunque pueden permanecer ms tiempo. Gastroenteritis Transmisible de los Cerdos (GTC)/ Coronavirus Respiratorio Porcino (CRP) La Gastroenteritis Transmisible del Cerdo (GTC) es una enfermedad entrica viral del cerdo, altamente contagiosa caracterizada por vmito, diarrea severa y alta mortalidad (hasta el 100%) en cerdos menores a dos semanas de edad. Aunque los cerdos de todas las edades son susceptibles a esta infeccin viral, la mortalidad en animales mayores de cinco semanas es muy baja. Solo se conoce un serotipo del virus de la GTC y las cepas del virus del CRP no son distinguibles de la GTC por la prueba de VSN, pero pueden diferenciarse por la prueba de ELISA. Con respecto al CRP, ste es causado por una mutacin del virus de la GTC, el cual infecta clulas epiteliales del tracto respiratorio y macrfagos alveolares. Los cerdos infectados por el CRP producen anticuerpos que neutralizan al virus de la GTC. La prueba de ELISA diferencial (TGE/PRC) se utiliza para diferenciar anticuerpos contra el virus de la GTC o el CRP. Influenza Porcina La Influenza Porcina (IP) es una enfermedad respiratoria aguda del cerdo causada por los Virus de Influenza Tipo A, de la familia Orthomyxoviridae. De estos virus se han identificado 15 hemaglutininas (H) y 9 neuraminidasas (N), lo cual sirve para la clasificacin de los subtipos. Los tres subtipos ms comunes de virus de IP que circulan en cerdos en el mundo son el clsico porcino H1N1 relacionado a las aves y el H3N2 relacionado con los humanos. No existe inmunidad cruzada entre ambos subtipos de virus. Las pruebas de HI se utiliza para detectar anticuerpos especficos contra cada serotipo, H1N1 o H3N2; la prueba de PGA tiene baja sensibilidad y alta especificidad, y la ELISA tiene alta sensibilidad y especificidad. El diagnstico de serologa requiere el uso de sueros pareados, obtenidos durante la fase aguda de la enfermedad y el segundo de 3 a 4 semanas despus, para demostrar un incremento en la cantidad de anticuerpos. Los anticuerpos maternales persisten de 2-4 meses dependiendo el nivel inicial, y se ha observado que los grados de signos y lesiones estn relacionados con la cantidad de anticuerpos maternos. Los niveles de anticuerpos se encuentran 6 meses despus de la infeccin. Parvovirosis El Parvovirus porcino causa falla reproductiva en cerdos, caracterizada por infeccin de embriones y fetos, generalmente en ausencia de signos clnicos externos en la hembra. La enfermedad se manifiesta cuando las cerdas susceptibles se infectan durante el primer tercio de gestacin, los embriones o fetos se infectan va trasplacentaria y mueren, momificndose. Las hembras que se encuentran infectadas y pasan a su descendencia inmunidad pasiva que puede persistir entre tres y seis meses. Los niveles elevados de anticuerpos pueden

prevenir la infeccin, pero niveles bajos pueden minimizar la diseminacin a partir de animales infectados. Es importante determinar que la mayora de las hembras de cra, principalmente las de reemplazo, primero y segundo parto, tengan anticuerpos y que el virus est infectando a los cerdos de engorda, para aprovechar la circulacin natural del virus infectando a las hembras de jvenes y de reemplazo. Cuando se determina la presencia de anticuerpos en 70% de las hembras de reemplazo, primero y segundo partos, y por lo menos del 80% del resto de las hembras adultas, no es necesario vacunar a los animales ya que indica que se estn infectando en forma natural. Cuando la seroprevalencia de las hembras de reemplazo y de primero y segundo parto es menor al 70%, podra presentarse un brote en algunos animales, pero si es menor al 40%, se corre el riesgo de que el virus pueda infectar un gran nmero de animales susceptibles. En este caso, se deben vacunar a todas las hembras de cra y mezclar hembras viejas con jvenes, para que se infecten naturalmente. La pruebas serolgica mas utilizada es HI, que es muy sensible y especfica y detecta anticuerpos de la clase IgG e IgM. Un suero se considera positivo a partir de un ttulo de 1:320 y se considera que los anticuerpos fueron inducidos principalmente por virus de campo, ya que con la vacunacin rara vez se alcanza este ttulo. Ttulos de ms de 1:5,120 en un gran nmero de sueros podran ser indicacin de un brote por Parvovirus. PRRS (Sndrome Respiratorio y reproductivo del Cerdo) Para detectar la presencia de anticuerpos se han desarrollado varias pruebas que incluyen mtodos de IFA, VSN e IPX en una monocapa de clulas; sin embargo, la prueba de ELISA es la ms utilizada debido a que es sensible, especfica y el tiempo de respuesta rpido. Los anticuerpos pueden detectarse de 9-13 das posinfeccin, llegan a su valor mximo de 30-50 das, y se estima que los ttulos no son detectados despus de 4 a10 meses posinfeccin. En esta prueba los valores S/P mayores a .4 son positivos, los mayores a 2.5 indican infeccin reciente o activa, por lo que la interpretacin de estos valores puede usarse para determinar en que momento el hato ha estado expuesto al virus Las siguientes son algunas caractersticas de las pruebas utilizadas en el diagnstico serolgico de PRRS: ELISA IFA VSN ELISA de boqueo Deteccin de Ig posinfeccin 9 13 das 7 11 das 9 a 28 das 7 a 11 das Sensibilidad 100 % > 90 % Cadena especfica 97 % Especificidad 98 % 99 % Alta 100 %