I.

INTRODUCCION

Existe un mundo formado por cosas tan pequeas, que no podemos percibirlas a simple vista. Un holands de delft, Antonio Van Leeuwenhoek (1632-1723), empez a explorar ese mundo; vio pulir lentes destinados a los anteojos que, en otras cosas, se empleaban para contemplar el cielo nocturno. Entonces decidi dedicarse a fabricar lentes, no para mirar las estrellas, sino para estudiar el mundo de las cosas pequeas que tena a su alrededor. Es muy cierto que el ser humano posee el sentido de la vista desarrollado, sin embargo no puede ver a simple vista cosas que midan menos de una decima de milmetro. La creacin del microscopio fue un importante avance en el mundo de la biologa, qumica y medicina, particularmente la biologa ha venido dcada tras dcada aportando nuevos conocimientos, desde la observacin de la clula y su descubrimiento, el de las bacterias, hasta la situacin actual con la visualizacin de la ultra estructura celular. A l descubrirse las bacterias se pudo averiguar la causa de muchas enfermedades y as encontrar su cura. El tejido humano tambin pudo ser examinado y se pudo descubrir como funciona nuestro cuerpo. Hoy en da, se analiza tejido enfermo en los hospitales. Tambin se usan los microscopios en la conocida microcirugas, cirugas muy difciles las cuales no pueden llevarse a cabo sin el microscopio .Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formacin de imgenes pticas aumentadas a travs de lentes convergentes, permiten la observacin de pequeos detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibiran. En el presente informe se hablara del microscopio, los tipos, sus partes, su c orrecto uso, cuidado y conservacin.

1.1 Objetivos de la prctica: Manejar correctamente el microscopio. Identificar sus partes y aprender sus aplicaciones. Conocer los tipos de preparados y coloraciones.

II.

MARCO TEORICO

2.1-CONCEPTO: Etimolgicamente microscopio viene del griego: "mikro" = pequeo y "scope" = mirar (para mirar cosas pequeas) El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto pequeo. Es el instrumento que ms se usa en los laboratorios que estudian los microorganismos. Mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminacin se puede hacer visible un objeto microscpico. Los microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamao original.

2.2-HISTORIA: No se sabe a ciencia cierta cuando descubri el hombre, por primera vez, que un objeto observado a travs de un cristal de forma lenticular apareciera agrandado. Existen a este respecto testimonios antiqusimos, pero muy vagos. La historia del microscopio se inicio en el siglo XVI, con Benedetto Rucellai, quien escribe en uno de sus pequeos poemas las observaciones realizadas sobre abejas seccionadas con la ayuda de un espejo cncavo. El mundo microscpico permaneci oculto para el ser humano hasta la invencin de un instrumento ptico realizado por Juan y Zacaras Jansen en 1590, lo que abri las puertas a un mundo desconocido. Los hermanos Jansen descubrieron que al colocar dos lentes separados y mirar a travs de ellos, los objetos observados aumentaban de tamao. Sin embargo, las primeras publicaciones importantes en el campo de la microscopa aparecen en 1660 y 1665, cuando Marcello Malpighi prueba la teora de William Harvey sobre la circulacin sangunea al observar al microscopio los capilares sanguneos y Robert Hooke publica su obra Micrographia.

Ms tarde el holands Anton van Leeuwenhoek invent un antepasado del microscopio (foto de la izquierda), al realizar las primeras observaciones de microorganismos en el agua de lluvia, sarro de dientes, sangre, semen, excrementos, etc., describiendo unos pequeos animales de gran diversidad. Leeuwenhoek, sin ninguna preparacin cientfica, puede considerarse el fundador de la bacteriologa. Tallaba l mismo sus lupas sobre pequeas esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el milmetro. Con estas pequeas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la sangre, las bacterias y los protozoos; examin por primera vez los glbulos rojos y descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no revel sus mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres.

Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos por

asociacin devidrios flint y crown, obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta poca son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler.

Durante el siglo XIX el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe public su teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejor la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los microscopios pticos, no consiguiendo stos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares (ncleo, mitocondria, etc.). El microscopio electrnico de transmisin (TEM) fue el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido (SEM).

2.3-MICROSCOPIO COMPUESTO

2.3.1-Parte ptica OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. Son de 5x, 10x y 15x. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. Son cuatro de 4x, 10x, 40x y 100x, el ltimo utiliza un agente de inmersin. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

2.3.2-Sistema mecnico SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes:

Brazo: da fijacin, estabilidad a la parte ptica. Pie: da fijacin a todo el microscopio.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto. PLATINO: Lugar donde se deposita la preparacin. Tiene una pinza y un orificio central. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular. REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

2.3.3-Sistema de iluminacin FUENTE DE ILUMINACION se trata generalmente de una lmpara incandescente de tungsteno sobrevoltada. Por delante de ella se sita un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces parsitas.

ESPEJO Necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La c ara cncava se emplea de preferencia con i l u m i n a c i n artificial, y la plana, para iluminacin natural (luz solar). Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo. CONDENSADOR Est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que piden q ue se llene con a c e i t e e l e s p a c i o e n t r e e s a l e n t e s u p e r i o r y l a p r e p a r a c i n . L a a b e r t u r a n u m r i c a mxima del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se l o g r a r a p r o v e c h a r t o d o s u p o d e r s e p a r a d o r . E l c o n d e n s a d o r p u e d e d e s l i z a r s e verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajndose para su uso con objetivos de poca potencia. DIAFRAGMA El condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del sistema ptico.

2.4- TIPOS DE MICROSCOPIOS: 2.4.1 MICROSCOPIO OPTICO Por lo que la resolucin de un objeto es funcin de la apertura numrica; cuanto mayor Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el tamao original. El lmite lo tienen en unas 2000 veces. Las lentes de un microscopio ptico son el condensador, el objetivo y el ocular. La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparacin y para esto se utiliza el condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final. Los microscopios que se usan normalmente en microbiologa estn equipados con tres objetivos: bajo poder, alto poder y objetivo de inmersin. Estos objetivos estn montados sobre una pieza que se llama revolver que puede rotarse para alinear el objetivo deseado con el condensador.

La imagen formada por el objetivo es finalmente aumentada por el ocular. El aumento total de un microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de su ocular. El microscopio compuesto es capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores que el microscopio construido con una sola lente. Este ltimo, llamado microscopio simple, se usa principalmente como lupas y cristales de aumento. Adems del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su poder resolutivo; esto es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser la definicin de un objeto. Los microscopios de gran poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeas estructuras. El poder resolutivo de un microscopio compuesto depende de la longitud de onda utilizada y de una propiedad ptica de la lente conocida como apertura numrica. Como los microscopios pticos utilizan luz visible, la longitud de onda est fijada y eso sea la apertura, el objeto resuelto ser ms pequeo.

2.4.2-MICROSCOPIO ELECTRNICO Los microscopios electrnicos utilizan rayos de electrones en lugar de la luz, lo que les permite tener un poder de resolucin muy elevado. La longitud de onda de los rayos de electrones es de 0,005 - 0,0003 nm, muy corta comparada con la de la luz visible (426 750 nm; violeta - rojo). Es posible con el microscopio electrnico resolver objetos separados por una distancia de 0,003 m, comparado con los 0,25 m de uno ptico. Los aumentos pueden llegar a ser de un milln de veces. A causa de la naturaleza de este instrumento slo pueden examinarse objetos muy delgados; incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada directamente. Por lo que, para preparar muestras para el microscopio electrnico se necesitan tcnicas especiales de cortes ultra finos. Para seccionar las clulas primero deben ser fijadas y deshidratadas (etanol o acetona). Despus de la deshidratacin, la muestra se incluye en una resina y es aqu donde se realizan cortes finos con un ultra micrtomo, por lo general equipado con una cuchilla de diamante. Una sola clula bacteriana puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas. Si slo tiene que observarse el contorno de un organismo, no son necesarias secciones finas por lo que se montan clulas enteras que se recubren de una capa fina de un metal pesado (oro). El rayo de electrones es dirigido sobre la preparacin y los electrones dispersados por el metal pesado activan una pantalla de observacin produciendo una imagen. A la primera tcnica se la denomina Microscopa Electrnica de Transmisin (MET) y a la segunda Microscopa Electrnica de Barrido (MEB).

2.5-MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. 5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). 7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

III.MATERIALES Y METODOS
Materiales:

Laminas y laminillas Algodn Alcohol Lancetas Gotero Fsforos Agua estancada.

Mtodos:

1. 2. 3. 4. 5.

Muestra de sangre: Con la lanceta pinchar el dedo de la persona y extraer una gota. Colocar la gota en un extremo de la lmina y esperar por 3 minutos. Con otra lmina formar un ngulo de 45 y esparcir la sangre hacia el centro de la lmina. Echamos cienza, que sirve para poder apreciar los glbulos rojos. Luego echamos agua destilada, la dejamos correr echamos gensina y aceite de cedro (100x).

Muestra de agua estancada 1. Colocamos un poco de agua estancada en una laminilla. 2. Cubrimos la muestra con una laminilla.

IV.RESULTADOS
4.1. Muestra: sangre Aumento: 1000x (100x del objetivo por 10x del ocular) Coloracin: cienza Observacin: glbulos rojos

4.2 Muestra: agua estancada Aumento: 400x Observacin: protozoarios.

V. CUESTIONARIO
Cul es la diferencia entre microscopio ptico y electrnico?

Ambos pueden utilizarse para el examen microscpico de microorganismos. Para la mayora de los anlisis de rutina se usa el microscopio ptico, mientras que para el exmen de las estructuras intracelulares se utiliza el electrnico como un complemento. Todos los microscopios utilizan lentes para aumentar la imgen del tamao de las estructuras y poder ver los detalles, pero la resolucin (ver dos puntos adyacentes como unidades distintas) es 100 veces mayor en el microscopio electrnico que en el ptico. Microscopios pticos

*De campo claro: formado por dos series de lente (objetivo y ocular) que funcionan conjuntamente para producir la imagen, aqu la muestra se visualiza por contraste entre ella y el medio que la rodea. Se utilizan tinciones para favorecer el contraste. Se utilizan colorantes con cargados positivamente porque se combinan con los componentes celulares que estn cargados negativamente. *De contraste de fases: aumenta el contraste, no hace falta teir la clula porque se basa en los distintos ndices de refraccin entre la clula y el medio desviando los rayos de luz; formndose una imagen oscura con un fondo brillante.

*Campo oscuro: en este la luz incide sobre la muestra slo desde los lados, la luz al ser dispersada por la muestra entra en el objetivo, observndose la muestra brillante sobre el fondo oscuro.

Microscopio electrnico

*De transmisin: se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la funcin de las lentes la realizan electromagnetos, operndose al vaco. Tiene alta resolucin, pero los haces electrolitos poseen bajo poder de penetracin por eso se utilizan tcnicas de cortes ultra finos. Para aumentar el contraste se preparan las muestras con compuestos como el cido smico, permanganato, uranio, lantano o plomo porque desvan adecuadamente los electrones. *De barrido: la muestra se recubre con una fina capa de un metal pesado, como el oro. el haz de electrones barre la superficie de la muestra, los electrones desviados por la capa de metal son recogidos y proyectados sobre una pantalla para producir una imgen. "Todos los microscopios electrnicos incorporan cmaras que permiten fotografiar las muestras".

Por qu se utiliza el aceite de cedro en la observacin con los objetivos de inmersin?

Porque el aceite de cedro tiene un ndice de refraccin similar al del vidrio (1,5 aprox.) y se utiliza para el objetivo de 100X, pues este no se puede usar seco, a diferencia del de 40X, 10X y menores.

Cmo se calcula el nmero de aumento de una muestra?

Se multiplica la medida del objetivo por la de los oculares.

Ejemplo: 40x ( objetivo) por 10x ( oculares) = 400x (aumento)

Esquematice comparativamente el microscopio ptico y electrnico

M. OPTICO Luz Frecuencia: 500 nm Lentes de vidrio Aire Muestras vivas o muertas Aumento: 25-2000x

M. ELECTRONICO Haz de eFrecuencia: 0.005 nm Campos electromagnticos Vacio Muestras muertas Aumento: 200-> 1.000.000x

Mencione los pasos de la coloracin grama 1)El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas. 2) La decoloracin debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las clulas gran positivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3) Cultivos ms viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta -yodo. El carcter de gran positivo no es siempre un fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms gran positivos que otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces gran positivos y otras gran negativos.

VI. ANEXOS
Observacin de glbulos rojos

Observacin de protozoarios

Microscopio ptico

Coloracin gram