Cultivo In vitro

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CULTIVO IN VITRO
Tipos de fecundao Self - Quando a flor fecundada pelos prprios polnios. Sibling Quando uma flor fecundada pelos polnios de plantas irms Hbrido Quando a flor fecundada pelos polnios de outras plantas de espcies diferentes. Deve-se pesquisar os gneros e ou espcies compatveis, pois vrios cruzamentos so incompatveis e no germinam.

Tempo de amadurecimento de cpsulas de sementes para alguns gneros Clique aqui

Pode-se coletar a cpsula aps 3/4 ou 4/5 desse prazo, pois com esse tempo, as j esto maduras. recomendvel guardar as sementes num frasco fechado, junto com slica gel para absorver umidade, na geladeira, entre 5 e 8C. Usa-se papel permevel (nunca folha plstica) para embrulhar as sementes. Material necessrio: 1 microscpio (como curiosidade, mas no necessrio), 1 balana de preciso de 2 pratos, com capacidade para pesar pequenas quantidades (divises de 0,01 gr (recomendvel)), 1 caixa de vidro (tipo aqurio), pinas, 1 tubo de ensaio, vidros mdios tipo (maionese,azeitona ou palmito), com tampas com boa vedao, mel e ou dextrosol, algodo no-hidrfilo (de algodoeiro de preferncia, 1 liquidificador, 1 vidro pequeno com tampa de conta-gotas, ! par de luvas cirrgicas, 1 seringa de injeo de 10 ml com agulha 30/8, 1 panela de presso que seja alta, 1 rolo de filme de pvc (plstico transparente), cloro de piscina, carvo ativado,1 pirex pequeno e 1 esptula de cabo longo Sementes A cpsula deve estar, de preferncia, madura mas no aberta. As sementes podem ser guardadas por no mximo 6 meses, em envelopes de papel e em lugar seco. Para saber se elas esto em condies de germinar, pode-se observ-las em um microscpio. Um grande nmero de sementes encorpadas e com o centro preto, indicam que esto em condies de germinao. As sementes desidratadas ou transparentes no iro germinar. Para separar as sementes, frteis das infrteis, isto quando forem sementes soltas (fora da cpsula), coloque com cuidado, as sementes em um tubo de ensaio, coloque gua da torneira, at quase encher o vidro. Agite bem e deixe descansar. Repita a operao mais duas ou trs vezes. As sementes boas iro se depositar no fundo e as infrteis iro ficar suspensas na mesmas

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gua, com cuidado v derramando essa gua at derramar a maioria dessas sementes infrteis. Repita a operao, se houver poucas sementes ruins, no h problema. Coe em filtro de papel, pode ser do tipo Melita e deixe secar, de preferncia sombra, guarde as sementes para uso posterior. MEDIDAS DOS COMPONENTES PARA 1 LITRO DE PREPARADO PARA CULTURA Vrias frmulas podem ser usadas: Para semear 1 tomate maduro sem pele. 1 L de gua de torneira, destilada melhor. 1 colher de sopa de acar comum, (podendo ser substitudo por 20 gr de dextrosol, mel... etc). 13 gr de agar agar (farmcia de manipulao) Adubos 30-10-10 ou 20-10-10 (adubos carregados em Nitrognio) A frmula de Juvenal Meyer uma das que podem ser usadas: 500 ml de gua de preferncia filtrada ou destilada 500 ml (ou gramas) de suco de tomate (bater no liquidificador 1 tomate grande e maduro sem pele e sem sementes) 20 gr de acar, mel, glicose ou dextrosol 14 gr de agar agar em p 2 gr de carvo ativado em p (farmcia de manipulao) 1 gr de adubo de boa qualidade na formulao 30-10-10 Para repique 150 gr de banana ou 1 banana sem casca. (nanica, da terra... etc.). 1 tomate grande maduro sem pele e sem sementes (opcional) 1 L de gua de torneira ou destilada. 20 gr de acar comum 13 gr de agar agar 1 gr de adubo 30-10-10 ou 20-10-10 Os adubos acima pode ser substitudo por: 1 gr de nitrato de clcio. gr de sulfato de amnia 0,25 gr de fosfato de potssio monobsico 0,25 gr de sulfato de magnsio hidratado Pegue vidros de 500 gr ou 1Kgr, com as tampas perfuradas em seu centro, furos de 3 mm, lave bem as tampas e vidros com gua e detergente. Coloque no furo da tampa, um pouco do algodo, bem apertado, de forma que fique bem firme, de modo a no permitir a entrada de poeira mas permitir a oxigenao Obs: podem ser usadas tampas de nome BIO SAMA PP74 da Samavidros, que j so apropriadas para cultivo in vitro
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Dissolva os adubos em ordem e com pouca gua pois em todoo processo ser usadoapenas 1 Litro de gua

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Coloque no liquidificador, todos os produtos na ordem especificada e bata todos sem o agar por ltimo acrescente o agar e bata novamente. Retire a espuma que se forma na superfcie, despeje a mistura em uma panela velha e leve ao fogo brando, mexendo de vez em quando deixe ferver bem. Coloque nos vidros lavados mais ou menos 1 cm, desse preparado e tampe-os muito bem.

Acomode-os na panela de presso. E coloque um pouco de gua (banho-maria), coloque a tampa da panela. Ao realizar este processo, aproveite para esterelizar gua, para ser utilizada no restante do processo.

O fogo deve ser o mais baixo que o fogo suportar. Quando a panela comear a chiar, conte 15 minutos. Deixe esfriar totalmente sem abrir a tampa da panela. Enquanto aguarda esfriar: Pegue um vidro com tampa e conta gotas. Prepare em um recipiente , 50 ml de gua. colher de ch de Hipocloreto de Sdio. Dilua bem. Coloque 1 cm da soluo, no vidro, coloque tambm as sementes j secas. Agite o vidro algumas vezes, no intervalo de 5 minutos. Este processo para esterilizar as sementes Com a seringa descartvel e a agulha, retire todo o lquido e jogue fora, as sementes no passaro atravz da agulha. Acrescente a gua esterilizada (mais ou menos 1 cm) e deixe em reserva PROCESSO CUIDADOSO Com os vidros em temperatura ambiente, recolha com um conta gotas esterilizado, um pouquinho da gua com as sementes isto dentro da redoma de vidro. Ao abrir o vidro com o produto, tome cuidado para no demorar muito, e no abrir a tampa completamente. O processo deve ser rpido e preciso. Tampe-o imediatamente e agite-o em movimento suave e circular, para espalhar as sementes na superfcie do meio de cultura. Vede a tampa com filme de pvc ou polietileno. Coloque-os em lugar claro e arejado

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Nesse vidro, levaro entre 30 e 40 dias para germinar e ficaro mais ou menos, dependendo da espcie, por mais 8 a 18 meses dependendo da espcie. Quando comearem a apontar, umas razes vigorosas, a poca ideal para o repique. Aps utilizar o conta gotas, lave-o com gua corrente, encha-o com lcool e deixe-o dessa forma, at o prximo trabalho. Prepare o produto de banana O processo desse produto, igual ao anterior. Ao lavarem os vidros em banho-maria, na panela de presso, coloque sempre um vidro com gua para ser esterilizada. Embrulhe em Papel alumnio: 1 esptula de cabo longo. 1 pina de cabo longo. 1 vasilhame marinex ou pirex pequeno. Todos separadamente. Coloque todos na panela para esterilizar deixe esfriar com a panela com a tampa fechada.

REDOMA DE VIDRO
A redoma deve ser feita com as medidas e no formato abaixo:

Esterilize a redoma com gua sanitria de boa qualidade. Vede bem e deixe em repouso por 15 minutos. Acomode os vidros secos, dentro da redoma, e todos os objetos a serem utilizados, mas sem retirar o invlucro.

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Introduza as mos vestindo as luvas cirrgicas novas, pela fenda, e v retirando os invlucros dentro da redoma. Cuide para que os objetos no toquem na superfcie da redoma, ou de qualquer outo objeto. No caso de se reutilizar as luvas, desinfecte-as com gua sanitria ou lcool iodado ou ainda, com o produto usado pelos veterinrios e dentistas (VIRKON-S). Coloque a gua esterilizada no pirex, e lave as mudinhas com a ajuda da pina e da esptula. Separe cuidadosamente as mudinhas uma a uma, observando o tamanho procurando deixar as de + ou o mesmo tamanho dento do mesmo vidro, para que tenham crescimento mais homogneo. Faa o replante usando a pina e com muito cuidado pois nessa fase, as plantinhas ainda so muito frgeis. Acomode-as de forma que o vidro no fique muito congestionado, colocando no mximo 25 plantas por vidro mas fica a critrio de cada um. Tampe bem o vidro e coloque-o em local arejado e claro. Assim que as mudas atingirem a altura do vidro ou for notado que a gua existente no no meio de cultura , acabe, sinal que est na hora de fazer o transplante para vasos coletivos ou at mesmo para copinhos de caf individual dependendo do tamanho dessa muda .

Vidros SAMAVIDROS

Os copinhos de caf devem ser furados na base, colocar pedrisco no fundo . H casos em que se tenha de realizar mais um repique. (olho clnico do orquidfilo). O substrato utilizado nesses casos o esfagno. Verifique sempre a umidade. Aps 2 meses, dever ser feita a primeira adubao, adubao qumica bem fraquinha, diluda

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em gua Quando forem plantadas em vasos individuais, as plantas j podero ser tratadas como plantas normais. Ou seja j podemos coloca-las juntamente com as demais plantas

Curso Ministrado por: Eduardo Nogueira Graa Artigos de: Ilma Lima e Mioko Sato Monma Compilao: Bernardino Mendes Damio Bibliografia: Curso de Introduo ao Estudo e Cultivo de Orqudeas da Sociedade Brasileira de Orquidfilos - Autor: Joaquim Gonzalez de Lema Filho edio de 1983. Waldemar Silva - Cultivo de Orqudeas no Brasil - 5 edio - 1979 - Livraria Nobel Hoehene - Iconografia de Orchidaceas do Brasil - 1949 - impresso por: S. A. INDSTRIAS "GRAPHICARS-F. LANZARA"

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