Inserir o nome do Laboratrio

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA CREATININA

Pgina 1 de 5 POPBIO 028 Reviso: 00

CREATININA
FUNDAMENTO Procedimento Colorimtrico de Ponto Final: A creatinina e os interferentes presentes na amostra reagem com o picrato alcalino, formando um complexo colorido que medido fotometricamente. A adio de um acidificante abaixa o pH para 5,0 decompe o picrato de creatinina deixando inalterada a cor derivada dos cromognios que tambm medida fotometricamente. Nesta metodologia mede-se a absoro do complexo formado antes e aps a acidificao do meio. O valor de creatinina da amostra calculado pela diferena entre as duas leituras fotomtricas Procedimento Cintico Colorimtrico: A creatinina e os interferentes presentes na amostra reagem com o picrato em meio alcalino, originado um complexo colorido. Mede-se a velocidade de formao desse complexo em perodos iniciais curtos evitando assim a interferncia de outros compostos. Uma primeira leitura feita aos 30 segundos iniciais da reao para eliminar o efeito dos interferentes de reao rpida. Aos 90 segundos de reao feita uma segunda leitura, antes que os interferentes da reao lenta possam ter efeitos significativos. Dessa forma a determinao fotomtrica do produto final fica livre de interferentes, referindo-se exclusivamente creatinina presente. APLICAO CLNICA A determinao da creatinina plasmtica um teste de funo renal mais seguro do que a uria. Nas doenas renais, a creatinina se eleva mais vagarosamente do que a uria e se reduz mais vagarosamente com a hemodilise. Valores altos de creatinina indicam disfuno renal e o grau de evoluo da enfermidade. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro, Plasma e Urina. A amostra de urina de 24 horas deve ser conservada em geladeira durante o perodo de coleta e at o momento da dosagem. Estabilidade e armazenamento da amostra No soro ou plasma, a creatinina estvel por 7 dias a 2-8C. Na urina a estabilidade de 4 dias a 2-8C. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO CREATININA CAT. 335 GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA CNPJ 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 Belo Horizonte MG Brasil Farmacutico Responsvel: Homero Jackson de Jesus Lopes CRF MG - 2010 Componentes do kit Conservar em temperatura ambiente (15-30C). 1- Padro - Contm creatinina 4,0 mg/dL. 2- Acido Pcrico - Contm cido pcrico 44,4 mmol/L 3- Tampo Alcalino - Contm carbonato de sdio 75,5 mmol/L; hidrxido de sdio 112,5 mmol/l; laurilsulfato de sdio 69 mmol/L.

MS 80022230143

Inserir o nome do Laboratrio

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA CREATININA

Pgina 2 de 5 POPBIO 028 Reviso: 00

Em baixas temperaturas o Tampo (3) pode turvar, porm no h interferncia na sua qualidade. 0 Incubar a 37 C at completa dissoluo e homogeneizar. 4- Acidificante: Contm cido actico 8,75 mmol/L Estabilidade Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso. Precaues e Cuidados Especiais 1- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. 2- Recomendamos o uso das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para a execuo do teste. 3- O Tampo Alcalino (3) corrosivo e o Acidificante (4) irritante. Evitar contato os olhos e mucosas. No aspirar ou ingerir. 4- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes. 5- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio ambiente. EQUIPAMENTOS Procedimento Tcnico Manual Espectrofotmetro (leitura entre 500 e 540 nm); Banho-maria na temperatura de 37C para o procedimento cintico; Equipamento com cubeta termostatizada para o procedimento de ponto final; Tubos e Pipetas; Cronmetro. Procedimento Tcnico Automatizado Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento Tcnico Alternativo Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Indicar as possveis diferenas quando os procedimentos manuais substiturem os procedimentos automatizados. Procedimento em Analisadores Automticos Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Interferncias A bilirrubina at 5 mg/dL, lipemia (triglicrides at 250 mg/dL), hemlise (hemoglobina at 180 mg/dL) no produzem interferncias significativas. Valores de bilirrubina acima de 5 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos. Valores de triglicrides acima de 250 mg/dL produzem resultados falsamente elevados. Procedimento Procedimento Tcnico Manual So apresentadas trs procedimentos: Procedimento direto, Procedimento com desproteinizao e Procedimento cintico. 1. Procedimento Direto A - Condies de Reao Leitura: Comprimento de onda 510 nm (500 a 540 nm) Medida: Acertar zero de absorbncia com o tubo Branco Tipo de Reao: Ponto final

B. Tcnica de Anlise 1-Identificar 3 tubos de ensaio como Branco, Teste e Padro e proceder:

Inserir o nome do Laboratrio

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA CREATININA

Pgina 3 de 5 POPBIO 028 Reviso: 00

Tubos Branco Teste Padro Padro (1) -----------------0,25 mL Amostra (soro ou urina diluda) -------0,25 mL --------gua destilada/ deionizada 0,25 mL ----------------Tampo Alcalino (3) 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL cido Pcrico (2) 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 2-Homogeneizar e incubar a 37C por 10 minutos. 3-Efetuar as leituras fotomtricas do Teste e do Padro em 510 nm ou filtro verde (500 a 540nm), acertando o Zero de absorbncia com o tubo Branco. A primeira absorbncia do tubo Teste ser A1. Acidificante (4) 0,1 mL 0,1 mL ----------4-Homogeneizar bem e esperar 5 minutos na temperatura ambiente. 5-Efetuar nova leitura do tubo Teste em 510 nm ou filtro verde 500 a 540nm, acertando o Zero de absorbncia com o tubo Branco. A segunda leitura do tubo Teste ser A2. CLCULOS Concentrao do Padro (CP) = 4,0 mg/dL Concentrao do Teste = CT A do Teste = A1 - A2 Fator de Calibrao (FC) = CP AP FC = 4,0 AP Exemplo AP = 0,238 A1Teste = 0,140 A2 Teste = 0,045 A do Teste = A1 A2 = 0,140 - 0,045 = 0,095 FC = 4,0 0,238 = 16,8 CT = FC x A do Teste = 16,8 x 0,095 = 1,6 mg/dL Dosagem da Urina Instruir o paciente para coletar corretamente a urina no perodo de tempo estipulado pelo mdico (12 horas, 24 horas ou outro). Diluir a urina a 1:25 (200 L de urina + 4,8 mL de gua destilada ou deionizada). Dosar a creatinina empregando o mesmo procedimento do soro. No final, multiplicar o resultado obtido por 25. 2. Procedimento com Desproteinizao Notas 1- Empregar este procedimento para amostras ictricas e turvas ou quando ocorrer turvao no Procedimento de ensaio direto. 2- Em amostras muito leitosas, pode-se no se obter um sobrenadante lmpido. Nestes casos, no ser possvel a determinao da creatinina. A- Condies de Reao Leitura: comprimento de onda 510 nm (500 a 540 nm) Medida: Acertar zero de absorbncia com o tubo Branco Tipo de Reao: Ponto final

B - Tcnica de Anlise 1- Em um tubo de centrifuga misturar 0,5 mL de amostra com 1,0 mL de cido Pcrico (2). Homogeneizar e centrifugar por 10 minutos. 2- Identificar 3 tubos de ensaio como Branco, Teste e Padro e proceder:

Inserir o nome do Laboratrio

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA CREATININA

Pgina 4 de 5 POPBIO 028 Reviso: 00

Tubos Padro (1) Sobrenadante lmpido gua destilada/ deionizada Tampo Alcalino (3) cido Pcrico (2)

Branco -----------------0,25 mL 2,0 mL 0,5 mL

Teste ---------0,75 mL ----------2,0 mL -----------

Padro 0,25 mL ----------------2,0 mL 0,5 mL

3- Homogeneizar bem e incubar a 37 C por 10 minutos. 4- Efetuar as leituras fotomtricas do Padro e do Teste em 510 nm ou filtro verde (500 a 540 nm), acertando o Zero de absorbncia com o tubo Branco. A primeira absorbncia do tubo Teste ser A1.
Acidificante (4) 0,1 mL 0,1 mL ----------

5- Homogeneizar bem e esperar 5 minutos na temperatura ambiente. 6- Efetuar nova leitura do tubo Teste em 510 nm ou filtro verde (500 a 540 nm), acertando o Zero de absorbncia com o tubo branco. A segunda leitura do tubo Teste ser A2. Clculos Realizar os mesmos clculos do Procedimento Direto. 3. Procedimento Cintico Preparo do Reagente de Trabalho De acordo com o consumo, misturar 1 volume de cido Pcrico (2) com 4 volumes de Tampo Alcalino (3). Estvel por 24 horas na temperatura ambiente, protegido da luz. A - Condies de Reao Leitura: Comprimento de onda 510 nm (500 a 540 nm) Medida: Acertar zero de absorbncia com gua deionizada Tipo de Reao: Cintica colorimtrica de dois pontos B - Tcnica de Anlise 1- Ajustar o Zero do fotmetro em 510 nm (490 a 520 nm) com gua deionizada. 2- Termostatizar o Reagente de Trabalho na temperatura de 37 C. A temperatura deve permanecer constante durante a realizao do teste. 3- Pipetar na cubeta do aparelho: Reagente de Trabalho 1000 L + 100 L de amostra (soro ou urina diluda) ou Padro. 4- Misturar e inserir no porta - cubetas termostatizado e acionar o cronmetro. 5- Fazer uma leitura fotomtrica do Padro (Ap) e do teste (At) aos 30 segundos (A 30) e uma segunda leitura aos 90 segundos (A90). 6- Calcular a diferena da absorbncia entre 90 e 30 segundos (A90 - A30) para o Padro e para o Teste. CLCULOS Ver linearidade. A do Teste ou Padro = A90 - A30 Como a metodologia obedece a lei de Lambert- Beer, pode-se efetuar os clculos atravs do Fator de Calibrao (FC). P = (A90 - A30) Padro T = (A90 - A30) Teste CP = concentrao do Padro em mg/dL = 4,0 mg/dL CT = concentrao do Teste em mg/dL FC = CP P Ct = FC T Exemplo

Inserir o nome do Laboratrio

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA CREATININA

Pgina 5 de 5 POPBIO 028 Reviso: 00

Se A30 Padro = 0,090 e A90 Padro = 0,138 Se A30 Teste = 0,124 e A90 Teste = 0,136 Se P = 0,138 0,090 = 0,048 T = 0,136 0,124 = 0,012 Cp = 4,0 mg/dL FC = CP P = 4,0 0,048 = 83 CT = FC T = 83 0,012 = 1,0 mg/dL CLAREAMENTO (DEPURAO) DA CREATININA Instruir o paciente para que faa uma coleta correta da urina de 12 ou 24 horas. O soro pode ser obtido em qualquer momento do perodo de coleta da urina. Dosar a creatinina do soro e da urina. Aplicar os resultados obtidos na equao abaixo: Clareamento (mL/min) = (U S) x VM U = creatinina na urina (mg/dL) S = creatinina no soro (mg/dL) VM = volume minuto (Volume urinrio de 24 h, em mL, dividido por 1440 min). NOTA: O clareamento dever ser corrigido para a superfcie corporal do paciente, que obtida atravs de nomograma correlacionando peso-altura. Multiplicar o valor da depurao por 1,73 e dividir pela superfcie corporal do paciente. Exemplo: Creatinina na urina = 118 mg/dL Creatinina no soro = 1,2 mg/dL Volume de 24 horas = 1680 mL Volume minuto = 1680/1440 = 1,17 mL/min Clareamento = (118 1,2) x 1,17 = 115 mL/minuto 2 Dados do Paciente: Peso = 60 Kg Altura: 165 cm Superfcie corporal: 1,66 m 2 Clareamento = (115 x 1,73) 1,66 = 120 mL/minuto/1,73 m Clareamento = 120 mL/minuto/1,73m2 RESULTADOS Converso de Unidades (mg/dL para SI) Mol/L de creatinina = mg/dL creatinina 88,4 CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade : PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.

Inserir o nome do Laboratrio

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA CREATININA

Pgina 6 de 5 POPBIO 028 Reviso: 00

VALORES DE REFERNCIA
Soro ou Plasma mg/dL 0,4 a 1,4 Urina mg/kg peso 24h Homens: 21 a 26 Mulheres: 16 a 22 Clareamento da Creatinina 2 mL/minuto/ 1,73 m Homens: 97 a 137 Mulheres: 88 s 128

SIGNIFICADO CLNICO A creatinina sendo um dos produtos do metabolismo nitrogenado deve ser removida do corpo continuamente atravs dos rins. A constncia na formao e exceo da creatinina faz dela um marcador muito til de funo renal, principalmente da filtrao glomerular, em virtude da sua relativa independncia de fatores como dieta, grau de hidratao e metabolismo protico. A determinao da creatinina plasmtica um teste de funo renal mais seguro do que a uria. Nas doenas renais, a creatinina se eleva mais vagarosamente do que a uria e se reduz mais vagarosamente com a hemodilise. Valores altos indicam disfuno renal e o grau de evoluo da enfermidade. LINEARIDADE Linearidade A reao linear at 12,0 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com soluo de NaCL 150 mmol/L (0,85%) e realizar uma nova determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio empregado. LIMITAES DO MTODO Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e outros procedimentos diagnsticos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Heinegard D. & Tiderstrom. Clin Chim Acta 1973; 43: 305-310. 2. Loken F. J Clin Lab Invest 1954; 6: 325-334. 3. Lopes HJJ, Baptista, JMA, Souza, MO. Rev Bras Anal Clin 1984; 16: 17-24. 4. Owen JA, Iggo B, Scandrett FF, Steward CP. Biochem J 1954;58:426. 5. Slot C. Scand J Clin Lab Invest 1965; 17:381. 6. CREATININA, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias
Reviso 04/11 Liberado

Assinatura

Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

Destino