OBJETIVO:

El alumno aprender la tcnica de PRUEBA INMUNOLOGICA DE EMBARAZO asi como a tener conocimiento de su aplicacin, asi como obtener criterios en falsos positivos.

INTRODUCCION.

Mtodos biolgicos de deteccin precoz del embarazo

Prueba de embarazo, por medio de la orina, con resultado negativo Los mtodos precoces son los que permiten detectar el embarazo en sus primeros das y antes de su principal sntoma, la suspensin de la menstruacin o amenorrea. A lo largo del tiempo se usaron diversos mtodos que hoy sabemos estaban basados en que cuando una mujer queda embarazada aparecen en su orina hormonas antes inexistentes. Los primeros mtodos usaron los efectos visibles que estas hormonas tienen sobre plantas y animales, llamados por esta razn mtodos biolgicos de deteccin de embarazos. A partir de la dcada de 1960 se desarrollaron mtodos de deteccin directa basados en que las reacciones inmunolgicos que producen estas hormonas pueden hacerse visibles usando antgenos especficos a ellas. Un papiro del Antiguo Egipto cuenta que para detectar el embarazo se haca orinar a la mujer durante varios das sobre semillas de trigo y cebada. Si despus de un tiempo germinaba la cebada, el hijo sera varn; si germinaba el trigo, sera mujer; si no germinaba ninguna semilla, la mujer no estaba embarazada (aparentemente el papiro no menciona cual era el diagnstico si germinaban ambas). Estudios hechos en 1963 mostraron que la orina de una mujer embarazada promova la germinacin el 70% de las veces, mientras que nunca lo haca la de las mujeres no embarazadas o los hombres. En 1928 los gineclogos alemanes Ascheim y Zondek desarrollaron el mtodo siguiente. Se inyectaban pequeas cantidades de orina en ratas hembras impberes, dos veces por da durante 3 das sucesivos. Al cabo de unas 100 horas sacrificaban las ratas e inspeccionaban sus ovarios. Si stos se hallaban engrosados, haba un 80% de probabilidad que la mujer estuviera embarazada. En 1930 Collip y colaboradores descubrieron que la orina de las embarazadas contena luego se descubri que eran en realidad fragmentos de sta la hormona gonadotropina corinica humana, actualmente denominada HCG por la sigla de su nombre en ingls Human Chorionic Gonadotropin.

En 1942, el citlogo argentino Eduardo de Robertis que en ese momento era Jefe de Trabajos Prcticos dedicacin exclusiva de la ctedra de Histologa de la Escuela de Medicina de la Universidad de Buenos Aires y Jefe de la Seccin de Citologa e Histofisiologia del Instituto de Anatoma General y Embriologa determin que la HCG acta sobre las clulas de Sertoli provocando la expulsin de espermatozoides en los sapos. Su condiscpulo Carlos Galli Mainini, mientras trabajaba en el Hospital Rivadavia de Buenos Aires entre 1942 y 1947, dedujo que si la mujer embarazada eliminaba HCG en la orina, su inyeccin en sapos causara la maduracin y expulsin de sus espermatozoides. Inyect orina de mujeres embarazadas en el saco linftico dorsal de sapos macho Bufo Arenarium; al cabo de 2 o 3 horas examin al microscopio su orina observando la presencia de espermatozoides. El mtodo, luego denominado Reaccin de Galli Mainini o Test de la rana, proporcion un modo eficaz y econmico de diagnstico precoz del embarazo y por ello se us masivamente en Argentina y Amrica Latina durante muchos aos. A juzgar por la falta de referencias en Internet, el mismo no tuvo difusin en Europa y Estados Unidos, donde aparentemente se usaron otros mtodos biolgicos hasta el desarrollo de los inmunolgicos algunas dcadas despus. Existen signos positivos, probables y presuntivos de embarazo, pero slo los positivos confirman con certeza la existencia de un embarazo. La determinacin de HCG es un mtodo presuntivo ya que puede ser positiva an en ausencia de embarazos. Sin embargo, de todos los mtodos disponibles en la actualidad es el que permite la deteccin ms temprana y es la base de los rpidos tests inmunolgicos actuales. Pruebas modernas La primera prueba "moderna" para el embarazo detecta la inhibicin del factor de preez temprana (EPF, por sus siglas en ingls). El EPF se puede detectar en la sangre en las 48 horas siguientes a la fertilizacin.1 Sin embargo, las pruebas del EPF son caras y toman mucho tiempo. La mayor parte de las pruebas qumicas buscan la presencia de la subunidad beta de la gonadotropina corinica humana (hCG) en la sangre o en la orina. El hCG se puede detectar en la orina o la sangre despus de la implantacin del producto en la matriz, que ocurre de seis a doce das despus de la fertilizacin.2 Los mtodos cuantitativos (suero beta) pueden detectar niveles de hCG tan pequeos como 1 mIU/mL, mientras que las puebas de orina requieren de 20 a 100 mIU/mL, dependiendo de la marca.3 Las pruebas cualitativas de sangre generalmente tienen un umbral de 25 mIU/mL, as que tienen menor sensibilidad que algunas pruebas de orina caseras. Con ultrasonido obsttrico, el saco gestacional puede algunas veces visualizarse tan temprano como a las cuatro y media semanas de gestacin (aproximadamente dos semanas y media despus de la ovulacin) y el "saco de yema" (en ingls, yolk sac) unas cinco semanas despus de la gestacin. El embrin puede ser observado y medido a las 5 semanas y media. El latido del corazn puede ser detectado a las 7 semanas de gestacin, y en ocasiones se ha observado desde las 6 semanas.4 5 Influencia del tiempo en las pruebas de embarazo

Lecturas negativas falsas (es decir, que indican que no hay embarazo cuando realmente s lo hay) pueden ocurrir cuando la prueba se aplica muy temprano. Las pruebas cuantitativas de sangre y las ms sensibles pruebas de orina normalmente detectan el hCG poco despus de la implantacin, que puede ocurrir en cualquier momento entre 6 y 12 das despus de la ovulacin.2 Exmenes de orina menos sensibles y pruebas cualitativas de sangre pueden no detectar el embarazo hasta tres o cuatro das despus de la implantacin. La menstruacin ocurre en promedio 14 das despus de la ovulacin, as que la probabilidad de un resultado negativo falso es muy baja una vez que el periodo menstrual se ha atrasado. Sin embargo, la ovulacin puede no ocurrir regularmente (es decir, en un momento predecible) en el ciclo menstrual. Hay varios factores que pueden ocasionar una ovulacin temprana o tarda, an en mujeres con una historia de ciclos menstruales regulares. El uso de equipos predictores de ovulacin (OPK, por sus siglas en ingls), o llevar un registro de los signos de fertilidad de la mucosidad cervical o de la temperatura basal del cuerpo pueden dar una idea ms precisa de cundo se debe hacer la prueba que la simple cuenta de los das. La precisin de una prueba de embarazo est ms relacionada al da de ovulacin que al da en que ocurre la relacin sexual. Es normal que el esperma viva hasta cinco das despus del coito6 en las trompas de falopio, esperando a que ocurra la ovulacin.7 Puede tomar hasta doce das ms que ocurra la implantacin y otros tres o cuatro das para que los niveles de hCG sean detectables - lo que significa que se pueden obtener resultados negativos falsos hasta tres semanas despus del acto sexual que caus el embarazo. Falsos positivos Es imperativo que una prueba de embarazo sea interpretada dentro del tiempo de reaccin especificado por la compaa que lo produce. Una mujer a quien se ha aplicado una inyeccin de hCG como parte de un tratamiento de infertilidad dar resultados positivos, sin importar su estado de preez real. Algunas medicinas para la infertilidad como el clomid no contienen la hormona hCG.8 Cuando se realiza de acuerdo a las instrucciones del paquete, por mujeres que no han recibido una inyeccin de hCG, los resultados positivos falsos son muy raros en las pruebas de embarazo. Algunas enfermedades pueden causar un resultado positivo falso: coriocarcinomas, deficiencia de IgA, anticuerpos heterfilos, enterocistoplastias, enfermedades trofoblsticas gestacionales (GTD), neoplasmas trofoblsticos gestacionales (GTN), grmenes celulares testiculares malignos, y otros tipos de cncer (como cncer de pulmn). Viabilidad del embarazo Las pruebas de embarazo se pueden utilizar para determinar la viabilidad de un embarazo. Se puede hacer una serie de exmenes de sangre cuantitativos, normalmente con una diferencia de 2 3 das. Bajo un nivel de hCG de 1,200 mIU/mL el hCG normalmente se duplica cada 48-72 horas,

aunque un aumento de 50-60% todava se considera normal. Entre 1,200 y 6,000 mIU/mL le toma de 72 a 96 horas al hCG para aumentar al doble, y arriba de 6,000 mIU/mL, el hCG muchas veces tarda ms de 4 das en alcanzar el doble. Si no aumenta a esta velocidad, normalmente indica un riesgo ms alto de aborto espontneo o embarazo ectpico. El ultrasonido tambin es una herramienta comn para determinar la viabilidad. Un pulso cardiaco menor que la esperada o las fallas en el desarrollo pueden indicar un problema con el embarazo.5 Sin embargo, el diagnstico no se debe basar en un solo ultrasonido. Las estimaciones imprecisas de la edad del feto y las imprecisiones inherentes al examen ultrasnico pueden ser causa de malinterpretaciones. Si los resultados del primer ultrasonido indican un problema, es una prctica razonable repetir el escaneo 7-10 das despus MTODOS BIOLGICOS:

Reaccin de Zondek y Aschhein

En 1927, Aschhein demostr que muy precozmente en la orina de la mujer embarazada poda demostrarse la presencia de una sustancia capaz de provocar en el ratn hembra impber modificaciones semejantes a las que se producen en el aparato reproductor de la mujer grvida. Se parte de una muestra de orina de la supuesta embarazada, que, tras ser tratada convenientemente (desintoxicada por agitacin con ter y decantacin posterior), se practican con ella inyecciones a ratones hembras impberes. Al quinto da del inculo, se sacrifican los animales y se hace un estudio macro y microscpico de sus ovarios. La reaccin positiva se caracteriza por la presencia de puntos hemorrgicos rojo violceos a nivel del ovario, observndose tambin manchas amarillentas debidas a la formacin de falsos cuerpos amarillos a nivel de los folculos distendidos. Esta observacin se complementaba con el estudio de cortes histolgicos seriados en donde se descubran los elementos caractersticos de la reaccin positiva. Esta reaccin daba un porcentaje muy alto de resultados (90-91%), pudiendo utilizarse desde 8-10 das despus de la ausencia de las reglas hasta otros tantos despus del parto.

Reaccin de Brouha-Hinglais-Simonnet

Data de 1929 y emplea el ratn macho de cuatro semanas de edad. Aqu se empleaban menos ejemplares (dos o tres a lo sumo), aunque se tardaba ms en obtener los resultados. La muestra de orina problema previamente tratada se inyectaba por va subcutnea a los animales durante 8 a 10 das consecutivos. Tras el sacrificio y la autopsia, la reaccin positiva se caracterizaba por un

aumento del volumen del testculo y por una gran tumefaccin de las vesculas seminales, ingurgitadas de una secrecin lquida blanquecina. Una reaccin fcil de observar.

Reaccin de Friedmann

Este autor en 1930 demostr que la inyeccin intravenosa de orina de embarazada a la coneja adulta, es capaz de provocar en 24 horas la dehiscencia folicular en los ovarios. Aqu hay diversas variantes del mtodo (con ms o menos dosis y en ms o menos das), pero el procedimiento final era la laparotomizacin del animal para examinar el tracto genital y esencialmente los ovarios. En condiciones normales, estos son del tamao de una juda, de superficie lisa y con algunos puntos redondos y translcidos (folculos en reposo). En caso de reaccin positiva, el ovario puede presentar aspectos algo distintos segn el momento del examen; en general, todo el tracto genital est congestionado y los folculos ovricos (a las 24 horas) han aumentado de volumen y perdido su transparencia tomando aspecto gris o negro; a las 48 horas el ovario est edematoso, con folculos hemorrgicos, algunos pueden haber estallado. Este mtodo presenta la ventaja de que al no requerir sacrificio del animal (solo es operado para extraerle una muestra ovrica), ste puede ser empleado varias veces.

Anuro-reaccin: la prueba de la rana

Famossima. El empleo de los anuros para el diagnstico del embarazo mediante la provocacin de la espermatognesis por la inyeccin de hormonas gonadogropas existentes en la orina de embarazadas fue propuesto por Galli-Mainini en 1947. Numerossimos trabajos siguieron a ste en todo el mundo, siempre utilizando sapos. La idea del empleo de las ranas macho para provocar esa misma reaccin se debe, en Espaa, a Aznar Ferreres y Hernndez Andueza (1948). El fundamento de la tcnica es tan sencillo como divertido. La reaccin est basada en la rpida respuesta eyaculadora conseguida en el animal por la accin directa sobre la gnada de la hormona gonadotropina corinica (HCG) presente en la orina de la gestante.

Son animales fciles de conservar en el laboratorio, pues pueden mantenerse en ayuno durante varios meses. No obstante, para alimentarlos y evitar el estado de caquexia a que pueden llegar, se les suministraba insectos vivos. Pero en general son animales poco exigentes. Como mtodo de mantenimiento en el laboratorio se empleaba la refrigeracin. S, como suena, las ranas se guardaban en la nevera como si de un brick de leche Pascual se tratara. La cosa era simple y

presentaba indudables ventajas. Mientras no se utilicen, a 8-12 C se mantienen en estado de vida retardado, pudiendo aguantar as entre 5 y 7 meses.

Se demuestra previamente en los animales elegidos (rana verde comn, variedades esculata, ridibunda, etc), mediante cateterismo de cloaca, que en ella no existen espermatozoides. Se procede al inculo de la orina previamente tratada en cualquiera de los sacos linfticos del animal. Las ranas inyectadas se mantienen en un sitio oscuro y tranquilo durante 2-3 horas, al cabo de las cuales se recoge orina de la cloaca para investigar la presencia o no de espermatozoides. Para ello, con la orina recogida, se hace una preparacin en fresco entre porta y cubre que se lleva al microscopio, donde se pone de manifiesto o no la presencia de las clulas germinales.

Pese a todo, no era un mtodo confiable. Se han encontrado reacciones positivas con orinas normales (no gestantes) y ante muestras prodentes de mujeres grvidas con afecciones hepticas de distinta etiologa se han obtenido resultados inespecficos.

Prueba inmunolgica

Desde que se demostr en 1953 por los trabajos de Bordet y Bussard que las hormonas de estructura proteica se comportaban como antgenos y que, por tanto, mediante su inyeccin al animal podra obtenerse un suero conteniendo anticuepos, se inici el estudio de las posibilidades de diagnstico del embarazo mediante una reaccin antgeno-anticuerpo que tuviese lugar entre la orina (o suero) de una mujer embarazada, ricos en gonadotropina corinica y un suero experimental obtenido de conejos inmunizados con productos comerciales purificados de esta misma hormona.

En efecto, estudios posteriores demostraron esta posibilidad, ponindose a contribucin las distintas tcnicas de reacciones Ag-Ac para evidenciar el antgeno GC presente en la orina o sangre de la mujer gestante. As por ejemplo, Brody y Carlstrm emplearon la reaccin de fijacin del complemento; Mc. Kean las reacciones de precipitacin y Wide y Gemzel las de aglutinacininhibicin que. Todas ellas demostraron su especificidad, pero por razones de orden tcnico y de sensibilidad, han sido las ltimas las que han predominado en la prctica.

MTODOS QUMICOS

Ha habido varios, que se han ido desarrollando coetneamente a los biolgicos. Se pueden citar la reaccin de Kapeller-Adler que investiga la presencia de histidina en la orina de la embarazada, la reaccin de Richardson para evidenciar la estrona libre, o la reaccin del yodo, conocida tambin como reaccin de Schlr o reaccin de Simola. Todas se valen de reacciones de coloracin de compuestos qumicos para valorar la positividad o negatividad de la prueba.

EL DIAGNSTICO DEL EMBARAZO EN LA ACTUALIDAD

Es fcil averiguar por qu los mtodos qumicos acabaron por desplazar a los biolgicos. No necesitan de animales de laboratorio y, puesto que se trabaja nicamente con factores humanos, se disminuye el nmero de posibles interferencias. Los modernos mtodos bioqumicos se basan en la deteccin de la fraccin beta de la hormona gonadotropina corinica en la orina, que solamente se excreta con ella en el perodo gestacional. Para ello hay a disposicin de la gente "kits" comerciales de prediccin con un margen de error de en torno al 2%. La deteccin de esta hormona en sangre representa una fiabilidad del 100%.

Como curiosidad, es interesante comentar que la gestacin no es el nico proceso que eleva los valores de HCG en sangre. En los varones, el cncer testicular cuenta con marcadores especficos, y esta hormona es tambin uno de ellos. En estos procesos tumorales, se elevan los niveles de fetoprotena y HCG, motivo por el cual, en ciertas ocasiones, tambin pueden emplearse los tests de prediccin de embarazo para el diagnstico de esta afeccin.

FUNDAMENTO:

Las pruebas de embarazo que usan reacciones inmunolgicas se basan en la inhibicin de la coagulacin de glbulos rojos o hemaglutinacin. Para esta prueba se utiliza suero de sangre de conejo que contiene anticuerpos contra la gonadotropina corinica (HCG) y eritrocitos recubiertos con HCG, a los que se agrega la sangre o la orina de la mujer a la que hay que diagnosticar. Si est

embarazada, la HCG en su sangre o su orina, reaccionar con los anticuerpos de conejo y evitar que se aglutinen los eritrocitos recubiertos. La prueba resultar entonces positiva.

OBSERVACIONES:

Se observo una prueba positiva de embarazo, debido que se presencio lineas totalmente bien marcadas.

DISCUSION:

La positividad de la prueba significa que hubo reaccion de los anticuerpo con tra la HGC. En este no hubo lneas de evaporacin es decir, lineas leve marcadas, pero si hubiera aparecido ya que es muy comun en muchas pruebas de embarazo caseras si se leen despus del periodo sugerido (tiempo de reaccin) de 3-5 minutos, independientemente de que exista un embarazo real

CONCLUSIONES:

Se logro tener conocimiento de la tcnica de PRUEBA INMUNOLOGICA DE EMBARAZO as como sus aplicaciones medicas e interpretaciones.

BIBLIOGRAFA.

1. De Saint,B.G. and Fischer,A. (2001): The role of PIE. Curr. Opin. Immunol. 2. Krutzik, S.R., Sieling, P.A., and Modlin, R.L. (2001): The role Pregnancy tesst. Curr.Opin.