[Ao] UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA INFORME N3 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

CURSO INTEGRANTES : : PI- 721 -A CONDOR SALAZAR, ENRIQUE CORONEL ZARATE, H GIANINA VIVANCO MUNAYCO, NE LSON ING. JANET ROJAS OROSCO PROFESORA : 2010-II

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL INDICE Pg. 1. OBJETIVOS 2. FUNDAMENTO TEORICO 3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 4. RESULTADOS 5 . CONCLUSIONES 6. RECOMENDACIONES 7. BIBLIOGRAFIA 8. ANEXO 3 3 5 7 8 8 8 9 INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA N3 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 1. OBJETIVOS Lograr una correcta preparacin de medio de cultivo usado ( APD ) Aprender la tcnic a del vaciado del medio de cultivo en cajas de Petri y tubos de ensayo adems se s aber la forma de trabajo en cada instrumento. Realizar una buena presentacin del medio de cultivo en el instrumento que lo contenga. 2. FUNDAMENTO TEORICO LOS MEDIOS DE CULTIVO Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificial es preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los mi croorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalini dad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a lo s lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredient es. El Agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medio s de cultivo. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materi ales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para i ncrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre comple ta se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes . Por su aspecto fsico. Los medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su aspecto en: Lquidos, Semislidos, Slidos. Y por su uso en: I.- Medios de cult ivos bsicos II.- Medios de cultivos especiales como: mejorados, selectivos, difer enciales, de transporte. INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 3

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Para el aislamiento, estudio y clasificacin de los microorganismos, es necesario utilizar un medio de cultivo en el que disp ongan de las sustancias orgnicas e inorgnicas necesarias indispensables para el no rmal desarrollo de su metabolismo. En estos medios, los microorganismos adems de poder multiplicarse, pueden manifestar caractersticas de crecimiento y propiedade s bioqumicas; aspectos de gran importancia para su clasificacin. Estos preparados estriles que poseen los elementos necesarios para el desarrollo de un microorgani smo, se denominan medios de cultivos y pueden dividirse por su: A) SEGN SU ASPECT O Medios lquidos. Se emplean fundamentalmente para cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien la produccin de metabolitos espe cficos La multiplicacin bacteriana en los medios de cultivos lquidos se manifiesta generalmente por el enturbiamiento de ste; estimular y promover la seleccin de algn o algunos microorganismos e impedir que otros se multipliquen; e identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioqumicas. Medios semislidos.Se utiliz an para identificaciones bioqumicas y averiguar si el germen estudiado es mvil. Lo s medios semislidos tienen una consistencia blanda. Medios slidos.- Se utilizan pa ra obtener colonias aisladas de microorganismos. Los medios slidos constituyen la mayor parte de los medios de cultivo que se emplean en Microbiologa. , En los me dios de cultivos slidos la multiplicacin bacteriana se manifiesta por una formacin macroscpica denominada colonia bacteriana, que es el resultado de la multiplicacin de una sola clula bacteriana. B) SEGN SU USO Medios de cultivos bsicos. Se caracte rizan por ser pobres en material nutritivo, de manera que su uso es muy restring ido, constituyen la base para la preparacin de otros medios. Como ejemplo pueden citarse el caldo peptonado y el Agar-Agar corriente. Medios de cultivos especial es. Entre estos se encuentran: a) Medios mejorados. En general son los mismos me dios bsicos a los que se les agrega una sustancia enriquecedora como sangre, suer o, etc. El uso de estos medios es universal y est orientado especialmente a obten er buen INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 4

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL desarrollo de cualquier tipo de bacteria, se utilizan en primera instancia en el aislamiento bacteriano, ya sea a partir de otros cultivos o de productos patolgi cos. Los medios de este tipo de uso ms frecuente son: Agar tripticasa-sangre, cal do tripticasa, Agar chocolate, medio de MuellerHinton. b) Medios selectivos. Son medios que contienen sustancias que impiden o limitan el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten el desarrollo de otras. consiste en aislar un m icroorganismo de un sustrato que contiene numerosas otras especies. Se incluyen en este grupo el agar cristal violeta para el aislamiento de bacterias Gram (-) y el agar telurito de potasio para el aislamiento de bacterias Gram (+). c) Medi os de cultivos diferenciales. Se emplean para demostrar alguna propiedad bioqumic a de la bacteria como degradacin de hidratos de carbono, protenas, hidrlisis de la urea, etc., contienen indicadores de cido base, redox o sustancias que detectan c ambios en el medio o en las caractersticas tpicas de las colonias el estudio en es tos medios debe realizarse empleando cepas bacterianas puras. Existen numerosos medios de este tipo, de uso preferencial en la bioidentificacin de bacilos Gram ( -) ya que ellos no tienen caractersticas muy distintivas en las colonias o cultiv os en general. Entre los de uso ms corriente se encuentran: Agar fierro-triple-azc ar (TSI agar Medio de SIM, Caldo glucosado fosfatado, Voges-Proskauer o del rojo de metilo, Medio agar-citrato de sodio (Medio de Simmons- Medio caldo urea, d) Medios de transporte. Sirven para transportar los especmenes que contienen a los microorganismos, del sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el estudio. Estos medios impiden que se altere la proporcin origina l de la flora microbiana en los especmenes. 3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Lo que vamos a utilizar en el laboratorio son levaduras y hongos para hacer su m edio de cultivo. Para medio solido se utiliza una concentracin de 15 g/L. Para nu estras experiencias utilizaremos APD estandarizado que es 39g/L Para nuestra exp eriencia se prepara 50 ml as que : As que para nuestra experiencia pesaremos 2g de APD Para comenzar nuestra experie ncia se limpia nuestra mesa de laboratorio se pasa trapo para sacar el polvo y d espus de ello se pasa alcohol a la mesa de trabajo, los tubos de ensayo y el matr az a utilizar en nuestra experiencia ya se desinfecto en la prctica anterior. En nuestra prctica de laboratorio se utilizara probeta que solo bastara lavarla con detergente y agua des ionizada para la prctica INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 5

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL Se midi 50 ml de agua desionizada en la probeta y se verti en el matraz junto con los 2g de APD, luego se procede a la disolucin mediante el bao mara (la olla se lle na con agua menos de la mitad para que este cubierto el matraz) se quedara en bao mara hasta desaparecer los grumos, todo ello es con la finalidad de homogenizar nuestra mezcla. (Fig a) Luego se distribuye el contenido del matraz en los tubos de ensayo aproximadamente se vierte 10 ml en cada tubo y el resto se queda en e l matraz. Luego los tubos y el matraz con el medio de cultivo preparado se coloc an en la autoclave a condiciones de presin de 15 psia, temperatura 120C por 45 min utos para que se esterilicen. (Fig b) Despus del tiempo se saca los tubos y el ma traz, a los tubos de ensayo se cierra las tapas al salir de la autoclave y se le s da una ligera inclinacin para poder tener ms rea superficial al momento que este se solidifique. Esta es la preparacin del medio de cultivo en un tubo de ensayo. (Fig c) Se enciende el mechero para as poder tener un radio de esterilizacin y pod er verter el contenido del matraz (medio de cultivo) a la caja Petri y es all don de se espera que solidifique este medio. Cuidadosamente se vierte el medio de cu ltivo dentro de la caja Petri levantando solo una pequea parte de la tapa de la c aja para as minimizar la contaminacin. (Fig. c) Se deja enfriar las cajas Petri ce rradas y cerca del mechero para asegurar que se encuentren un ambiente estril y l ibre de bacterias que contaminen en medio de cultivo. (Fig. d) Fig. a Fig. b Fig. c Fig. e INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO Fig. d 6

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO 4. RESULTADOS Se realiz la preparacin de medios de cultivo y se present en diferentes materiales, en dos cajas Petri y en dos tubos de ensayo. La elaboracin del medio de cultivo fue exitosa debido a que era homogneo adems de no alterar su coloracin ni consisten cia a lo largo del procedimiento experimental. Se logr adquirir los conocimientos necesarios para la elaboracin de medios de cultivo a su vez de adiestrar en la e laboracin del mismo. INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 7

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL 5. CO NCLUSIONES Los medios del cultivo son sistemas que tienen nutrientes, humedad, oxgeno y un p H adecuado que permiten el crecimiento de un microorganismo. Los tipos de cultiv os dependen del tipo de microorganismo que se quiere criar ya que cada tipo de m icroorganismo requiere un tipo de medio de cultivo particular. La caja Petri es el material que tiene mayor regin de cultivo dando lugar a que los microorganismo s consuman y consigan alimentos rpidamente. Los tubos de ensayos permiten variar el rea de regin de cultivo hacindolas ms eficientes al momento de inclinarlas (1 cm por lado). Los mecheros tienen un radio de esterilidad que nos garantiza que el microorganismo no se contaminaran Un proceso bioqumico hace abaratar costos porqu e no se utiliza presiones altas ni mucha energa La biotecnologa hoy en da se en cau sa hacia la modificacin gentica como los productos transgnicos La biotecnologa es la tecnologa que se basa en la biologa y que supone un avance en la ciencia que adems ya est ms que introducida en campos como agricultura, farmacia, ciencia de los al imentos, medioambiente y medicina hoy en da. 6. RECOMENDACIONES Para obtener buenos resultados mantenga ordenado y esterilizado sus materiales. Los medios de cultivos deben ser preparados pensando exactamente la cantidad que se va a utilizar y siguiendo las instrucciones de la gua de laboratorio. Trabaja r con el mechero bunsen para evitar que el cultivo se contamine, ya que este pro porciona un radio de proteccin. Los tubos de ensayo no deben ser guardados vertic almente en la gradilla sino colocarlos inclinados sobre una franela. No destapar las cajas de Petri, sino hasta el momento que vayan a ser utilizadas. Es conven iente colocarse un cubre bocas la persona que va a realizar el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el medio de cultivo. Es conveniente ma ntener el mechero encendido y trabajar cerca del rea estril al momento del vaciado en las cajas de Petri. Levantar la tapadera de la caja Petri con la mano izquie rda , sin soltarla y sin retirarla demasiado de la base de la misma caja mientra s que con la mano derecha tomar el matraz que contiene el medio de cultivo y rea lizar el vaciado de aproximadamente 15 ml. A 20 ml del medio de cultivo por caja procurando que no se forman burbujas, se procede a tapar la caja inmediatamente 7. BIBLIOGRAFIA Alcaraz Munguia Monica / Manual de Practicas de Microbiologa / Universidad de Col ima / Mxico / 2009. Pginas web consultadas http://www.solociencia.com/biologia/070 92105.htm, 23.06 pm , 02 de mayo INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 8

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL 8. AN EXO MICROBIOS ANTIGUOS SEPULTADOS EN GLACIARES PODRAN VOLVER A LA VIDA (NC&T) El hall azgo es significativo porque los cientficos no saban hasta ahora con la suficiente certeza si organismos congelados tan antiguos podran revivir fcilmente o por cunto tiempo son viables las clulas bajo ciertas circunstancias despus de ser congelada s. Kay Bidle, uno de los autores principales del estudio, y profesor de ciencias marinas y costeras en Rutgers, y sus colaboradores Paul Falkowski (Rutgers), Sa ngHoon Lee (Instituto de Investigacin Polar de Corea) y David Marchant (Universid ad de Boston), fundieron cinco muestras de hielo cuya edad era de entre 100.000 aos y 8 millones, para liberar los microorganismos atrapados en su interior. Los investigadores queran averiguar cunto tiempo podran las clulas permanecer viables y cun intacto estaba su ADN en el hielo ms reciente y en el ms viejo. Los microorgani smos son ms viables en el hielo joven que en el viejo, como poda esperarse. En los experimentos, los investigadores trataron de hacerlos crecer en medios de culti vo. Los microorganismos procedentes de hielo joven se duplicaban cada dos das. En cambio, los microorganismos de las muestras de hielo ms viejo crecieron muy desp acio, duplicando su cantidad tan slo cada 70 das. Los microorganismos del hielo ms antiguo no slo tardaban ms en crecer: los investigadores eran incapaces de identif icarlos cuando crecan, porque su ADN se haba deteriorado. De hecho, el ADN en las cinco muestras examinadas mostr un "declive exponencial" despus de 1,1 millones de aos, restringiendo as la preservacin geolgica de microbios en ambientes helados y s u posible intercambio de material gentico con los ocanos, una preocupacin creciente ante la amenaza de derretimiento impuesta por el calentamiento global sobre blo ques de hielo cuyo interior potencialmente sembrado de material biolgico desconoc ido ha permanecido sellado durante miles o millones de aos. De todos modos, para la investigacin, se escogieron los glaciares antrticos no slo porque contienen el h ielo ms antiguo del planeta, sino tambin porque las regiones polares estn expuestas a la mayor radiacin csmica. En ese sentido, es la radiacin csmica la principal caus a de que el ADN se descomponga en pedazos con el paso del tiempo geolgico. La may or parte de los organismos no pueden reparar este dao. Con menor incidencia de ra diacin csmica, la preservacin puede ser mejor. Dado que el ADN se haba deteriorado t anto en el hielo antiguo, por culpa de los rayos csmicos en buena medida, los inv estigadores tambin han llegado a la conclusin de que aunque la preservacin de micro bios y sus genes en cometas, ricos en hielo de agua, podra haber permitido la tra nsferencia de material gentico entre planetas, debido a que el flujo de radiacin cs mica en el espacio es extremadamente alto, las posibilidades de que la vida en l a Tierra hubiera sido sembrada por material gentico externo a nuestro sistema sol ar son remotas. Las cinco muestras de hielo usadas en el experimento fueron toma das de dos valles de las Montaas Transantrticas. INGENIERIA DE METODOS TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 9