UNIVERSIDAD AUTNOMA DE NAYARIT UAN

FRANCISCA GONZLEZ R.
ALUMNA

TRABAJO FINAL ESCHERICHIA COLI ENTEROPATGENA

TRABAJO

MICROBIOLOGA, PARASITOLOGA Y MICOLOGA

MATERIA

Dra. MARICELA RAMREZ RANGEL Dr. JUAN MANUEL MIRAMONTES CARRILLO

MAESTROS

II - B

MEDICINA

GRADO/GRUPO

CARRERA

INTRODUCCIN

Escherichia coli enteropatgena (EPEC) es una de las principales causas de diarrea en nios menores de dos aos en pases en vas de desarrollo. La principal caracterstica histopatolgica de la infeccin es una lesin que induce la EPEC en el intestino conocida como la lesin A/E (adherencia y eliminacin). Las bacterias se adhieren a los enterocitos y permiten la acumulacin de la actina del citoesqueleto en la regin apical de la clula, hasta formar una estructura de tipo pedestal y causar la eliminacin de las microvellosidades intestinales.

A pesar de que se conoce de modo detallado el proceso de formacin de los pedestales de actina, an no se ha esclarecido el mecanismo global de la diarrea que induce EPEC. La diarrea se ha vinculado con 3 mecanismos.

La destruccin de las microvellosidades del enterocito La salida masiva de iones hacia la luz intestinal La secrecin de alguna enterotoxina.

E. coli enteropatgena (EPEC) fue la primera en describirse y es tal vez uno de los microorganismos ms estudiados. La infeccin con EPEC es una de las causas ms comunes de diarrea infantil en pases en vas de desarrollo, como Mxico. Esto ltimo se debe en gran medida a que en el mbito local se desconocen muchos aspectos relevantes acerca de la virulencia y el diagnstico eficaz de EPEC, lo que repercute en el control adecuado de la enfermedad diarreica en los nios. El diagnstico microbiolgico de la infeccin se realiza con metodologas adicionales a las utilizadas con regularidad en el laboratorio de microbiologa clnica, entre ellas las siguientes: a) serotipificacin, b) ensayo de adherencia, c) prueba de FAS (tincin

fluorescente para actina) y d) deteccin especfica de genes que codifican a protenas incluidas en la patognesis, como el bfpA y eae.

ESCHERICHIA COLI ENTEROPATGENA (EPEC)

A mediados de la dcada de los cuarenta se identificaron en Inglaterra brotes de diarrea en nios de guarderas asociados a E. coli. Las bacterias se llamaron E. coli enteropatgenas (EPEC) para diferenciar a este tipo virulento de las bacterias de flora normal.

Una de las principales caractersticas de la infeccin es la diarrea de tipo acuoso, que puede ocurrir en diversos grados de intensidad. Adems, es comn que los nios infectados presenten vmito y fiebre. El periodo de incubacin vara de 3 a 24 horas despus de que el individuo ingiere en condiciones experimentales un inculo grande de bacterias (109 a 1010 UFC); se cree que el inculo que infecta de manera natural a los nios es mucho menor.

Una vez que la bacteria alcanza la mucosa intestinal, comienza a desencadenarse un mecanismo de patogenicidad complejo, que tiene como resultado la produccin de diarrea. Los nios menores de dos aos son la poblacin infantil con mayor susceptibilidad a la infeccin, y de ellos, la mayor prevalencia se ha observado en lactantes hasta de seis meses.

De manera alarmante, las cifras de letalidad en pases subdesarrollados son elevadas (20 a 50%), lo que convierte a la infeccin por EPEC en una anomala clnica de inmediata respuesta. Adems, se ha notificado en algunos pases latinoamericanos que la infeccin por EPEC supera a la provocada por Campylobacter spp. Y rotavirus en la poblacin infantil.

-PATOGNESIS MOLECULAR

EPEC induce una alteracin histopatolgica en el intestino conocida como lesin A/E (adherencia y eliminacin). La lesin se lleva a cabo mediante un mecanismo de virulencia complejo, que induce la degeneracin de las microvellosidades y altera la morfologa normal de la regin apical del enterocito. El modelo de patognesis de EPEC se divide en tres fases:

Adherencia inicial Inyeccin de factores y transduccin de seales Contacto ntimo.

-Adherencia inicial La adherencia es un proceso fundamental en la patognesis y de ella pueden distinguirse dos fases; la primera implica la adherencia inicial entre las mismas bacterias, mientras que la segunda supone la adherencia de las bacterias a la clula del husped. Estos fenotipos estn directamente relacionados con dos factores de virulencia importantes de EPEC: los pelos formadores de penachos (BFP, por sus siglas en ingls) y el flagelo.

Los PFP permiten que las bacterias interacten entre ellas para formar una microcolonia y el flagelo establece el contacto inicial de la microcolonia con la clula epitelial.

Los BFP son pelos o fimbrias de 7 nm de dimetro y 14 a 20 m de largo, cuya biognesis requiere 14 genes codificados en el plsmido de virulencia denominado factor de adherencia de EPEC o EAF. En este plsmido tambin estn codificados los genes del opern per (regulador codificado en el plsmido) que regula la sntesis del BFP y las protenas que secreta EPEC.

La expresin del BFP se induce in vitro en la fase de crecimiento logartmico y lo regulan factores fisicoqumicos como la temperatura, el calcio y los iones amonio. Resulta interesante que todos stos son factores que EPEC encuentra en el intestino delgado del husped. Los BFP permiten que las bacterias se agrupen entre ellas y formen microcolonias (un fenotipo conocido como autoagregacin); estos sucesos promueven la adherencia localizada tpica de EPEC en cultivo de clulas in vitro y el intestino delgado.

El contacto entre las bacterias y la clula del husped se relaciona directamente con el flagelo de EPEC. Sin embargo, tambin se han referido otros factores como la adhesina intimina o los filamentos cortos de EspA.

-Inyeccin de Factores y Transduccin de Seales Una vez que la bacteria est adherida, inyecta a la clula una serie de protenas mediante el sistema de secrecin tipo III (SSTT). La mayor parte de estas protenas est codificada en el cromosoma de EPEC, dentro de una isla de patogenicidad de 35 kb conocida como el locus de la eliminacin del enterocito o LEE.

La isla de patogenicidad LEE est organizada en cinco operones policistrnicos (LEE1 a LEE5); estos operones forman tres dominios de virulencia que codifican a los siguientes genes.-

Los operones LEE1, LEE2 y LEE3 codifican los genes de las protenas del SSTT, las cuales forman un complejo de aguja (CA)

En el LEE4 los genes de las protenas que se secretan a travs del SSTT las cuales se conocen de forma colectiva con el nombre de Esp (protenas secretadas por EPEC)

En LEE5 estn codificadas la adhesina bacteriana intimina y su receptor, llamado Tir porque se transloca por la misma bacteria a travs del SSTT hacia el interior de la clula.

Una vez adherida a la clula, EPEC inyecta factores de virulencia (Esp) mediante el SSTT-translocn, entre ellos Tir, que se inserta en la membrana de la clula y expone una regin en el espacio extracelular.

Las protenas del SSTT forman el CA; este complejo atraviesa la membrana interna, el espacio periplsmico y la membrana externa de la bacteria y permite la secrecin de protenas. El CA es una compleja maquinaria macromolecular cuya estructura y funcin estn conservadas dentro de un gran nmero de patgenos gramnegativos, como Yersinia, Shigella, Salmonella y EPEC. El SSTT de EPEC se ensambla de manera coordinada por al menos 19 protenas; la plataforma del CA inicia con la localizacin de la protena EscV en la membrana interna y EscC en la membrana externa.

A continuacin se agregan otros componentes de membrana interna (EscR, EscS, EscT y EscU) que completan la plataforma del CA. La protena EscN se agrega como el componente citoslico del SSTT; sta funciona como una ATP-asa citoplsmica para proveer la energa necesaria al sistema. La lipoprotena EscJ conecta la plataforma en la membrana interna (EscR, EscS, EscT, EscU y EscV) con la protena EscC en la

membrana externa y forma un conducto cilndrico que atraviesa el espacio periplsmico, a travs del cual pasa la protena EscF para establecerse finalmente como la punta del CA. Este complejo de aguja le permite a EPEC secretar protenas hacia el medio extracelular. A travs del CA pasan tres protenas codificadas en el LEE conocidas como protenas translocadoras. La primera de ellas, EspA, se ensambla directamente con EscF y se polimeriza en la punta o regin distal del CA.

La polimerizacin permite que la aguja molecular se extienda y forme un puente fsico que posibilita el contacto entre la bacteria y la membrana de la clula. Evidencias ultraestructurales han demostrado que EspA forma un conducto cilndrico en cuyo interior pasan las protenas EspB y EspD. Estas protenas se hallan en la membrana de la clula eucaritica y completan el conducto llamado SSTT-translocn, que conecta y permite la comunicacin molecular entre la bacteria y la clula y por el cual EPEC inyecta directamente a las protenas efectoras de la virulencia.

Las protenas EscR, EscS, EscT, EscU y EscV del SSTT se insertan en la membrana interna de la bacteria para formar la plataforma del complejo de aguja (CA) y, de manera simultnea, la protena EscC se coloca en la membrana externa. Mediante un mecanismo dependiente de Sec, la lipoprotena EscJ se sita en el espacio periplsmico y conecta a la plataforma en la membrana interna, as como a la EscC en la membrana externa. La protena EscN est ligada de

modo estrecho a la cara citoslica de la membrana interna; esta protena es una ATP-asa que provee la energa necesaria para el transporte de protenas; de esta manera pasa por el sistema la EscF, que se localiza en la punta del CA. Mediante este conducto pasa EspA hasta la punta, en donde interacta con EscF y comienza a polimerizarse. La polimerizacin permite que el CA se alargue. La EspA forma un tubo cilndrico que sirve para enviar a las protenas EspB y EspD a la membrana de la clula en donde se colocan y terminan de formar el translocn-SSTT.

Las protenas efectoras se han clasificado en protenas codificadas en el LEE (EspF, EspG, EspH, EspZ, Map y Tir) y no codificadas en el LEE (Cif, EspG2, NleC, y NleD). EspF redistribuye protenas importantes de las uniones estrechas intercelulares, con lo que se atena la resistencia transepitelial. EspG y EspG2 degradan la red de microtbulos por debajo de donde se encuentra la bacteria adherida a la clula. Por su parte, EspH modula la estructura del citoesqueleto de actina, as como la formacin de filopodios durante la lesin A/E. La protena EspZ se acumula en zonas donde crecen los pedestales de actina; empero, no se ha demostrado un papel especfico dentro de la patognesis de EPEC. Map se ubica con protenas de la mitocondria, en donde altera el potencial de membrana y propicia la liberacin del citocromo C e induccin de apoptosis.

Entre estos factores, la inyeccin de Tir en el citosol es un paso crucial durante la lesin A/E y la formacin de los pedestales. El transporte de Tir a travs del SSTTtranslocn se lleva a cabo mediante una chaperona especfica llamada CesT. Una vez en el citosol, un fragmento central de Tir (dominio hidrofbico) se inserta dentro de la membrana plasmtica de la clula, con lo que expone hacia el espacio extracelular un fragmento de 107 aminocidos conocido como TIBA (rea de unin a intimina), con el que se une a la protena de membrana externa de EPEC llamada intimina.

-Contacto ntimo y Formacin de Pedestales La ltima etapa de la infeccin por EPEC se caracteriza por la unin estrecha entre la bacteria y la clula del husped, as como la formacin de los pedestales de actina.

La intimina (una protena de membrana externa) se une con firmeza a Tir y se induce el reacomodo del citoesqueleto, lo cual favorece la formacin de los pedestales de actina y la desaparicin de las microvellosidades absortivas; ello da lugar a la lesin A/E

Tras la unin de Tir con intimina, aqul se fosforila en el residuo 474 por una protena de la familia Src-cinasa conocida como c-Fyn. La forma fosforilada de Tir recluta a la protena adaptadora Nck, la cual atrae, interacciona y activa al final a otras protenas reguladoras del citoesqueleto, como WASP (protena del sndrome de Wiskott-Aldrich) y el complejo Arp2/3. Todas estas protenas activadas atraen la polimerizacin de actina hacia la zona donde est Tir fosforilada, lo que inicia la reorganizacin del citoesqueleto.

Los pedestales se forman por debajo de donde la bacteria est adherida y se componen sobre todo de actina polimerizada y otras protenas relacionadas con actina, como actinina , fimbrina, miosina, talina y ezrina. La reorganizacin del citoesqueleto altera la morfologa y fisiologa normal de la regin apical de las clulas, lo que lleva al final a la prdida de las microvellosidades intestinales y su funcin.

-DIARREA INDUCIDA POR EPEC

A pesar de que se han estudiado con detalle cada uno de los episodios participantes en la formacin de los pedestales, el mecanismo global de la diarrea en los nios infectados con EPEC no est claro. Se cree que el cambio de la configuracin del enterocito reduce la absorcin enzimtica de nutrientes en el intestino. Sin embargo, la lesin A/E no se ha detectado en todas las biopsias de nios infectados, por lo que otros factores deben contribuir a la diarrea.

Estudios realizados in vitro han demostrado que la infeccin reduce la resistencia elctrica transepitelial de clulas MDCK (clulas de rin canino Madin-Darbin) y Caco2 (clulas de carcinoma de colon). Mutantes de EPEC con defectos en la adherencia ntima (eae) o la formacin de los pedestales no afectan la resistencia elctrica normal de las clulas. La disminucin de la resistencia elctrica se ha vinculado con incrementos del Ca++ intracelular y la redistribucin de las uniones estrechas intercelulares. El potencial de membrana en reposo (PMR) tambin se altera cuando EPEC infecta a cultivos de clulas HeLa. Las clulas infectadas con la cepa de EPEC WT o la mutante en intimina (eae) muestran una reduccin notable del PMR, mientras que en las clulas incubadas con la cepa mutante en el SSTT (escN) el PMR permaneci inalterado.

La infeccin por EPEC a clulas Caco-2 o HeLa induce tambin incrementos electrofisiolgicos de la corriente de cortocircuito (Isc) y la diferencia de potencial en cmaras de Ussing. El aumento de la Isc depende del SSTT y el translocn, ya que cepas mutantes en EspA, EspB, EspD o EscN no aumentan la Isc. Todos estos cambios en el gradiente electroqumico, que se exacerban por la disminucin de la absorcin intestinal y el incremento de la permeabilidad de la clula, son sin duda factores importantes dentro de la patognesis de la diarrea secretora.

En un esfuerzo por conocer de modo ms pormenorizado el mecanismo molecular de la diarrea, en fecha reciente estudios demostraron que EspC (una protena autotransportadora secretada por EPEC mediante el sistema de secrecin tipo V, SSTV) induce la salida masiva de iones al espacio extracelular. La actividad enterotxica se puso de manifiesto al incubar EspC purificada con tejido intestinal de rata montada en cmara de Ussing.

Adems de la actividad enterotxica, la protena EspC purificada es tambin una citotoxina. En experimentos realizados por Navarro-Garca y colaboradores se demostr que EspC induce dao al citoesqueleto de clulas HEp-2.60 El efecto

citotxico de EspC es muy parecido al que induce la toxina Pet (toxina codificada en un plsmido) de EAEC y otras toxinas autotransportadoras de enterobacterias.

De manera interesante, el gen espC slo ha podido reconocerse en cepas de EPEC de tipo I, que estas cepas son las ms virulentas. En fecha reciente tambin se ha encontrado que durante la infeccin de EPEC a cultivos de clulas epiteliales, la toxina EspC se enva directamente al citosol de la clula. A pesar de que el SSTV secreta EspC, el mecanismo de internalizacin parece tener la mediacin del sistema de secrecin tipo tres (SSTT).

En estudios recientes se ha localizado EspC en el interior de las clulas, aun antes de la formacin completa de los pedestales de actina. La toxina inyectada por la bacteria (al igual que la toxina purificada) induce la contraccin del citoesqueleto y la muerte de la clula epitelial, por lo que los autores han propuesto que EspC exacerba de manera notoria los sntomas de la diarrea en los nios.

-TIPOS VIRULENTOS DE EPEC

De manera distintiva, todas las cepas de EPEC contienen una isla de patogenicidad denominada LEE en el cromosoma bacteriano, mientras que slo los aislamientos ms virulentos codifican al plsmido EAF. Debido a estas caractersticas genotpicas hoy da se clasifica a EPEC en dos tipos virulentos: I y II. Las cepas que pertenecen al tipo I, adems del LEE, codifican al plsmido de virulencia EAF, en tanto que las de menor virulencia denominadas de tipo II no codifican al plsmido EAF.

Por otro lado, Trabulsi y colaboradores propusieron clasificar a las cepas de tipos I y II en cepas tpicas y atpicas, respectivamente, con base en la presencia o ausencia del plsmido EAF y el fenotipo de adherencia.

Las cepas tpicas (de tipo I) presentan el patrn de adherencia localizada (LA, del ingls localized adherence) sobre cultivos de clulas epiteliales, mientras que las cepas atpicas (o de tipo II) poseen adherencia semejante a la localizada (LAL, por sus siglas en ingls), adherencia difusa o, en algunos casos, adherencia agregativa.

-DIAGNSTICO DE EPEC

Como cualquier E. coli, la bacteria se asla de muestras de heces en medios selectivos y diferenciales para enterobacterias, como el agar de MacConkey o el agar de eosina y azul de metileno. Sin embargo, cuando se sospecha de un brote epidmico es necesario diferenciar los aislamientos de EPEC de las E. coli de flora normal, ya que son indistinguibles desde el punto de vista bioqumico y para ello se requieren pruebas adicionales distintas de las habituales realizadas en el laboratorio clnico.

Para el diagnstico de EPEC se utilizan las siguientes metodologas: a) serotipificacin, b) ensayo de adherencia con clulas HEp-2, c) prueba de FAS (tincin fluorescente para actina) y d) tcnicas de biologa molecular que amplifican genes que codifican a protenas de virulencia.

La serotipificacin fue el mtodo que logr reconocer a tipos especficos de E. coli causantes de diarrea infantil en la dcada de 1940; de esa manera surgi el esquema de Kauffman, que todava es una herramienta til. En Mxico, uno de los pioneros en el diagnstico e investigacin de enteropatgenos como E. coli fue Jorge Olarte, cuya investigacin en el rea data del decenio de 1950. Olarte y colaboradores desarrollaron tcnicas para la recuperacin ptima de enteropatgenos a partir de heces o sangre, como en Salmonella, y fue el primero en vincular serotipos especficos de E. coli con cuadros diarreicos en nios del Hospital Infantil de Mxico Federico Gmez. Ellos aislaron una E. coli del serotipo O111:B4 (un serotipo tpico de EPEC) de un caso mortal de diarrea; la llamaron Escherichia coli-gomez.

En la actualidad, la serotipificacin es todava un instrumento valioso en el diagnstico. En un trabajo que realizaron investigadores en Italia se detectaron mediante serotipificacin cepas de EPEC aisladas de las heces de nios con diarrea. En dicho estudio, 75% de los serotipos tpicos vinculados con EPEC mostr uno o ms factores de virulencia; cabe destacar que resultados similares a estos se han publicado en otras partes del mundo.

Autores como Cravioto y colaboradores recomiendan efectuar el anlisis serolgico de las cepas aisladas en Mxico junto con otra metodologa, ya que sus investigaciones demostraron limitaciones del anlisis serolgico en cepas de EPEC aisladas en Mxico de nios con diarrea. Las cepas de EPEC que ellos aislaron no pertenecan a serotipos comunes; pese a ello, se identificaron como EPEC mediante el ensayo de adhesin a clulas HEp-2.

La prueba fenotpica de diagnstico, considerada hoy el estndar de oro para la identificacin de EPEC, es el ensayo de adherencia sobre clulas epiteliales HEp-2 que describieron de forma inicial Cravioto y colaboradores. Este mtodo permite identificar EPEC dado que las bacterias se agrupan en cmulos o microcolonias sobre las clulas epiteliales en cultivo; dicha disposicin se conoce como adherencia localizada o fenotipo LA.

Asimismo, con la citada tcnica pueden tambin reconocerse E. coli enteroagregativa (EAEC); las bacterias de este tipo diarreognico se agrupan y forman empalizadas que se adhieren a las clulas y al cristal; tambin puede identificarse E. coli adherente difusa (DAEC), reconocible porque las bacterias se adhieren a las clulas de forma aleatoria. Una variante de la tcnica de Cravioto la propusieron en Mxico ZepedaLpez y Gonzlez-Lugo, quienes prefijaron las clulas HEp-2 con metanol fro y aadieron las clulas bacterianas para estudiar los fenotipos de adhesin; los resultados obtenidos fueron idnticos a los descritos con la tcnica tradicional.

La prueba de FAS (tincin fluorescente para actina) es una tcnica alternativa que se ha empleado con amplitud en estudios epidemiolgicos y la investigacin bsica. Mediante este ensayo se observa la acumulacin de la actina del citoesqueleto en la forma de puntos fluorescentes en la clula, en los que se encuentran los pedestales y las bacterias adheridas. La prueba de FAS se puede realizar de dos maneras: a) de modo directo en biopsias intestinales de nios con enfermedad diarreica con sospecha de infeccin por EPEC y b) en cultivos de clulas HEp-2, HeLa o Caco-2 infectadas con la cepa aislada de las heces del paciente.

En la tcnica se utiliza la faloidina, que es un compuesto que se une de manera constitutiva a la actina intracelular. Este compuesto se acopla a algn fluorocromo, casi siempre rodamina, de tal forma que mediante microscopia de fluorescencia es posible observar el citoesqueleto de actina de clulas epiteliales no infectadas con sus caractersticas fibras de estrs y, adems, puntos de acumulacin de actina sobre las clulas infectadas por EPEC, algo que se denomina prueba de FAS positiva (FAS+).

El ensayo de adherencia y la prueba de FAS son suficientes para relacionar una E. coli con el patotipo de EPEC. Sin embargo, para tener la informacin completa acerca de la capacidad patognica de la cepa aislada es preciso detectar genticamente los factores de virulencia mediante tcnicas de biologa molecular.

Los estudios moleculares se realizan sobre todo mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y con sondas genticas. Los blancos genticos para identificar EPEC son una secuencia gentica del plsmido EAF que se emplea como sonda o la amplificacin por PCR de la subunidad estructural de los BFP (bfpA) y el gen que codifica a la intimina (eae).

En 1995, Gunzburg y colaboradores obtuvieron 100% de especificidad en la deteccin de cepas de EPEC con adherencia localizada (LA+), tras amplificar el gen bfpA mediante PCR. De manera notable, la PCR para identificar EPEC se realiza en un tiempo menor de cinco horas y ello la hace una manera rpida y especfica de diagnstico. En Mxico, la mayora de los casos de diarrea que provoca EPEC no se identifica con regularidad;

pero, el laboratorio de bacteriologa molecular del Instituto de Diagnstico y Referencia Epidemiolgicos (InDRE) mantiene una vigilancia epidemiolgica con herramientas diagnsticas moleculares como el colony blot y la PCR.

Asimismo, Lpez-Saucedo y colaboradores han desarrollado en Mxico una reaccin mltiple de PCR que permite detectar en una sola reaccin cualquier tipo diarreognico de E. coli con una alta sensibilidad, incluida PEC. A diferencia de la reaccin convencional (que slo reconoce a una categora diarreognica), en la mezcla se incluyen varios pares de iniciadores para amplificar genes especficos de cada una de las categoras diarreognicas de E. coli y que en el caso de EPEC se amplifica a los genes bfpA y eae. La PCR mltiple es sensible y especfica y se ha probado en cepas provenientes de muestras clnicas y alimentos con resultados satisfactorios. En fecha reciente se ha desarrollado un ensayo que utiliza la tecnologa de microarreglos de DNA, en la que se usan sondas con genes especficos de serotipos de E. coli como el O55, O111, O114, O128 y el O157.87 La misma tecnologa de microrreglos se ha usado para extender el perfil de deteccin de antgenos somticos de E. coli, as como a los antgenos flagelares.

-EPIDEMIOLOGA Estudios epidemiolgicos realizados en pases en vas de desarrollo, incluidos Latinoamrica y Mxico, han demostrado que ETEC y EPEC son dos de los principales patgenos aislados en los casos de diarrea infantil.

Dentro de la vigilancia epidemiolgica que llevan a cabo las autoridades de salud en Mxico, se ha comunicado que EPEC se presenta en forma endmica hasta en 6% de la poblacin, una cifra muy parecida a la informada para pases industrializados como Alemania y Australia, en los que se ha encontrado que 5.9 y 7.6%, respectivamente, de nios sanos son portadores normales de cepas de EPEC.

FRECUENCIA DE AISLAMIENTO DE EPEC EN NIOS CON DIARREA Y SANOS EN DIVERSOS PASES

En lo que respecta diarrea, en Mxico detectado un alto

a se

nios

con ha

porcentaje de

pacientes infectados con EPEC. En un estudio que se condujo en Guadalajara, Jalisco, en 1987, se logr aislar cepas de EPEC en 17.5% de los casos de nios menores de dos aos con diarrea. En este estudio se identific EPEC con mayor frecuencia que otros patgenos tpicos, como Shigella, Giardia, Salmonella o rotavirus. Por otro lado, en 1991 Cravioto y colaboradores llevaron a cabo un estudio en nios con diarrea de una poblacin rural del estado de Morelos. Ellos aislaron cepas de EPEC en 19% de los casos de diarrea en nios de esa regin.

En estudio mas recientes realizados en el laboratorio de bacteriologa mdica del Hospital Infantil de Mxico (SSA), se ha logrado aislar E.coli con adherencia localizada (LA) en 7% de 208 casos de nios con un cuadro diarreico grave (cepas del tipo I). Asimismo, 12% de los casos se identificaron en cepas con adherencia parecida a la localizada (LAL) en este mismo grupo de pacientes (cepas del tipo II).

Estos resultados sugieren que las cepas EPEC (tipos I y II) inducen 17% de los casos graves de diarrea en nios que acuden al servicio de urgencias del Hospital Infantil de Mxico.

Datos similares comunic el grupo de Estrada- Garca, que reconoci cepas de EPEC atpicas (cepas del tipo II) en 21% (slo por debajo de ETEC, 27%) de 62 casos de nios menores de cinco aos internados por diarrea aguda en hospitales de la Ciudad de Mxico y Villahermosa, Tabasco.

Con estos datos epidemiolgicos es posible advertir que EPEC es una bacteria causante de 17 a 19% de los casos de diarrea infantil en diversas regiones del pas, lo que indica que en Mxico uno de cada cinco nios que enferman de diarrea puede estar infectado con este virotipo de E. coli.

En otras naciones en vas de desarrollo como Brasil y Chile, la epidemiologa de EPEC es similar.86,96-98 Gomes y colaboradores (1989) encontraron que 23% de cepas de E. coli con adherencia localizada (LA+) intervena en grado significativo en casos de nios con diarrea, aun por encima de otros patgenos importantes como rotavirus o ETEC (cuadro I). Por su parte, Tornieporth y colaboradores notificaron que EPEC intervino slo en 8% de los casos de diarrea aguda en nios del mismo pas. Como hecho de inters, las EPEC atpicas son hoy las bacterias aisladas con ms frecuencia de nios con diarrea en ese pas, con una prevalencia elevada de 10.192 a 16.4%.

En la Repblica de China se demostr que cepas de EPEC se aslan en 5% de los casos de diarrea de nios menores de tres aos. En Nigeria, Okeke y colaloradores realizaron un estudio en el que incluyeron a nios de reas rurales; EPEC se aisl slo en 2.1% de los casos de diarrea. Sin embargo, no existi diferencia significativa respecto del aislamiento de EPEC en casos de nios con un cuadro diarreico y aquellos sujetos que no presentaban diarrea.

CONCLUSIN
E. coli enteropatgena es una bacteria cuya epidemiologa se ha estudiado poco en Mxico, pese al riesgo que representa para nios menores de dos aos. Este patgeno induce dao histolgico en la mucosa del intestino delgado y lleva a los nios infectados en ocasiones a la muerte; en consecuencia, es importante contar con datos epidemiolgicos fidedignos, as como una infraestructura institucional adecuada de diagnstico para el control de esta infeccin intestinal.

El mecanismo lesivo de EPEC es un proceso sumamente complejo, pero sin duda alguna muy eficiente para la bacteria. Una vez que alcanzan el intestino delgado, las bacterias se reproducen y comienzan a adherirse entre ellas hasta formar una microcolonia. Esta ltima entra en contacto con la clula del husped mediante el flagelo y, de manera simultnea, sintetiza una aguja molecular por la cual le inyecta a la clula protenas que alteran sus funciones normales. Por consiguiente, EPEC se adhiere con firmeza, remodela la superficie apical del enterocito y crea los pedestales de actina y compromete al final la fisiologa normal del intestino, con diarrea resultante.

Los pedestales y la prdida de las microvellosidades no son la nica causa de la diarrea, pero s factores importantes. En la mayor parte de los estudios epidemiolgicos realizados en pases en vas de desarrollo, as como en Mxico, se ha observado que la infeccin por EPEC tiene una elevada tasa de morbilidad y mortalidad, lo que resalta la importancia de realizar un diagnstico microbiolgico certero y eficaz.

Para identificar a las cepas provenientes de nios con diarrea, se efectan metodologas diferentes de las habituales del laboratorio de microbiologa. Dichas tcnicas podran estar al alcance de cualquier laboratorio clnico institucional por su sencillez, como la PCR mltiple. Casi todas las tcnicas se llevan a cabo en laboratorios de investigacin o laboratorios especializados de diagnstico microbiolgico, como en el caso del InDRE. El papel que tiene el InDRE en la actualidad en Mxico es de vital

importancia, con el fin de detectar y responder ante brotes epidmicos por EPEC y notificarlos a la Secretara de Salud para su control.

Por ltimo, el diagnstico oportuno y eficaz de la infeccin por EPEC es sin duda alguna un paso esencial para el buen pronstico de los pacientes, sobre todo si se trata de nios menores de seis meses en los cuales se han visto elevadas tasas de mortalidad.

REVISIN BIBLIOGRAFA

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