Universidad Catlica del Maule Escuela de Medicina 2011

MicroRNAs y medicina regenerativa: Bases moleculares y dianas en tratamiento

Curso: Patologa y Fisiopatologa General Docente: Erik Morales Mejas Integrantes: Francisca Hernndez C. Medeline Labarca C. Felipe Leal V. Claudia Ramrez V. Javier Valderrama S. Alfonso Vargas L. Vanessa Villagra A. Fecha de entrega: 28 de junio del 2011 Fecha de presentacin: 4 Julio del 2011

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I. RESUMEN

Introduccin: Los microRNAs (miRNAs) son una clase evolutivamente conservada de pequeos RNAs y estn implicados en muchos procesos relacionados con la medicina regenerativa. Entre ellos destacan los procesos regenerativos cardiovasculares y hepticos, reparacin de heridas cutneas y enfermedades neurolgicas como la esclerosis lateral amiotrfica. Los miRNAs se presentan como un campo joven de investigacin que pueden utilizarse como posibles blancos teraputicos y tratar diversos padecimientos humanos en relacin a su rol en la medicina regenerativa. Objetivo: Dentro de los objetivos de esta revisin bibliogrfica est obtener informacin sobre qu son los miRNAs y cules son sus bases moleculares, descifrar su importancia en la medicina regenerativa, qu funciones cumplen y cmo podramos identificar y manipular dichas molculas para poder de encontrar tiles y novedosos blancos teraputicos en este campo. Resultados: Se pudo hallar informacin del tema, la que ordenamos y analizamos. A pesar de que profundizamos nuestros conocimientos, no quedamos satisfechos, ya que hay varias carencias. Falta que se realicen ms estudios para poder confirmar cada vez ms los roles de los miRNAs. Por otra parte, hay reas en las que an no se descubierto o se conoce muy poco de la participacin de ellos. Si bien es cierto que hay varios estudios, la mayora trata de experimentaciones en animales, pero falta que los estudios futuros se enfoquen en mayor proporcin a los humanos. Mtodos: Para llevar a cabo nuestra revisin bibliogrfica utilizamos diversas fuentes, como revistas mdicas, libros del tema y bases de datos como Cochrane, Scielo, y principalmente PubMed con el fin de obtener informacin actual sobre el tema. Conclusiones: Tras realizar nuestra revisin, podemos concluir que los miRNA tienen una base molecular compleja y que hay un sinnmero de posibles aplicaciones teraputicas de ellos en la medicina regenerativa, pero an es una materia nueva en donde se necesitan muchos estudios futuros para esclarecer la forma en que podemos acceder a ellos y usarlos con fines teraputicos. II. INTRODUCCIN La presente revisin bibliogrfica pretende hallar respuesta a varias inquietudes que surgen del tema de microRNAs y medicina regenerativa. Entre estas dudas estn, por ejemplo, En qu medida los microRNAs contribuyen a la medicina regenerativa? Cules son las funciones que cumplen los microRNAs en el organismo y cmo podemos usar el conocimiento de ellas en favor de la medicina? De qu forma podemos identificar y manipular a los microRNAs? Cules son las posibles aplicaciones de la medicina regenerativa? Para poder comprender estas temticas es necesario, en primer lugar, definir los principales conceptos a tratar, que son los microRNAs y tambin medicina regenerativa. Los microRNAs (miRNAs) son una clase evolutivamente conservada de pequeos RNAs. Estn codificados en el genoma y en principio son transcriptos como parte de grandes molculas que luego se modifican hasta alcanzar su forma madura de 22 nucletidos de largo aproximadamente. La medicina regenerativa es un nuevo campo de la ciencia que hace una integracin de varias disciplinas con el fin de poder aplicar los conocimientos que otorga cada una de ellas a la bsqueda de nuevas estrategias teraputicas para sanar diversas enfermedades, tratar injurias o el proceso de envejecimiento. Los principales ejes en que se basa son la reparacin, el reemplazo y la regeneracin de clulas, tejidos u rganos. Los conceptos mencionados son muy importantes, ya que su asociacin puede resultar en nuevos tratamientos y aplicaciones clnicas para muchas patologas. Por otro lado, los miRNAs representan posibles blancos teraputicos que requieren ser estudiados para poder 2

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obtener beneficios para la medicina actual y futura. Por estos motivos, es necesario revisar detalladamente la informacin que se tiene acerca de estos temas y ordenarla, realizar un anlisis crtico, informarse de las actualizaciones que van surgiendo, todo esto para contribuir a las investigaciones que requieran de esta informacin, difundir los conocimientos a la poblacin en general y aportar con nuestro propio enfoque de cmo vemos la relacin existente entre los miRNAs y la medicina regenerativa. En este trabajo, se integraron las aplicaciones que consideramos ms relevantes, enfatizando aquellas que se asocian con importantes rganos de nuestro organismo. Mostramos las diferentes formas en que los miRNAs pueden contribuir al desarrollo de la medicina regenerativa, explicando mtodos y ejemplificando con estudios ya realizados para otorgar una visin ms amplia y completa del conocimiento actual del tema. III. DESARROLLO MicroRNAs Los microRNAs (miRNAs) son una clase evolutivamente conservada de pequeos RNAs. Se ha descubierto en los ltimos aos que cumplen un papel muy importante en la regulacin de diversos procesos, como el desarrollo y patologa de varios rganos y tejidos. Estn codificados en el genoma y originalmente son transcritos formando parte de grandes molculas que sufren modificaciones hasta alcanzar su forma madura de 22 nucletidos de largo aproximadamente. Se considera que los microRNAs ejercen una regulacin negativa de la expresin gentica, ya que inhiben la traduccin y/o promueven la degradacin del RNA mensajero (RNAm) mediante el apareamiento de bases con secuencias complementarias dentro de las transcriptos codificadores de protenas del RNAm. Aunque todava no est del todo claro, algunas evidencias postulan que los miRNAs podran mejorar la traduccin bajo ciertas circunstancias. Se han identificado cientos de genes de miRNAs humanos y existen anlisis bioinformticos que muestran que stos regularan la expresin de ms del 30% de los genes que codifican para protenas en humanos. Con esto podemos hacernos una idea de la gran influencia que los miRNAs podran ejercer en la expresin gnica (1). Los miRNAs estn presentes en una amplia gama de especies desde los organismos multicelulares ms simples hasta el mismo ser humano, mantenindose sus caractersticas de forma conservada a medida que se avanza en la escala evolutiva, destacando una gran abundancia molecular por clula como en el C. Elegans en el que algunos microRNA llegan a tener hasta 50000 copias por clula (2). Sin embargo, cabe destacar su notable ausencia en organismos que son unicelulares, lo cual indica que los microRNAs en general podran ser esenciales para la diferenciacin en mltiples tipos celulares o tisulares y/o para mantener a las clulas en un estado de diferenciacin particular. Esta idea sera apoyada por investigaciones recientes, que sugieren que los microRNA seran de hecho reguladores importantes de estos procesos. Se ha visto que las clulas poco o nada diferenciadas no requieren microRNA para sobrevivir, prueba de esto es el hecho de que por ejemplo las clulas madre embrionarias de ratn que no producen mRNA son viables pero incapaces de diferenciarse (3), as tambin en el pez cebra, la mayora de los miRNA no se expresan en las clulas indiferenciadas (4,5) que cursan etapas tempranas de su desarrollo sino que luego en etapas posteriores es cuando adquieren una marcada expresin tisular especfica cuando la mayora de los tipos ya se ha formado (5). Tambin se ha observado que en muchos tipos de clulas cancergenas los niveles de miRNA son mnimos en comparacin con su tejido totalmente diferenciado de origen (6). Los microRNA se transcriben en el ncleo a partir de genes de DNA pero no traducen protenas por lo que se consideran no codificantes. La mayora de los genes codificantes de 3

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microRNAs se encuentran en regiones intergnicas y tienen su propio promotor y elementos regulatorios, sin embargo existe un 40% aproximado de genes que se encuentran en regiones intrnicas que se transcriben junto al gen hospedador. El proceso de formacin comienza cuando la RNA Polimerasa II transcribe el locus especfico de cada miRNA, el cual es ms largo que su producto final debido principalmente a la presencia de una secuencia inversa complementaria ubicada a continuacin de la regin que contiene la informacin secuencial del microRNA propiamente tal, lo cual genera al ser transcrito una estructura que se pliega sobre s misma en forma de horquilla por el pareamiento de bases complementarias, formando una doble cadena de RNA denominada pri-miRNA. sta a su vez contina su proceso en el ncleo sufriendo la escisin de sus extremos libres gracias a Drosha, una ribonucleasa especfica de RNA bicatenario, denominndose ahora pre-miRNA, que luego es transportado activamente hacia el citosol mediante la protena de exportacin nuclear Exportina-5 asociada a Ran-GTP. Luego en el citosol, el pre-miRNA es procesado por la enzima Dicer que corta la unin de las cadenas complementarias dejando un dplex de 20 a 25 bases aproximadamente que posteriormente es separado dejando libre el microRNA maduro que se une al Complejo Silenciador Inducido por RNA (RISC) formando as la unidad funcional de silenciamiento. As, ya formado este complejo, posee la capacidad de unirse de forma complementaria a la regin no traducible 3 (3-UTR) de sus mRNA blanco, el que podr ser degradado o detenido en su traduccin dependiendo si su apareamiento con el microRNA es perfecto o parcial, respectivamente (ver Figura y Tabla 1). Medicina regenerativa La medicina regenerativa, tambin conocida como ingeniera de tejidos o terapia celular, es una joven rea en el mundo de la ciencia. Este campo hace una integracin de varias disciplinas con el fin de poder aplicar los conocimientos que otorga cada una de ellas a una nueva dimensin de la medicina. Dentro de sus objetivos est lograr que las clulas, tejidos e incluso rganos, puedan tener una reparacin de los daos causados por una noxa, reemplazar aquellos elementos que ya no son necesarios o bien, hacer un cambio adaptativo y tambin regenerar aquellas partes que se hayan perdido, de modo que el organismo siga con sus funciones vitales en forma ntegra. A esta agrupacin de sorprendentes aspiraciones podramos llamarla trada R: reparacin, reemplazo y regeneracin, conceptos que nos parecen profundamente interesantes y creemos que es vital que se sigan obteniendo conocimientos en esta rea dada la revolucionaria propuesta que permitira asegurar la salud y el bienestar de las personas. Las innovadoras tcnicas que sugiere la medicina regenerativa podran aplicarse para superar o realizar el tratamiento de un sinnmero de enfermedades, injurias e incluso, el proceso de envejecimiento. Cabe destacar que hay grandes diferencias entre la medicina regenerativa y lo que se ha usado tradicionalmente para enfrentar los desafos de la medicina y de forma particular, en el tratamiento de las enfermedades, que se basa mayoritariamente en la administracin de medicamentos elaborados con sustancias qumicas. La medicina regenerativa tiene otro enfoque en el que se pueden usar protenas, cDNA, genes, clulas y tejidos. Segn la materia prima y sus caractersticas, las medicinas regenerativas son clasificadas en 4 tipos: 1) 2) 3) 4) Substancias humanas, como protenas y genes Clulas y tejidos, lo que se considera un tipo de ingeniera de tejidos Clulas madres embrionarias Materiales innovadores (7) 4

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Los mltiples estudios que se han realizado, nos han permitido ir entendiendo poco a poco varias disciplinas, de las que antes se tena poco o nada de conocimiento, lo que ha hecho de forma paralela, que vayan creciendo y adquiriendo un rol cada vez ms protagnico en la medicina regenerativa. Este nuevo y creciente conocimiento ha contribuido a realizar sorprendentes avances dentro de la medicina regenerativa, incluyendo ingeniera de tejidos, biologa de clulas madres y recambio y reemplazo de tejidos, tanto en la vida adulta de los mamferos como durante su desarrollo embrionario (8-13). Desde la salida a la luz de los primeros microRNAs que se identificaron (lin-4 y let-7), se ha demostrado el importante papel que cumplen en los procesos biolgicos, que en ese entonces se evidenci en el desarrollo de C. elegans (14). Continuamente se han seguido encontrando ms y ms procesos en mamferos que sufren la influencia de los microRNAs. Dentro de ellos podemos mencionar el desarrollo, metabolismo, proliferacin celular, apoptosis, y regeneracin celular (15,16). De este modo, este tipo de pequeos RNAs potenciar sin lugar a dudas los nuevos enfoques en la medicina regenerativa, lo que nos acerca a descubrir tcnicas que contribuyan a una mejor medicina, por medio de la comprensin ms profunda de los procesos o mecanismos biolgicos en que los microRNAs se vean envueltos. A medida que se han ido realizando estudios acerca de los microRNAs, se ha hecho cada vez ms evidente que tienen roles potenciales en la medicina regenerativa (7). Pueden actuar como medicamentos en s o blancos teraputicos para curar a una gran cantidad de enfermedades. Dentro de ellas, un rol impactante de los miRNAs est en el cncer, pudiendo actuar como indicadores diagnsticos y pronsticos (11). Sabemos que el cncer es una enfermedad que si bien, hay mtodos para poder sobrellevarla en alguna medida, no existe una cura definitiva para ella. Es por esto que es de suma urgencia seguir realizando estudios para que se puedan hallar pronto nuevos mtodos para enfrentar el cncer y sanar a los pacientes, dada la potencial capacidad que tendra la medicina regenerativa para hallar la tan ansiada solucin que mejorara indudablemente la vida de los pacientes que sufren de cncer. Otra de las aplicaciones de los microRNAs se traduce en ser incorporados en las clulas madres para inducirlas a diferenciarse para lograr reparar o regenerar clulas, estructuras o tejidos daados (9). Adems, los microRNAs podran tener funciones claves en la proliferacin y diferenciacin de clulas madres, incluyendo las clulas madres embrionarias, con las que se tendra una gama ms amplia de aplicaciones dada su potencialidad de progresar a diferentes estados y tipos de clulas. Claramente, se podra aumentar la cantidad de tratamientos exitosos con clulas madres, si entendiramos a cabalidad las funciones regulatorias de los microRNAs en el mantenimiento y diferenciacin de ellas, adems de cmo ejercen el control en la autorenovacin tisular y cmo pueden regular la diferenciacin. Por lo tanto, el uso de microRNAs podra traer varios beneficios: 1) Un gran nmero de clulas madre podra ser obtenido de unas pocas de ellas, delegando a los microRNAs la regulacin de este proceso. 2) Podramos reparar el dao que han sufrido los tejidos o regenerar clulas envejecidas usando microRNAs para activar la diferenciacin o proliferacin de clulas madre endgenas. 3) Si aplicamos el conocimiento que tenemos de los microRNAs en las clulas madres, podramos ser capaces de controlar cundo y cmo inducir la diferenciacin de las clulas madres blanco en el cuerpo de los pacientes (diferenciacin inducible). Por ejemplo, se sabe que la expresin de miR-181 hace que aumente la cantidad de clulas al entrar en el linaje linfoide-B, pero no al entrar en el linaje linfoide-T. Por otra parte, la expresin ectpica de miR-142s o miR-223 tiene el efecto opuesto (17). 5

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En el rea de la ingeniera de tejidos, tambin podran ejercer la regulacin de algunos procesos, como el ciclo de desarrollo celular Esto se ha comprobado al realizar experimentos con varios tipos de animales. Por ejemplo, Giraldez AJ y colaboradores, al estudiar peces cebra, encontraron que miR-430 marca cientos de mRNAs maternos y tiene la capacidad de promover su deadenilacin o controlar la transicin cigtica materna durante la embriognesis (19). Adems, en ratones que tienen delecin especifica de Dicer, el crecimiento del ovocito falla al procesar la primera divisin celular (20). Los resultados arrojados en estos estudios nos hacen pensar que existe la posibilidad de mantener clulas en algn estadio de desarrollo en particular, segn lo que se requiera, usando microRNAs en el futuro ojal no muy lejano. Esto abre otra ventana de tcnicas que nos sugiere que se pueden utilizar, por ejemplo, para detener el envejecimiento o deterioro de clulas tan importantes como las neuronas, evitando etapas crticas de enfermedades que conlleven un deterioro neuronal. Adems, algunas investigaciones sugieren que los microRNAs pueden ser utilizados como medicamentos para tratar enfermedades metablicas, como la obesidad. Por ejemplo, se ha identificado a MiR-14 como el primer microRNA que participa en metabolismo de la grasa. Si inhibimos su expresin, aumentan los niveles triacilglicerol y diacilglicerol en Drosophila (18). El hecho de que los microRNAs se vean envueltos en la obesidad nos parece muy relevante, ya que la obesidad es una enfermedad que padecen millones de personas en todo el mundo y que cada da ms personas son afectadas por ella. La obesidad produce mltiples dao al organismo, conduciendo a enfermedades de todo tipo, es una enfermedad muy deteriorante que puede llevar incluso a la muerte dadas las alteraciones orgnicas, por lo que hallar una nueva forma de tratar la obesidad contribuira a mejorar la salud de muchas personas. Los microRNAs tambin pueden relacionarse con los shRNAs. El shRNA o RNA corto de horquilla es una molcula de RNA que puede ser usada para silenciar la expresin de genes va RNA de interferencia (iRNA). Los microRNAs basados en las bibliotecas de shRNA podran usarse para identificar de forma rpida y efectiva a los posibles blancos teraputicos, as como tambin para estudiar la etiologa y patogenia de cientos de enfermedades (21). A pesar del gran potencial de los microRNAs en la medicina regenerativa, hay algunos obstculos que superar para que se puedan aplicar a la clnica: Cmo hacer que la terapia de los microRNAs sea eficiente, especfica e inducible? Esta estrategia teraputica tendr efectos secundarios? La teraputica de los microRNAs conducir al cncer? Terapias asociadas a microRNAs

Los microRNAs participan en aspectos esenciales de la regulacin de nuestra maquinaria gentica, influyendo en numerosos procesos de nuestro organismo. Por esta razn, muchos padecimientos humanos como diversos tipos de cncer, enfermedades neuronales e infecciones virales se relacionan con fallas en la expresin de estas molculas (22). Existen distintas formas de modular los microRNAs con fines teraputicos y entre stas se encuentran la inhibicin y la sobreexpresin artificial de los microRNAs. Cuando hay dficit de un determinado miRNA, el hecho de introducir nuevamente el miRNA maduro o inducir su expresin en el tejido afectado podra restaurar la regulacin de su 6

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gen objetivo. En contraste, el exceso de la expresin de un miRNA en un tejido podra ser revertido directamente disminuyendo los niveles de ese miRNA maduro o de forma indirecta reduciendo las molculas necesarias para su biosntesis (26).

Inhibicin de miRNAs Un mtodo teraputico para corregir el mal funcionamiento de un miRNA es utilizar oligonucletidos anlogos los cuales son capaces de inhibir o silenciar la actividad de estos miRNA. Estos oligonucletidos anti-microRNA sintticos son conocidos como Antagomirs (23) o AMOS (Oligonucletidos Anti-miRNAs) (24). De esta manera, estos anti-miRNAs pueden tener el potencial de emerger como una nueva clase de agentes teraputicos (22). La utilidad potencial de los oligonucletidos anti-miRNAs depender de si existen concentraciones efectivas de stos que se unan al sitio de accin in vitro o in vivo. Aunque se ha visto que algunos oligonucletidos actan contra objetivos in vitro, stos son rpidamente degradados cuando son usados in vivo (22). Por lo tanto, es indispensable el desarrollo de oligonucletidos modificados para que cumplan su funcin. Se conocen muchas modificaciones que han sido usadas para mejorar la accin de los oligonucletidos, como por ejemplo: Fosforotioatos, 2 O-Me, Morfolino, 2-fluoro (2-F) y cidos nucleicos bloqueados (LNAs) son las modificaciones usadas ms importantes (22). Sobreexpresin artificial de miRNAs Entre las estrategias destinadas a restaurar la funcin de un miRNA, la ms simple es introducir directamente el precursor de miRNA, producido por Drosha, dentro de las clulas. Este pre-miRNA ser procesado por Dicer para producir el duplicado miR/miR* deseado. Al igual que en la inhibicin de miRNAs anteriormente descrita, el uso de estos pre-miRNAs es altamente eficiente in vitro, pero podra presentar mltiples dificultades en su aplicacin in vivo, para lo que se necesitara de las modificaciones qumicas al azcar 2 (fosforotioatos, 2 O-Me, morfolino, 2-fluoro y LNA) para mejorar su resistencia ante la degradacin por nucleasas. Por otro lado, para mejorar la distribucin de estos pre-miRNAs, se han considerado estrategias con (si)RNAs (22, 25). microRNAs en diversos tejidos 1) microRNAs implicados en el corazn Roles conocidos de los miRNAs en el desarrollo y funcin cardiaca La expresin no regulada de los miRNAs se relaciona a enfermedades cardiacas en humanos, as como al inhibir la maduracin de estos en corazones de roedores, ha revelado que los miRNAs son vitales para el desarrollo y funcionamiento del corazn. Por otro lado, estudios genticos han identificado distintos roles para miRNAs especficos durante la cardiognesis, hipertrofia cardiaca y conduccin elctrica (1). Estudios recientes han demostrado una asociacin entre diversos miRNAs con varios defectos cardiacos. Por ejemplo miR-1 favorece numerosas anormalidades cardiacas, incluyendo arritmias, tabicacin ventricular deficiente, hipertrofia cardiaca e hiperplasia del miocito, mientras que miR-133 tiene un potencial arritmognico y tambin un rol en la hipertrofia 7

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cardiaca. En adicin, se especula que miR-21, miR-195 y miR-208 participan controlando la hipertrofia cardiaca (1) (ver figura 2).

Expresin de miRNA durante la remodelacin cardiaca: El corazn es sensible al estrs y a una gran variedad de estmulos. El principal elemento de estrs biomecnico del corazn y de sus estmulos patolgicos es experimentar una gran remodelacin cardiaca conocida como hipertrofia cardiaca (27). La hipertrofia cardiaca se define macroscpicamente como un engrosamiento de la pared y/o el septo interventricular; en la clula se caracteriza por un incremento del tamao del cardiomiocito, con aumento de la sntesis protenica y un cambio en la organizacin de la estructura sarcomrica (28). La hipertrofia cardiaca se presenta junto a la reactivacin de genes cardiacos fetales que normalmente se expresan en el corazn antes de nacer. Esta reactivacin en cardiomiocitos postnatales indica que los eventos moleculares que controlan la expresin de genes cardiacos durante el desarrollo son redistribuidos para regular el crecimiento hipertrfico o incluso, la regeneracin del corazn (29). Si la hipertrofia se mantiene en el tiempo podran surgir consecuencias adversas como fallas cardiacas y muerte repentina (30). Se han realizado estudios que revelan que existen cambios en la expresin de miRNAs en corazones humanos defectuosos, incluyendo el aumento de miRNAs que estn expresados normalmente en el desarrollo cardiaco (31, 32). Se ha establecido un nexo entre miRNAs e hipertrofia cardiaca al demostrar que los miRNAs regulados por estrs pueden influenciar la respuesta hipertrfica cardiaca tanto positiva como negativamente (31, 33, 34). MiRNAs modulan la hipertrofia cardiaca: Estudios muestran que aumenta la produccin de MiR-195 durante la hipertrofia cardiaca en humanos y ratones (31). Adems, la sobreproduccin de este microRNA en corazones de roedores indujo hipertrofia varias semanas despus del nacimiento. Si esta sobreproduccin es sostenida, resulta una cardiomiopata dilatada y una insuficiencia cardiaca en ratones jvenes (31). Los mecanismos por los que acta y la funcin de miR-195 an no estn claros ya que todava no existen genes blanco que hayan sido confirmados. miR-214 tambin se incrementa durante la hipertrofia, sin embargo, la sobreexpresin de ste en los ratones transgnicos no caus un fenotipo cardiaco anormal (31). Todo esto indica que ciertos miRNAs, pero no otros, son suficientes para inducir la respuesta hipertrfica. Claramente, se necesitan otros estudios para determinar si estos miRNAs son necesarios para la respuesta hipertrfica y poder identificar sus genes blanco. Por otro lado, existe una disminucin de miR-1 y miR-133 durante la hipertrofia (31, 34, 35). Sus patrones de expresin coincidentes no sorprenden, ya que ambos son transcritos juntos desde los mismos genes policistrnicos. La sobreexpresin de miR-1 o miR-133 inhibi la hipertrofia cardiaca en un modelo in vitro usando cardiomiocitos primarios (34,35). Aunque la expresin de miR-1 disminuye durante la hipertrofia cardiaca (31, 34, 35), se necesitan otros estudios genticos que demuestren un rol directo de este miRNA en la regulacin de la hipertrofia cardiaca. Tanto miR-1 como miR-133 se han propuesto para regular la expresin de genes ligados al crecimiento (34, 35, 36), sugiriendo que ambos actuaran como supresores del crecimiento y que estn reducidos durante la hipertrofia cardiaca. 8

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MiR-208 est expresado especficamente en el corazn (33). Los animales nulos de miR-208 presentaron una leve reduccin en la contractilidad a los dos meses de edad y una reduccin continua de la funcin cardiaca de ah en adelante. Adems, los ratones nulos en este miRNA dejan de experimentar crecimiento hipertrfico en respuesta a una sealizacin activada de calcineurina o al estrs cardiaco inducido por un exceso de presin (33). Estos resultados indican que las vas genticas que coordinan la hipertrofia cardiaca comparten un componente comn regulado por miR-208. MiR-21, un miRNA implicado en el crecimiento celular tumoral y en la apoptosis (33,34), est aumentado en respuesta a la hipertrofia cardiaca inducida por un agonista en experimentos realizados en cultivos celulares y en la hipertrofia inducida por un exceso de presin in vivo (31, 35, 37). Sin embargo, la naturaleza exacta de la funcin de miR-21 todava no se ha dilucidado. La inhibicin de miR-21 usando oligonucletidos antisense suprime el crecimiento hipertrfico inducido por agonistas en cardiomiocitos primarios (37). La inhibicin de miR-21 usando un cido nucleico antisense modificado y bloqueador de miR-21 estimul el crecimiento hipertrfico in vitro (38). Estos estudios de la funcin de miR-21 son totalmente contradictorios. Claramente, se necesitan ms estudios genticos y la determinacin de las vas moleculares que son moduladas por miR-21, para entender de mejor forma la funcin de este miRNA. En conjunto, la evidencia reciente ha establecido miRNAs, en particular miR-1, miR-21, miR-133, miR-135, miR-208, como nuevos factores que han sido identificados en ejemplares animales de hipertrofia cardiaca. Con todo esto, la identificacin de blancos especficos para miRNAs envueltos en la respuesta hipertrfica facilitar la comprensin en los mecanismos moleculares subyacentes a este proceso de enfermedad. MicroRNAs y regeneracin cardiovascular La evidencia que ha surgido en el ltimo tiempo indica que los miRNAs participan en el control del desarrollo cardaco, en la patognesis de la enfermedad cardiovascular y en la diferenciacin de clulas madre en cardiomiocitos. Se ha investigado la funcin del miRNA-1 (miR-1) y miRNA-133 (miR-133) en la enfermedad cardiovascular y cardiomiognesis durante el desarrollo. Ambos se expresan especficamente en el msculo esqueltico y corazn. El genoma de los vertebrados contiene 2 loci distintos para las agrupaciones bicistrnicas de miR-1 y miR-133 que dan origen a secuencias maduras idnticas de miRNA. Aunque miR-133a se expresa en la misma unidad bicistrnica como miR-1-1 o miR-1-2, miR-133b se expresa como un gen transcripto separado. Durante la miognesis esqueltica y el desarrollo del corazn, la expresin tejidoespecfica est altamente controlada por redes transcripcionales biognicas, incluyendo reguladores transcripcionales como el factor potenciador especfico de miocito 2 (MEF2), el factor de respuesta al suero (SRF), la protena 1 de diferenciacin miognica (MyoD) y miocardina (39, 40, 41). En el cardiomiocito, SRF induce la expresin de miR-133, que a su vez inhibe a SRF en un circuito regulatorio, que afecta la diferenciacin y promueve la proliferacin del progenitor. En los progenitores de msculo esqueltico, miR-133 acta potenciando la proliferacin de mioblastos al marcar a SRF, mientras que miR-1 promueve la miognesis al marcar a la histona deacetilasa 4 (HDAC4). HDAC4 suprime la transcripcin de MEF2. De esta manera, miR-1 y miR-133 participan codificando circuitos de feedback negativo al controlar la proliferacin y el estado de diferenciacin de los progenitores de msculo esqueltico y cardiaco (42). 9

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La delecin marcada de miR-1-2, mostr varias funciones en el corazn, tales como la regulacin de la morfognesis cardiaca, conduccin elctrica y control del ciclo celular. Estos son procesos regulados marcando los genes codificantes Hand2 e Irx5, as como tambin aquellos que regulan el ciclo celular y supresores tumorales (36). MiR-1 y miR-133 tambin regulan respuestas hipertrficas en el corazn (43). Se ha visto que durante la diferenciacin espontnea de las clulas madre embrionarias en el miocardio aumentan los niveles de miR-1 y miR-133, pero disminuyen durante la diferenciacin miocrdica forzada por el inhibidor de HDAC: tricostatina A. La sobreexpresin de miR-1 en las clulas madre embrionarias por infecciones de lentivirus disminuye la cardiomiognesis a travs de la inhibicin post-transcripcional de la quinasa dependiente de ciclina 9 (CDK-9) (44). Por otra parte, en otro estudio se encontr que miR-1 promueve la diferenciacin miocrdica en un cultivo embrionario de ratones y humanos. De este modo, los miRNAs msculo-especficos regulan de forma precisa la expresin espacio-temporal de genes marcados en diversas situaciones, incluyendo la diferenciacin miocrdica, desarrollo cardiovascular y enfermedad cardiovascular del adulto (45). DIANAS: - Se podran regular los niveles de miRNAs como una nueva estrategia teraputica. Se necesita establecer mtodos para determinar a los blancos de miRNAs de forma eficiente y precisa entre todos los que se han sugerido. La identificacin de genes blanco especficos podra darnos un conocimiento ms profundo de los mecanismos de la patognesis de la enfermedad cardiovascular. - La funcin de miRNAs con su expresin disminuida incluye a tipos novedosos u otros de RNAs no codificantes, los que podran ser identificados por un secuenciamiento de alto rendimiento as como tambin podra ser analizado en aquellos expresados en altos niveles en el corazn. - Protenas como HuR, una protena de unin rica en elementos AU que interacta con la regin no transcripta 3 (3UTR) de mRNAs, se podran estudiar paa averiguar si pueden que alterar el potencial de los miRNAs para inhibir la expresin gentica bajo condiciones de estrs (46). - Las tecnologas basadas en los RNA de interferencia tambin pueden considerarse como tratamiento. - Hay elementos que pueden reducir los niveles de miRNAs que se expresan de forma patognica o aberrante, tales como oligonucletidos antisense modificados que tengan como blanco a las secuencias de miRNAs maduros, inhibidores de miRNAs (anti-miRs), incluyendo el oligonucletido colesterol conjugado 2-O-metil (antagomir), oligonucletido cido nucleico bloqueado (LNA), y 2-O-metoxietil fosforotiodato (47, 48, 49). - Se pueden usar modelos que imiten miRNAs para elevar los niveles de miRNAs (48, 49). - La expresin aberrante de miRNAs se puede convertir en una estrategia innovadora para tratar la enfermedad cardiovascular.

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2) MiRNAs en la regeneracin heptica: El hgado adulto es un rgano nico en su capacidad de proliferacin con hepatocitos totalmente diferenciados (50), los hepatocitos adultos estn en reposo y normalmente se dividen slo una vez o dos veces al ao en ratones e incluso con menos frecuencia en humanos (51). Sin embargo, los hepatocitos adultos tienen la posibilidad de dividirse muchas veces en respuesta a una lesin o prdida de tejido heptico (52, 53). Despus de dos tercios de hepatectoma parcial (2 / 3 PH) en ratones, los hepatocitos entran y progresan a travs del ciclo celular en una forma altamente sincronizada (54). Todos los hepatocitos se dividen una vez, y todos los otros hepatocitos se dividen una vez ms para restaurar la masa heptica en un plazo de 7 das (50). Hay muchos factores que influyen en la regulacin del ciclo celular de los hepatocitos, por lo tanto tambin en su proliferacin, y se ha demostrado que los microRNAs (miRNAs) regulan post-transcripcionalmente genes que manejan la proliferacin en el desarrollo y cncer, aunque su papel en la regeneracin de rganos es en gran parte desconocida (55). Pero un anlisis de los cambios en la expresin del miRNA durante la regeneracin del hgado del ratn, llev a la identificacin de miR-21 y miR-378 como reguladores de la regeneracin de rganos (56). Se ha investigado sobre los miRNAs y sus genes diana implicados en la regeneracin del hgado mediante la generacin de ratones con inactivacin hepato-especfica de DGCR8, que es un componente esencial del complejo microprocesador. Con recientes descubrimientos sobre dao proliferativo en clulas madre de ratn deficientes de DGCR8, se ha indicado que la iniciacin de la sntesis de ADN estaba retrasada en los hepatocitos deficientes de DGCR8 despus de una hepatectoma parcial 2/3 (57). Por lo tanto, lo anterior sugiere que los miRNA regulan la progresin de los hepatocitos desde la fase G1 a S durante la regeneracin heptica. Para identificar de qu manera los miRNAs actan regulando la regeneracin en el hgado, se busc cambios de expresin de miRNAs en hgados de ratones silvestres adultos despus de una HP 2/3. Debido a que los miRNAs reportados como promotores de la proliferacin en clulas madre de ratn no se expresan en los hepatocitos, no fue sorpresa que ninguno de esos miRNAs fue inducido por la HP 2/3 (56). En vez de eso se encontr especficamente niveles incrementados de miRNA-21, un promotor establecido de proliferacin que se expresa en gran cantidad en muchos tipos de cncer (58). En cuanto al descubrimiento de genes diana, se encontr que Btg2 es un objetivo directo de miR-21. Ms an, algunos datos sugieren que la expresin incrementada de miR-21 sirve para antagonizar al inhibidor del ciclo celular Btg2 durante la regeneracin del hgado (56). El efecto promotor de la proliferacin del incrementado miR-21 despus de la HP 2.3 parece ser apoyada por una disminucin en la expresin de miR-378 y una subsecuente de-represin de Odc1. La inhibicin especfica de miR-21 y miR-378 in vivo podra ser usada para delinear sus contribuciones individuales a la regulacin de la regeneracin heptica (59). Los niveles del gen promotor proliferativo Ccnd1 se incrementaron en los hepatocitos con una deficiencia global de miRNA antes de la HP 2.3. Un perfil revel que miR-16, un miRNA conocido por inhibir Ccnd1 en la prstata, es expresado en el hgado (60). Por lo tanto, la prdida de miR-16 podra explicar la de-represin de Ccnd1 en los ratones Dgcr8del/fl. Anlogamente, es posible que la perdida de otros miRNAs normalmente expresados en los 11

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hepatocitos pero no inducidos por la HP 2.3 pueda contribuir a la regeneracin daada en los ratones Dgcr8del/fl . En contraste a los descubrimientos, despus de la inactivacin de DGCR8 en la piel se produjo una deplecin de miR-21 en todas las muestras de hgado de ratones con deficiencia hepato-especfica de DGCR8 (61). Esto demuestra que el miR-21 es mayormente expresado en los hepatocitos del hgado y apoya nuestra conclusin acerca de la regulacin directa ejercida por el miR-21 en la progresin del ciclo celular en los hepatocitos. La induccin especfica de miR-21 en la fase G1 despus de la HP 2.3 y la daada transicin G1-S en hepatocitos con deficiencia global de miRNA y aquellos con deficiencia de FoxM1 sugiere que miR-21 juega un rol lder en la regulacin por miRNAs de la regeneracin heptica (56). Poco ha sido reportado acerca de la regulacin o funcin del miR-378, se sabe que la expresin del miR-21 esta aumentada en el cncer heptico primario humano (62, 63). Ms an, se ha visto que miR-21 promueve la proliferacin de lneas celulares hepticas cancergenas mediante la inhibicin del supresor de tumores homlogo a la tensina (PTEN) (62). Por lo tanto, es probable que miR-21 inhiba Btg2, y potencialmente otros reguladores de la proliferacin heptica, as como en la regeneracin heptica en humanos. 3) MiRNAs en la Reparacin de la piel Es evidente la importancia de los miRNAs en la funcin celular normal. Esto se ha demostrado en recientes investigaciones, al comparar la expresin de miRNAs en tejidos enfermos y en tejidos normales, hallando en tejidos enfermos una expresin aberrante de miRNAs (64). Esto es relevante debido a que una adecuada funcin celular es fundamental para una correcta reparacin de los tejidos, como por ejemplo la piel. Cicatrizacin de heridas cutneas La estimulacin de la proliferacin es un proceso importante para la regeneracin de tejidos, la cicatrizacin de heridas, la activacin linfocitaria y la carcinognesis; se ha evidenciado una posible participacin de miRNAs en la proliferacin (64, 65). Gu J. y Iyer VR analizaron un grupo de 33 miRNAs con perfiles de expresin similar y consistente a lo largo de la replicacin (por ejemplo, miR-125b, miR-143, mir-21), sugiriendo que los miRNAs participan en la regulacin de la expresin de importantes genes implicados en la entrada de los fibroblastos en el ciclo celular y la proliferacin (65). Adems, se ha propuesto que los miRNAs juegan un rol especfico en el proceso de cicatrizacin de heridas cutneas. La reparacin de la piel humana daada es un proceso fisiolgico que incluye tres fases superpuestas: inflamacin, proliferacin (epitelizacin, angiognesis, granulacin y formacin de tejido) y maduracin. Por lo tanto, es clave para el proceso regenerativo la induccin de la expresin y/o represin de los factores sistmicos y locales de estos procesos (64). Shilo y colaboradores revisaron el rol de los miRNAs en la angiognesis en heridas (66). A partir de esta revisin se propuso que: (i) (ii) el proceso de cicatrizacin de heridas cutneas involucra cambios en la expresin de un miRNA especfico en una fase especfica de la curacin de heridas (66) la regulacin aberrante de determinados miRNAs y las deficiencias en la angiognesis presente en las heridas pueden desempear un papel clave en la secuencia de cicatrizacin anormal en las heridas crnicas (66). 12

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MiRNA en cicatrizacin de heridas en condiciones de hipoxia Es sabido que la isquemia causa complicaciones en el cierre de las heridas. En un modelo de lesin isqumica en ratones se demuestra cmo los microRNAs podran estar implicados en la limitacin de la re-epitelizacin de las heridas bajo la hipoxia, que es el principal componente de la isquemia. Adems se ha llegado a la observacin de que en las heridas isqumicas la proliferacin de clulas epiteliales est comprometida (67). (Ver figura 3) El factor-1 inducible por hipoxia (HIF-1) es un factor de transcripcin implicado en la regulacin del ciclo de clulas hipxicas. Recientemente, ha sido demostrado que este factor al ser expresado en los queratinocitos de ratones, podra detener la proliferacin celular (68). Por otra parte, estudios recientes han demostrado que HIF-1 tambin podra servir como factor de transcripcin para la expresin de genes no codificantes, incluyendo a los microRNAs (69). En los tejidos hipxicos se ha encontrado una masiva induccin in vivo de HIF-1, el cual es un potente inductor de miR-210 que a su vez tiene como objetivo el silenciamiento de la expresin del factor de transcripcin E2F3, y ste ltimo, es reconocido como un factor que favorece la proliferacin celular en los queratinocitos (Fig 1). Por lo tanto, los miRNAs tendran una participacin importante en la limitada regeneracin de las heridas durante la hipoxia isqumica (67).

HIF-1

miR-210

E2F3

Disminuye proliferacin queratinocitos

Figura 1: Rol de HIF-1 en inadecuada cicatrizacin de heridas hipxicas.

El uso de un antagonista o un imitador de miR-210, nos va permitir respectivamente una inhibicin o una sobreexpresin de miR-210 en estos queratinocitos. As coherentemente se observ que la disminucin de los niveles basales de miR-210 en queratinocitos aument significativamente la proliferacin celular. y la induccin de un imitador de miR-210 claramente comprometi la proliferacin de los queratinocitos (67).

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4) MicroARN y regeneracin de la sinapsis en la Esclerosis Lateral Amiotrfica La esclerosis lateral amiotrfica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa que resulta en la prdida de las motoneuronas, la denervacin de los msculos de destino, atrofia muscular y parlisis de extremidades inferiores y msculos respiratorios (70). Hoy en da, no existen tratamientos efectivos para esta enfermedad, por lo cual es necesario identificar mediadores y vas de sealizaciones claves (72) para una terapia a futuro, en la que es considerada la enfermedad de motoneuronas ms comn en adultos (71). MiR-206 es un microARN especfico del msculo esqueltico, por lo tanto un regulador importante en la sinapsis neuromuscular y justamente es inducido durante la ELA, ya que en modelos experimentales con ratones, hay una rpida progresin de la enfermedad en ausencia de miR-206. Este microARN actuara sobre la histona deacetilasa-4 y tambin por medio de la accin del factor de crecimiento fibroblstico, detectando lesiones de neuronas motoras y promoviendo la regeneracin sinptica (70). Varios experimentos se han llevado a cabo para comprobar la accin de miR-206 posterior a la denervacin en la Esclerosis Lateral Amiotrfica, por ejemplo, se extrajo el nervio citico de ratones salvajes, provocando un gran aumento tanto de miR-206, como de pri-miR206 en los msculos tibial anterior y gastrocnemios principalmente (73); los axones en regeneracin reinervan de preferencia los sitios originales de unin sinptica (74, 75). Por lo tanto, esta reinervacin compensatoria, puede dar cuenta de la clnica casi asintomtica en esta enfermedad, hasta que los restos de motoneuronas no pueden compensarla (76, 77). Tambin en ratones deficientes en la enzima SOD1 y con bajos niveles de miR-206 artificial, se vio una rpida progresin de la enfermedad, as como tambin una atrofia acelerada del msculo esqueltico, lo que llev a cifosis, parlisis y muerte de estos ratones (70). En los ratones de tipo salvaje (presentan miR-206), la reinervacin se manifest entre la 2 y 3 semana despus de la denervacin, y se complet casi a las 5 semanas. Sin embargo, en los ratones deficientes en miR-206, la reinervacin comenz tres semanas despus y adems dur por lo menos dos semanas ms, lo que indica, que el retraso en la reinervacin en ratones deficientes en miR-206 se debe principalmente a la falta de una seal que emana de estos msculos y que influye en la interaccin de los axones motores regenerados y la fibra muscular. Por otra parte, las vesculas sinpticas no se agregaron correctamente en las terminaciones nerviosas y los axones crecieron ms all de las uniones neuromusculares en los ratones mutantes, lo que sugiere una posible falta de las seales que emanan desde el msculo (70). (Ver figura 4a) La histona deacetilasa-4 (HDAC4) ha sido implicada en el control de la expresin gnica neuromuscular (78, 79), miR-206 reprime la traduccin de sta y distintos factores de organizacin de la sinapsis neuromuscular son afectados de manera opuesta por miR-206 y HDAC4. En distintos experimentos, posterior a la denervacin HDAC4 aumenta en ratones deficientes de miR-206, en comparacin con ratones que presentan este microARN (70). (Ver figura 4b) Los niveles de ARNm de varios reguladores conocidos en la formacin de la sinapsis (80, 81, 82), como FGF7/10/22 no son afectados en la denervacin en ratones normales y mutantes, por el contrario una protena vinculada al FGF (FGFBP1) fue regulada en gran medida en ratones deficientes de miR-206 (mutantes) (70), sta protena interacta con FGF7/10/22 y aumenta la accin del FGF7 en mioblastos (83). Estos factores de crecimiento 14

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derivan del msculo y promueven la diferenciacin presinptica en la unin neuromuscular (80), por lo tanto esto demuestra que FGFBP1 podra potenciar los efectos de estos factores de crecimiento y que su regulacin por HDAC4 resulta en lo contrario (70). En sntesis, un modificador clave en la patogenia de la ELA es miR-206 y sus acciones se llevan a cabo principalmente a travs de factores derivados del msculo, los cuales estn a cargo de promover la interaccin entre el nervio y el msculo, luego de la denervacin (70). Un hallazgo importante es que este microARN se presenta en gran cantidad en aquellos msculos inervados por fibras de conduccin lenta y que son resistentes a la denervacin (84). Recientemente en los humanos con ELA se han identificado mutaciones en los genes que codifican para TDP-43 y la FUS, los cuales regulan el metabolismo del ARN (85, 86, 87) y tambin interactan con Drosha (88, 89). En vista de todos los experimentos llevados a cabo y sus resultantes, la identificacin la accin de miR-206 en esta enfermedad sugiere distintas posibilidades de intervencin al modular este microARN, pero tambin las vas que ste regula (70). IV. DISCUSIN Y CONCLUSIONES: En relacin a la revisin presentada, es emocionante pensar en las potenciales aplicaciones en la medicina, especficamente en la medicina regenerativa, de unas molculas tan simples y que involucran mecanismos tan complejos en su actuar como son los miRNAs. stos cumplen diversos roles en distintas partes del organismo, las que repasamos, analizamos y comentamos a continuacin: Hemos visto que los miRNA cumplen roles esenciales tanto en el desarrollo y funcin normal del corazn, as como tambin en patologas asociadas a l. Sabemos que existe una asociacin entre los miRNAs con las patologas cardiacas. Por ejemplo, miR-1 participa en arritmias, tabicacin ventricular deficiente, hipertrofia cardiaca e hiperplasia del miocito, mientras que miR-133 tiene un potencial arritmognico y tambin un rol en la hipertrofia cardiaca. Sin embargo, los miRNAs podran tener otras funciones tanto o ms importantes que todava no se han descubierto. La evidencia presentada nos sugiere que existen distintos microRNAs implicados en la hipertrofia fisiolgica y patolgica. Dada la complejidad de la remodelacin cardiaca que ocurre durante esto, consideramos que la identificacin especfica de miRNAs, ayudara a entender los mecanismos moleculares envueltos en la hipertrofia. Adems, logramos apreciar que los miRNAs pueden ser multifacticos, ya que son capaces tanto de estimular como de inhibir la hipertrofia. La forma en que los miRNAs se expresan en el proceso de enfermedad podra darnos un mtodo diagnstico para combatir las distintas patologas que afectan al corazn y se podran disear tratamientos para ellas. Los miRNAs son trascendentales en la regeneracin heptica, ya que se asocian a importantes procesos, por ejemplo, a la regulacin de etapas del ciclo celular y genes o factores involucrados en la proliferacin, entre otros. Especficamente, miR-21 y miR-378 han sido identificados como promotores de la proliferacin de hepatocitos: miR-21 (conocido promotor de la proliferacin altamente expresado en varios tipos de cncer) se encuentra aumentado en este proceso, mientras que al contrario, miR-378 (cuya funcin y regulacin ha sido pobremente reportada) est en niveles disminuidos, sugiriendo que ambos actan de manera distinta regulando la expresin de genes para la proliferacin celular. El rol de los miRNAs en la cicatrizacin de la piel radica a grandes rasgos en la induccin/inhibicin de la proliferacin celular de fibroblastos. Algunos de los miRNAs 15

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involucrados en esto son miR-125b, miR-143 y miR-21. Adems, se ha asociado la participacin de miRNAs a la angiognesis, lo que est implicado en la cicatrizacin anormal de heridas crnicas. En condiciones hipxicas, se evidencia que se limita la re-epitelizacin de heridas cutneas al disminuir la proliferacin celular de queratinocitos y esto puede estar mediado por miR-210. Sin embargo, se debe contar con ms estudios al respecto para aclarar el rol de los miRNAs en la reparacin cutnea y encontrar nuevos y tiles blancos teraputicos. Un modificador clave en la patogenia de la Esclerosis Lateral Amiotrfica es miR-206, el cual se encuentra principalmente y en gran cantidad en aquellos msculos que son inervados por fibras de conduccin lenta y que son resistentes a la denervacin. Este miRNAs se encarga de promover la interaccin entre el nervio y el msculo esqueltico actuando principalmente a travs de factores de crecimiento derivados del propio msculo denervado, como FGF7/10/22, contribuyendo de esta forma a la regeneracin sinptica. En vista de su accin en esta trascendente enfermedad, son interesantes las distintas posibilidades de intervencin teraputica tanto en la modulacin de miR-206, como en las vas que ste regula, ya que hoy en da no existen tratamientos efectivos para sta enfermedad. La ventaja de esta nueva forma de medicina es que apunta a blancos moleculares especficos, a diferencia del tratamiento tradicional al que estamos acostumbrados. Sin embargo, se requiere un anlisis meticuloso de los resultados que se han obtenido de los diversos estudios, sin hacer conclusiones apresuradas. Adems, se debe actuar con prudencia ante ellos, ya que estamos en presencia de reas de estudio muy nuevas que recin se estn descubriendo y no sabemos an de forma precisa cmo funcionan los miRNAs ni todos los efectos que podra tener la medicina regenerativa, por lo que las tentativas de tratamientos clnicos no pueden ser considerados seriamente ni se debe confiar ciegamente en ellos por el momento, pero s nos alientan y esperanzan. Los microRNAs pueden ser las herramientas del maana dirigidas a controlar los procesos subyacentes a las enfermedades, con el afn de combatirlas e incluso poder revertirlas. Tenemos que considerar que se debe entender de forma ntegra cmo los miRNAs estn implicados en los procesos fisiolgicos de los seres humanos y los procesos fisiopatolgicos responsables de las enfermedades que los aquejan. Todo parece indicar que los miRNAs son los elegidos para mantener el delicado equilibrio del desarrollo normal de los tejidos. Pero para llegar a esto, queda mucho camino por recorrer y se debe hacer investigacin de forma constante e incansable, para poder entender los mecanismos moleculares que rigen la activacin, funcin y regulacin de este tipo de RNA a nivel genmico, ya que podran estar involucrados en la etiopatogenia de una gran cantidad de enfermedades. Es probable que esta disciplina no tenga lmites, puesto que la salud siempre ser un tema prioritario y con innumerables cuestionamientos por resolver, de los cuales la experiencia a travs de los aos nos ha demostrado que mientras ms conocimientos tenemos, ms inquietudes nos surgen para sacar el mximo provecho posible de esa informacin, buscando nuevas y mejores estrategias de enfrentamiento para tratar las afecciones del organismo en general. Los pacientes que puedan ser tratados a travs de la medicina regenerativa estaran eternamente agradecidos de todos aquellos investigadores y profesionales de la salud que por medio de ella les pudieran devolver su vitalidad y darles una nueva posibilidad de vida.

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V. ESTRATEGIAS DE BSQUEDA Para llevar a cabo nuestra revisin bibliogrfica utilizamos diversas fuentes, como revistas mdicas, libros del tema y bases de datos como Cochrane, Scielo, y principalmente PubMed, donde limitamos nuestra bsqueda a los idiomas ingls y espaol y no excluimos segn ao de publicacin o pas de procedencia. Inicialmente nuestras palabras clave de bsqueda fueron microRNA y regeneration. Una vez orientado nuestro trabajo, decidimos iniciar una bsqueda ms especfica para analizar la funcin de los microRNA en la regeneracin de diferentes tejidos, utilizando frases como microRNA and liver regeneration, microRNA and heart regeneration, microRNA and skin regeneration and cicatrization y procedimos a evaluar los ms acordes a nuestros intereses. VI. REFERENCIAS Callis TE. and Wang DZ. (2008) Taking microRNAs to heart. Trends in Molecular Medicine 14: 254-260. (2) Lim, L.P., Lau, N.C., Weinstein, E.G., Abdelhakim, A., Yekta, S., Rhoades, M.W., Burge, C.B. and Bartel, D.P. (2003) The microRNAs of Caenorhabditis elegans. Genes Dev. 17, 9911008. (3) Kanellopoulou, C., Muljo, S.A., Kung, A.L., Ganesan, S., Drapkin, R., Jenuwein, T., Livingston, D.M. and Rajewsky, K. (2005) Dicer-deficient mouse embryonic stem cells are defective in differentiation and centromeric silencing. Genes Dev. 19, 489501. (4) Chen, P.Y., Manninga, H., Slanchev, K., Chien, M., Russo, J.J., Ju, J., Sheridan, R., John, B., Marks, D.S., Gaidatzis, D., Sander, C., Zavolan, M. and Tuschl, T. (2005) The developmental miRNA profiles of zebrafish as determined by small RNA cloning. Genes Dev. 19, 12881293. (5) Wienholds, E., Kloosterman, W.P., Miska, E., Alvarez-Saavedra, E., Berezikov, E., de Bruijn, E., Horvitz, H.R., Kauppinen, S. and Plasterk, R.H. (2005) MicroRNA expression in zebrafish embryonic development. Science 309, 310311. (6) Lu, J., Getz, G., Miska, E.A., Alvarez-Saavedra, E., Lamb, J., Peck, D., Sweet-Cordero, A., Ebert, B.L., Mak, R.H., Ferrando, A.A., Downing, J.R., Jacks, T., Horvitz, H.R. and Golub, T.R. (2005) MicroRNA expression profiles classify human cancers. Nature 435, 834838. (7) Haseltine, W.A. (2003). Regenerative medicine: a future healing art. Brookings Rev 21, 38-43. (8) Alonso, L., and Fuchs, E. (2003). Stem cells of the skin epithelium. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 11830-11835. (9) Harada, S., and Rodan, G.A. (2003). Control of osteoblast function and regulation of bone mass. Nature 423, 349-355. (10) Dor, Y., Brown, J., Martinez, O.I., and Melton, D.A. (2004). Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation. Nature 429, 41-46. (11) Leor, J., Amsalem, Y., and Cohen, S. (2005). Cells, scaffolds, and molecules for myocardial tissue engineering. Pharmacol. Ther. 105, 151-163. (12) Radtke, F., and Clevers, H. (2005). Self-renewal and cancer of the gut: two sides of a coin. Science 307, 1904-1909. (13) Sage, C., Huang, M., Karimi, K., Gutierrez, G., Vollrath, M.A., Zhang, D.S., GarciaAnoveros, J., Hinds, P.W., Corwin, J.T., Corey, D.P., and Chen, Z. (2005). Proliferation of functional hair cells in vivo in the absence of the retinoblastoma protein. Science 307, 1114-1118.
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VII. ANEXOS

Figura 1

Tabla 2
Figura 1. Biognesis y mecanismo del microRNA: a) La biognesis comienza con la transcripcin del miRNA primario por la RNA polimerasa II, de unidades transcripcionales independientes con longitudes que van desde varios cientos a varios miles de nucletidos que pueden codifican un slo miRNA o aveces dos o ms. En adicin a las unidades independientes, algunos miRNAs se originan dentro de los intrones de transcriptos de mRNA. b) Los miRNAs primarios entran en su va de procesamiento y sufren escisin nuclear por el Complejo Microprocesador en el cual las RNasa III endonucleasas: Drosha y DGCR8 producen un precursor intermediario de miRNA de unos 70 nucletidos de largo (premiRNA), cuyas caractersticas son una estructura bicatenaria en forma de horquilla y un corte escalonado en la base de dicha horquilla. c) La exportina-5 reconoce el corte escalonado y exporta el premiRNA al citoplasma. d) Una vez en el citoplasma, Dicer, otra RNasa III endonucleasa, corta los extremos del precursor y genera un duplicado. Una sola cadena del duplicado resultante de 22 nucletidos aprox. es incorporada selectivamente dentro del Complejo Silenciador inducido por RNA (RISC), mientras que la otra posiblemente es degradada. e) La regulacin de la expresin del gen blanco por un RISC cargado con miRNA es facilitada por un apareo complementario de bases con la secuencia blanco dentro del extremo 3 UTR de los mRNAs. Generalmente, en animales, el perfecto o semi-perfecto apareamiento complementario de bases entre el RISC cargado y el mRNA resulta en una inmediata degradacin del mRNA. Sin embargo, la gran mayora de los miRNAs son imperfectamente complementarios a sus mRNAs objetivo y median su degradacin.

Imagen y tabla adaptada de Taking microRNAs to heart (1).

Figura 2

Roles conocidos de los miRNAs en el desarrollo y funcin cardiaca: Estudios recientes han demostrado una asociacin entre diversos miRNAs con varios defectos cardiacos. Estos se muestran en la figura 2.

Imagen adaptada de Taking microRNAs to heart (1).

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Figura 3

En la imagen superior izquierda se puede observar el desarrollo de heridas isqumicas y no isqumicas desde el da 0 hasta el da 7. En la imagen superior derecha est representado el cierre de heridas isqumicas (lnea continua) comparado con heridas no isqumicas (lnea punteada). Por ltimo, en la imagen inferior se analiza el porcentaje de epitelizacin en heridas isqumicas y no isqumicas. Todas estas imgenes evidencian la mejor cicatrizacin de las heridas en que no est presente el componente isqumico. Imgenes adaptadas de Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds (67).

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Figura 4

Rol de los miRNAs en Esclerosis Lateral Amiotrfica. Imagen adaptada de MicroRNA-206 Delays ALS Progression and Promotes Regeneration of Neuromuscular Synapses in Mice (70).

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Figura 5

Esquema resumen de microRNA y medicina regenerativa.

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I. RESUMEN..... 2 II. INTRODUCCIN.. 2 III. DESARROLLO... 3 MicroRNAs........... Medicina Regenerativa.... Terapias asociadas a microRNA... MicroRNA en diversos tejidos........... MicroRNAs implicados en el corazn.. MicroRNAs en la regeneracin heptica... MicroRNAs en la reparacin de la piel... MicroARN y regeneracin de la sinapsis en la ELA... 3 3 6 7 7 11 12 14

IV. DISCUSIN Y CONCLUSIONES V. ESTRATEGIAS DE BSQUEDA......... VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS...

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VII. ANEXOS. 23 VIII. INDICE DE MATERIAS.. 27

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