7.

Fosforilacin oxidativa y fotofosforilacin

Bioqumica

Si pudiera demostrarse que ha existido un rgano complejo que no pudo haber sido formado por numerosas y ligeras modificaciones sucesivas, mi teora fracasara por completo.Charles Darwin.

7. Fosforilacin oxidativa y fotofosforilacin

El estudio de la fosforilacin oxidativa se inici en 1906 con el informe de Arthur Harden sobre el papel vital del fosfato en la fermentacin celular. Sin embargo, a principios de los aos 1940, la relacin entre la oxidacin de los azcares y la generacin de ATP fue establecida de forma definitiva por Herman Kalckar, confirmando el papel central del ATP en la transferencia de energa, que haba sido propuesto por Fritz Albert Lipmann en 1941. Ms tarde, en 1949, Friedkin y Morris Albert L. Lehninger demostraron que la coenzima NADH se encuentra relacionada con vas metablicas tales como el ciclo del cido ctrico y la sntesis de ATP.

Arthur Harden

Durante otros veinte aos, el mecanismo por el cual se generaba el ATP sigui siendo un misterio, con cientficos buscando un elusivo "intermediario de alta energa", que enlazara las reacciones de oxidacin y fosforilacin. El misterio fue resuelto por Peter D. Mitchell con la publicacin de la teora quimiosmtica en 1961. En un principio la propuesta fue muy controvertida, pero fue aceptada lentamente y finalmente Mitchell recibi el Premio Nobel de Qumica en 1978 por su teora.
Morris Albert L. Lehninger

La investigacin posterior se centr en la purificacin y caracterizacin de las enzimas involucradas, con importantes contribuciones realizadas por David E. Green sobre los complejos de la cadena de transporte de electrones, as como de Efraim Racker sobre la ATP sintasa. Un paso fundamental hacia la solucin de los mecanismos de la ATP sintasa fue proporcionada por Paul D. Boyer, con su desarrollo en 1973 del mecanismo de "cambio de unin", seguido por su radical propuesta de un sistema de catlisis rotacional en 1982. Los trabajos ms recientes incluyen estudios estructurales de las enzimas involucradas en la fosforilacin oxidativa, llevados a cabo por John E. Walker, habiendo obtenido Walker y Boyer el Premio Nobel en 1997.

Animacin

7.1 Fosforilacin oxidativa

l NADH y el FADH2 formados en la glucolisis, en la oxidacin de los cidos grasos y en el ciclo del acido ctrico, son molculas ricas en energa porque poseen un par de electrones con elevado potencial de transferencia. Cuando estos electrones se transfieren al oxigeno molecular, se libera una gran cantidad de energa, que puede ser utilizada para generar ATP.

La fosforilacin oxidativa es el proceso por el que se forma ATP como resultado de la transferencia de electrones desde el NADH o el FADH2 al O2 a travs de una serie de transportadores de electrones. Se le llama as para distinguirla de otras rutas que producen ATP con menor rendimiento, llamadas "a nivel de sustrato".

La fosforilacin oxidativa genera 34 de las 38 moleculas de ATP que se forman cuando la glucosa se oxida completamente a CO2 y H2O.

Se calcula que hasta el 90% de la energa celular en forma de ATP es producida de esta forma.

El evento vital se lleva a cabo en la membrana interna mitocondrial, nn dicha membrana existen tres complejos enzimticos transportadores de electrones: El complejo NADH deshidrogenasa. El complejo citocromo b-c1. El complejo citocromo oxidasa. El flujo de electrones desde el NADH o el FADH2 al O2 a travs de dichos complejos proteicos, provoca el bombeo de protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Cuando los protones regresan a la matriz mitocondrial a travs de un complejo enzimtico, se sintetiza ATP. De esta forma, la oxidacin y la fosforilacin estn acopladas por un gradiente de protones a travs de la membrana interna mitocondrial. La fuerza protn-motriz generada, impulsa los protones a travs de las ATP sintasas presentes en la membrana mitocondrial interna, permitiendo la unin del ADP a un grupo fosfato, con la consiguiente formacin de ATP. El conjunto de estos procesos, que culminan con la formacin de ATP, constituyen la fosforilacin oxidativa.

Una molcula de NADH permite la formacin de 3 molculas de ATP, mientras que una de FADH2 slo aportar 2 ATP.
Tanto los electrones como los protones, que han sido impulsados a lo largo de la cadena respiratoria, deben unirse a un aceptor final. En la respiracin aerobia el aceptor ltimo de electrones y protones es el O2, que al unirse al H2, forma H2O como producto final.

La fosforilacion oxidativa muestra en forma clara que los gradientes de protones son la divisa de energa libre inconvertible en los sistemas biolgicos. Pese a que la fosforilacin oxidativa es una parte vital del metabolismo, produce una pequea proporcin de especies reactivas del oxgeno tales como superxido y perxido de hidrgeno, lo que lleva a la propagacin de radicales libres, provocando dao celular, contribuyendo a enfermedades y, posiblemente, al envejecimiento. Sin embargo, los radicales tienen un importante papel en lasealizacin celular, y posiblemente en la formacin de enlaces disulfuro de las propias protenas de la membrana interna mitocondrial. Las enzimas que llevan a cabo esta ruta metablica son blanco de muchas drogas y productos txicos que inhiben su actividad.

Reacciones del transporte electrnico

Las reacciones que tienen lugar a nivel de la NADH-reductasa o complejo I son una serie de reacciones redox, en las que intervienen un coenzima flavnico (FMN o flavina mononucletido).

Este complejo se encuentra completamente embebido en la membrana interna de la mitocondria, y est orientado de tal manera que el sitio de fijacin de NADH est mirando hacia la matriz mitocondrial. Su masa es de aproximadamente 850 kilodaltons.

Cuenta con un centro ferrosulfurado en el que el tomo de hierro es el que realiza el intercambio electrnico para cederlos al coenzima Q. El flujo de dos electrones desde el NADH hasta la coenzima Q, da lugar al bombeo de cuatro H+ a travs de la membrana mitocondrial interna, desde la matriz hacia su cara citoplasmtica. La reaccin global de esta reaccin es:

El complejo II o succinato-reductasa, va a recibir los electrones directamente del succinato. Posee a lo menos cuatro protenas diferentes. Es mucho ms pequeo que el complejo I. Su masa es de aproximadamente 140 kilodaltons. Se encuentra a nivel de la membrana, y uno de sus componentes es una enzima del ciclo del cido ctrico, la succinato deshidrogenasa, que cataliza la reaccin de succinato a fumarato. Uno de los productos de la reaccin, el coenzima reducido FADH 2 no abandona el complejo, transfiriendo los electrones en el interior del mismo a un centro Fe-S, para posteriormente ser cedidos al coenzima Q. Esta es la nica enzima del ciclo del cido ctrico que no se encuentra libre en la solucin de la matriz mitocondrial, sino que est fuertemente unida a la membrana mitocondrial interna.

Por otro lado, algunas de las enzimas mitocondriales que utilizan FAD (acil-CoA deshidrogenasa, primer enzima de la -oxidacin), no introducen sus electrones a la cadena de transporte electrnico a travs del complejo II, sino mediante una flavoprotena transportadora de electrones (ETFPubiquinona reductasa) que reduce directamente la ubiquinona o coenzima Q. El potencial de transferencia electrnica es menor en este complejo que en el anterior, y el desprendimiento energtico no es suficiente para el bombeo de hidrogeniones, lo que se traducir en un menor rendimiento de ATP, comparado con el obtenido cuando los electrones penetran en la cadena utilizando el complejo I.

La segunda bomba de hidrogeniones, se sita en el complejo III o citocromo-reductasa, est compuesto por los citocromos b562 y b566, citocromo c1 y c, una protena ferrosulfurada y al menos otras seis subunidades proteicas. Posee como grupos prostticos fierro-azufre y el grupo Hem. Su masa es de aproximadamente 250 kDa. A travs de la siguiente secuencia de reacciones los electrones son transferidos hasta el citocromo c, este flujo genera un potencial suficiente para bombear 2H+ hacia el lado citoplasmtico. La diferencia de potencial de transferencia es menor que en el complejo I y por lo tanto la capacidad de mover los hidrogeniones tambin es menor.

El IV complejo, la citocromo-oxidasa acepta cuatro electrones del citocromo c, uno cada vez, a travs de dos grupos Hem que utilizan tomos de cobre y los transfiere a una sola molcula de O2 formando dos molculas de H2O. Su masa es de aproximadamente 160 kDa. Se estima que el 90 % del consumo total de oxgeno de las clulas es realizado por la citocromooxidasa. El oxgeno molecular es un aceptor de electrones con un fuerte carcter oxidante, una alta tendencia a captar electrones, pero reacciona muy lentamente a menos que sea activado catalticamente. Esta activacin es realizada por este complejo, el cual tambin funciona como una bomba de protones, realizando un movimiento neto de 4H+ hacia el espacio intermembranoso.

ATP sintasa, tambin llamada complejo V, es la enzima final del proceso de la fosforilacin oxidativa. Esta enzima se encuentra en todas las formas de vida y funciona de la misma manera tanto en procariotas como en eucariotas. Esta enzima usa la energa almacenada en un gradiente de protones a travs de la membrana para llevar a cabo la sntesis de ATP desde ADP y fosfato(Pi). Las subunidades proteicas que lo componen varan de acuerdo a la especie, pero el rango en mamferos va desde 12 a 18 subunidades. La subunidad F0 est completamente embebida dentro de la membrana interna mitocondrial y la subunidad F1 se encuentra orientada hacia la matriz mitocondrial. La unidad F1 para ser funcional necesita como mnimo: tres unidades a y , y dos subunidades. La subunidad F1 funciona como un canal protnico. En un comienzo fueron llamados partculas elementales, que se podan ver fcilmente en el microscopio electrnico al observar un corte de la membrana interna de la mitocondria.

Otro componente presente en la cadena de electrones y que pertenece a ningn complejo y que participa activamente en ella es la ubiquinona o coenzima Q. Es una benzoquinona liposoluble, y se mueve con bastante libertad en la mb interna mitocondrial. Es capaz de captar electrones de los complejos I y II, y los cede al complejo III.

La ATP sintasa.

La ATP sintasa es una mquina molecular que combina los aspectos elctricos, mecnicos y qumicos de la funcin enzimtica. Todos ellos estn claramente separados, se atribuyen fcilmente a sus diferentes subunidades, y son razonablemente bien comprendidos gracias a una abundancia de datos estructurales y cinticos. Sin embargo, la comprensin de la enzima de una manera plena a nivel molecular exigir considerables esfuerzos, tanto experimentales como tericos. Hay cinco cuestiones pendientes. ... Slo cuando hayamos resuelto estos problemas nos aproximaremos a una plena comprensin de esta extraordinaria pieza de la maquinaria celular. Para ver animacin 3D: http://www.grahamj.com/fivth2.html

Acoplamiento fosforilacin-oxidacin
Aunque han existido teoras mltiples que intentaban justificar la conexin entre estas dos funciones, ninguna se sostena con los necesarios datos experimentales. El planteamiento de la hiptesis quimiosmtica o de Mitchell permiti la teorizacin y posterior corroboracin del mecanismo de dicho acoplamiento. El transporte de electrones y la sntesis de ATP estaban acoplados a travs de un gradiente de protones, o hidrogeniones, entre ambas caras de la membrana interna. El bombeo de protones, desarrollado por los diferentes complejos de la cadena de transporte electrnico, genera un aumento de concentracin de H + en la cara citoplasmtica, y un gradiente elctrico debido a la carga positiva movilizada por los protones hacia el exterior de la membrana. Estos gradientes establecen una fuerza protomotriz (movedora de protones) que empuja a los hidrogeniones hacia el interior, y utilizando esta fuerza, el complejo enzimtico ATP-sintasa formara enlaces de alta energa en forma de molculas de ATP. Por qu se produce un defecto en la produccin de energa? Puede producirse un defecto en la produccin de energa cuando alguna de las protenas que constituyen la fosforilacin oxidativa no se genera correctamente o bien cuando los componentes de la cadena no se ensamblan bien entre ellos. Estos defectos pueden ser hereditarios o adquiridos. Una causa frecuente de defecto adquirido en la produccin de energa es el envejecimiento.

Por qu se produce un defecto hereditario en la produccin de energa? Cada una de las protenas que constituyen la fosforilacin oxidativa est determinada genticamente Cuando se produce una mutacin en un gen que codifica alguna de estas protenas, sta muestra alteraciones en su concentracin o estructura que pueden alterar su funcin. Tambin el ensamblaje de los componentes de la cadena respiratoria est determinado genticamente y puede mostrar alteraciones que comprometen la sntesis de ATP.

7.2 Fotofosforilacin
La fotosntesis es el proceso metablico primario de las plantas y de hecho se considera el primario en la biosfera, es as debido a que permite utilizar la energa radiante del sol para transformarla en energa qumica de ATP, que es necesaria para la biosntesis de carbohidratos y de hecho para el anabolismo en general. Esta capacidad solo la desarrollan las plantas ya que cuentan con clulas parenquimaticas clorofilianas, las cuales se encuentran en las hojas, partes verdes de tallos, flores y frutos verdes. Se puede considerar a la fotosntesis como un proceso metablico el cual utiliza dos etapas:

1. Fotofosforilacin.
La fotofosforilacin es una de las tres vas responsables de la formacin de ATP y solo se puede observar en clulas fotosintticas.

En 1954, Arnon demostr que la incidencia de luz sobre cloroplastos, poseyendo estas cantidades suficientes de ADP y grupos fosfato, da lugar a la sntesis de ATP, siendo proporcional su cantidad al flujo electrnico inducido por luz. En 1957, suministr evidencias experimentales del acoplamiento entre fotofosforilacin y fotorreduccin del NADP*.Tambin demostr lo que ms tarde se llam fotofosforilacin cclica, en la que no haba produccin ni gasto de oxgeno.

Como se ha mencionado este proceso depende de la luz, adems al igual que la fosforilacin oxidativa, requiere una membrana tilacoide intacta y puede desacoplarse del transporte electrnico, el cual es impulsado por la luz por compuesto tales como 2,4-dinitrofenol. Se distinguen tres fases en el proceso de formacin de ATP: 1) Captura de la energa en los complejos de oxidacin 2) Transporte de esta energa hasta los lugares de fosforilacin 3) Utilizacin de esta energa para la sntesis de ATP Para realizar la fotofosforilacin se requiere de un fotosistema de los cuales existen dos tipos.

Fotosistema I
Su centro de reaccin es designado por P700, pues absorbe luz con longitudes de onda cercanas a 700nm. En este fotosistema un electrn es captado por una molcula aceptora de electrones, o aceptora primaria, el cual se desplaza a travs de una serie de reacciones de tipo redox hasta llegar a la fijacin del electrn a la coenzima NADP.

Fotosistema II
Su centro de reaccin es designado por P680 ya que puede absorber longitudes de onda prximas a 680 nm. Este se encuentra en la membrana tilacoide de los cloroplastos, es una protena intrnseca al igual que la cadena transportadora d electrones, adems de ser el lugar donde el agua sufre una oxidacin. Este fotosistema no tiene participacin alguna en la fotofosforilacin cclica.

Las superficies estromales de la membrana tilacoide se asemejan mucho a las unidades F1 de la ATP sintasa del cloroplasto, es notablemente similar al complejo F1F0 mitocondrial. Las similitudes que podemos citar son: 1.- Ambas unidades F0 y CF0 son protenas hidrfobas que contienen un canal translocador de protones. 2.- Ambas unidades F1 y CF1 son protenas de membrana perifrica hidrfilas de composicin subunitaria 33E, de las cuales es una ATPasa reversibles. 3.-Ambas ATP sintasas son inhibidas por la oligomicina y por diciclohexilcarbodimida (DCCD).

Este mecanismo consiste en la absorcin de energa lumnica por molculas de clorofila con la excitacin resultante de algunos de los electrones de esas molculas, los electrones excitados pasan de la clorofila a la primera serie de molculas transportadoras, por lo que se puede decir que ingresan en una cadena transportadora de electrones similar a la de la respiracin celular. A medida que estos electrones pasan a lo largo de la serie de transportadores se bombean protones a travs de la membrana y el ADP se convierte en ATP por quimiosmosis, de este proceso se derivan dos los cuales son llamados:

a) Fotofosforilacin cclica.
Los pigmentos del fotosistema captan la energa luminosa que es transferida a la clorofila la del centro de reaccin. La clorofila excitada transfiere sus electrones hacia un aceptor (la ferrodoxina). Los electrones recorren una cadena transportadora, sucediendo un conjunto de reacciones de oxidacin-reduccin que conducen a la liberacin de energa, parte de la cual es utilizada para fosforilar ADP, formando ATP. Al final de la cadena, los electrones vuelven al centro de reaccin del fotosistema I, siendo por ello un flujo cclico de electrones.

b) Fotofosforilacin no cclica.
En este tipo de fotofosforilacin los electrones provenientes de la clorofila son sustituidos por electrones derivados del agua. Los electrones liberados por la clorofila transcurren a lo largo de la cadena transportadora de electrones hasta finalizar en NADP+, el cual se combina con electrones e hidrogeniones provenientes del agua para formar NADPH. Este proceso genera alrededor de 1.25 molculas de ATP por cada fotn absorbido.

2. Reduccin de CO2
Es la segunda etapa y depende de los productos formados durante la primera va que es la fotofosforilacin, esta etapa es diferente para cada tipo de planta. Dentro de esta etapa encontramos el ciclo de Calvin-Benson, para el cual la fuente de energa para la ruta son el NADPH y el ATP producidos durante las reacciones de la fotosntesis dependientes de la luz.

En este ciclo se fijan las molculas de CO2 y se produce una molcula de gliceraldehdo-3fosfato que abandona el ciclo y unirse a otra, para as producir una molcula de glucosa

Bibliografa:
Fosforilacin oxidativa:
1. Fosforilacin oxidativa, recuperado el 29 de mayo 2012 de http://www.geeksxd.net/vb/zona-escolar/1766-fosforilacion-oxidativa.html 2. Gua metablica, problemas de energa, recuperado el 29 de mayo 2012 de http://www.guiametabolica.org/informacion/por-que-se-produce-un-defecto-en-laproduccion-de-energia 3. Metabolismo, Fosforilacin oxidativa, recuperado el 29 de mayo 2012 de http://recursos.cnice.mec.es/biologia/bachillerato/segundo/biologia/ud04/02_04_04_02_02.h tml 4. Complejos multiproteicos, recuperado el 29 de mayo 2012 de http://www.elergonomista.com/biologia/fos01.htm 5. Darwin y los motores olvidados, recuperado el 29 de mayo 2012 de http://jolimu.wordpress.com/2008/10/08/ 6. Una nueva mirada al motor giratorio ms pequeo del mundo, recuperado el 29 mayo de http://sedin-notas.blogspot.mx/2009/05/una-nueva-mirada-al-motor-giratorio-mas.html 7. Farp, G.; Biologia celular y molecular; McGraw-Hill Interamericana, 1996; Vol.1. 8. Stryer, L.; Bioquimica, 4ta ed; Edit. Reverte, Barcelona, 1995; Vol 2.

Fotofosforilacin:
1. Muiz, O. Apuntes de Bioqumica Vegetal UNAM, 2005, pgs. 82-85, Mxico 2. Tortora, G., Berdell, R., Christine., L. Introduccin a la microbiologa pgs. 141-143 3. Voet, D., Voet, J.G. Fundamentos de bioqumica Editorial: Medica Panamericana, 2006, pg. 612-613 Espaa. 4. http://recursos.cnice.mec.es/biologia/bachillerato/segundo/biologia/ud04/02_04_04_02_02.h tml 5. http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/photosynthesis_1/02t.html 6. http://web.usal.es/~evillar/fosfox.htm 7. http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/10energia.htm#_Toc57556597 8. http://almez.pntic.mec.es/~jrem0000/dpbg/Fotosintesis/fotofosforilacion.html 9. http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/fotofosforilacion 10. http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120072/bio12.swf 11. http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000051/lecciones/cap02/anexo_57.htm 12. http://www.lourdesluengo.es/biologia/fotoquimio.html http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/photosynthesis_1/11t.html

Animaciones:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. http://www.educared.org/wikiEducared/Animaci%C3%B3n:_fosforilacion_oxidativa.html http://www.grahamj.com/fivth2.html http://www.educared.org/wikiEducared/Portada.html http://www.johnkyrk.com/mitochondrion.esp.html http://www.maph49.galeon.com/respcel/review4.html http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120072/bio12.swf http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/metab/t-e-foto.html http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/metab/t-e-mitoc.html

Videos recomendados:
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