L-asparaginasa (CE 3. 5. 1. 1) est presente en muchos tejidos animales, bacterias, plantas y en el suero de ciertos roedores, pero no en la humanidad.

L-asparaginasa es producida por un gran nmero de microorganismos que incluyen E. coli. Cataliza la hidrlisis de L-asparagina en L-aspartato y amonaco. El mecanismo exacto de su accin es an desconocido, aunque el producto de hidrlisis en dos etapas a travs de una beta-acil-enzima intermedio Composicin de la enzima Mol % La L-asparaginasa (CE 3. 5. 1. 1) enzima se purific hasta homogeneidad a partir de Aminocido Acido asprtico 8.70 Pseudomonas aeruginosa 50071 clulas que se cultivaron en fermentacin en estado Treonina 2.71 slido. Serina 4.07 Los diferentes pasos de purificacin (incluyendo fraccionamiento con sulfato de cido glutmico 12.9 amonio seguido por separacin en Sephadex filtracin en gel G-100 y CM-Sephadex Prolina 2.71 C50) se aplicaron a la cultura crudo filtrado para obtener un preparado enzimtico Glicina 17.1 Alanina 3.9 puro. Cistena 1.64 La enzima se purific 106-veces y mostr una actividad especfica final de 1900 UI / mg Valina 2.1 con un rendimiento del 43%. Sodio dodecil sulfato-poliacrilamida electroforesis en gel Metionina 6.94 (SDS-PAGE) de la enzima purificada revel que era una cadena peptdica con Mr de Isoleucina 1.97 160 kDa. Leucina 4.25 Un anlisis de Lineweaver-Burk mostr un valor Km de 0,147 mM y Vmax de 35,7 UI. Tirosina 1.72 Fenilalanina 3.07 La enzima mostr mxima actividad a pH 9 cuando se incuban a 37 C durante 30 min. Histidina 3.99 La composicin de aminocidos de la enzima purificada se determin tambin. Lisina 5.07 Arginina 3.32 Paso Volumen recogido (mL) 450 275 175 100 Actividad Total (UI) 74300 63100 45200 32300 Protena Total (mg) 4150 674 91 17 Actividad especfica (UI/mg) 17.9 93.7 497 1900 Purificacin Rendimiento (%) 100 85 60.8 43

Extracto crudo Precipitacin (NH4)2SO2 Columna de filtracin en gel Sephadex G100 Columna CM-Sephadex C50

0.00 5.2 27.7 106

Fig. 4. Electroforesis en gel de poliacrilamida de la L-asparaginasa de Pseudomonas aeruginosa 50071. Electrophresis de la enzima se llev a cabo en un gel de poliacrilamida al 15% en ausencia de SDS y el gel se ti con azul Coomassei R-250. Lnea A, extracto crudo; B Lane, fraccin de sulfato de amonio; C Lane, Sephadex G-100 fraccin de filtracin en gel; D Lane, CM-Sephadex C50 fraccin.

Resumen de Purificacin de EXG de T. harzianum Paso de purificacin sobrenadante de cultivo (NH4)2SO4 precipitacin Filtracin en gel de Sephadex G-200 Filtracin en gel de Sephadex G-50 Actividad (IU/mL) 7.87 6.02 23.18 40.41 Actividad especfica (U/mg) 2.25 3.04 10.78 49.22 Rendimiento (%) 100 5.09 19.6 10.26 Purificacin 1 1.35 4.79 21.87

Resumen de Purificacin de EG de T. harzianum Paso de purificacin sobrenadante de cultivo (NH4)2SO4 precipitacin Filtracin en gel de Sephadex G-200 Filtracin en gel de Sephadex G-50 Actividad (IU/mL) 0.79 1.06 0.45 0.72 Actividad especfica (U/mg) 0.087 0.37 0.23 0.63 Rendimiento (%) 100 13.3 56 90 Purificacin 1 4.22 2.60 7.15

Resumen de Purificacin de BGL de T. harzianum Paso de purificacin Actividad (IU/mL) 0.92 0.40 0.35 0.68 Actividad especfica (U/mg) 0.20 0.06 0.25 0.35 Rendimiento (%) Purificacin

sobrenadante de cultivo (NH4)2SO4 precipitacin Filtracin en gel de Sephadex G-200 Filtracin en gel de Sephadex G-50

100 12.58 40.56 73.75

1 0.29 1.24 1.74