Metabolismo do azoto e ciclo da ureia Rui Fontes

Metabolismo do azoto dos aminocidos e ciclo da ureia

1Embora os aminocidos nutricionalmente dispensveis possam, no que refere ao esqueleto carbonado, formar-se a partir da glicose, uma boa aproximao realidade afirmar-se que os aminocidos existentes no sangue e nas clulas resultam da hidrlise das protenas endgenas ou das protenas da dieta. Se pensarmos apenas na poro azotada mesmo os aminocidos sintetizados endogenamente tm origem nos aminocidos formados naqueles processos de hidrlise. A maior parte dos aminocidos libertados aquando da hidrlise das protenas endgenas so reutilizados na sntese dessas mesmas protenas ou de outras protenas mas uma parte sofre catabolismo perdendo o azoto e gerando intermedirios no azotados que, em ltima anlise (directa ou indirectamente), vo acabar por oxidar-se a CO2. Os aminocidos ou os intermedirios a que estes do origem no decurso do seu catabolismo podem perder os grupos azotados em reaces de desamidao ou desaminao em que se liberta o io amnio. A concentrao plasmtica do amnio , no indivduo saudvel, muito baixa (cerca de 20 M no sangue sistmico e cerca de 260 M na veia porta)1. Quando a concentrao de amnio aumenta no plasma (hiperamonmia) provoca alteraes neurolgicas que podem culminar em coma e morte. No fgado, o amnio txico convertido em ureia no txica. Uma situao clnica aguda que cursa com hiperamonmia , por exemplo, uma hemorragia para dentro do lmen do sistema digestivo em doentes com cirrose heptica. Outras condies clnicas mais raras que tambm cursam com hiperamonmia so as causadas por dfices congnitos das enzimas do ciclo da ureia. Numa reaco catalisada pela sinttase do carbamil-fosfato I, uma enzima da matriz mitocondrial, forma-se carbamil-fosfato (ver equao 1). Na reaco catalisada por esta sinttase consome-se amnio e CO2 que se ligam para formar o carbamilo que fosforilado pelo ATP; o processo tambm envolve a hidrlise de uma outra molcula de ATP. O carbamil-fosfato vai ser o dador de um dos dois azotos da ureia que se vai formar. Embora, estritamente, no possa ser considerada uma enzima do ciclo da ureia, a relao da sinttase de carbamil-fosfato I com este ciclo to ntima que assim considerada com muita frequncia. NH4+ + CO2 + 2 ATP + H2O carbamil-fosfato + 2 ADP + Pi 4(1)

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No ciclo da ureia intervm uma enzima que, tal como a sinttase de carbamil-fosfato I, est na matriz mitocondrial, a transcarbamlase da ornitina (ver equao 2); as outras trs esto no citoplasma e so a sinttase do arginino-succinato, argininosuccnase e argnase (ver equaes 3-5). Costuma dizer-se que a ornitina [5C,2N] desempenha, no ciclo da ureia, um papel cataltico porque se consome na primeira reaco (transcarbamlase da ornitina: ver equao 2) e, via citrulina [6C,3N], arginino-succinato [10C,4N] e arginina (6C,4N], se regenera na ltima (argnase: ver equao 5). na reaco catalisada pela argnase que se d a hidrlise da arginina formando-se a ureia e regenerando-se a ornitina, um dos substratos da transcarbamlase da ornitina. Ao longo do ciclo da ureia a estrutura da ornitina vai aceitando os componentes da ureia; como evidenciado pela reaco catalisada pela argnase, a arginina (C6,N4) pode ser entendida como sendo formada por dois resduos: ornitina [5C5,2N] e ureia [1C,2N]. Por aco cataltica da transcarbamlase da ornitina, a ornitina aceita o grupo carbamilo do carbamil-fosfato gerando citrulina que reage com o aspartato gerando arginino-succinato (sinttase do arginino-succinato: ver equao 3): a formao do arginino-succinato um processo endergnico acoplado com a hidrlise de ATP a AMP + PPi. Por aco duma lase (argininosuccnase) o arginino-succinato desdobra-se em arginina e fumarato (ver equao 4). Como j referido a transcarbamlase da ornitina uma enzima da matriz mitocondrial enquanto que todas as outras trs enzimas do ciclo so citoplasmticas: assim, o produto da transcarbamlase da ornitina, a citrulina, sai da mitocndria, enquanto o substrato aminoacdico da mesma enzima, a ornitina, entra para a mitocndria; os dois processos de transporte so catalisados pelo mesmo transportador.

Para comparao: a concentrao plasmtica da glutamina cerca de 6 mM e a dos aminocidos em que a concentrao plasmtica mais baixa (metionina e aspartato) ronda os 20 M [Bergstrom et al. (1974) J Appl Physiol 36:693-7].

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ornitina + carbamil-fosfato citrulina + Pi citrulina + aspartato + ATP arginino-succinato + AMP + PPi arginino-succinato arginina + fumarato arginina + H2O ureia + ornitina 5-

(2) (3) (4) (5)

O somatrio das reaces catalisadas pelas enzimas do ciclo da ureia e pela sinttase do carbamil-fosfato I pode ser expresso pela seguinte equao soma: CO2 + NH4+ + aspartato + 3 ATP ureia + 2 ADP + AMP + 2 Pi + PPi + fumarato (6)

Na estrutura da ureia [OC(NH2)2] o carbono tem origem no CO2, um dos tomos de azoto tem origem directa no amnio e o outro origem directa no aspartato, cujo esqueleto carbonado origina fumarato durante o processo. 6O amnio que est na origem do carbamil-fosfato heptico tem origem nos aminocidos que sofrem catabolismo libertando amnio. Uma parte considervel do amnio (talvez 1/3) utilizado para a sntese de carbamil-fosfato captado pelo fgado chegando a, atravs da veia porta, j como amnio. Este amnio foi formado nos entercitos a partir da glutamina (via aco da glutamnase que catalisa a hidrlise do grupo amida: ver equao 7) ou no lmen do intestino por aco das bactrias2. Os restantes 2/3 resultam da aco de enzimas hepticas que provocam a perda de grupos azotados de aminocidos na forma de amnio. Exemplos deste tipo de enzimas so a enzima de clivagem da glicina (ver equao 8), a lase da cistationina (ver equao 9), a asparagnase (ver equao 10), a glutamnase (ver equao 7) e a desidrognase do glutamato (ver equao 11). De notar que o azoto do amnio libertado pela aco da desidrognase do glutamato poder ter tido origem ltima em muitos outros aminocidos: em reaces de transaminao (quer directamente, quer atravs de intermedirios dos processos catablicos) quase todos os aminocidos podem ceder o seu grupo amina ao -cetoglutarato formando o glutamato. glutamina + H2O glutamato + NH4+ glicina + H4-folato + NAD+ N5,N10-metileno-H4-folato + NADH + CO2 + NH4+ cistationina cistena + -cetobutirato + NH4+ asparagina + H2O aspartato + NH4+ glutamato + NAD+ -cetoglutarato + NADH + NH4+ 7(7) (8) (9) (10) (11)

O segundo azoto presente na estrutura da ureia tem origem directa no aspartato: o aspartato ao reagir com a citrulina e ao sair como fumarato deixa ficar azoto no grupo guanidina da arginina que vai sofrer hidrlise e gerar a ureia. No entanto, este segundo azoto pode, indirectamente, ter origem em todos os aminocidos. A alanina (que vertida pelos msculos ou pelos entercitos e captada pelo fgado) exemplo de um aminocido dador de amina para a sntese de aspartato no fgado. Por aco sequenciada da transamnase da alanina (ver equao 12) e da transamnase do aspartato (ver equao 13) o grupo amina que estava na alanina pode originar o grupo amina do aspartato; a sequncia envolve como intermedirio aminado o glutamato. Sequncias similares envolvendo diversas transamnases e a transamnase do aspartato podem explicar a transferncia de grupos amina de diversos aminocidos para o oxalacetato e a formao de aspartato; a equao soma que descreve estes processos a equao 15 (ver abaixo). Quando a perda de azoto origina amnio (casos da desamidao hidroltica da glutamina ou da asparagina ou as desaminaes oxidativas da glicina ou do glutamato ou a desaminao por aco de lases de diversos aminocidos; ver equaes 7-11) este io inorgnico pode, por aco da desidrognase do glutamato (ver equao 14), originar o grupo amina do glutamato. O glutamato formado por aminao do -cetoglutarato pode, por transaminao, ser dador de amina ao oxalacetato para formar aspartato (ver equao 13); assim, via -cetoglutarato/glutamato todos os aminocidos podem contribuir para o azoto que vai ser cedido directamente pelo aspartato na sntese da ureia.

de notar que parte da ureia que circula no sangue passa para o lmen intestinal onde reconvertida em amnio pelas bactrias: existe assim um ciclo entero-heptico de azoto envolvendo a ureia e o amnio assim como as enzimas hepticas do ciclo da ureia e a urease (ureia + H2O CO2 + 2 NH3) das bactrias intestinais.

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alanina + -cetoglutarato piruvato + glutamato glutamato + oxalacetato -cetoglutarato + aspartato -cetoglutarato + NH4+ + NADPH glutamato + NADP+ 8-

(12) (13) (14)

A equao soma relativa ao processo de sntese de ureia (ver equao 6) mostra que se gastam 4 ligaes ricas em energia do ATP durante a sntese de uma molcula de ureia. No entanto tambm possvel defender um outro ponto de vista. O oxalacetato aceitador de grupos amina em reaces de transaminao em que se forma o aspartato (equao 15). Na converso do fumarato (formado no ciclo da ureia) a oxalacetato participam a fumrase e a desidrognase do malato e a equao soma correspondente a esta converso a equao 16. A equao 20 (que a soma das equaes 6 e 15-19) mostra que, tendo em conta os ATPs que se podem formar como consequncia da oxidao do fumarato (equaes 16 e 17), tambm se pode pensar que o nmero de ligaes ricas em energia gastas na sntese de uma molcula de ureia de apenas 1,5 ATPs. CO2 + NH4+ + aspartato + 3 ATP ureia + 2 ADP + AMP + 2 Pi + PPi + fumarato oxalacetato + -aminocido aspartato + -cetocido fumarato + NAD+ oxalacetato + NADH NADH + O2 + 2,5 ADP + 2,5 Pi NAD+ + 2,5 ATP AMP + ATP 2 ADP PPi + H2O 2 Pi CO2 + NH4+ + 1,5 ATP + -aminocido ureia + 1,5 ADP + 1,5 Pi + -cetocido (6) (15) (16) (17) (18) (19) (20)

No ciclo da ureia gastam-se 4 ligaes ricas em energia do ATP mas, porque a reconverso do fumarato em aspartato permite a formao de 2,5 ATPs (admitindo relao P:O de 2,5 para o NADH), o gasto lquido de apenas 1,5 ATPs. 9A esmagadora maioria dos aminocidos degradada no fgado mas uma parte importante do catabolismo dos aminocidos ocorre no msculo e nos entercitos. de notar que o catabolismo de uma determinada molcula de um determinado aminocido at CO2 e ureia pode ser feito por etapas envolvendo vrios rgos. Um bom exemplo o caso da glutamina que (em parte) convertida, nos entercitos, em amnio e alanina (esta converso pode ocorrer via glutamina glutamato cetoglutarato succinil-CoA succinato fumarato malato oxalacetato fosfoenolpiruvato piruvato alanina). A alanina vertida na veia porta e captada pelo fgado podendo, aqui, ser convertida em glicose (gliconeognese); se esta glicose for libertada para o sangue pode ser oxidada a CO2 em todos os rgos. O amnio formado nos entercitos a partir da glutamina e o azoto da alanina so, no fgado, convertidos em ureia. O msculo um importante local de degradao dos aminocidos ramificados (valina, leucina e isoleucina). No processo de degradao destes aminocidos o seu grupo amina pode acabar como azoto da alanina ou da glutamina. Embora constituam apenas 10% dos aminocidos das protenas musculares, a alanina e a glutamina constituem, em conjunto, mais de metade dos aminocidos libertados pelos msculos. (1) A alanina uma forma de transporte de azoto e de carbonos do msculo para o fgado sendo este transporte um dos componentes do chamado ciclo da alanina. A alanina libertada pelo msculo resulta de reaces de transaminao em que intervm o piruvato formado na gliclise muscular; esta alanina captada pelo fgado servindo o azoto para a sntese de ureia e o esqueleto carbonado para a sntese de glicose que, libertada no fgado, pode ser usada como combustvel pelo msculo (ciclo da alanina). (2) Embora no seja consensual [1], admite-se que o esqueleto carbonado de algumas das molculas da glutamina libertada pelo msculo tenha origem na valina e na isoleucina3. No seu catabolismo estes dois aminocidos geram succinil-CoA; no ciclo de Krebs o succinil-CoA pode formar -cetoglutarato que, aceitando um grupo amina em reaces de transaminao, gera glutamato e (via sinttase da glutamina) glutamina. Na origem dos grupos azotados da glutamina estariam quer os

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O msculo tambm liberta para o sangue -cetocidos ramificados que se originam por aco da transamnase dos aminocidos ramificados e um outro -cetocido que intermedirio no catabolismo da valina (-hidroxi-isobutirato): estas molculas podem ser captadas pelo fgado e completarem a o processo catablico com formao de glicose (casos dos cetocidos derivados da valina e isoleucina) e corpos cetnicos (casos dos -cetocidos derivados da isoleucina e leucina) ou sofrer oxidao completa (a CO2) no prprio fgado.
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aminocidos ramificados (que podem ceder o grupo amina para formar o grupo -amina da glutamina) quer outros aminocidos que possam sofrer desaminao no msculo e ceder o NH4+ (que substrato da sinttase da glutamina) para formar o grupo 5-amida da glutamina. A glutamina, libertada pelo msculo, pode ser, directa ou indirectamente (via alanina e amnio formados nos entercitos a partir da glutamina), captada pelo fgado onde os carbonos podem gerar glicose e os azotos ureia. 11Para alm da ureia, um importante composto azotado da urina o io amnio (NH4+). A maior parte do amnio excretado na urina forma-se nas clulas tubulares renais por aco da glutamnase (ver equao 7) e da desidrognase do glutamato (ver equao 11): o rim capta glutamina do plasma (com origem no msculo e, em situaes de acidose, tambm no fgado) e usa os seus azotos para formar o amnio que excreta na urina. O valor do pKa do io amnio de cerca de 9,3 encontrando-se por isso na forma protonada em pHs fisiolgicos. O io amnio formado segregado para o lmen tubular representando uma forma de excreo de protes. A sntese e secreo de amnio pelo rim tm um papel homeosttico na regulao do pH do meio interno aumentando em situaes de acidose. Para se compreender esta ltima afirmao til escrever a equao que descreve o somatrio dos processos que levam oxidao completa da glutamina (C5H11O3N2) com gerao de amnia de forma a pr em evidncia que se gastam protes durante o processo (ver equao 21)4. De notar que a oxidao da glutamina com gerao de ureia no tem as mesmas consequncias no que se refere ao consumo de protes (ver equao 22). C5H11O3N2 + 4,75 O2 + 2H+ 2 NH4+ + 5 CO2 + 2,5 H2O C5H11O3N2 + 4,75 O2 CON2H4 + 4 CO2 + 3,5 H2O 12(21) (22)

Para alm da ureia e do amnio urinrios existem outras formas de eliminar o azoto que foi obtido atravs da ingesto de protenas. Essas outras formas so a eliminao urinria de creatinina (formada com azoto da arginina e da glicina) e de cido rico (formado com azoto das purinas que por sua vez veio da glicina, do aspartato e da glutamina) e a eliminao de protenas inteiras e outros produtos azotados nas fezes, tegumentos e secrees genitais e nasais. No seu conjunto cerca de 16% da massa das protenas azoto. No adulto, com 70 kg de peso e com uma dieta equilibrada do ponto de vista calrico, mesmo na ausncia de ingesto de protenas, um mnimo de cerca de 25g de aminocidos so diariamente perdidos (perdas obrigatrias de aminocidos). Porque o catabolismo dos aminocidos fica acelerado quando se ingerem protenas, para manter balano azotado nulo, h que ingerir mais aminocidos do que aqueles que so obrigatoriamente perdidos no contexto de uma dieta proteica nula. As estimativas actuais apontam para valores na ordem dos 0,66 g kg-1 dia-1 (46 g/dia num adulto de 70 kg) como correspondendo ao valor de ingesto proteica que supre as necessidades em 50% dos indivduos adultos [2]. Em geral, recomenda-se uma ingesto diria de, pelo menos, 0,83 g de protenas por kg de peso (58 g num indivduo adulto de 70 kg). Pelo menos no sentido que damos palavra reserva quando falamos do glicognio e da gordura dos adipcitos, os mamferos no fazem reservas de aminocidos nem de protenas. Embora em resposta ao aumento da insulina no perodo ps-prandial haja um aumento da sntese proteica e diminuio da degradao (acontecendo o contrrio quando a insulina desce) esta variao cclica diria na massa proteica muito pequena ( 0,3%) e, alm disso, as protenas tm papeis biolgicos que ficam comprometidos se a massa de protenas do organismo descer de forma aprecivel. Em geral a morte sobrevm quando, em consequncia de jejum ou m nutrio, se perdem cerca de 50% das protenas endgenas [3]. No caso do glicognio heptico 24 horas sem ingesto de glicdeos so suficientes para que este praticamente se esgote. No caso da gordura do tecido adiposo existem patologias congnitas compatveis com a vida (lipodistrofias) em que este tecido est praticamente ausente. Um adulto saudvel que no faz musculao, no est a recuperar de uma situao em que perdeu protenas endgenas, nem est a engordar, est em equilbrio azotado (tem um balano azotado nulo) e em resposta a um aumento da ingesto de protenas aumenta o catabolismo dos aminocidos. Para o total do azoto eliminado tambm contribui o azoto das protenas das clulas da pele ou das mucosas que no seu processo de renovao cclica descamam assim como as protenas da dieta cujo digesto e absoro incompleta. A digesto incompleta de protenas mais marcada no caso das protenas dos alimentos vegetais. Dependendo da dieta as perdas nas fezes podem constituir cerca de 20% do total do azoto

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De notar que a mesma equao tambm pode ser escrita pondo em destaque que se forma bicarbonato: C5H11O3N2 + 4,75 O2 2 NH4+ + 3 CO2 + 0,5 H2O + 2 HCO3-.

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eliminado diariamente sendo que o restante , quase todo , eliminado na urina. A percentagem de azoto eliminado como ureia varia com a quantidade de protenas ingeridas aumentando quando aumenta a quantidade de protenas na dieta. Nas dietas tpicas do ocidente cerca de 85% do azoto urinrio azoto ureico sendo o restante componente de diversos compostos azotados da urina (cido rico, creatinina, amnia, hipurato, fenil-acetil-glutamina, etc.). Assim, se admitirmos que ingesto de 100 g/dia de protenas (a ingesto mdia nos EUA) corresponde uma absoro de 80 g/dia a eliminao de ureia poderia ser de cerca de 23g/dia (80g * 0,16 * 60/28 * 0,85)6. 14A velocidade com que o azoto dos aminocidos convertido em ureia depende da velocidade de desaminao e oxidao dos aminocidos (catabolismo dos aminocidos) e da actividade das enzimas do ciclo da ureia. Muitas das enzimas envolvidas no catabolismo dos aminocidos tm Kms superiores s concentraes em que estes existem nas clulas, admitindo-se, por este motivo, que so sensveis a variaes na sua concentrao [4]. Em todas as clulas do organismo, mas particularmente no fgado que recebe directamente os aminocidos libertados aquando da digesto intestinal, o aumento de aminocidos livres pode ser uma consequncia de aumento da ingesto de protenas na dieta. A velocidade de sntese de ureia mnima quando a dieta no contm protenas mas contm glicdeos e , em termos calricos, capaz de colmatar a despesa energtica. Comparativamente com esta situao, o catabolismo dos aminocidos e a sntese de ureia maior quando a ingesto alimentar nula (apenas gua). Neste ltimo caso, a protelise endgena est aumentada fornecendo aminocidos como substratos da gliconeognese. A glicagina que aumenta nesta condio estimula a captao de aminocidos para o fgado, o seu catabolismo e a gliconeognese. Se o tempo de jejum se prolonga por vrios dias parte da despesa energtica do crebro pode passar a ser colmatada pelos corpos cetnicos. No entanto, mesmo nesta situao, cerca de metade da despesa energtica do crebro deriva da oxidao da glicose e a gliconeognese essencial para formar a glicose que consumida pelo crebro. Embora esta adaptao ao jejum (sntese de corpos cetnicos) permita que a degradao das protenas endgenas diminua medida que o tempo de jejum total se prolonga, a sntese de glicose no jejum total est em grande parte7 dependente da degradao das protenas endgenas e da converso dos aminocidos glicognicos em glicose. Acompanhando o aumento da sntese de corpos cetnicos, durante o jejum prolongado diminui a formao de T3 (hormona tiroideia) e esta diminuio provoca diminuio da degradao das protenas endgenas [4]. Um outro factor que pode influenciar a velocidade de oxidao e catabolismo dos aminocidos a composio aminoacdica da dieta. Se uma dieta deficiente num aminocido essencial a sntese proteica est prejudicada e aumenta a concentrao de aminocidos livres. Existem aminocidos que, em condies normais, seriam usados na sntese proteica e que, nestas circunstncias, vo sofrer catabolismo. Uma dieta deficiente num aminocido essencial provoca aumento do catabolismo dos outros aminocidos. A converso dos aminocidos em glicose ou a sua oxidao directa (via acetil-CoA) acompanhada da formao de ureia. As condies que levam ao aumento do catabolismo dos aminocidos tambm levam ao aumento da sntese de ureia. A activao das enzimas do ciclo da ureia , em geral, causada por aumento da sua sntese. No caso da sinttase de carbamil-fosfato I, a actividade depende estritamente da presena de um activador alostrico: o N-acetil-glutamato. A enzima responsvel pela sntese deste composto denomina-se sntase do N-acetil-glutamato (ver equao 23) e est tambm activada (aumento da sua sntese), provocando activao da sinttase de carbamil-fosfato I, quando a dieta rica em protenas. acetil-CoA + glutamato N-acetil-glutamato + CoA (23)

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1. Stipanuk, M. H. (2006) Biochemical, Physiological, Molecular Aspects of Human Nutrition, 2nd edn, Sunders, Elsevier., St. Louis. 2. Rand, W. M., Pellett, P. L. & Young, V. R. (2003) Meta-analysis of nitrogen balance studies for estimating protein requirements in healthy adults, Am J Clin Nutr. 77, 109-27.

Cerca de 0,3-0,5 g de azoto (correspondente a 2-3 g de protenas) eliminado por dia nos tegumentos (descamao da pele e formao de pelos e unhas), no suor, nas secrees nasais e genitais e nas perdas ao lavar os dentes. 6 16% a percentagem mdia da massa de azoto nas protenas; 60/28 a razo entre a massa molecular da ureia e a massa dos tomos de azoto na ureia. 7 Se ignoramos a glicose que se refaz a partir da reciclagem da alanina e do lactato nos ciclos da alanina e do lactato, parte da glicose formada de novo durante o jejum total resulta da converso heptica do glicerol libertado aquando da hidrlise dos triacilgliceris do tecido adiposo.

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Metabolismo do azoto e ciclo da ureia Rui Fontes 3. Dulloo, A. G., Gubler, M., Montani, J. P., Seydoux, J. & Solinas, G. (2004) Substrate cycling between de novo lipogenesis and lipid oxidation: a thermogenic mechanism against skeletal muscle lipotoxicity and glucolipotoxicity, Int J Obes Relat Metab Disord. 28 Suppl 4, S29-37. 4. Frayn, K. N. (2003) Metabolic regulation. A human perspective., 2nd edn, Blackwell Science, Oxford.

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