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MEMBRANA PLASMTICA
Ingrid Romer Hernn Sala Gabriela Gmez Silvia Mrquez

Introduccin
Las clulas estn separadas del medio que las rodea por una delgada lmina denominada membrana plasmtica, que define los lmites de las mismas. Hace 3700 millones de aos, la formacin espontnea de una estructura similar a la membrana plasmtica de las clulas actuales permiti aparicin de los primeros seres vivos. Sin esta barrera protectora, las clulas estaran expuestas a los rigores del mundo externo, no podran regular su medio interno y, en consecuencia, no serian viables. La membrana plasmtica no asla a la clula completamente sino que constituye una barrera altamente selectiva, que tiene la propiedad de regular el intercambio de materiales entre la clula y el medio que la rodea. La membrana es una estructura muy delgada: slo tiene un espesor de 6 a 10 nm (1nm=10 9 m). Por lo tanto, se necesitaran mil membranas plasmticas apiladas, una sobre otra, para igualar el espesor de esta hoja de papel. Precisamente debido a su delgadez, cuando se

examina una clula al microscopio ptico convencional, puede observarse sin dificultad el interior de la misma; en el mejor de los casos podr apreciarse el contorno de la membrana, pero nunca podr distinguirse su ultraestructura. Recin las primeras microfotografas al microscopio electrnico demostraron que la ultraestructura las membranas era siempre la misma. Esta estructura se denomin unidad de membrana y la misma no slo es vlida para la membrana plasmtica, sino para casi todas las membranas celulares.

Fig. 4.1 - Microfotografa electrnica de transmisin de una membrana plasmtica. Se pueden ver tres lneas paralelas, dos lneas densas alos electrones (2,5 - 3 nm) separada por una capa intermedia clara (3,5-4 nn). Este aspecto conocido como unidad de membrana no es reflejo de una estructura trilaminar a nivel molecular, sino es la expresin de como el osmio, usado como "colorante" se une a la membrana.

Funciones de la membrana plasmtica

Como ya se mencion, las membranas no son simples barreras sino que: Definen la extensin de la clula y establecen sus lmites. Constituyen barreras selectivamente permeables, dado que impiden el intercambio indiscriminado de sustancias entre el citoplasma y el medio extracelular. La membrana plasmtica, gracias a sus propiedades fisicoqumicas, est capacitada para transportar de un lado a otro de la misma determinados solutos, macromolculas y complejos macromoleculares. Sin embargo, hay molculas, que a pesar de ser toxicas para la clula,

pueden ingresar sin dificultad a la misma a travs de la membrana. Un ejemplo seria el CO (monxido de carbono). Controlan las interacciones de la clula con el medio extracelular (tanto con la matriz extracelular como con otras clulas vecinas). Permite a las clulas reconocerse, adherirse entre s cuando sea necesario e intercambiar materiales e informacin. Intervienen en las respuestas a seales externas a la clula. La membrana posee receptores, que son molculas o conjuntos de molculas, capaces de reconocer y responder a seales provenientes del medio extracelular portando informacin especifica. Cuando dichas seales llegan hasta la membrana plasmtica, se desencadenan seales internas en la clula, tanto activadoras como inhibitorias de distintos procesos celulares. Como ejemplos de estas seales externas podemos citar a los factores de crecimiento que favorecen la divisin celular o diversas hormonas como por ejemplo la insulina, que aumenta la sntesis de glucgeno. Singer y Nicholson propusieron en 1972 un modelo estructural para las membranas al cual denominaron modelo del mosaico fluido. De acuerdo al mismo las membranas son disoluciones bidimensionales de lpidos y protenas. Segn este modelo, la estructura de la membrana sera una delgada lamina formada por dos capas superpuestas de lpidos (tambin llamadas hemimembranas), con la fluidez propia de los aceites, en la cual se encuentran insertadas protenas. Esto le confiere el aspecto de un mosaico.

Fig. 4.2 -Esquema del "Modelo del mosaico fluido" de las membranas Las membranas no son estructuras estticas ni rgidas. Estn formadas por un conjunto de molculas hidrofbicas e hidroflicas que se mantienen unidas por enlaces, en general, no covalentes. Una de las principales caractersticas de las membranas biolgicas es su alto grado de fluidez. Esto implica que sus lpidos y protenas pueden desplazarse libremente en todas las direcciones, pero siempre sobre el plano de la membrana. De all entonces la denominacin de mosaico fluido; a esta propiedad tambin se la conoce como difusin lateral.

Como puede observarse en el esquema, las membranas tambin presentan glcidos unidos por enlaces covalentes a lpidos y protenas. Esto da lugar a los llamados glucolpidos y glucoprotenas, respectivamente. Estas membranas carecen de resistencia mecnica y en muchas clulas, como en el caso de hongos, bacterias y plantas estn reforzadas por paredes celulares. 1. COMPOSICIN DE LAS MEMBRANAS BIOLGICAS Todas las membranas biolgicas de los seres vivos, tanto la membrana plasmtica, como las de las organelas, estn formadas por: A. Lpidos B. Protenas C. Glcidos La proporcin de cada uno de estos componentes vara de acuerdo a la funcin que realiza cada tipo de membrana. Por ejemplo, las membranas mitocondriales tienen una proporcin muy elevada de protenas (ver Tabla 1). Tabla 1 Composicin de las membranas de diferentes clulas. (Los valores representados como % peso seco de la membrana) Glbulos Rojos Humanos Lpidos Fosfolpidos cido fosfatdico Fosfatidiletanolamina Fosfatidilcolina Fosfatidilserina Esfingomielina Cerebrsidos Colesterol Otros Lpidos Protenas Glcidos (o restos de glcidos en glicoprotenas) 30 a 40 20 a 25 < 1 5 7 5 6 <1 12 3 60 a 70 7 Staphiloccoccus aureus 20 20 <1 40 40 Mielina 60 a 70 25 a 30 0 5 10 5 5 10 15 15 20 a 30 Observada en cortes histolgicos

A. Lpidos
La variedad de lpidos presentes en las membranas es muy amplia; sin embargo, todos poseen una caracterstica en comn: son molculas anfipticas. Esto significa que sus molculas contienen una zona hidroflica o polar y una hidrofbica o no polar. Los fosfolpidos son los lpidos ms abundantes en las membranas. Debido a su carcter anfiptico, los fosfolpidos, en un medio acuoso se organizan espontneamente conformando

la denominada bicapa lipdica. Las cabezas polares estn orientadas hacia el medio acuoso (intra y extracelular) y las colas hidrofbicas hacia el medio lipdico, es decir, al interior de la bicapa, constituyendo la matriz de la membrana. A su vez, estas bicapas tienden a cerrarse espontneamente sobre s mismas formando vesculas, es decir, compartimientos cerrados en toda su extensin tridimensional, similares a una esfera.

Fig. 4.3 - Esquema de un fosfolpido.

Fig. 4.4 - Corte esquemtico de una

vescula de fosfolpidos.

La bicapa de fosfolpidos funciona principalmente como armazn estructural de la membrana y como barrera que impide el pasaje de sustancias hidrosolubles a travs de la misma; esto ltimo es debido al carcter fuertemente hidrofbico de la matriz de la membrana. Los fosfolpidos ms frecuentes de las membranas son la fosfatidiletanolamina, la fosfatidilcolina, la fosfatidilserina y la esfingomielina. Los fosfolpidos de las membranas son DIACILGLICERIDOS. La estabilidad de las bicapas lipdicas esta dada por: interacciones hidrofbicas entre las colas hidrocarbonadas. fuerzas de van der Waals entre las colas hidrofbicas. fuerzas electrostticas y puentes hidrogeno entre las cabezas polares de los lpidos, ya sea entre ellos mismos y con las molculas de agua de los medios extra e intracelular.

Como se notar todas estas son uniones dbiles (no covalentes) y le confieren simultneamente estabilidad y fluidez a la membrana. Las cadenas hidrocarbonadas de los cidos grasos que forman parte los fosfolpidos (tambin denominadas colas o grupos acilo), pueden presentarse:

saturados (sin dobles enlaces) monoinsaturados (con un nico doble enlace) poliinsaturados (ms de un doble enlace)

En general, los lpidos de membrana contienen un grupo acilo insaturado y otro saturado en su estructura.

Fig. 4.5 -Fosfatidiletanolamina-(fosfolpido de membrana)

Fig. 4.6 - Esquema de un fosfolpido con una cola saturada y una no saturada.

La presencia de cidos grasos insaturados aumenta la fluidez de la membrana, debido al quiebre de las colas a la altura de los dobles enlaces. Esto impide, o al menos dificulta, que las colas hidrocarbonadas se compacten, restringiendo as las interacciones entre ellas. El hecho de que uno de los grupos acilo de los fosfolpidos est saturado y el otro no, garantiza una buena fluidez dentro del rango de temperaturas fisiolgicas. Por otro lado, cuando las cadenas hidrocarbonadas son cortas, tienen menor superficie para interactuar entre s; esto ltimo tambin favorece la fluidez de las membranas. El colesterol es un esteroide que se encuentra en un alto porcentaje en la membrana plasmtica de las clulas animales. Su concentracin vara mucho de un tipo de membrana a otro; en animales hay membranas donde el colesterol constituye hasta el 50% del total de los lpidos. Contrariamente, la mayora de las clulas vegetales y bacterianas carecen de colesterol.

El colesterol, al ser tambin una molcula anfiptica, presenta una orientacin similar a la de los fosfolpidos: el grupo hidroxilo (polar) se orienta hacia el exterior de la bicapa y el sector hidrofbico hacia el interior de la misma.

Fig. 4.7 - Esquema de la ubicacin del colesterol en la membrana plasmtica Las funciones del colesterol se pueden resumir de la siguiente mane Inmoviliza los primeros carbonos de las cadenas hidrocarbonadas. Esto hace a la membrana menos deformable y menos fluida, es decir, la estabiliza. Sin colesterol, la membrana necesitara de una pared celular que le otorgue contencin mecnica. Previene el compactamiento de las cadenas hidrocarbonadas a bajas temperaturas, ya que evita que las colas se junten, aumenten las interacciones dbiles entre las mismas y se cristalicen (adopten una estructura muy compacta).

La cardiolipina es un derivado de los fosfolpidos que se encuentra en la membrana interna de la mitocondria. El dolicol es un lpido que se halla en el REG e interviene en la glicosilacin de las protenas. B. Protenas (Fig.4.8) Mientras que los lpidos ejercen principalmente una funcin estructural, las protenas no slo desempean un rol estructural sino que adems son las responsables de las funciones especficas de las membranas biolgicas. Estas segn su funcin pueden agruparse en: enzimticas, de transporte, receptoras y de reconocimiento. Diferentes membranas tienen distinta proporcin y composicin de protenas, de acuerdo a sus funciones. En otras palabras, son justamente las protenas las que le otorgan distintas funciones a las membranas. Estas en su mayora son protenas globulares (estructura terciaria o cuaternaria).

Segn su ubicacin en la membrana se clasifican en: -Protenas intrnsecas, integrales o transmembrana: Pueden atravesar total o parcialmente la bicapa, asomando a una o ambas superficies de la misma. nicamente pueden ser extradas de la membrana por medio de detergentes que rompen la bicapa. Tienen un sector hidrofbico, que es el que esta insertado en la membrana y una o dos regiones hidroflicas, expuestas a los medios intra y extracelulares (ambos acuosos). De lo anterior se deduce que estas protenas son molculas anfipticas. La porcin que atraviesa la membrana suele presentar una estructura de alfa hlice con una elevada proporcin de aminocidos hidrofbicos que interaccionan con las colas hidrocarbonadas de la matriz de la membrana. El sector proteico (tambin llamado dominio) expuesto a los medios acuosos suele tener estructura globular e interacciona con las cabezas polares de los fosfolpidos y con otras molculas a travs de uniones inicas y puente de hidrgeno. Dentro de las protenas integrales encontramos: Protenas monopaso: La protena atraviesa una sola vez la membrana. Protenas multipaso: La cadena polipeptdica atraviesa dos o ms veces la bicapa lipdica. Por lo tanto, esta posee varias regiones hidrofbicas insertadas en la matriz de la membrana alternadas con sectores hidroflicos que se exponen hacia los medios acuosos.

Fig. 4.8 -Asociacin de protenas de membrana con la bicapa lipdica: Transmembrana, atraviesan la membrana como -helice o como lminas plegadas cerradas. Perifricas unidas a protenas transmembrana por interacciones no covalentes dbiles y Perifricas unidas a lpidos mediante uniones covalentes. Algunas protenas multipaso atraviesan muchas veces la membrana y forman un cilindro hueco con un interior hidroflico por el que pueden pasar molculas pequeas solubles en agua. Este es el principio de las protenas canal que se analizaran mas adelante. Las protenas integrales pueden difundir lateralmente y rotar sobre su propio eje, pero no pueden realizar movimientos a travs del plano de la membrana, o ms sencillamente

movimiento flip-flop (ver ms adelante). Las protenas integrales suelen desplazarse acompaadas de los lpidos que las rodean ya que estos le ayudan a mantener su conformacin. Sin embargo, algunas protenas integrales estn ancladas a componentes del citoesqueleto y no pueden trasladarse. De esta manera intervienen en la morfologa de la clula, por ejemplo alargada (o ahusada), cbica, cilndrica, etc. -Protenas extrnsecas o perifricas: Se encuentran sobre la cara externa o tambin interna de la membrana y pueden estar ligadas tanto a las protenas integrales como a los fosfolpidos por uniones dbiles. Se pueden extraer fcilmente con tratamientos no drsticos. Cuando estas se ubican del lado citoplasmtico de la membrana suelen interactuar con el citoesqueleto. C. Hidratos de carbono Las membranas celulares contienen entre un 2-10% de glcidos. Estos se asocian covalentemente a los lpidos (glicolpidos) y a las protenas (glicoprotenas). Los glicolpidos (o glucolipidos) presentes en las membranas son los ganglisidos y cerebrsidos. Los ganglisidos se forman por la unin de un oligosacrido con la ceramida. La estructura de los cerebrsidos es similar, slo que el hidrato de carbono no es un oligosacrido sino una galactosa o una glucosa. (ver captulo de lpidos) Los hidratos de carbono de los glucolpidos y las glucoprotenas, en su mayora oligosacridos, suelen ubicarse en la cara no citoslica de la membrana plasmtica formando una estructura llamada glicoclix (Fig. 4.9 y 4.10), cuyas funciones se pueden resumir de la siguiente manera: Proteger a la superficie de la clula de agresiones mecnicas o fsicas. Como ejemplo podemos citar a las clulas situadas en la luz del intestino delgado que presentan un glicoclix muy pronunciado. Poseer muchas cargas negativas, que atraen cationes y agua del medido extracelular. Intervenir en el reconocimiento y adhesin celular. Actan como una huella dactilar caracterstica de cada clula, que permite distinguir lo propio de lo ajeno. Actuar como receptores de molculas que provienen del medio extracelular y que traen determinada informacin para la clula, por ejemplo, receptores de hormonas y neurotransmisores.

Fig. 4.9 - Microfotografa electrnica de un glicocalix de epitelio intestinal (izquierda).

Fig.4.10 Esquema del glicocalix de una clula eucariota Las diferencias entre los grupos sanguneos se hallan determinadas por ciertos oligosacridos muy cortos, presentes en las membranas plasmticas de los glbulos rojos o eritrocitos. Estos oligosacridos slo difieren en sus monmeros terminales y estn ligados a una protena transmembranosa o a una ceramida de la membrana plasmtica. Por ejemplo, los eritrocitos pertenecientes al grupo sanguneo A, presentan como monosacrido terminal una N-acetilgalactosamina y los del grupo B una galactosa. Cuando ambos monosacridos terminales estn ausentes estamos en presencia del grupo 0 (Fig.4.11).

Fig. 4.11 - Grupos sanguneos 2. FLUIDEZ DE LA MEMBRANA Como ya se mencion, las membranas son estructuras dinmicas donde los componentes pueden desplazarse en todas las direcciones sobre el plano de la bicapa. De ah que el modelo reciba el nombre de mosaico fluido.

Fig. 4.12 - Movimientos de los fosfolpidos en una bicapa lipldica 2.1. MOVILIDAD DE LOS COMPONENTES DE LAS MEMBRANAS Existen tres tipos de movimientos posibles en las membranas:

rotacin (sobre su propio eje) traslacin (o difusin lateral) sobre el plano de la membrana. flip-flop

El movimiento de flip-flop es el intercambio de fosfolpidos de una monocapa (o hemimembrana) a la otra; esta sumamente restringido, debido a la dificultad que posee la cabeza polar para atravesar el medio hidrofbico de la matriz de la membrana. De all que no sea un movimiento que ocurra de manera espontnea sino que est mediado por enzimas denominadas flipasas. Tanto los movimientos de difusin lateral como el de rotacin se llevan a cabo sobre la misma hemimembrana de la bicapa lipdica. 2.2. FACTORES QUE AUMENTAN LA FLUIDEZ DE LAS MEMBRANAS -cidos grasos insaturados -Baja concentracin de colesterol -Altas temperaturas -Colas hidrocarbonadas cortas (dificultan el empaquetamiento) Factores que favorecen la viscosidad Alto grado de saturacin y mayor longitud de las colas hidrocarbonadas. Menor temperatura del medio Factores que favorecen la fluidez Alto de grado de insaturacin y menor longitud de las colas hidrocarbonadas. Mayor temperatura del medio

Fig. 4.13 - Esquema de los fosfolpidos de membrana en estado viscoso y fludo. 2.3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA FLUIDEZ El ascenso de la temperatura aumenta la energa cintica entre las molculas y, por lo tanto, el movimiento de las colas hidrocarbonadas. Esto lleva a una disminucin de las interacciones atractivas entre las mismos y a un aumento de los movimientos de rotacin y

de difusin lateral. Por el contrario, una disminucin de la temperatura vuelve ms rgida a la membrana ya empaqueta las colas hidrofbicas de los fosfolpidos e impide sus movimientos. Si la temperatura desciende significativamente, la membrana puede llegar a cristalizarse, con la prdida consiguiente de muchas funciones vitales de la membrana. Los organismos que habitan regiones donde hay grandes amplitudes trmicas estacionales varan la composicin de los fosfolpidos de sus membranas en forma peridica, asegurando as una fluidez ms o menos constante durante todo el ao. Por otra parte, organismos que habitan ambientes extremos poseen composiciones fosfolipdicas muy particulares en sus membranas, por ejemplo, los que viven a temperaturas inferiores a los 0C tienen membranas muy ricas en lpidos poliinsaturados. 2.4.. DETERMINACIN DE LA FLUIDEZ DE LA BICAPA LIPDICA La fluidez de la membrana se pudo determinar experimentalmente tratando clulas con anticuerpos fluorescentes que eran reconocidos y se unan a las protenas (receptores) presentes en la membrana plasmtica. Gracias a esta tcnica, se pudo observar, a travs del microscopio, el desplazamiento de los receptores sobre la superficie de la membrana y su agrupamiento en un polo de la clula, donde posteriormente ingresaban por endocitosis (internalizacin a la clula, ver ms adelante). 3. ASIMETRIA DE MEMBRANA En ambas caras de la bicapa (tambin denominadas hemimembranas o monocapas) no se encuentran los mismos tipos de fosfolpidos. Si bien estos en su mayora se sintetizan en la cara citosolica del retculo endoplasmtico liso , luego, por medio de movimientos del tipo flip-flop (nicamente permitidos en el REL, gracias a la presencia de flipasas), se van ubicando del lado de la bicapa que les corresponda. Por ej., la fosfatidilcolina y la esfingomielina predominan en la cara no citosolica de la membrana (Fig. 4.7).

La asimetra estructural de las membranas suele manifestarse a travs de una asimetra funcional. Esto significa que las funciones presentes en la cara citosolica no son las mismas
que aparecen en la cara no citoslica. Por ejemplo, en el caso de la membrana plasmtica, las molculas que intervienen en el reconocimiento celular se ubican casi exclusivamente en la cara expuesta hacia el medio extracelular, pues no tendra mucho sentido que dichas molculas estuviesen expuestas hacia el citoplasma. 4. FUSIN DE MEMBRANAS Las membranas tienen una elevada capacidad para fusionarse entre s. Por ejemplo, cuando una vescula se aproxima a la membrana plasmtica, a una cisterna o, inclusive, a otra vescula, al entrar en contacto ambas superficies, las dos membranas se fusionan, constituyendo a partir de ese momento una sola membrana. Este fenmeno explica el transito de sustancias desde un compartimiento celular a otro, y desde las endomembranas a la membrana plasmtica. (ver ms adelante endo y exocitosis). Este es el principio en el que se basa la administracin de frmacos vehiculizadas dentro de liposomas, que son vesculas fosfolipdicas artificiales que contienen alguna droga de inters teraputico. Cuando el liposoma se aproxima a la clula blanco (o target), la membrana del liposoma se fusiona con la membrana plasmtica liberando su contenido directamente en el citoplasma de la clula. Este fenmeno permite que el contenido del liposoma slo sea captado por

ciertos tipos celulares y no por otros. Tcnicas basadas en esta propiedad de las membranas se utilizan, por ejemplo, para combatir clulas tumorales.

Fig. 4.14 -Fusin de dos membranas 5. PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS CELULARES Como ya se ha mencionado la membrana plasmtica es una barrera con permeabilidad selectiva que regula el intercambio de sustancias entre el citoplasma y el medio extracelular. Sus propiedades aseguran que las sustancias esenciales, como la glucosa, los aminocidos y los lpidos entren a la clula fcilmente, que los intermediarios metablicos permanezcan en la clula y que los productos de desecho, como la urea, abandonen la misma. Todo esto permite a la clula mantener el medio interno relativamente constante. La membrana, debido a sus caractersticas hidrofbicas, es impermeable a la mayor parte de las molculas hidrosolubles, como la glucosa, los aminocidos y los iones en general. En cambio, las molculas hidrofbicas, siempre y cuando su tamao no sea demasiado grande, pueden atravesarla fcilmente. Podemos observar en la figura 4.15, que nicamente atravesarn la membrana las molculas no polares y pequeas como el O2, CO2, N2 e incluso el CO (txico), compuestos liposolubles como los cidos grasos y esteroides y, adems, a pesar de ser molculas polares, el glicerol, la urea y el agua. El resto de las molculas se transfiere de un lado a otro de la membrana gracias a protenas integrales que actan como transportadores; sin estos transportadores dichas molculas no pueden difundir a travs de las membranas.

Fig. 4.15 - Permeabilidad de la membrana a los diferentes solutos 6. MECANISMOS DE TRANSPORTE TRANSMEMBRANA

Fig. 4.16 - Distintos mecanismos y estructuras utilizados por los solutos para atravesar las mem-branas de una clula. Antes de continuar con los mecanismos de transporte es preciso hacer una breve aclaracin acerca del fenmeno de difusin. Si colocamos un soluto en un solvente, las molculas de soluto, debido a la energa cintica de las molculas presentes en la solucin, difundirn desde la zona donde se encuentran en mayor concentracin hacia la zona donde se hallan en menor concentracin. Al cabo de un tiempo toda la solucin presentar la misma concentracin de soluto. Por ejemplo, si agregamos una gota de tinta a un vaso con agua, la tinta difundir a travs del lquido y al cabo de un tiempo todo el vaso presentara una tincin pareja.

Fig. 4.17 - Difusin de una sustancia disuelta en un solvente. Para lograr esto no se requiere aporte externo de energa, sino que es suficiente con la energa cintica propia de las molculas. Si tenemos en cuenta que la temperatura de un medio es, de alguna manera, un ndice de la energa cintica de las molculas presentes en el mismo, es fcil deducir que a mayor temperatura, ms importante ser el fenmeno de difusin. Podemos definir entonces a la difusin como el movimiento de molculas desde una zona de mayor concentracin hacia una de menor concentracin. A la diferencia de concentracin que existe entre una zona y otra se la denomina gradiente.

a) DIFUSION SIMPLE Cuando la difusin se realiza entre compartimientos separados por una membrana permeable a ese soluto, se denomina difusin simple y, como ya se dijo, no requiere de otra energa adicional que no sea el movimiento de las molculas, desplazndose stas a favor de su gradiente de concentracin. En otras palabras, la difusin simple no requiere gasto de ATP, ya que es un fenmeno espontneo. Las molculas que se movilizan por difusin simple a travs de la membrana son las no polares y pequeas, las liposolubles y las polares pequeas, pero sin carga elctrica neta, como el H 2O. En el caso particular del H2O, la difusin simple se denomina smosis. El pasaje de agua a travs de la membrana u smosis se lleva a cabo siempre en forma espontnea y muy rpidamente. El H2O difundir desde el compartimiento de menor concentracin de solutos o medio hipotnico, al de mayor concentracin de solutos o medio hipertnico, de modo tal de igualar las concentraciones en ambos compartimientos. Al cabo de un tiempo, el resultado sern dos medios isotnicos, o sea, la concentracin a ambos lados de la membrana ser la misma.

Fig. 4.18 -Efecto del proceso osmtico sobre una clula viva. Si colocamos una clula, por ejemplo un glbulo rojo, en una solucin hipertnica (agua salada, por ejemplo) el H2O tender a salir por smosis hacia el medio extracelular, encogiendo o crenando al glbulo rojo. En cambio, si el medio extracelular es hipotnico (agua destilada, por ejemplo) el H2O penetrar en la clula, hinchndola y, finalmente, ocasionando su ruptura o lisis. Cabe hacer aqu una breve aclaracin: un medio no es por s mismo ni hipertnico ni hipotnico; siempre que se use esta terminologa lo que se esta haciendo es comparar un medio con respecto a otro . Por ejemplo, A puede ser hipertnico con respecto a B y, al mismo tiempo, A tambin puede ser hipotnico con respecto a C. Es decir, A tiene una concentracin de solutos intermedia. Por otra parte, se dice que dos medios son isotnicos cuando su concentracin de solutos es la misma. Ms adelante veremos (en Acuaporinas) que adems de la smosis existen otros tipos de transporte de H2O a travs de las membranas biolgicas.

Fig. 4.19 - Osmosis. Efecto de los cambios de concentracin de soluto en (a) clulas animales y (b) clulas vegetales b) DIFUSIN FACILITADA Aquellas molculas que no pueden atravesar fcilmente las membranas por difusin simple debido a su polaridad y/o a su tamao (por ej. glucosa, aminocidos, iones, etc.), podrn hacerlo si estn presentes sus respectivos transportadores. Dichos transportadores son protenas integrales de membrana y se los puede agrupar del siguiente modo: Protenas canal o canales inicos Protenas carrier o permeasas La difusin facilitada ocurre siempre a favor del gradiente, por lo tanto no requiere gasto de energa adicional. Sin embargo, puede tratarse de un gradiente de concentracin (las molculas se dirigen del compartimiento de mayor concentracin hacia el de menor concentracin) o de un gradiente de potencial elctrico (el soluto con carga elctrica, independientemente de su signo, se desplazar de una zona donde la carga sea mayor hacia otra donde la carga sea menor). Estas protenas transportadoras presentes en las membranas presentan caractersticas muy similares a las enzimas: Saturabilidad (se saturan al alcanzar la mxima velocidad de transporte)

 Especificidad (reconocen a sus ligandos a travs de un sitio especfico) Pueden ser inhibidas por determinadas sustancias. Cuando las protenas transportadoras se saturan de solutos a transportar, alcanzan su mxima velocidad de transporte y por lo tanto las molculas a ser transportadas debern esperar a que se desocupen los sitios de unin. b1) Canales inicos: Los canales inicos son poros o tneles formados por una o varias protenas transmembrana. En general, son de tipo multipaso, con un interior hidrofilico. Existen canales inicos en todas las clulas, tanto en la membrana plasmtica como en las membranas de los organoides. Son altamente selectivos, porque cada canal slo puede transportar un tipo de ion (K+, Na+, etc.). Los iones se mueven a travs del canal a una velocidad muy elevada (10 8 iones por segundo). El transporte de un ion es impulsado por el gradiente electroqumico. O sea que un ion puede difundir de un lado a otro de la membrana, gracias a la diferencia de concentracin como a la diferencia de carga elctrica a ambos lados de la membrana. La mayora de los canales no permanecen abiertos permanentemente, sino que se abren en respuesta a estmulos. Estos estmulos pueden ser tanto la presencia de una sustancia inductora como una modificacin de la carga elctrica de la membrana (modificacin del potencial elctrico). Los canales que se abren o cierran en presencia de sustancias inductoras (ligandos) son llamados dependientes de ligando y los otros, dependientes de voltaje.

Fig. 4.20 - Diferentes tipos de canales.

b2) Carriers o permeasas: Al igual que los canales inicos, las permeasas estn formadas por protenas transmembrana multipaso. Suelen transportar una gran variedad de iones como el HCO3- y otras molculas polares sin carga como la glucosa. Este tipo de protenas fijan una nica molcula de sustrato (o unas pocas) a la vez, y a continuacin sufren un cambio conformacional reversible que les permite transportar el soluto de un lado al otro de la membrana (translocacin). Aqu vale hacer otra aclaracin: para entender la difusin facilitada no hay que pensar si una sustancia entra o sale de la clula, lo importante es considerar que se est movilizando algo a favor del gradiente (qumico o elctrico) gracias a la accin de protenas transportadoras . Por esta razn es que no se requiere de energa adicional, no se requiere gasto de ATP, ya que es el propio gradiente el que impulsa el pasaje a travs de los transportadores. Este tipo de transporte es siempre sin gasto de energa y a favor del gradiente electroqumico. La velocidad de transporte es muy inferior al de los canales inicos.

Fig. 4.21 -Transporte facilitado por medio de una permeasa. Existen tres tipos de permeasas: -MONOTRANSPORTADORA O UNIPORTE: Transfieren UN solo tipo de soluto de un lado al otro de la membrana. (ej.: transporte de glucosa en la mayora de las clulas animales, desde el medio extracelular, la sangre, donde la concentracin es mayor, hacia el interior de las mismas donde es menor) -COTRANSPORTADORA O SIMPORTE: Transfieren DOS tipos de solutos, ambos en el mismo sentido. -CONTRATRANSPORTADORA O ANTIPORTE: Transfiere DOS tipos distintos de solutos en sentidos contrarios. Es decir, uno ingresa al citoplasma si, y solo si, simultneamente el otro sale.

Fig. 4.22 - Tres tipos de transporte mediados por protenas transportadoras Los uniportes transportan las molculas a favor de su gradiente de concentracin. Como ejemplo podemos citar la glucosa y distintos aminocidos. En cambio, los otros dos tipos de transporte acoplan el movimiento de un tipo de ion o molcula a favor de su gradiente de concentracin con el de otro tipo de molcula o ion en contra de su gradiente de concentracin. O sea lo que hacen es acoplar un transporte energticamente favorable con otro que no lo es. Un ejemplo de COTRANSPORTE sera el transporte de Na+ y glucosa en la membrana plasmtica de las clulas intestinales (ver ms adelante) y uno de CONTRATRANSPORTE, el transporte de Cl- y HCO3- en la membrana de los glbulos rojos. Tanto el cotransporte como el contratransporte, son tambin llamados transportes acoplados, ya que no se pueden llevar a cabo si no estn presentes ambos tipos de solutos. Casos particulares de transporte pasivo: Ionforos y Aquaporinas IONOFOROS

Fig. 4.23 - Mecanismo de pasaje de iones a travs de ionforos transportadores mviles

Estas sustancias tienen la propiedad de poder incorporarse a las membranas y aumentar la permeabilidad a ciertos iones. En general son fabricados por bacterias como mecanismos defensivos. Existen dos tipos distintos: -Transportadores mviles: Se unen reversiblemente a un ion que se encuentra en el medio con mayor concentracin, giran en la bicapa y lo liberan en el otro lado de la membrana. Ejemplo: Valinomicina (Fig.4.23). - Formadores de canales: Son protenas con estructura helicoidal, en cuyo interior de la hlice hay una regin hidroflica que permite el paso de iones monovalentes (con una sola carga elctrica). Ejemplo: Gramidicina (Fig. 4.24).

Fig. 4.24 - Esquema de la estructura del canal de gramicidina ACUAPORINAS Son canales especiales con estructura helicoidal que permiten el paso selectivo de H 20. No son canales inicos. En ciertas clases de clulas, por ejemplo en algunas clulas renales, se requiere un mayor transporte de H20 que el logrado exclusivamente con la difusin simple (osmosis). La estructura de las acuaporinas es semejante a la de los ionoforos formadores de canales. c) TRANSPORTE ACTIVO Las clulas no pueden depender nicamente del transporte pasivo dado que deben importar, por un lado, molculas que estn en menor concentracin en medio extracelular que en el citoplasma y, por otro, necesitan mantener constante la composicin inica intracelular. Ambas funciones se llevan a cabo por medio del transporte activo. Es un transporte que se realiza en contra del gradiente, ya sea este de concentracin o elctrico y, en consecuencia, se requerir gasto de energa en forma de ATP. El transporte activo se realiza por medio bombas y tambin presenta formas de monotransporte, cotransporte y contratransporte. Posee las mismas caractersticas de especificidad y saturabilidad que la difusin facilitada, aunque difiere de sta por realizarse contra el gradiente electroqumico. El

transporte activo esta desfavorecido termodinmicamente (es endergnico) y se da solamente cuando est acoplado (directa o indirectamente) a un proceso exergnico como, por ej., la conversin de ATP a ADP + Pi. Debido a esto, las bombas se suelen denominar ATPasas de transporte. Existen muchos tipos de ATPasas distintas. Aqu vamos a hablar de las ms importantes, que son la Bomba de Na+-K+ (bomba sodio potasio)y la de K+/H+.

Fig. 4.25 - Esquema de la ATPasa.

Las sustancias que se movilizan por transporte activo son en muchos casos las mismas que lo hacen a travs de difusin facilitada, la diferencia fundamental es que en el primer caso lo hacen en contra del gradiente mientras que en el segundo lo hacen a favor.

Bomba Na+/K+
Est presente en todas las membranas plasmticas de las clulas animales. Tambin se la conoce como Na+-K+ ATPasa. Es un complejo proteico formado por cuatro subunidades, todas ellas protenas integrales de la membrana plasmtica. Su funcin es expulsar Na+ al espacio extracelular e introducir K+ al citosol. Ambos son movilizados en contra de su gradiente electroqumico, estableciendo as diferencias de concentracin y carga entre el espacio extra e intracelular para ambos iones. Debido a que se esta transportando simultneamente dos solutos distintos en sentidos opuestos, estamos en presencia de un sistema de contratransporte. Es importante recordar que, si bien el Na+ sale y el K+ ingresa a la clula, ambos lo hacen en contra de su gradiente y, en consecuencia, hace falta hidrolizar ATP para movilizarlos. La Bomba Na+-K+ tiene simultneamente funciones de protena transportadora y de ATPasa (hidroliza ATP para obtener energa). Por lo menos un tercio de la energa que consume una clula animal se destina para impulsar esta bomba. En las clulas nerviosas, donde la

actividad elctrica es sumamente importante, este valor asciende al 60%. Cada ATPasa puede hidrolizar hasta 100 molculas de ATP Mecanismo de accin de la Bomba Na+/K 1) Tres iones de Na+ se unen al dominio citoplasmtico de la ATPasa, debido a la gran afinidad que existe entre ambos. 2) Luego se hidroliza el ATP y se fosforila la protena. Esto lleva a un cambio conformacional en la misma. 3) Esto permite la translocacin de los iones Na+ hacia el espacio extracelular. 4) A continuacin, dos iones K+ del medio extracelular, donde su concentracin es menor, se unen a un sitio receptor de K+ accesible ahora desde el exterior de la clula. La unin del K+ con la protena induce la liberacin del fosfato. 5) La desfosforilacin de la bomba, restituye la conformacin original. 6) Esto permite la translocacin de los iones K + hacia el citoplasma. Se puede comenzar nuevamente el proceso. Por cada molcula de ATP que se hidroliza se posibilita el transporte de 3 iones Na+ hacia espacio extracelular y de 2 iones K + al citoplasma. Las transferencias de iones se hallan acopladas, y por lo tanto no pueden realizarse una independientemente de la otra.

Fig. 4.26 Mecanismo de accin de la ATPasa Na+/K+ Las funciones de la bomba de Na+/K+ son: a) Mantener diferencias en las concentraciones de Na+ y K+ intra y extracelulares. b) Generar un potencial elctrico de membrana, que es una diferencia de voltaje, o sea de carga, entre ambos lados de la membrana. Al bombear tres iones en una direccin y slo dos en otra, se genera un potencial elctrico negativo del lado interno de la membrana con respecto al externo. El lado citoslico es normalmente ms negativo que el espacio extracelular. c) Intervenir en la regulacin del volumen celular.

d) Generar diferencias de concentracin de Na+ o K+ para que otros transportadores pasivos utilicen indirectamente la energa potencial acumulada en este gradiente. Como ejemplo podemos citar al: -COTRANSPORTE Na+/GLUCOSA (ya citado en difusin facilitada). Esta situacin se da en las membranas apicales de las clulas del intestino delgado o en membranas de clulas renales, donde deber absorberse glucosa desde la luz del intestino o de los tbulos renales, aunque las concentraciones extracelulares sean bajas. Gracias a la accin de la bomba Na+-K+ se expulsan iones Na+ a travs de la membrana basal de la clula. De este modo, la concentracin de Na+ intracelular se mantenida baja. En la regin apical de la membrana se encuentra una permeasa pasiva cotransportadora de Na + y glucosa. El Na+ ingresa de este modo a favor de su gradiente electroqumico al interior de la clula y arrastra a la glucosa con l, que ingresa de este modo en contra de su gradiente de concentracin, gracias al sistema de cotransporte. Este tipo de transporte tambin se denomina transporte acoplado a gradientes inicos o TRANSPORTE ACTIVO SECUNDARIO (ya que indirectamente est ligado a una bomba). Posteriormente, la glucosa atravesar la clula y saldr por difusin facilitada, a favor de su gradiente de concentracin, hacia el torrente sanguneo.

Fig. 4.27 Mecanismo de co-transporte Na+/glucosa en epitelio intestinal Hay otro tipo de ATPasa, presente en las membranas internas mitocondriales y de cloroplastos, que juega un papel muy importante en la obtencin de la energa. Acta como una ATPsintetasa (sintetiza ATP), gracias al gradiente de H + que se genera a ambos lados de las membranas internas de cloroplastos y mitocondrias. Dicho proceso se ver con detenimiento en los captulos de Respiracin y fotosntesis.

Existen otro tipo de bombas, como las de las membranas del Retculo endoplasmtico liso de las clulas musculares, que se encargan de bombear iones Ca++ hacia el interior del REL y mantener baja la concentracin citoslica Ca++ , o las de los lisosomas, que bombean H+ hacia el interior de los mismos, disminuyendo as el pH intralisosomal. d) TRANSPORTE EN MASA (Fig. 4.28) Hasta aqu analizamos el modo en el que los iones y las pequeas molculas atraviesan la membrana celular. Pero como ingresan o abandonan la clula partculas de mayor tamao. Esto se realiza por medio del TRANSPORTE EN MASA. Este tipo de transporte involucra siempre gasto de ATP, ya que la clula realiza un movimiento general de su estructura (en particular de la membrana plasmtica y del citoesqueleto -ver funciones del citoesqueleto). El mecanismo por medio del cual los materiales entran a la clula se denomina endocitosis y aquel por el cual la abandonan, exocitosis. d1) ENDOCITOCIS En este proceso una extensin de la membrana rodea progresivamente al material que ser internalizado, luego se produce una gemacin o invaginacin de la membrana, y finalmente sta se separa de la membrana, formando una vescula endoctica. Posteriormente, el material incorporado es digerido por los lisosomas. Las fibras de actina y miosina del citoesqueleto intervienen en este proceso. Se distinguen 3 tipos de endocitosis: -Fagocitosis -Pinocitosis -Endocitosis mediada por receptor A) Fagocitosis: Implica la ingestin de partculas de gran tamao, como microorganismos, restos celulares, inclusive de otras clulas, por medio de vesculas llamadas fagosomas. Estos fagosomas suelen presentar un gran tamao. La fagocitosis slo se da en determinados tipos de clulas. En algunos organismos unicelulares (protistas) constituye un modo de alimentacin: engloban grandes partculas, por ej. bacterias, por medio de prolongaciones de la membrana plasmtica llamados pseudpodos y las internalizan, formndose as un fagosoma o vescula fagoctica. Posteriormente ser degradada por las enzimas lisosomales. Para ampliar consultar en la bibliografa: Lisosomas. En los animales slo se da en algunas clulas altamente especializadas, llamadas clulas fagocticas (macrfagos de los tejidos y glbulos blancos sanguneos denominados neutrfilos). En estos casos la funcin no es de ndole nutricional, sino defensiva. Las clulas fagocticas defienden nuestro organismo contra infecciones, ingiriendo microorganismos patgenos. Otra funcin sera eliminar clulas muertas o daadas, o restos

celulares (por ejemplo glbulos rojos no funcionales). El proceso fagoctico se desencadena por la unin del material a endocitar con ciertos receptores de la membrana plasmtica que reconocen al mismo. B) Pinocitosis: Es la incorporacin de fludo y de partculas disueltas en l por medio de pequeas vesculas. Es un proceso inespecfico y la velocidad de ingestin es muy elevada. Por ejemplo, un macrfago puede ingerir por hora un cuarto de su volumen celular. El tamao de estas vesculas endocticas en mucho menor que el de los fagosomas. C) Endocitosis mediada por receptor: En muchos aspectos es similar a la anterior, salvo que en este proceso, la endocitosis es mucho ms selectiva. Determinadas molculas (ligandos) que la clula desea incorporar son reconocidos por receptores especficos, ubicados en la membrana plasmtica. Los ligandos se unen a estos receptores y estos complejos ligando-receptor confluyen, gracias a la fluidez de la membrana, a determinadas zonas de la misma, donde sern endocitados. La invaginacin de la membrana se denomina en este caso fosita revestida. Esto se debe a que las vesculas presentan en su cara citosolica un revestimiento de protenas caractersticas, en este caso de clatrina. La funcin de la misma, sera entre otras, permitir que se produzca la invaginacin. A continuacin se forma la vescula recubierta o revestida que se fusionar con un conjunto de vesculas llamadas endosomas, donde se clasifican las molculas endocitadas y se las separa de los receptores. Este proceso puede incrementar mil veces la eficiencia de internalizacin de un determinado ligando, sin tener que incrementar la absorcin de fluido extracelular. Un ejemplo importante de este proceso es la captacin de colesterol por las clulas animales. El colesterol, debido a su carcter hidrofbico, es transportado por la sangre unido a protenas, formando complejos llamados lipoprotenas de baja densidad (LDL). Estas LDL se unen a receptores ubicados en la superficie celular y los complejos LDLreceptor son internalizados en vesculas revestidas y luego transferidas a los endosomas, previa liberacin de la cubierta de clatrina. En el interior de los endosomas, el LDL se disocia del receptor y este es reciclado nuevamente a la membrana plasmtica para captar nuevamente LDL.

Fig.4.28- Tipos de transporte en masa d2) EXOCITOSIS Es el proceso inverso a la endocitosis. En este caso, material contenido en vesculas intracelulares tambin llamadas vesculas de secrecin es vertido al medio extracelular. La secrecin de sustancias comienza generalmente con estmulos provenientes del medio extracelular, que inducen a las vesculas de secrecin, ubicadas en las cercanas de la membrana, a fusionarse con la misma y volcar su contenido al medio extracelular. As por ejemplo se liberan las protenas de exportacin (ver funciones del Aparato de Golgi) y los neurotransmisores (para ampliar esto ultimo consultar Sinapsis nerviosa en la bibliografa) En este caso, la membrana de la vescula pasa a formar parte de la membrana plasmtica. Es decir, hay ganancia de membrana, mientras que en la endocitosis hay prdida de membrana.

AUTOEVALUACIN

1. Esquematice el modelo de mosaico fluido de la membrana plasmtica. Indique sus componentes. 2. Enumere las funciones ms importantes de la membrana plasmtica. 3. Conteste las siguientes preguntas con respecto a la estructura de la membrana plasmtica: a) Cul es la caracterstica comn a todos los lpidos de membrana? b) Por que se dice que la membrana plasmtica es asimtrica? c) De qu depende el grado de fluidez de la membrana? d) Dnde espera encontrar ms protenas en la membrana interna de una mitocondria o en el retculo liso? Por qu? 4. Resuelva el siguiente problema: En sus estudios sobre las clulas, Ud. descubre una nueva protena, a la que llama esgfun. Esta protena tiene un dominio A extracelular y un dominio C intracelular. Ud. descubre que esgfun es mvil, recorre lo largo de toda la membrana en 15 minutos. No importa cuantas veces la observe, el dominio A siempre est del lado extracelular y el C del lado intracelular. a) Explique por qu se mantienen los dominios de esta manera. b) Si Ud. fuera capaz de extraer todo el colesterol de esta membrana, qu cambios observara en los movimientos de esgfingolpidos?. 5. Clasifique a los distintos tipos de transporte considerando los siguientes criterios : a) Gasto de energa: pasivos (sin gasto) o activos (con gasto). b) Uso de protenas transportadoras: mediado (uso) o no mediado (no uso). c) Nmero y direccin de partculas transportadas: uniporte, simporte y contratransporte. 6. Realice un cuadro comparativo donde indique las semejanzas y diferencias entre el transporte activo y la difusin facilitada. 7. Explique los distintos tipos de ionforos. 8. Resuelva el siguiente problema: A Ud. se le provee de un cultivo de clulas en su medio de cultivo. Se encuentran en dicho medio muchas clulas por ml. Se le agrega una sustancia X y se puede medir la concentracin interna de esta sustancia a travs del tiempo de esta manera ud puede conocer como es tomada por las clulas. Describa (use grficos recuerde los de enzimas) como podra determinar si X entr a la clula por difusin simple, transporte facilitado o transporte activo. Puede asumir que tiene al alcance de su mano todas las tcnicas que necesita. 9. Conteste las siguientes preguntas sobre tipos de transporte

a) Qu tipo de mecanismo utiliza la glucosa para ingresar a las clulas epiteliales del intestino desde la luz de este al interior de las mismas. De dnde se obtiene la energa? b) Los iones de Ca++ son eficientemente incorporados en muchas clulas vivientes, incluso cuando esto se realiza en contra de gradiente. Proponga un mecanismo para explicar esto. c) Las neuronas y otras clulas excitables tienen membranas que son polarizadas. Existe una diferencia de voltaje que es negativo en el interior de la clula y positivo en el exterior. Explique cmo esta polarizacin es mantenida en una neurona en reposo. Cules son los iones ms importantes que participan? existen iones ms importantes que otros? Cmo se crea y se mantiene esta diferencia de potencial? d) Basado en sus conocimientos sobre los distintos tipos de transporte atravs de la membrana, proponga un mecanismo para explicar como estransportada la galactosa al interior de las clulas epiteliales del intestino.Incluya un diagrama de su mecanismo elegido (existe ms de unaposibilidad, Ud. necesita solamente explicar uno) e) Cules son los distintos mecanismos por los que puede ingresar el agua y los iones en la clula? f) Describa los mecanismos de transporte en masa y cite ejemplos.

Responda las siguientes preguntas de opcin mltiple:

1. En que se diferencian las membranas de una clula eucaritica: a- los fosfolpidos se encuentran solo en algunos tipos de membrana. b- solo algunas membranas tienen permeabilidad selectiva. c- solo algunas membranas tienen lpidos anfipticos. d- algunas protenas son propias de cada membrana. e- todas son correctas. 2. Cul de los siguientes procesos incluye todos los dems de la lista? a- smosis. b- difusin de un soluto a travs de la membrana. c- difusin facilitada. d- transporte pasivo. e- transporte de un ion a favor de gradiente.

3. Si una ameba es isotnica respecto a una solucin que es hipertnica para un cangrejo, en cul de estos organismos ocurrir un ingreso netos de agua al sumergir ambos en la solucin? a- en la ameba. b- en el cangrejo. c- en ninguno de los dos. 4. Cul de los siguientes factores podran influir en la fluidez de la membrana? a- una proporcin grande de fosfolpidos insaturados. b- una baja temperatura. c- una proporcin grande de fosfolpidos saturados. d- un potencial alto de membrana. e- ninguna es correcta. 5. Las clulas incorporan lipoprotenas utilizando: a- fagocitosis b- endocitosis mediada por receptor. c- exocitosis. d- transporte activo. e- endocitosis a granel.

EL NCLEO CELULAR

Silvia Mrquez- Andrea Lassalle- Viviana Sabbatino- Gladys Glvez

INTRODUCCIN
El ncleo es la estructura ms destacada de la clula eucarionte, tanto por su morfologa como por sus funciones. Su tamao es variable (5 a 10 mm) al igual que su ubicacin siendo en la mayora de los tipos celulares central. El ncleo tiene tres funciones primarias, todas ellas relacionadas con su contenido de ADN. Ellas son: 1. Almacenar la informacin gentica en el ADN. 2. Recuperar la informacin almacenada en el ADN en la forma de ARN. 3. Ejecutar, dirigir y regular las actividades citoplasmticas, a travs del producto de la expresin de los genes: las protenas. En el ncleo se localizan los procesos a travs de lo cuales se llevan a cabo dichas funciones. Estos procesos son: 1. La duplicacin del ADN y su ensamblado con protenas (histonas) para formar la cromatina. 2. La transcripcin de los genes a ARN y el procesamiento de stos a sus formas maduras, muchas de las cuales son transportadas al citoplasma para su traduccin y 3. La regulacin de la expresin gentica.

ESTRUCTURA DEL NCLEO

(Fig. 10.1)

El ncleo est rodeado por la envoltura nuclear, una doble membrana interrumpida por numerosos poros nucleares. Los poros actan como una compuerta selectiva a travs de la cual ciertas protenas ingresan desde el citoplasma, como tambin permiten la salida de los distintos ARN y sus protenas asociadas. La envoltura nuclear es sostenida desde el exterior por una red de filamentos intermedios dependientes del citoesqueleto, mientras que la lmina nuclear, la cual se localiza adyacente a la superficie interna de la envoltura nuclear, provee soporte interno. El ncleo tambin tiene un nucleoplasma, en el cual estn disueltos sus solutos y un esqueleto filamentoso, la matriz nuclear la cual provee soporte a los cromosomas y a los grandes complejos proteicos que intervienen en la replicacin y transcripcin del ADN.

Los cromosomas aparecen ocupando lugares especficos. Los genes que codifican productos relacionados, aunque estn localizados en diferentes cromosomas, pueden estar ubicados prximos en el ncleo interfsico. Por ejemplo, los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 poseen un gran nmero de genes que codifican para ARNr. Dichos cromosomas estn agrupados de tal forma que los genes de los ARNr estn todos juntos y confinados en el nuclolo, el lugar donde se sintetizan, procesan y ensamblan los ARNr. Esta separacin fsica asegura que los ARNr puedan ser eficientemente ensamblados dentro de las subunidades ribosomales. En el ncleo, los genes transcripcionalmente activos tienden a estar separados de los inactivos. Los activos se encuentran ubicados centralmente, mientras que los silentes estn confinados prximos a la envoltura nuclear. Tan pronto como las clulas entran en mitosis o meiosis, los fragmentos de la matriz nuclear dirigen la condensacin de los cromosomas, constituyndose en la parte central de los mismos.

Fig. 10.1 - Esquema de un ncleo interfsico

LA ENVOLTURA NUCLEAR
La envoltura est formada por dos membranas concntricas interrumpidas por poros nucleares y por la lmina nuclear.

Fig. 10.2- Microfotografa electrnica de la envoltura nuclear Las membranas delimitan un espacio de 10 a 50 nm, el espacio o cisterna perinuclear. La membrana externa en contacto con el citoplasma tiene ribosomas adheridos, que sintetizan las protenas que se vuelcan al espacio perinuclear. El espacio perinuclear se continua con el REG. La membrana interna posee protenas integrales que le son propias, que se unen a la lmina nuclear y a los cromosomas. La lmina nuclear, capa fibrosa de 10 a 15 nm en la que apoya la membrana interna, est formada por protenas del tipo de los filamentos intermedios, polmeros de lamina o laminina nuclear. Ellas se unen a las protenas integrales de membrana. La fosforilacin de las laminas provoca el desensamble de la lmina nuclear causando la ruptura de la envoltura al inicio de la divisin celular. La lmina nuclear confiere estabilidad mecnica a la envoltura nuclear. Adems, al interactuar con la cromatina participa en la determinacin de la organizacin tridimensional del ncleo interfsico. Si bien la formacin de la lmina no se requiere durante los pasos iniciales, la organizacin de la envoltura es indispensable para el crecimiento posterior y el mantenimiento de su integridad. Las laminas se incorporan luego que la cisterna perinuclear rodea al ADN y se inicia el transporte entre el ncleo y el citoplasma. (Fig. 10.3) La envoltura nuclear es un derivado del sistema de endomembranas, siendo esto evidente al inicio de la divisin celular, cuando la envoltura se desorganiza y pasa a formar parte del sistema de cisternas y vesculas del retculo endoplsmico. La aparicin de la envoltura nuclear permiti que los eucariontes aislaran los procesos genticos principales, como la autoduplicacin del ADN o la sntesis de ARN. Adems esto

posibilit que el ARNm se modifique dentro del ncleo antes de ser traducido en los ribosomas. Estas modificaciones no ocurren en los procariontes, ya que a medida que la ARN polimerasa sintetiza el ARN, simultneamente el extremo 5 se une al ribosoma y comienza la traduccin.

Fig. 10.3 - Mecanismo de formacin y desintegracin de la membrana nuclear

COMPLEJOS DE PORO NUCLEAR

La envoltura nuclear presenta estructuras discoidales llamadas complejos de poro nuclear (CPN) (Fig. 10.4). El nmero de CPN es variable, incrementndose a medida que aumenta la actividad celular. En una clula de mamfero hay entre 3000 a 4000 complejos de poro. Cada CPN es una estructura macromolecular compleja constituida por un gran nmero de protenas de disposicin octamrica. Est formado por:

Ocho columnas proteicas, que forman las paredes laterales del poro.
Un anillo externo, formado por ocho unidades proteicas. Un anillo interno, tambin con estructura octamrica. Protenas de anclaje que fijan cada columna al espacio perinuclear. Protenas radiales que se proyectan desde las columnas hacia la luz del poro, a manera de diafragma Protenas fibrilares fijas al anillo interno y externo. En la cara nuclear convergen para formar una canastilla o cesta. A lo largo de estas fibrillas se ubican nucleoporinas que intervienen en el transporte de sustancias a travs del poro.

 Un poro central o abertura.

Fig. 10.4 - Esquema del complejo de poro nuclear La luz de los CPN suele presentarse obturada por las protenas que circulan a travs del poro, como por las carioportinas (Kap) que actan como eficientes transportadores en el trfico ncleo/citoplasma. Los CPN presentan uno o varios canales acuosos a travs de los cuales las pequeas molculas solubles en agua difunden (transporte no regulado). Las molculas de mayor peso molecular son transportadas en forma activa, por lo que requieren energa y molculas transportadoras. Se importan dentro del ncleo: Las protenas sintetizadas en el citoplasma necesarias para ensamblar los ribosomas. Los factores de transcripcin requeridos en la activacin o inactivacin de los genes. Los factores de empalme necesarios en el proceso de maduracin de los ribosomas. Las molculas y macromolculas ensambladas y exportadas desde el ncleo al citoplasma incluyen: Las subunidades ribosomales ARNm ARN de transferencia

 Factores de transcripcin que son devueltos al citoplasma para ser reutilizados. Los mecanismos implicados en el transporte a travs del poro son diferentes al transporte de protenas en las membranas de otros organelos . Por ejemplo, las protenas nucleares son transportadas a travs del poro manteniendo su conformacin plegada, por el contrario las protenas que no se localizarn en el ncleo se despliegan durante el transporte. Los complejos de poro nuclear hacen de la envoltura nuclear una barrera selectiva entre el ncleo y el citoplasma. Estos complejos constituyen la principal va de comunicacin entre el compartimiento nuclear y citoplasmtico de la clula ante el pesado trfico molecular. Aun cuando las protenas pequeas y otras molculas viajan a travs de los canales perifricos, las protenas de gran tamao deben poseer una etiqueta para ingresar por el canal central. Estas protenas sintetizadas en el citoplasma contienen la seal de localizacin nuclear (nuclear signal localization, NSL). Tampoco los ARN pueden salir de ncleo por s mismos. Ellos salen a travs del complejo de poro con una protena especial que posee una seal nuclear de exportacin (nuclear export signal, NES). Ambas NSL y NES consisten en una secuencia corta de aminocidos, muchos de los cuales tienden a estar ubicados centralmente dentro de las protena. Observemos en la Fig. 10.4, como las proyecciones filamentosas desde la cara citoslica del complejo pueden enlazar protenas, conducindolas dentro del poro central. Los filamentos citoslicos, el poro central y la canasta nuclear se proyectan dentro del compartimiento nuclear. Se cree que la canasta puede ser un rea importante de paso para la preparacin de las ribonucleoprotenas (RNP) antes de ser exportadas. Las molculas de mayor tamao requieren de una protena transbordadora o carioportina. La superfamilia de carioportinas esta integrada por: importinas . exportinas y transportinas .

IMPORTACIN DE PROTENAS (Fig. 10.5)

Las importinas son heterodmeros, formados por dos subunidades, la subunidad-a se une a la NSL de la protena nuclear permitiendo la unin con la subunidadad-b. Esta unin origina una importina funcional que lleva unida a la protena nuclear a ser transportada. El complejo importina funcional se pone en contacto con los filamentos citoslicos, donde guiado por las nucleoporinas (Nup), llega al poro central. La translocacin de complejo importina/carga es regulado por la pequea RanGTPasa [1] , que se une a la subunidad b de la importina. Esta b-importina es la encargada de interactuar con el poro provocando su dilatacin y posibilitando el ingreso de la protena nuclear. La translocacin de protenas es un proceso activo. Cuando el complejo penetra al interior del ncleo, las subunidades de importina se separan y la carga es liberada. La disociacin de las subunidades causa entonces un nuevo cambio en su forma, dejando al descubierto la NES de cada subunidad. Otras protenas en el poro central reconocen la NES y retornan las subunidades al citoplasma.

Fig. 10.5 - Modelo de mecanismo de importacin a travs del CPN

EXPORTACIN DE ARN
Los ARN maduros se asocian a protenas llamadas transportinas, las cuales actan como transbordadores permitiendo el pasaje de ARN al citoplasma. En la fig. 10.6 se esquematiza como el ARNm es llevado fuera del ncleo. Los ARNm maduros que presentan la poli A se asocian con varias protenas, formando una partcula de ribonucleoprotena (RNP). Estas partculas se mueven linealmente a travs de la canasta nuclear. Al igual que las importinas, las RNP son recicladas hacia el ncleo. En el citoplasma, las CRBP ( del ingls, cytoplasmic RNA-binding proteins) reemplazan a las RNP para guiar a los ARNs a sus destinos citoslicos correctos.

Fig. 10.6 - Modelo de mecanismo de exportacin de ARNm a travs del CPN

CROMOSOMAS Y CROMATINA
El ncleo contiene los cromosomas de la clula. Cada cromosoma consiste en una molcula nica de ADN con una cantidad equivalente de protenas. Colectivamente, el ADN con sus protenas asociadas se denomina cromatina. La mayor parte de las protenas de la cromatina consisten en copias mltiples de cinco clases de histonas. Estas protenas bsicas son ricas en residuos de arginina y lisina cargados positivamente. Por esta razn se unen estrechamente con los grupos fosfatos (cargados negativamente) del ADN. La cromatina tambin contiene pequeas cantidades de una amplia variedad de protenas no histnicas y RNP. La mayora de ellas son factores de transcripcin (por ej., el receptor esteroide), siendo su asociacin con el ADN pasajera. Estos factores regulan que parte del ADN ser transcripta en ARN.

NIVELES DE ORGANIZACIN DE LA CROMATINA

La observacin a travs del microscopio ptico de un ncleo interfsico, nos permite distinguir dos tipos de cromatina. La eucromatina o cromatina laxa, de localizacin central, y la heterocromatina o cromatina densa, en la periferia del ncleo (Fig.10.7). La heterocromatina representa aproximadamente el 10% del total de cromatina y es considerada transcripcionalmente inactiva (Fig. 10.8).

La eucromatina se encontrara al menos en dos estados, la eucromatina accesible, que representa alrededor del 10%, donde se encuentran los genes que se estn transcribiendo y la eucromatina poco accesible, ms condensada (pero menos que la heterocromatina), donde estn los genes que la clula no est transcribiendo. Si el ncleo celular se incuba con nucleasas, enzimas que digieren el ADN, las secuencias que primero se digieren son las que portan los genes expresados por la clula, lo que corrobora el menor grado de condensacin de la eucromatina.

Fig. 10.7 - Microfotografa electrnica del ncleo de un hepatocito. a. eucromatina; b. RER

Fig. 10.8 - Microfotografa electrnica del ncleo de un linfocito. a. eucromatina; b. heterocromatina, c. mitocondria

Fig. 10.9 - H1 y formacin de la fibra de 10 nm Cuando el cromosoma en interfase se esparce artificialmente sobre agua, tiene la apariencia de un collar de perlas. Las perlas son los nucleosomas, las unidades de enrollamiento de la cromatina. (Fig. 10.10b) Los nucleosomas estn formados por un centro o "core" de histonas. Dicho centro posee dos copias de cada una de las siguientes histonas: H2A; H2B; H3 y H4 Alrededor del centro de histonas, 146 pares de bases del ADN se enrollan en dos vueltas. La unin de las histonas al ADN no depende de una secuencia particular de nucletidos, sino de la secuencia de aminocidos de la histona. Las histonas son unas de las molculas ms conservadas durante el transcurso de la evolucin. La histona H4 en el ternero difiere de la H4 de la planta de poroto en slo 2 residuos de aminocidos de una cadena de 102. Alrededor de 60 pares de bases de ADN unen un nucleosoma con el prximo. Cada regin de unin es el ADN espaciador. La quinta histona, la H1, conecta a los nucleosomas y acta como una banda de goma, mantenindolos juntos dentro de una misma cuerda enrollada. Esta estructura se conoce como fibra de 10nm, siendo el primer grado del empaquetamiento de la cromatina. (Fig. 10.9)

Los nucleosomas se organizan, a su vez, en fibras de 30nm (solenoide), girando a manera de resorte alrededor de un eje virtual. Esta estructura es mantenida por la interaccin de las H1 de nucleosomas cercanos. (Fig. 10.10c) En el siguiente nivel de empaquetamiento, las fibras de 30 nm se organizan en una serie de bucles o asas superenrolladas (Fig. 10.10d; Fig. 10.11). Estos bucles se estabilizan gracias a la interaccin con las protenas de la matriz nuclear o andamiaje nuclear (scaffold).

Fig. 10.10 - Modelo de empaquetamiento de la cromatina Cada bucle de cromatina representa un dominio funcional o unidad de replicacin (Fig. 10.10e). Estos dominios contienen alrededor de 100.000 pares de bases, extensin de ADN suficiente para acomodar varios genes de tamao promedio. Algunos genes, sin embargo,

pueden abarcar varios dominios adyacentes de un cromosoma. Cada cromosoma puede tener cien o ms dominios.Durante la profase, los cromosomas aparecen en forma ms condensada, alcanzando la cromatina su mayor nivel de condensacin en metafase(Fig. 10.10f). La organizacin de los cromosomas envuelve la fosforilacin de la H1 y otras protenas, lo cual causa el plegamiento y empaquetamiento an ms compacto de la cromatina. El andamiaje o matriz nuclear se convierte en el centro de la estructura del cromosoma, y como la compactacin contina, ste se pliega modo de acorden.

Fig. 10.11- Empaquetamiento de la fibra de 30 nm El grado de condensacin de los dominios de cromatina se mantiene principalmente debido a la asociacin con la matriz nuclear y a protenas asociadas como la topoisomerasa II o girasa, encargada de controlar el grado de superenrollamiento del ADN (Fig. 10.11). La unin entre la cromatina y la matriz se da a nivel de zonas altamente conservadas, denominadas secuencias SAR o MAR (scaffold associated regions/ matrix attachment regions). Las SAR son regiones de varios cientos de pares de bases ricas en residuos de adenina y timina, abundantes en la heterocromatina. Con coloraciones especiales los cromosomas, revelan diferencias estructurales de importancia funcional. Las bandas oscuras consisten en cromatina altamente condensada, mientras que las bandas claras se corresponden con cromatina ms laxa. El examen de la cromatina en bandas claras y oscuras revela que ambos tipos de cromatina estn acomodados en bucles de distintos tamaos y que a su vez se proyectan desde el andamiaje plegado. El andamiaje est muy plegado en la heterocromatina, y es ms lineal en las bandas de eucromatina, formando bucles ms amplios. Las histonas de la eucromatina estn fuertemente acetiladas. Estos cambios afectaran el grado de empaquetamiento de la eucromatina, hacindola ms accesible para la transcripcin de sus genes. Las caractersticas de la hetero y eucromatina son: Tabla 10.1 - Caractersticas de la Cromatina

Tipo de cromatina Eucromatina Heterocromatina

Estado fsico Laxa condensada

Cambio qumico Acetilada Metilada

Tipo de genes Activos Silentes

Replicacin Fase S temprana Fase S tarda

Los cromosoma en metafase tambin poseen un revestimiento de RNP. Dicho revestimiento deriva de los componentes del nuclolo. Estos cromosomas se constituyen en el vehculo para dividir el material nucleolar entre las futuras clulas hijas. El empaquetamiento de la cromatina permite confinar al ADN dentro del ncleo La molcula de ADN de un cromosoma humano contiene 50 x 106 pares de nucletidos en el cromosoma ms pequeo (1.7 cm con la molcula extendida) a 250 x 106 pares de nucletidos en el ms largo ( 8.5 cm). Midiendo extremo con extremo el total de cromosomas de una clula humana diploide, el ADN se extiende ms de 2 metros. El empaquetamiento del ADN en forma de cromatina, no solamente le permite entrar dentro de los lmites del ncleo, sino tambin lo protege del ataque de las nucleasas.

EL CROMOSOMA EUCARIOTA (Fig.

millones de pares de nucletidos.

10.12)

Cada cromosoma eucariota consiste en una molcula simple de ADN de alrededor de 150

La molcula de ADN en el cromosoma eucariota es lineal, por lo tanto posee dos extremos (en contraste con el cromosoma bacteriano que es circular). La molcula de ADN de un cromosoma tpico eucariota contiene: Un conjunto lineal de genes que codifican para ARN y protenas interrumpido por Muchas secuencias de ADN no codificante. El ADN no codificante incluye: Secuencias de aproximadamente 170 nucletidos de ADN satlite, repetidas miles de veces, que corresponden al centrmero. Secuencias repetitivas en los extremos del cromosoma llamadas telmeros. Mltiples secuencias sealizadoras altamente conservadas, denominadas origen de replicacin (ORI) , necesarias para que se realice la duplicacin del ADN en un tiempo breve.

Fig. 10.12- Secuencias de un cromosoma eucariota estable en las diferentes etapas del ciclo celular El centrmero es una constriccin primaria localizada centralmente o hacia los extremos de cada cromosoma. El ADN centromrico como ya mencionamos es altamente repetitivo y se encuentra siempre condensado siendo parte de la heterocromatina.

Fig. 10.13- Sntesis de telmeros por la telomerasa. a) La telomerasa se une al telomero; b) La telomerasa alarga los extremos de la cadena 3`; c) La telomerasa avanza; d) La ADN polimerasa sintetiza la cadena retrasada. Los telmeros son cruciales en la vida de la clula. Ellos son necesarios para la duplicacin completa del cromosoma, los protegen de las nucleasas, evitan que los extremos del cromosoma se fusionen entre s y facilitan la interaccin del cromosoma con la envoltura nuclear. Los telmeros de las clulas humanas contienen la secuencia 5'TTAGGG3, que se repite aproximadamente 2000 veces. 5 '... ..TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG..... 3 ' 3 '... ..AATCCC AATCCC AATCCC AATCCC A..... 5 ' La cadena rica en guanosina corre en direccin 5' a 3', extendindose 12 a 15 nucletidos ms all de la cadena rica en citosina, formando un apndice en una de las cadena en cada extremo del cromosoma. Este desnivel se mantiene de generacin en generacin por medio de una enzima especial, la telomerasa, que agrega nuevas unidades al extremo 3' de la cadena rica en guanosina (Fig. 11.13). La telomerasa es una ribonucleoprotena, la cual provee un molde de AAUCCC que gua la insercin de la secuencia TTAGGG. Entonces la telomerasa es una retrotranscriptasa, sintetiza ADN a partir de un molde de ARN. Las clulas con telomerasa activa pueden compensar el acortamiento de los telmeros durante la duplicacin del ADN. La telomerasa activa se encuentra solamente en: Las clulas de la lnea germinal, incluyendo clulas troncales embrionarias Eucariotas unicelulares Clulas cancerosas

Los cromosomas se diferencian por la ubicacin del centrmero

Durante la mayor parte de la vida de la clula, los cromosomas son demasiado largos y tenues para ser vistos bajo un microscopio.

Fig. 10.14- Microfotografa electrnica de un cromosoma metafsico Antes de que una clula se divida, cada cromosoma se duplica (durante la fase S del ciclo celular). Al inicio de la divisin celular, los cromosomas duplicados se condensan en estructuras que pueden teirse con facilidad (por ello denominadas cromosomas), pudindose observar bajo el MO. La condensacin es tal que el cromosoma es aproximadamente 10.000 veces ms corto que la molcula de ADN que contiene (Fig. 10.14). A primera vista, los cromosomas duplicados se mantienen juntos por el centrmero. Mientras estn juntos, es comn llamar a cada parte del cromosoma duplicado, cromtida hermana. Esto no debe confundirnos, cada una de las "cromtidas hermanas" es un cromosoma completo. El cinetocoro es una estructura proteica discoidal que forma parte del centrmero y ayuda a separar las cromtidas hermanas. Es el sitio de unin con los microtbulos del huso, que contienen los motores de dinena que tiran a los cromosomas en la anafase. Adems proveen una plataforma para ensamblar y movilizar las protenas que construyen el huso. La posicin del centrmero, determina el largo de los brazos del cromosoma; en base a esto se puede clasificar a los cromosomas en: (Fig. 10.15) Metacntricos: el centrmero en posicin central determina brazos de igual longitud Submetacntricos: un par de brazos es ms corto que el otro, pues el centrmero se encuentra alejado del centro. Acrocntricos: el centrmero se halla prximo a uno de los extremos, por lo tanto uno de los brazos es casi inexistente.

Fig. 10.15- Tipos de cromosomas Los cromosomas acrocntricos poseen una masa de cromatina llamada satlite, en el extremo del brazo corto. El satlite se halla aislado del resto del cromosoma por la constriccin secundaria. La zona aledaa al satlite de los cromosomas acrocntricos contribuye a formar el nuclolo (Fig. 10.16) El ms corto de los dos brazos del cromosoma se llama p; el ms largo es el brazo q.

Fig. 10.16- Partes de un cromosoma mittico. Todas las especies tienen un nmero caracterstico de pares de cromosomas homlogos llamado nmero diploide (2n). El nmero diploide del hombre es 46. El cariotipo es una representacin grfica o fotogrfica de los cromosomas presentes en el ncleo de una sola clula somtica de un individuo. Cada miembro del par de cromosomas homlogos proviene de cada uno de los padres del individuo cuyas clulas examinamos. El cariotipo de la mujer contiene 23 pares de cromosomas homlogos, 22 pares son autosomas y el par restante, cromosomas sexuales, ambos " X".

El cariotipo del hombre contiene los mismos 22 pares de autosomas y 1 par de cromosomas sexuales, un cromosoma sexual "X" y un cromosoma sexual "Y" (un gen en el cromosoma Y designado SRY es el que pone en marcha el desarrollo de un varn, por lo tanto determina el sexo). El anlisis del cariotipo involucra la comparacin de cromosomas por su longitud, la ubicacin de los centrmeros y la ubicacin y los tamaos de las bandas G. Durante la mitosis, los 23 pares de cromosomas humanos se condensan y son visibles con un microscopio ptico. Preparacin de un Cariotipo: La preparacin de un cariotipo normalmente involucra bloquear las clulas (glbulos blancos) durante la mitosis con colchicina y marcar los cromosomas condensados con tincin Giemsa. La tincin marca las regiones de los cromosomas que son ricos en pares de nucletidos entre A -T produciendo una banda oscura, la banda G. Luego de la tincin, los cromosomas se fotografan, se recortan y se ordenan de acuerdo a su longitud. Los de igual tamao se aparean segn la ubicacin de su centrmero. Una error comn es suponer que cada banda representa un slo gen. En realidad las bandas ms pequeas contienen ms de un milln de pares de nucletidos y potencialmente cientos de genes. Por ejemplo, el tamao de una banda pequea es igual a toda la informacin gentica de una bacteria. El anlisis del cariotipo es una de muchas tcnicas que nos permiten investigar las miles de enfermedades genticas que se pueden encontrar en los seres humanos.

Fig. 10.17 - Cariotipo femenino normal: Los autosomas se ordenan en grupos por tamao y posicin del centrmero.

Fig. 10.18 - Mapa estndar (Idiograma) de patrones de bandeo del cromosoma 2. Los nmeros corresponden a las regiones y bandas. A la derecha , idiograma del cariotipo humano masculino.

El nuclolo
En el nuclolo tiene lugar la formacin de subunidades ribosmicas, la sntesis y procesamiento de ARNr y actualmente se considera que desempea un importante papel en la regulacin del ciclo celular. [2] El nuclolo es un aglomerado de fibras de cromatina de distintos cromosomas. En el hombre, los pares 13,14, 15, 21 y 22, aportan sectores de cromatina que forman el nuclolo. Todos estos cromosomas son acrocntricos y presentan constricciones secundarias denominadas organizadores nucleolares (NOR), donde estn los genes que codifican ARNr (Fig. 10.19).

Fig. 10.19 - Esquema de nuclolo indicando los bucles de los 10 cromosomas con los genes para el ARNr

Fig. 10.20 - Microfotografa electrnica del nuclolo. NE, Envoltura nuclear; NO. Organizador nucleolar; PG, Zona granular; PF, Zona fibrilar. El nuclolo aparece como una estructura simple carente de componente membranoso, en la que diferenciamos dos regiones: Una zona fibrilar central, formada por ADNribosmico y ARNr naciente Un zona granular perifrica donde los grnulos estn formados por las subunidades ribosmicas en proceso de ensamblado (Fig. 10.20). Los nuclolos, al igual que la envoltura nuclear desaparecen en la mitosis y se reorganizan alrededor de los segmentos de ADNr, que como su nombre lo indica, codifica ARNr. Siendo

el ARNr el ms abundante dentro de los tipos de ARN, existen mltiples copias del gen que lo codifica. El genoma humano presenta alrededor de 200 copias del gen para ARNr. Estos genes que promedian los 10.000 nucletidos se localizan en tndem. Cada gen est separado por ADN espaciador y presenta asociado una molcula de ARN polimerasa I. De cada enzima parten perpendicularmente los ARNr nacientes, tomando la apariencia caracterstica de un rbol de navidad. Cada gen produce un transcripto llamado ARNr 45S que ser luego procesado (Fig. 10.21) El tamao del nuclelo vara entre clulas y en la misma clula segn su actividad, pues si bien la velocidad de transcripcin puede acelerarse, el ensamblado de las subunidades ribosomales requiere de un tiempo ms o menos constante; es por ello que en los nuclolos grandes observamos mayor proporcin de componente granular.

Fig. 10.21 - Microfotografa electrnica de los genes nucleolares (ADNr) durante la transcripcin. Observe como la longitud de los transcriptos primarios aumenta a medida que nos alejamos del punto de inicio.

AUTOEVALUACIN
1) La eucromatina se caracteriza por: a- ser transcripcionamente inactiva b- teirse debilmente c- presentarse altamente condensada d- formar parte de genes que no se expresan 2) En el nuclolo se sintetizan:

a- Precursores de ARNr b- ARNt c- Pre ARNm d- ARNm 3) Los organizadores nucleolares aportan informacin para la sntesis de: a- ARNm b- ARNr c- ARNt d- Ribosomas 4) La composicin qumica y funcin de las histonas son respectivamente: a- protenas bsicas y forman parte en la estructura de la cromatina b- protenas bsicas cuya nica funcin es regular la expresin de los genes c- son protenas cidas e intervienen en la estructura de la cromatina d- son protenas cidas e intervienen en la sntesis de ADN polimerasa. 5) El andamiaje o matriz nuclear: a- est formado exclusivamente por lminas b- se asocia a la cromatina a nivel de las SAR/MAR del ADN c- est ms replegado en la eucromatina d- se desorganiza durante la divisin celular 6) Presentan seal de localizacin nuclear: a- las hormonas esteroides b- todas las riboprotenas c- los factores de transcripcin d- todas las anteriores son correctas 7) Los dominios funcionales de la cromatina:

a- aparecen por empaquetamiento de la fibra de 10 nm b- dependen exclusivamente de la interaccin con la H1 c- representan individualmente un gen d- funcionan como unidades de replicacin del cromosoma. 8) El pasaje de molculas a travs de los CPN: a- no es regulado y requiere de etiquetas o seales en las molculas transportadas b- no es regulado para molculas pequeas y solubles que circulan por los canales perifricos c- siempre es regulado y no depende del tamao de la molcula a transportar d- requiere que todas las molculas a ser transportadas tengan una NSL 9) Cul de las siguientes afirmaciones es FALSA con respecto a la telomerasa? a- es la enzima encargada de formar los telmeros b- es una ARN polimerasa c- se inactiva poco despus del nacimiento d- las clulas cancerosas conservan la telomerasa siempre activa 10) Un investigador inyecto un cultivo celular con suero anti-laminina, y observ: a- que la clulas no pudieron dividirse b- que las clulas luego de la mitosis no pudieron organizar su envoltura nuclear c- que los complejos laminina/antilamina se acumularon dentro del ncleo d- que la envoltura nuclear formada resulto frgil e inestable