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Manejo de Nematodos Endoparsitos: Proyecciones Futuras. Autores: Maylen Gmez y Magda Montes I. Introduccin: En los ltimos aos, las investigaciones realizadas en el campo de los nematodos fitoparsitos, han cobrado particular importancia, teniendo en cuenta el papel negativo que desempean estos organismos en el desarrollo de cultivos de gran inters econmico. Si se comparan con aquellos de vida libre, solo unos pocos nematodos estn involucrados en el parasitismo de plantas; sin embargo, afectan una amplia variedad de cultivos, desde temporales hasta rboles frutales y establecen en muchos casos relaciones biotrficas de gran inters cientfico (Fenoll y Ohl, 1996), superadas nicamente por la simbiosis. Las prdidas que sufre la agricultura debido a la incidencia de los nematodos endoparsitos sedentarios, alcanzan valores respetables. Por ejemplo, se plantea que la presencia del gnero Meloidogyne en plantaciones de guayabo, constituye uno de los factores limitantes del cultivo debido a las grandes prdidas producidas. Se estima entre un 48 a un 57% de reduccin en los rendimientos (Surez y Rosales, 1997) Si aadimos que, adems del dao directo que estos organismos ocasionan, muchas veces dejan puertas de acceso para el establecimiento de hongos, bacterias y virus, estas cifras pudieran alcanzar valores an mayores. Aunque hoy se tiene claro el dao potencial que los nematodos endoparsitos representan para la agricultura en general, todava existen dificultades con relacin a su control. En la actualidad, gracias al desarrollo alcanzado por la biotecnologa y al estudio del

mecanismo de interaccin planta nematodo, se concede gran importancia al empleo de

variedades resistentes como una posible alternativa de control. Estas ideas han surgido a partir de los estudios de eventos bioqumicos, fisiolgicos y moleculares que tienen lugar durante la infeccin por nematodos. A estos temas nos referiremos en detalle en el curso del presente trabajo. II. Morfologa y anatoma. Los nematodos son organismos pluricelulares que miden generalmente menos de 2 mm de largo. A pesar de su pequeo tamao, su organizacin es bastante compleja. Poseen todos los rganos y sistemas de rganos encontrados en los animales superiores, excepto sistema circulatorio y respiratorio, los cuales no estn definidos. La mayor parte de estos organismos son generalmente alargados y cilndricos. Se plantea que en el caso de las hembras adultas de algunas especies fitoparsitas, cambian su forma cilndrica por la de saco, rin u otras mostrando as un dimorfismo sexual entre la hembra y el macho, aunque en otros casos el macho es quien presenta diferencias menos marcadas (Bello y col., 1994) En su mayora, se reproducen de forma bisexual. Algunas especies presentan reproduccin partenogentica. El ciclo de vida es simple y directo y se divide en seis estadios: huevo, cuatro estados larvarios y el adulto (Sijmons,1993). Su sistema de alimentacin consta de: boca, esfago e intestino. La boca en la mayor parte de estos or ganismos esta provista de un estilete. Dicha estructura est provista de un conducto interior y una musculatura que permite que el rgano sea retrctil y se pueda introducir en la raz y los tejidos de la planta para su alimentacin (Bello y col., 1994). III. Clasificacin: Los nematodos parsitos de plantas pertenecen al Phylum Nematoda. Generalmente se clasifican en dos grandes grupos con relacin a su ubicacin en el tejido vegetal, o sea, al tipo

de relacin biotrfica establecida con la planta hospedera (Bello y col., 1994). En este sentido se habla de: nematodos ectoparsitos y nematodos endoparsitos. Los ectoparsitos son aquellos que atacan la parte exterior de los tejidos. Se alimentan introduciendo su estilete en los tejidos vegetales, pero cumplen todo o casi todo su ciclo evolutivo en el exterior de la planta husped (Sijmons, 1993). Los endoparsitos, como lo indica su nombre, penetran el tejido vegetal (total o parcialmente). Se plantea que este grupo pasa al menos una etapa de su vida en el in terior de los tejidos donde se alimenta y como consecuencia produce serias lesiones: ndulos, agallas, deformaciones entre otras (Escobar y col., 1999). Su persistencia en los tejidos por largos perodos supone el establecimiento de una relacin husped patgeno muy compleja, razn por la cual se trabaja hoy intensamente. (Milligans y col., 1998; Sanz-Alfrez y col., 1999). Los endoparsitos a su vez se dividen en: migratorios y sedentarios. Los migratorios en cualquier estado de desarrollo, excepto el de huevo, se mueven a travs y fuera de los tejidos del hospedero. Existen endoparsitos migratorios de partes areas y migratorios de partes subterrneas. Los endoparsitos sedentarios pueden ser divididos en dos grandes grupos: los nematodos formadores de quistes y los nematodos formadores de ndulos o agallas en la raz. Dentro de este ltimo grupo se encuentran ubicados los gneros Meloidogyne y Heterodera (Herreros y col., 2001). IV. Ciclo de Vida. El ciclo de vida se inicia con la eclosin de los huevos y seguidamente la invasin de la raz por los estados infectivos. Estos estados son larvas de vida libre que habitan en la micela de agua presente en los suelos y que necesitan penetrar en la raz para completar su ciclo reproductivo. Cuando estos estadios alcanzan la raz, comienzan a explorar su superficie y

seleccionan una regin particular para penetrar. Est regin es la zona de elongacin; donde las clulas del meristemo apical se preparan para la diferenciacin celular. Han sido propuestas algunas posibilidades para la seleccin de este sitio, desde el reconocimiento de molculas especficas en la superficie de la raz hasta seales fsicas o qumicas (Perry, 1997). Una vez que se produce el reconocimiento de esta regin entonces se produce la invasin. Al penetrar la raz se produce una migracin intercelular o intracelular segn el tipo de nematodo, que concluye en el cilindro vascular. Los nematodos seleccionan entonces una clula especfica como precursora para la formacin de un sitio de alime ntacin (SA), estructura en la que permanecen durante su desarrollo, hasta completar su reproduccin, (Fenoll y col., 1997; Wyss, 1997; Herreros y col., 2001). Las clulas que conforman estas estructuras dejan de manifestar su patrn normal de crecimiento, su maquinaria biosinttica se pone al servicio del nematodo . Poco despus de iniciada la alimentacin los nematodos comienzan a inmovilizarse. En el interior de los tejidos sufren tres mudas, hasta alcanzar su madurez sexual. Los machos abandonan la raz y las hembras comienzan a engrosar su cuerpo. Como resultado de este engrosamiento provocan la ruptura de los tejidos quedando conectados con sus estilete al sitio de alimentacin y el resto del cuerpo expuesto en la superficie de la raz (Sijmons, 1993). Los huevos igualmente quedan en el exterior de los tejidos hasta su eclosin. Pueden estar dentro de la hembra formando quistes (nematodos formadores de quistes) o inmersos en una matrix gelatinosa (nematodos de agallas). Dentro de los huevos se forma el primer estado larval y se produce la primera muda antes de alcanzar el estado en el cual eclosionan. La produccin de huevos es un proceso muy perjudicial para la planta infectada. La formacin de los mismos supone una gran demanda de agua, nutrientes y fotoasimilatos (Fenoll y Del Campo, 1998).

En el caso de los nematodos formadores de quistes el macho se desarrolla mas rpido. Se plantea que deja de alimentarse despus de la tercera muda y emerge de la cutcula en estado de J3 movindose hacia las hembras guiado por la atraccin de feromonas. La mayora de las especies exhiben una reproduccin sexual. El ciclo se desarrolla entre 3 y 8 semanas, dependiendo del hospedero y de las condiciones ambientales. Con el tiempo, el cuerpo del nematodo se endurece dando lugar a la formacin de un quiste (Sijmons, 1993). En los nematodos formadores de ndulos la reproduccin es partenognetica, aunque se encuentran machos. Como resultado de la infeccin se forma una agalla o ndulo en la raz frecuentemente empleado para diagnosticar la infeccin. La extensin de la agalla depende de la poblacin de nematodos en particular y de la especie hospedera. El ciclo de vida dura aproximadamente 6 semanas, al finalizar el nematodo muere y la clula gigante degenera (Fenoll y Del Campo, 1998). V. Daos ocasionados: Los nematodos endoparsitos agrupan especies altamente polfagas que producen afectaciones en diversos cultivos que incluyen temporales y perennes (Del Campo y col., 1996) Se reportan daos en tomate, pepino, pimiento, guayabo, meln de agua, caf, papa, entre otros (Fernndez, 1991; Talavera y col., 1999; Rodrguez y col., 2001). Sanz-Alfrez y col. (1995) sealan que desde el punto de vista agrcola, los nematodos sedentarios son frecuentemente responsables de reducciones en la productividad de muchas cosechas. En ocasiones con efectos catastrficos y consideran que el gnero Meloidogyne es sin duda uno de los agentes principales que afectan las explotaciones hortcolas intensivas, sobre todo en las regiones tropicales pues las altas temperaturas favorecen su desarrollo. Los cultivos atacados generalmente son especies de alto costo en el mercado por lo que una disminucin de la productividad suponen un costo econmico elevado.

Los daos que producen los nematodos se efectan sobre las races. Estos se inician con la ruptura de las clulas de la planta a travs de su estilete, por la disolucin de las paredes celulares o por la induccin de cambios fisiolgicos en las clulas como resultado de la inyeccin de sustancias por el nematodo a travs del estilete (Sijmons, 1993; Van Der Eyken y col., 1996; Milligans y col., 1998). Estas afectaciones provocan una predisposicin de la planta al ataque de otros microorganismos patgenos como hongos, bacterias y virus que penetran la planta a travs de la heridas ocasionadas por el dao mecnico producido por el nematodo (Surez y Rosales, 1997) En las plantaciones estas afectaciones se manifiestan con la aparicin de sntomas como: marchitez, presencia de parches en el campo con zonas de clorosis, enrollamiento o muerte de las hojas, detencin del desarrollo, deformacin de las semillas o de los frutos, necrosis externa e interna de las races, presencia de agallas o quistes en las races y proliferacin del nmero de rac es por acumulacin de sustancias de crecimiento. El resultado final es la destruccin de la capacidad vegetativa del cultivo (Gnzalez, 1984; Perry, 1997; Perry y Advisor, 1999). Generalmente los agricultores se inclinan a culpar la reduccin de los rendimientos a problemas como la carencia de fertilidad en el suelo, falta de agua, deficiencias de ciertos elementos, quemaduras de sol, falta de luz entre otros factores, en circunstancias en que son los nematodos la causa de estas anomalas (Gonzlez, 1984) En ocasiones estos organismos pueden estar presentes en el suelo y sin embargo, no se detecta ningn efecto perjudicial sobre la planta, incluso puede que no se produzcan daos severos, hasta pasado algn tiempo de establecido el cultivo.

VI. Mecanismo de interaccin planta nematodo. VI.1 Nematodos formadores de quistes. Los nematodos formadores de quistes poseen estiletes robustos que les permiten perforar la pared celular. Los juveniles penetran la raz en direccin al cilindro vascular, perpendicularmente a la superficie de la raz. La migracin hacia el cilindro vascular, es destructiva (intracelular) y los nematodos dejan un rastro de clulas muertas en su recorrido. Cuando la endodermis es perforada y los nematodos penetran el cilindro vascular, la conducta destructiva cambia por una explorativa; que finaliza con la identificacin de la clulas parenquimatosas y la seleccin de las clulas precursoras del sitio de alimentacin (Wyss y Zunke, 1986; Fenoll y del Campo, 1998). Las secreciones inyectadas por los nematodos formadores de quistes disparan un proceso de debilitamiento o cada de la pared celular entre la clula inicial del SA y las clulas parenquimatosas vecinas a lo largo del cilindro vascular. Cambios a nivel de citoplasma y ncleo son detectados a las pocas horas de iniciarse la alimentacin. Los protoplastos se fusionan dando lugar a un continuo de clulas, o sea un sincicio (Sijmons, 1993). Los ncleos se agrandan y los nuclolos se hacen mas visibles. El citoplasma comienza a hacerse denso con abundantes ribosomas y retculo endoplasmtico, la vacuola central desaparece y los plastdios y mitocondrias proliferan indicando un estado metablico muy activo. Las clulas vecinas son reclutadas para formar el sincicio, cuyo tamao continua incrementndose a lo largo del desarrollo del nematodo, especialmente cuando lo que se desarrolla es una hembra. Las paredes celulares de las clulas que rodean al sincicio comienzan a engrosarse e invaginarse en aquellos puntos prximos a los vasos del xilema incrementndose la superficie para la toma de nutrientes (Zancheo and Bleve-Zancheo, 1995; Golinowski y col., 1996).

Los nutrientes son tomados a partir de una estructura subcelular llamada tubo de alimentacin, que se forma alrededor del estilete d nematodo y que conecta la punta del el estilete con las regiones mas profundas del SA (Wyss y col., 1994). Esta estructura est conectada con el retculo endoplasmtico y est rodeada por un rea de citoplasma libre de organelos. De esta forma el nematodo puede liberar sus enzimas digestivas a travs del tubo para predigerir el citoplasma y producir molculas de una talla conveniente para poder ser tomadas por l durante su alimentacin (Grundler y Bockenhoff, 1997). VI. 2 Nematodos formadores de agallas. Los nematodos formadores de agallas adoptan una estrategia diferente. La invasin se inicia en la propia zona de elongacin. En cambio, su estilete no es tan robusto como para perforar las paredes celulares. Se plantea que estos nematodos segregan enzimas digestivas que debilitan la lmina media entre clulas. Estos no penetran directamente al cilindro vascular (Fenoll y Del Campo, 1998). Los estadios juveniles se dirigen hacia el pice de la raz migrando a travs de las clulas de la corteza. Provocan con los movimientos vigorosos de sus cuerpos, el debilitamiento de las paredes celulares, sin embargo no es una migracin destructiva. Probablemente ellos sigan esta conducta como consecuencia da la presencia de la banda de casparium, que puede constituir una barrera fsica en su camino hacia el cilindro vascular (Wyss y col., 1992). Los nematodos penetran cerca del meristemo donde la endodermis no se ha formado. Finalmente rotan su migracin 180 y penetran el cilindro vascular desde su base y continan movindose en direccin opuesta, hacia la zona de diferenciacin, hasta su destino final (Sijmons y col.,1991; Gravato y col., 1995). Cuando los estadios juveniles alcanzan el cilindro vascular en desarrollo, reconocen una clula particular y se establecen. Esta clula ser la precursora para comenzar un sitio de

alimentacin permanente, en el cul el nematodo se alimentar durante su desarrollo completo hasta su reproduccin. A partir de esta momento dependen absolutamente de esta zona para abastecerse de agua y de nutrientes (Sanz Alfrez y col., 1999; Herreros y col., 2001). Despus que se establecen, los msculos de la pared del cuerpo del nematodo degeneran y este queda atrapado en la raz (Fenoll y Del Campo, 1998). Los nematodos formadores de ndulos inyectan secreciones de naturaleza desconocida, en las clulas seleccionadas para comenzar el SA al igual que los formadores de quistes, pero la respuesta de la clula precursora es diferente. El primer cambio detectable en la morfologa afecta el ncleo, con una serie de repetidas mitosis, mientras que la clula crece sin dividirse. El resultado final es una clula grande multinucleada (Sijmons, 1993; Zancheo y BleveZancheo). La distribucin del retculo endoplasmtico y los organelos concuerda en gran medida con la del sincicio. Las clulas proximales a los vasos tambin se engrosan para aumentar la superficie disponible para el intercambio. Frecuentemente el SA est compuesto por varias clulas gigantes conectadas por plasmodesmos (Fenoll y Del Campo, 1998). En muchos hospederos las clulas que rodean este SA comienzan a proliferar, producindose entonces una agalla o ndulo en la raz. Las clulas gigantes quedan contenidas dentro de la agalla, que es el resultado de una hipertrofia vascular (Escobar y col., 1999). VII. Mecanismo de Induccin de los sitios de alimentacin: En la actualidad existe toda una gran polmica con relacin al mecanismo de induccin de estos sitios y numerosas son las investigaciones que se realizan. Aunque se han logrado notables avances, todava no se conocen exactamente toda una serie de eventos bioqumicos y fisiolgicos que conllevan a la formacin y funcionamiento de los sincicios y clulas gigantes.

Hasta el momento slo se conoce que tiene lugar una profunda reprogramacin de la expresin gentica durante la infeccin. Se produce la induccin de algunos promotores especficos y el silenciamiento de otros. Estos cambios son el resultado de la interferencia con la maquinaria que coordina la expresin gentica con el ciclo celular (Sanz-Alfrez y col., 1999; Escobar y col., 2001). Desde hace algn tiempo se considera que los componentes de las secreciones de los nematodos son los responsables de disparar los mecanismos implicados en la induccin de los sitios de alimentacin (Goverse y col., 1999). La naturaleza de las secreciones an no se conoce claramente; no obstante, algunas protenas ya han sido identificadas. Entre stas se encuentran enzimas lticas como celulasas y peptinasas, que se piensa estn involucradas en la penetracin de los tejidos de la planta y establecimiento del SA. Tambin se han identificado enzimas digestivas (proteasas) que se relaciona con la propia alimentacin del nematodo. Algunos grupos de investigacin han producido anticuerpos monoclonales que rec onocen como antgenos a elementos presentes en las secreciones. Algunos de estos antgenos han sido identificados; sin embargo, su rol especfico en los mecanismos de induccin de estos sitios no ha quedado claro (De Boer y col., 1996; Willianson y Hussey, 1996; Fenoll y Del Campo, 1998). En trabajos recientes en el fraccionamiento de estas secreciones y las fracciones resultantes han sido empleadas para inducir una respuesta en ausencia de nematodos (Robertson y col., 1999). Algunos autores ya han reportado cambios en la expresin de genes especficos en los SA (Gheysen y col., 1996; Aristzabal y col., 1996; Fenoll y col., 1997). Los cambios en la expresin gnica en los S.A que han sido comprobados, ocurren probablemente a nivel de la activacin de promotores (Van der Eycken y col., 1996; Barthels y col., 1997).

Los primeros cambios en la expresin gentica durante el desarrollo de estos sitios, fueron detectados a nivel de RNA mensajeros, aunque estos cambios no fueron especficamente asociados a la formacin de los sitios (Fenoll y Del Campo, 1998). Desde entonces algunos grupos cientficos se dedicaron a la construccin de libreras genmicas. A partir de monitoreos diferenciales de estas libreras, se han identificados genes, que son en ocasiones, muy especficos de los SA. Este es el caso de los genes de tomate Lemmi8, as como Lemmi9, altamente transcrito en clulas gigantes despus de una infeccin con Meloidogyne incognita (Van der Eycken y col., 1996; Fenoll y col., 1997; Escobar y col., 1999). Aunque se desconoce la funcin del gen Lemmi9 , la protena que se deduce de su secuencia presenta gran homologa con la protena de algodn LEA4, que se induce en condiciones de estrs salino (Sanz- Alfrez y col., 1999; Escobar y col., 1999). No ha sido encontrada una funcin similar para Lemmi9. Se plantea que la acumulacin de este gen en clulas gigantes pudiera estar relacionada con cambios osmticos durante el desarrollo y funcionamiento de estas clulas (Escobar y col., 1999). La extensina Lemmi8 es una protena estructural de pared celular y es otro de los productos gnicos en los que se trabaja intensamente (Bucher y col., 1997). Estudios realizados revelan que la expresin de este gen aumenta durante la infeccin por nematodos. Estos hechos sugieren una implicacin de las extensinas en los procesos defensivos de la planta. Posiblemente las extensinas impidan el avance de estos patgenos al aumentar la rigidez de la pared celular debido a su entrecruzamiento molecular (Hernndez y col., 2001). Para identificar genes de respuesta a nematodos se ha seguido como estrategia, el empleo de plantas transgnicas con fusiones del gen reportero uidA (codifica para la B- glucoronidasa) con promotores de genes conocidos. Esto permite detectar histoquimcamente l expresin a

gnica dentro del SA y as estos genes pudieran ser catalogados como especficos de los SA o del tejido que rodea a este sitio (Del Campo y col., 1996; Fenoll y col., 1997; Escobar y col., 2001). En Tabaco uno de los promotores identificados por esta va es el que corresponde al gen TobRB7. Este gen codifica para una acuaporina de membrana, posiblemente involucrada en la toma de agua en clulas gigantes(Sanz-Alfrez y col., 1993; Opperman y Conkling, 1996). Los promotores de los genes que codifican para las distintas isoformas de HMGRasa (Hidroximetil- glutaril-Coa Reductasa) tambin se han reportado que responden ante una infeccin por nematodos. Este gen se ha relacionado con la sntesis de esteroles vegetales que los nematodos precisan para producir sus propias hormonas. Dentro de estos HMG2,

involucrado en la produccin de fitoalexinas, es inducido por nematodos formadores de agallas, quiz como un mecanismo de defensa. El promotor de HMG1 tambin es inducido por nematodos en Arabidopsis (Aristzabal, 1996). En este caso la expresin es muy especfica de clulas gigantes y puede ser detectada fcilmente. La restringida expresin de este gen en clulas gigantes y el hecho de que su expresin no ha sido correlacionada con un menor desarrollo del nematodo, sugiere tal vez, una funcin diferente a la de su implicacin en los mecanismos de defensa. Estudios mas recientes en Arabidopsis parecen demostrar un papel mas claro de esta enzima en la biognesis de la pared celular, la membrana y tambin en el trfico vesicular (BleveZancheo, 1997). Son pocos lo genes reportados como especficos en estos sitios. Todava quedan interrogantes que hasta hoy no tienen claras respuestas. Queda por conocer dentro de estos promotores que secuencias responden a nematodos y que factores transcripcionales regulan su expresin. El

estudio de estos factores de transcripcin permitir entender como estos nematodos inician estas cascadas de eventos que concluyen con la diferenciacin de un sitio de alimentacin. VIII. Estrategias de control. Con relacin a los mtodos de control, hasta hace muy pocos aos se realizaba mediante el empleo de agroqumicos, uso de cultivares resistentes (resistencia natural) y determinadas prcticas de manejo agronmico. El control qumico en muchos casos result insuficiente, con la agravante de la contaminacin ocasionada por el uso indiscriminado de productos de gran toxicidad y residualidad. Existe una tendencia mundial hacia evitar los riesgos de la aplicacin de plaguicidas para los agricultores y los consumidores. Una estrategia promisoria para el control de estos organismos puede ser el uso de cultivares resistentes la cual se ha ido fortaleciendo a medida que ha evolucionado el conocimiento cientfico en estos ltimos aos. La aparicin reciente de la ingeniera gentica, ha permitido obtener plantas resistentes a travs de la introduccin de genes. Esta variante utilizada en la Nematologa Agrcola, ha tenido sus limitaciones porque en muchos casos estas plantas confieren resistencia a una especie de nematodo en cuestin. Existen proyectos de investigacin que persiguen obtener plantas resistentes que confieran resistencia a ms de una especie de nematodo. El primer reporte ha sido en remolacha azucarera confiriendo resistencia a nematodos formadores de quites (Cai y col., 1997; Fenoll y Del Campo, 1998). IX. Proyecciones futuras El incremento del conocimiento de eventos precisos que tienen lugar durante el proceso de infeccin provocado por algunos nematodos est posibilitando designar nuevas estrategias basadas en el empleo de plantas resistentes obtenidas por ingeniera gentica.

Las investigaciones deberan enfocarse sobre los sitios de alimentacin, ya sea bloqueando su induccin o interfiriendo en su normal funcionamiento, de manera que los nematodos no puedan completar su ciclo reproductivo (Del Campo y col., 1996; Fenoll y Del Campo, 1998; Herreros y col., 2001). Para ello las investigaciones se han dirigido en dos sentidos, ambos basados en el uso de promotores ms o menos especficos de los SA y estas son: 1. Prevenir la acumulacin del producto de determinados genes que son esenciales para la alimentacin del nematodo. 2. Provocar Expresin de protenas citotxicas en estos sitios. El primer estudio fue realizado en plantas de tomate transformadas. La construccin consista en una fusin del promotor del gen TobRB7 con una versin antisentido de su propia regin de codificacin (Opperman y Conckling, 1996). Como resultado se obtuvieron plantas donde los niveles de infeccin con M. incognita se redujeron notablemente. Esto se debe a que no hay acumulacin de acuaporina en clulas gigantes, interfiriendo su normal funcionamiento. El uso comercial de esta plantas, sin embargo, no tuvo muy buenos resultados. El promotor TobRB7 es inducido por nematodos formadores de ndulos, por lo que no hay manifestacin de resistencia para los formadores de quistes. Adems las plantas mostraron afectaciones en la produccin de semillas. Ohl y col., en 1997, desarrollaron estudios sobre la expresin de protenas citotxicas en sincicios de Arabidopsis. Para ello introdujeron promotores especficos en los sitios de alimentacin, reportndose una disminucin significativa de la infeccin y de la produccin de huevos. Las protenas anti-nematodos tambin pueden interferir en el desarrollo y establecimiento de la infeccin cuando son expresadas a altos niveles por promotores constitutivos. Estas protenas reconocen componentes moleculares implicados en el proceso de infeccin. Dentro

de ellas se destaca Orizacystatin, un inhibidor peptdico de proteasas de serina, aisladas de semillas de arroz y que bloquea efectivamente proteasas digestivas de Globodera pallida. Las plantas transgnicas que expresan el gen del inhibidor de proteasas bajo el control del promotor 35S, tienen un nivel considerable de resistencia. Esto constituye un ejemplo de cmo protenas que interfieran en la correcta alimentacin del nematodo y que ya han sido empleadas para otros patgenos de plantas, pueden ser usadas en el control de nematodos endoparsitos sedentarios (Urwin y col., 1995). Otras estrategias empleadas son: el uso de anticuerpos contra las secreciones de estos organismos, inhibidores de enzimas digestivas presentes en las secreciones, enzimas hidrolticas como colagenasas, que pueden afectar su cutcula y la B-endotoxina de Bacillus thuringiensis (Burrows, 1996, Stiekema y col., 1997; Fenoll y Del Campo, 1998). Los cultivares de tomate que portan el gen Mi (confiere resistencia a tres especies de Meloidogyne ) tambin han sido muy utilizados en estos ltimos aos para contrarrestar los efectos tan dainos de este gnero. Desafortunadamente muchas de la poblaciones de Meloidogyne han sobrepasado esta resistencia, lo que ha conllevado a la necesidad de continuar estudiando mas a fondo la relacin establecida entre estos fitoparsitos y sus hospederos (Milligans y col., 1998). En la naturaleza existen especies que manifiestan resistencia natural. Los aportes del conocimiento humano han permitido que estas respuestas defensivas que poseen muchas plantas ante el ataque por patgenos, puedan ser potenciada. Este es el caso de los llamados elicitores (naturales y qumicos), que pueden conferir una resistencia a partir de la activacin de genes asociados a la resistencia sistmica adquirida (Friendrich y col., 1996, Lawton y col., 1996).

Existen en la actualidad resultados muy promisorios. Productos comerciales ofrecen una excelente alternativa como elicitores naturales y qumicos. Algunos de ellos manifiestan una activacin similar a un sistema de defensa natural de la planta con su aplicacin exgena (Lanfontaine y Benhamou, 1996; Benhamou y Blaguer, 1998 (a) Benhamou y Belaguer, 1998 (b)). El quitosan es un potente elicitor de pared celular. Este producto es capaz de inducir la actividad de quitinasas, fitoalexinas, inhibidores de proteasas y componentes estructurales como callosa y lignina. Se plantea que pudiera ocasionar el engrosamiento de la pared celular y por consiguiente restringir le crecimiento y multiplicacin del patgeno (Benhamou, 1996). Actualmente el estudio de variedades resistentes es un tema al que se le est prestando particular importancia, sin embargo, todava se desconocen muchos de los mecanismos involucrados en el desarrollo de una respuesta defensiva. En las interacciones patgeno- hospedero subyace una interaccin gentica que, de manera obligada, acarrea la co-evolucin de ambos, fundamentalmente por presiones selectivas recprocas, aunque tambin favorecidas por otros factores tanto biticos como abiticos. Es necesario un conocimiento preciso de esta interacciones para poder definir nuevas estrategias de manejo integrado (Slack, 2001; Del Campo col., 2001). Se hace necesario, por tanto, profundizar en los procesos de interaccin planta-nematodo con el fin de caracterizar las bases moleculares de la resistencia y definir medidas de control respetuosas con ele ambiente y que garanticen la seguridad del productor y el consumidor.

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