BIOLOGA MOLECULAR Universidad Maimnides 2006

Lic. Federico Jensen Lic. Rocio Soldati

Actividades de la materia: Clases Tericas. Trabajos Prcticos Seminarios: Prcticos y Tericos

Biologa Molecular de la Clula. Alberts, Johnson, Lewis. Biologa Celular y Molecular. Lodish, Berk. Principios de Bioqumica. Lehninger, Nelson y Cox.

Hitos de la Biologa Molecular 1866 Gregor Mendel: Principios de la gentica moderna. 1868 Miescher descubre la Nuclena en el ncleo de glbulos blancos. 1887 Base fsica de la herencia est en el ncleo. 1910. Levene descubre que el ADN est formado por nucleotidos: Base + azcar + fosfato. Primer modelo tridimensional.

Griffith, en 1928, realiz experimentos con la bacteria Streptococcus pneumoniae: Cepa virulenta: S (smooth, con cubierta proteica) Cepa no virulenta: R (rough, sin cubierta proteica) CONCLUSION Una sustancia de las bacterias virulentas muertas por calor puede transformar a las bacterias R vivas (no virulentas). PRINCIPIO TRANSFORMANTE

Avery, Mc Leod y Mc Carty, en 1944 pudieron aislar y purificar la sustancia transformante. Usaron el extracto de bacterias S (virulentas) muertas por calor. Trataron cada extracto con enzimas que destruyen el ARN, las protenas y el ADN. Se evalu la capacidad biolgica transformante de bacterias R (no virulentas). CONCLUSION EL PRINCIPIO TRANSFORMANTE ES EL ADN

Estructura del ADN

Cada molcula de ADN est formada Por dos largas cadenas de polinucletidos compuestas por cuatro tipos de sub unidades nucleotdicas.

la disposicin tridimensional del ADN es una consecuencia de las propiedades qumicas Y estructurales de sus componentes

REGLAS DE CHARGAFF PARA ADN DE DOBLE HLICE La proporcin de Adenina (A) es igual a la de Timina (T). A = T . A/T = 1. La proporcin de Guanina (G) es igual a la de Citosina (C). G= C. G/C=1. La proporcin de bases pricas A+G es igual a la de las bases pirimidnicas T+C. A+G = T + C La relacin entre A+G y T+C es igual a la unidad Edwin Chargaff A+G/T+C=1 La proporcin entre (A+T) y (G+C) es caracterstica de cada organismo, variando de una especie a otra.

Procedencia del ADN Timo de Bovino Esperma de bovino Germen de trigo Saccharomyces Escherichia coli Mycobacterium tuberculosis X174 T3 T5 T7 Virus ARN Mosaico del tabaco (TMV) Mosaico amarillo nabo Poliomielitis Encfalo miocarditis del ratn Reovirus Tipo 3 Tumor de las heridas

A 28,2 28,7 27,3 31,3 26,0 15,1 24,3 23,7 30,3 32,4 A 29,8 22,6 28,6 27,3 28,0 31,1

G 21,5 22,2 22,7 18,7 24,9 34,9 24,5 26,2 19,5 18,3 G 25,4 17,2 24,0 23,5 22,3 18,6

C 21,2 20,7 16,8 17,1 25,2 35,4 18,2 27,7 19,5 C 18,5 38,0 22,0 23,2 22,0 19,1

T 27,8 27,3 27,1 32,9 23,9 14,6 32,3 23,5 30,8 32,4 U 26,3 22,2 25,4 25,9 27,9 31,3

5-Me-C 1,3 1,3 6,0 17,0 HMC

De la observacin de la tabla anterior pueden extraerse las siguientes conclusiones: Todos los ADN cumplen la relacin A=T y G=C, excepto el ADN del bacteriofago X174. El ADN de este virus est formado por una sola hlice. En los virus ARN no se cumple la equimolaridad de las bases excepto en el caso de virus que tienen ARN de doble hlice. En estos virus se cumple que A=U y G=C, adems se cumple que A+G/U+C=1. El fago T2 y los otros fagos (T4 y T6) en vez de citosina tienen hidroximetil-citosina (HMC). Algunos organismos tiene en su ADN una pequea proporcin de 5-metil-citosina (5-Me-C) que sustituye a la citosina.

Cuadro comparativo entre especies

Organismo Escherichia coli Diplococcus pneumoniae Mycobacterium tuberculosis Levadura Paracentrolus lividus (erizo mar) Arenque Rata Hombre Hombre Hombre Tejido Esperma Esperma Mdula sea Timo Hgado Esperma A+T/G+C 1,00 1,59 0,42 1,79 1,85 1,23 1,33 1,52 1,53 1,52

EL MODELO DE LA DOBLE HLICE: WATSON Y CRICK (1953)

Datos de Chargaff (1950), relativos a la composicin de bases nitrogenadas en el ADN de diferentes organismos. Estudios de difraccin de rayos X sobre fibras de ADN. Para determinar la estructura tridimensional o disposicin espacial de las molculas de ADN. (Rosalin Franklin)

Difraccin de Rayos X: ADN-B

Basndose en estos datos Watson y Crick propusieron su Modelo: Doble Hlice

El ADN es una doble hlice enrollada helicoidalmente a derechas (sentido dextrorso). Cada hlice es una serie de nucletidos unidos por enlaces fosfodister en los que un grupo fosfato forma un puente entre grupos OH de dos azcares sucesivos (posiciones 3 de un azcar y 5 del siguiente). Las dos hlices antiparalelas. 5P 3OH , mientras que la hlice complementaria sigue la secuencia de tomos 3OH 5P.

 El dimetro de la doble hlice es de 20 .

Las bases nitrogenadas son estructuras planas perpendiculares al eje de la doble hlice, apiladas unas sobre otras a una distancia de 3,4 .

Se produce una vuelta completa de la doble hlice (360) cada 10 pares de bases (34 )

Ptes de H Fzas que Estabilizan el ADN

Interacciones Hidrofbicas

Apilamientos de bases

Adems de la forma B existen otras estructuras posibles que puede presentar el ADN:

ADN-A

ADN-B

ADN-Z

 ADN-B: 92% de humedad relativa, se encuentra en soluciones con baja fuerza inica se corresponde con el modelo de la Doble Hlice.

ADN-A: 75% de humedad, presenta 11 pares de bases por giro completo y 23 de dimetro. ADN-C: 66% de humedad, se obtiene en presencia de iones Li, muestra 9+1/3 pares de bases por giro completo y 19 de dimetro. ADN-Z: doble hlice sinistrorsa (enrollamiento a izquierdas), 12 pares de bases por giro completo, 18 de dimetro, se observa en segmentos de ADN con secuencia alternante de bases pricas y pirimidnicas (GCGCGC), debido a la conformacin alternante de los residuos azcar-fosfato sigue un curso en zig-zag.

ADN- B

ADN- A

ADN- Z

surco > surco > surco < surco <

surco > surco <

Sentido de Giro pb por vuelta Distancia vertical e/ pb Dimetro de hlice Surco > Surco < Inclinacin pb

D 10.4 0.34nm 2.37nm ancho, prof. estrecho, prof. 1.2 (casi perpend.)

D 11 0.23nm 2.55nm estrecho, prof. amplio, no prof. 19 (grande)

L 12 0.37nm 1.84nm plano, sin prof. estrecho, prof. 9 (ligera)

Genoma
Set completo de informacin gentica codificado en cidos nuclicos. (ADN o ARN). Todo el ADN de los cromosomas. Incluye genes, secuencias intergnicas y repetidas. Los Eucariotas pueden tener 2-3 genomas Genoma Nuclear Genoma Mitocondrial Genoma de los Plstidos Si no se especifica, genoma habitualmente se refiere al genoma nuclear.