Transcripcin reversa

La transcripcin reversa es otro mtodo para adquirir un gen. Es llamada as como el opuesto directo del proceso de la transcripcin. Este proceso convierte mRNA a DNA. Se aslan molculas individuales de mRNA en el citoplasma. Entonces se identifican y seleccionan la molcula de mRNA que se necesita en una solucin. Entonces se agregan nucletidos de DNA, DNA ligasa, y DNA polimerasa. Los nucletidos forman puentes de Hidrgeno con el mRNA y son unidos por la ligasa. Un segmento de DNA es formado. Este gen puede ser duplicado muchas veces por PCR. La transcripcin es mucho ms rpida comparada con cortar DNA por enzimas de restriccin. Esto es porque es muy problemtico elegir la correcta enzima de restriccin e identificar varios segmentos de genes cortados por una enzima. Por otro lado, un pequeo proceso de identificacin es necesitado en la transcripcin reversa. Cmo funciona? Se usan: Buffer mRNA DNA primers Enzima de transcripcin reversa dNTPs Taq DNA polimerasa

Entonces se incuban a 37 grados para permitir que la enzima de transcripcin reversa trabaje. A partir de mRNA, la enzima de transcripcin reversa, con ayuda de los primers y teniendo a la mano dNTPs, transcribe una cadena hbrido de RNA y DNA, con un aumento de temperatura a 55 grados; para despus con RNAse H degradar la cadena de RNA. A partir de all, se coloca un segundo primer en la cadena recin hecha para despus la polimerasa sintetizar una cadena de cDNA (ADN complementario).

Transcriptasa reversa. Transcriptasa reversa es el nombre comn para una enzima que funciona como RNa dependiente de DNA polimerasa. Son codificadas por retrovirus, donde copian el genoma viral a DNA cuando se integran a la clula husped. La transcriptasa reversa tiene dos actividades:

- Actividad de DNA polimerasa

Actividad de RNAse H (Degrada RNA de hbridos de RNA-DNA) La transcriptasa reversa est en todos los retrovirus, pero se obtiene comercialmente de dos retrovirus:

Moloney murine leukemia virus: Un polipptido simple. Avian myeloblastosis virus: Compuesto por dos cadenas pptdicas.

Aplicaciones La transcripcin reversa se usa en un derivado del PCR, llamado RT-PCR. Despus de haber obtenido la cadena de cDNA, se usa el procedimiento de PCR para obtener varias copias de un gen. ste proceso a su vez es utilizado para: Estudio de patgenos virales Estudio de virus de RNA negative-stranded. Estudio de virus de RNA positive-stranded. Estudio de virus dsRNA Estudio de retrovirus En la deteccin de enfermedades por marcado especfico. Diagnstico de enfermedades microbianas.

REFERENCIAS
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