Tema 9 (cont) MECANISMOS GENERALES DE REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Para lograr el crecimiento equilibrado un organismo requiere la integracin de un gran

nmero de rutas metablicas interconectadas que participan en la generacin de energa as como en la biosntesis de todas las molculas necesarias para el desarrollo del organismo. Las rutas de anabolismo y del catabolismo requieren de la presencia de una serie de enzimas y es a travs de ellas que se ejerce el control sobre el destino de un determinado metabolito y su integracin en una u otra ruta. El metabolismo est controlado a nivel hormonal y tambin a nivel enzimtico, en diferentes aspectos: - Por las propiedades intrnsecas de las enzimas. - Por la accin reguladora de algunas de ellas. - Por la represin o activacin gnica de su sntesis Las enzimas: catalizadores biolgicos Las reacciones qumicas necesitan un aporte de energa, que se denomina energa de activacin, para iniciarse. Se dice que las enzimas son catalizadores biolgicos ya que su funcin es acelerar la velocidad de las reacciones qumicas porque disminuyen su energa de activacin. Se combinan con los sustratos orgnicas para producir un estado de transicin con menor energa libre que el estado de transicin de la reaccin no catalizada. Las propiedades de los catalizadores son: - Aceleran las reacciones qumicas - No hacen que sucedan reacciones energticamente desfavorables. - No cambian el punto de equilibrio de una reaccin - No se consumen en las reacciones Las enzimas son catalizadores sintetizados por los seres vivos; la mayora de ellas son protenas globulares, aunque existen algunos ARN con propiedades catalizadoras: son las ribozimas. Las enzimas tambin posen otras propiedades particulares: - Son muy especficas en cuanto a los sustratos sobre los que actan y a las reacciones qumicas que catalizan - Su actividad est regulada por factores externos, por sus propiedades inherentes y por molculas originadas en las reacciones que promueven. Estructura de las enzimas Las enzimas son generalmente protenas globulares que se caracterizan por tener un centro activo, donde se unen los sustratos y uno o ms centros de regulacin, donde se unen otras sustancias que modulan la accin de la enzima. El centro activo de una enzima contiene los grupos funcionales que se pueden unir al sustrato y efectuar la accin cataltica. Los aa que forman el centro activo, la geometra y la carga del mismo estn relacionadas con el reconocimiento del sustrato y con el tipo de reaccin, de manera que son responsables de la especificidad de la enzima. Los centros reguladores se localizan en la superficie de la enzima. Algunas enzimas son protenas simples y otras, protena conjugadas. Su actividad depende, adems de su estructura, de otras estructuras no proteicas denominadas cofactores. El complejo protenacofactor se llama holoenzima; cuando el cofactor se separa, la protena restante, que se inactiva, se llama apoenzima. El cofactor puede ser un ion metlico o una molcula orgnica; en este ltimo caso se habla de coenzima. Las coenzimas funcionan como

transportadores intermediarios de electrones o de grupos funcionales que son transferidos en la reaccin enzimtica global. Las enzimas tienen una alta especificidad por sus sustratos, por lo que puede suceder simultneamente muchas reacciones distintas en la misma clula. Cintica enzimtica La velocidad de una reaccin enzimtica depende de: - Concentracin de las enzimas y de sustrato - Concentraciones de las coenzimas que intervienen - Del pH - Temperatura - Presencia o ausencia de inhibidores. Regulacin de la actividad enzimtica 1. Control por sustrato. El nivel de control ms simple se puede ejercer al cambiar la velocidad de reaccin de una enzima, por ejemplo, al modificar la concentracin del sustrato. Si sta es ligeramente menor que la de la enzima, la velocidad se relaciona con la concentracin del sustrato de acuerdo con la relacin de Michaelis-Menten.

Las enzimas que catalizan una reaccin reversible y dependen de una cierta concentracin de sustrato para operar, a menudo no parecen tener sustrato suficiente cuando ste se calcula por clula. Sin embargo, en las clulas eucariticas, la compartimentalizacin permite a las enzimas asociarse espacialmente en las estructuras membranosas, que pueden dar concentraciones locales de sustrato muy altas. La compartimentalizacin tambin es crtica para otros factores necesarios para la actividad enzimtica como los iones metlicos, coenzimas y pH. 2. Control alostrico. Las enzimas, por tanto el control metablico, puede ser afectado por ciertos metabolitos reguladores (efectores, modificadores o moduladores). Estos metabolitos pueden inhibir o activar la actividad enzimtica. Hay enzimas que no siguen la cintica de Michaelis-Menten. Cuando la velocidad de reaccin V se grafica contra la concentracin de sustrato, estas enzimas son complejos con mltiples componentes difciles de aislar, se trata de enzimas reguladoras conocidas como enzimas alostricas. De estas se pueden distinguir tres clases: 1) Homotrpicas: Aqu el sustrato puede actuar como efector sobre la rapidez de la reaccin enzimtica, por lo general, incrementndola. 2) Heterotrpicas: La inhibicin o estimulacin es causada por sustancias de origen natural que no sea el sustrato. 3) Mixtas: Algunas enzimas muestran ambas caractersticas. A. Interacciones concertadas: El modelo concertado predice que la unin de una molcula de sustrato convierte a al enzima (todas las subunidades) a una forma de alta

afinidad, la cual puede unir ms rpidamente al sustrato. El efecto de los inhibidores o de los activadores en una enzima heterotrpica tambin se puede explicar con este modelo. B. Interacciones secuenciales: El modelo secuencial sugiere que hay dos estados conformacionales para las subunidades de la enzima. La unin del sustrato provoca un cambio en la conformacin de la subunidad en cuestin. Este cambio no altera significativamente la otra subunidad, pero aumenta o disminuye la afinidad de las subunidades por el sustrato. Nuevamente, un inhibidor o un activador puede encajar en el modelo. 3. Control por retroalimentacin. El mtodo por el cual las enzimas reguladoras con comportamiento alostrico controlan varias vas en su forma ms simple, es el que se conoce como retroinhibicin o inhibicin por producto final. Se ha encontrado que estas enzimas alostricas se localizan en o cerca del comienzo de una va enzimtica y que son inhibidas o estimuladas por el producto final de esa va. Muchos de estos tipos de control han sido investigados en la sntesis de aminocidos en E. coli y se pueden identificar en muchos sistemas. La caracterstica de este tipo de control es que la enzima en el comienzo de una ruta ramificada se presenta en ms de una forma, cada una de las cuales es inhibida por uno de los productos finales. - Control por retroalimentacin simple: en ese caso, los productos de una ruta ramificada slo afectan a la enzima que acta desde el punto de ramificacin, y el punto de ramificacin intermedio afecta la va comn. Un ejemplo de esta forma de control es la sntesis de los aminocidos aromticos fenilalanina, tirosina y triptfano en Bacillus subtilis. La formacin de triptfano, fenilalanina y tirosina, inhibe las enzimas en el punto de ramificacin, lo cual provoca la formacin de cido corsmico. El exceso de cido corsmico, a su vez, inhibe las primeras enzimas de la secuencia que conduce a este cido. - Control por retroalimentacin secuencial: En este caso las enzimas reguladoras en el punto de ramificacin de una va enzimtica, tienen sitios mltiples para efectores alostricos diferentes, de modo que la inhibicin completa se puede lograr slo cuando ambos efectores estn presentes. Un ejemplo es el efecto de la fenilalanina y la tirosina sobre la enzima que forma al cido frnico a partir del cido corsmico. - Control por retroalimentacin acumulativa: Esto ocurre en algunas enzimas regulatorias donde los productos finales de la va son muy diferentes. La enzima tiene mltiples sitios alostricos en los que los efectores originan individualmente slo la inhibicin parcial. Se requieren cantidades saturantes de todos los efectores para completar la inhibicin. Un ejemplo de esta clase de control es la enzima glutamina sinteasa, la cual participa en las vas que conducen a varios compuestos como la histidina, el triptfano y la glucosamina-6-P

4.

Control integrado mediante la carga energtica.

No es razonable esperar que el consumo y la produccin de ATP, el intermediario de alta energa, se produzcan simultneamente dentro de la clula. En perodos cortos, el contenido de la clula de compuestos adenilados, AMP, ADP y ATO, se puede considerar constante. Por lo tanto, la cantidad de energa presente en la clula puede considerarse como la proporcin

de ATP y ADP con respecto al total de compuestos adenilados, siendo el ATP doble de ADP. Esta suma se conoce como la carga energtica:

La carga energtica tiene efecto sobre algunas enzimas , especialmente cuando estn implicadas en el uso o generacin del ATP. Dos ejempllos muy importantes son la fosfofructocinasa y la piruvato deshidrogenasa. La enzima fosfofructocinasa se sita en una etapa esencialmente irreversible de la gluclisis, la enzima es estimulada tanto por ADP como por AMP, e inhibida por ATP y nitrato. Por lo tanto, si la carga energtica dentro de la clula es baja, la fosfofructocinasa se activa y el flujo de carbono a travs de la gluclisis aumenta para producir ms ATP. La formacin de acetil CoA por la piruvato deshidrogenasa a partir de piruvato, el producto final de la gluclisis, tambin es esencialmente irreversible y, por lo tanto, controla la rapidez con la que funciona el ciclo de Krebs, as como la produccin de ATP e intermediarios biosintticos. La piruvato deshidrogenasa es inhibida por acetil CoA, NADH y ATP y activada AMP. Por lo tanto la enzima puede controlar el flujo de carbono a travs del ciclo de Krebs dependiendo de los niveles de NADH, ATP y acetil CoA. 5. Modificacin de la enzima: Las enzimas pueden activarse o desactivarse por modificaciones ya sea reversibles o irreversibles, que a menudo son efectuadas por otras enzimas. - Modificacin irreversible: Algunas enzimas, en particular las enzimas digestivas, se sintetizan en una forma inactiva conocida como zimgeno. Esta forma se activa por la accin de una segunda enzima que rompe la molcula en un punto especfico. Un ejemplo de esta forma de control es el quimotripsingeno, la forma inactiva de la quimiotripsina, el quimotripsingeno se sintetiza en el pncreas y consiste en una sola cadena polipeptdica, reticulada por cinco enlaces disulfuro. Cuando el enlace peptdico que une a la arginina 15 y la isoleucina 16 se rompe por la accin de la tripsina, el quimiotripsingeno se convierte en la quimiotripsina totalmente activa. - Modificacin reversible: La modificacin de las enzimas de formas inactivas a formas activas puede ser reversible. Por ejemplo, una fosforilasa que se encuentra en el msculo existe en dos formas: una activa y otra inactiva. La forma inactiva pasa a la forma activa por la fosforilacin de un residuo especfico de serina mediante una enzima fosforilasa kinasa especfica. Bajo diferentes condiciones, el grupo fosfato es eliminado de la enzima activa por una segunda enzima especfica, fosforilasa fosfatasa, para producir la enzima inactiva. La regulacin de la actividad enzimtica por fosforilacin y desfosforilacin es posiblemente el mecanismo regulatorio ms importante a nivel global, y requiere de la participacin de otras enzimas (fosfatasas y kinasas) para Se puede considerar un buen ejemplo, en el metabolismo del glucgeno, una forma de almacenamiento de glucosa, donde la sntesis y la degradacin deben ser controlados y coordinados. En los animales, el metabolismo del glucgeno est bajo el control de hormonas en una serie compleja de reacciones que incluyen la modificacin reversible de las enzimas.

Otra forma de modificacin reversible de la actividad enzimtica, se encuentra en la enzima glutamina sintetasa de E. Coli. La enzima puede ser adenilada (adicin del grupo adenina) por una enzima adenilil transferasa, la cual hace a la enzima ms susceptible al control por retroalimentacin por parte de la glutamina. Adems, la glutamina inhibe a una enzima deadenilante, y por lo tanto, un aumento de la glutamina permitir la formacin de ms enzimas susceptible, reduciendo as la formacin de glutamina. 8.2.6 Alteracin del nmero de molculas de enzima Hay un segundo tipo de control que determina el nmero de molculas de enzima presentes dentro de una clula. Se puede ver que el control es ejercido tanto a nivel transcripcional como traduccional. Un tercer control posible es un incremento en la degradacin de la enzima en cuestin sin afectar su rapidez de sntesis, reduciendo as su concentracin global.