El

pelitre

espaol

'Pyrethrum

cineraraefolium" Vis. Por

Obdulio Fernndez y Carlota Capdevila

El cultivo del pelitre se ha extendido rpidamente por toda Espaa, pero no se conoce dato alguno referente a su riqueza en principios insecticidas. Se iniciaron los cultivos de pelitre de Dalmacia por i n i c i a t i v a de un industrial francs, M . Caulet (1), en 1892, efectundose un ensayo prctico en e l Parque de Barcelona, donde se cultivaron semillas importadas directamente de Dalmacia, y ms tarde, en 1894, se sembr tina hectrea de terreno en Granollers, con resultados tan satisfactorios que despus de diez aos se hicieron las primeras plantaciones industriales en Aragn, en la provincia de Huesca, cerca de Jaca, y en 1907 se cultiv en Tarragona, extendindose despus por Aragn y Andaluca, merced a la campaa reiterada del profesor de la Universidad de Granada doctor Serrano. A la propiedad insecticida del pelitre se ha aadido en los ltimos aos otra derivada de ella, cual es l a parasiticida interna; de aqu qu se emplee, a lo que parece con cierto xito, para combatir Ascaris lumbricoides, Trichocephalus y Taenia. En cuanto a la parasiticida externa, debe mencionarse e l empleo de emulsiones de piretrina para tratar l a sarna producida por Sarcoptes. Adems de los aspectos indicados existe otro importante para los pases en que se desarrollan los mosquitos: e l pelitre es un buen lrvicida, no en forma de polvo, sino en extractos obtenidos con disolventes (1) Tesis Doctoral. Uni. M o n t p e l l i e r , por M. Angelin, pgs, 2 8 3 1

32

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

neutros. Los estudios de Gingsburg (2) acreditan a los extractos de pelitre como eficaz larvicida, que podran ensayarse en las diversas formas propuestas por e l autor, en las regiones paldicas nacionales, por los organismos del Estado. La agricultura, o ms bien l afitoteraputica,han ampliado e l uso del pelitre a la defensa contra las epidemias de que son vctimas los vegetales que utilizan el hombre y los animales para l a alimentacin. El ingeniero francs Robin ha roto una lanza en pro del pelitre nacional, suplantado por e l polvo de Derris y las preparaciones rotenonadas. En 1936 escribe que se emple e l pelitre largamente contra la Doryphora de las patatas y contra los gusanos de los racimos de uvas, as como para combatir los Eudemis y los Cochylis, solo y mezclado con polvo de Derris. N o hay grandes diferencias en las cifras de piretrina;; que ccntienen las muestras espaolas con las exticas, a pesar di las discrepancias de los procedimientos analticos; pero existe l a posibilidad de mejorar las cualidades del polvo comercial y de los extractos y de exaltar la s n t e s i s natural de las piretrinas por medio del cultivo en distintos terrenos y abonos. En muchos pases productores se han hecho campaas nacionales para l a mejora de l a industria pelitrera y los Gobiernos han solicitado informacin de los ms hbiles tcnicos de otros pases, al objeto de mejorar las cualidades del pelitre, previo estudio de los terrenos a cultivar, de los mtodos de recoleccin y desecacin y del empaquetado para lafinalidadcomercial. Quede consignado que l a causa impulsora de este estudio fue ver en la realidad que las muestras de origen nacional eran de menos e f i cacia insecticida para las moscas que las ya acreditadas extranjeras, en particular las del Japn.

II. LA E D A D D E LAS F L O R E S Ha sido mucho tiempo creencia muy generalizada, y comunicada a uno de nosotros en conversacin por un especialista, que e l pelitre debe recogerse cuando los capullosfloralesno se han abierto. Sin em-

( 2 ) "Pyrethrum as a mosquito l a r v i c i d e " . Proce. 1 7t h An. Meet. N. J . Mosq u i t o Extermin Assoa, 1 9 3 0 , pg. 57.

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

33

bargo, investigaciones subsiguientes han llevado a los agricultores a l convencimiento de que lasflorestienen ms abundancia en piretrinas cuanto ms desenvueltas se hallen, y en e l libro tan conocido de Gnadinger, "Pyrethrum Flower", se exhibe en l a pgina 112 una magn f i c a fotografa de f l o r e s en tres grados de desarrollo, en l a que se seala como ms adecuada para l a recoleccin l a ms desarrollada. Del estudio hecho por varios especialistas ingleses y norteamericanos se i n f i e r e que l a cantidad de piretrinas va creciendo durante l a maduracin.

Confloresabiertas del pelitre de la Casa de Campo de Madrid, conservado cuatro aos, se han obtenido unas cifras de piretrinas bastante anlogas a los pelitres ms acreditados de Europa, sin agregarles antioxgenos ni sustancias conservadoras. Las muestras de l a provincia de Primorska (Yugoslavia) son las ms abundantes en piretrinas, casi siempre en nmeros prximos al 8 por 1.000, segn datos publicados por Gnadinger y Corl. Las espaolas, analizadas segn la tcnica de estos investigadores, a Casa de Campo son menos ricas en piretrinas, exceptundose las de l de Madrid, que pueden rivalizar en este aspecto con ellas. Tienen, sin embargo, ms piretrinas que las procedentes de Rusia, Bulgaria y Suiza. Como es sabido, las muestras del Japn en todas las cosechas superan a las europeas por su peso en piretrinas, casi siempre superior al 10 por 1.000. Algunas plantas de Kenya (frica) han dado cifras prximas al 14,4 por 1.000.

III. C O M P O S I C I N

QUMICA

La composicinqumicade los principios activos del pelitre fue determinada por Staudinger y Rucizka, quienes dieron e l nombre de piretrinas a los principios activos. Son stos esteres del alcohol cetnico piretrolona, cuya estructura responde a la metil-pentabienil-ciclo-pentanolona, la primer sustancia de naturaleza alnic hallada en produc-

34

ANALES DELjardnBOTNICO DE MADRID

tos naturales con los cidos crisantemo-carboxlicos, sustancias de constitucin ciclopropnica, formando la piretrina I (I) y la piretrina II (II). CH3 CH / H . , C \ CH - CH., - CH = C = CH CH HC I O co I CH CH [CH3]2C -^ CH - CH = C < XCH., (I) CH3 CH H2C HC C= O I O I CO I CH /CH3 [CH3]SC ^-^ CH - CH = C ' COOCH3 ( I I ) La saponificacin de la mezcla de semicarbazonas produce l a piretrolona y dos cidos diferentes, juntamente con e l ster unimetlico del cido crisantemobicarboxlico. La piretrolona I I I en disolucin alcohlica se reduce con hidrgeno y da tetrahidropiretrolona (IV), que oxidada con permanganato en f r o origina cidos caproico (V) y levulnico (VI), lo cual demuestra que e l grupo C O no es unin de l a cadena lateral.

ANALES DEL JARDlN BOTNICO DE MADRID CH, CH \ CH CH., - CH = C = CH CH3+ 2 H HX / " HOC! ; C= O ( I I I ) CH, 'I c= o CH8 I / CH., - Cf XOH (VI) CH.,

35

CH / \ jCH-C,Hn H2C C= O (IV)

+ 0,-

(V)

El cido crisantemomonocarboxlico (VII) es lquido dextrgiro. Reducido por el hidrgeno produce e l cido 2.2. dimetil-3-isobutilciclo-propano-1-carboxlico. Oxidado con ozono produce 1-transcarnico (Vill) y acetona (IX).

CH I COOH (VII) I I rf + CH3 CO CH3

r CH I COOH (Vill)

(IX)

l dimetilEl cido crisantemo monocarboxlico es, por consecuencia, e isobutil-ciclopropano-carboxlico. Se v o l a t i l i z a en corriente de vapor de agua. El segundo cido obtenido es e l crisantemo dicarboxlico (X), slido destrgiro; no es reductible por e l hidrgeno y oxidado con ozono

36

ANALES DELjardnBOTNICO DE MADRID

produce cidos 1-trans-carnico (XI) y pirvico (XII) al romperse la cadena isobutlica. [CHJ.-.C - C H - C H = C<; \/ \COOH CH COOH (X) / O /CH, -CC + O = C< X H \ COOH -* O,

CH I COOH (XI)

(XII)

Este cido no se encuentra libre en lasflores,pero se obtiene en l a saponificacin de los esteres metlicos. El tercer compuesto cido obtenido es e l ster-monometlico del cido crisantmico-dicarboxlico (XIV), lquido destrgiro; oxidado con ozono produce cido I, transcarnico ( X V ) , y e l ster metlico del cido pirvico (XVI). /CH5 [CHJ]2-Cc-7CH-CH=C<r CH I COOH (XIV) a,W - C ^ /CH-Cf \/ XO CH I COOH (XV) /CH3 + O = C<^ X C O O CH3

O*

(XVI)

Gracias a este dato sefijala posicin del carboxilo esterificado COO.CH3.

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

37

IV. E L E C C I N D E L P R O C E D I M I E N T O

ANALTICO

El nmero de procedimientos de anlisis para e l pelitre, desd l a fecha en que Staudinger y Ruzicka establecieron la constitucin de las piretrinas, cada ao s hace ms variado, lo cul prueba que no hay entre todas las tcnicas una que se acomode a las necesidades de la prctica diaria. Por este motivo, antes de emprender el estudio analtico de las muestras defloresde pelitre existentes en Espaa, cremos t i l la compulsa de las diversas tcnicas, comparando las cifras obtenidas en cada una de ellas. Los procedimientos de anlisis pueden agruparse segn la idea directriz que sirvi de base para la tcnica. Primer grupo,El de los fundados en la estructura cetnica de l a piretrolona y en su capacidad para formar semicarbazonas; idea que se debe a Staudinger y Ruzicka. Por extensin de la idea, e l grupo carbonlico puede formar hidrazonas, para-nitrofenilhidrazonas y 2,4-dinitrofenilhidrazonas. Segundo grupo.La piretrolona es un alcohol cetnico, e s t i l o de l a benzona; por tanto, despus de aislada de su combinacin con los cidos crisantemocarboxlicos, ofrece cualidades reductoras que se apreciaron frente al reactivo de Fehling. Por este motivo, e l grupo se t i t u l a de procedimientos fundados en l a reduccin. Tercer grupo.De igual modo que se pueden practicar condensaciones diferentes sobre la molcula de las piretrinas por el C O de la piretrolona, es posible aislar en suficiente grado de pureza, y previa saponificacin, los cidos formadores de las piretrinas, unas veces juntos los dos crisantemocarboxlicos, aprecindose as e l contenido total en piretrinas de l aflor,y otras separando del conjunto de los cidos; uno, e lI , por destilacin en corriente de vapor de agua, y el otro, e l II, extrayndole del residuo no destilado por medio de un disolvente a propsito. Cada uno de los procedimientos es susceptible de cambio en las tcnicas aisladas de evaluacin de los componentes de las piretrinas.

38

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

PRIMER

GRUPO

Mtodo de Staudinger y Harder (3). Despus de haber sido determinada la constitucin qumica de los polvos de pelitre en 1924 por Staudinger y Ruzicka (4), se- public en 192-7 e l primer mtodo qumico de- evaluacin debido a Staudinger y Harder. Fundndose los autores en que las sustancias que tienen en su molcula un grupo C O - forman con la semicarbacida, seroicarbazonas insolubles. I d - piretrolona deba producir un compuesto cristalizable, insoluble y ponderable; pero se forma un aceite resinoso, que al c r i s t a l i z a r arrastra variedad de sustancias tales, qu no puede, por tanto, e l mtodo ser gravimtrico y hay necesidad de convertirlo en gasomtrico o recurrir a l a determinacin del nitrgeno en la masa oscura separada; por t a l causa omitimos la descripcin de la tcnica. A.) Pelitre de secano, cosecha 1935. Casa de Campo. Madrid. Flores abiertas. Primera extraccin: 1 . * P i r e t r i n a s en 1 . 0 0 0g r . de polvo, 3 , 4 1 2 g r . 2 . * Cantidad de p i r e t r i n a s en 1 . 0 0 0g r . ,3 , 1 5 3 1 gr. Segunda extraccin: 1/ Cantidad de p i r e t r i n a s en 1 . 0 0 0g r , ,2 , 9 7 1 7 g r . 2.' Cantidad de p i r e t r i n a s en 1 . 0 0 0g r . ,2 , 5 9 3 2 g r . B) Pelitre de Granada, La muestra analizada es un polvo amarillo claro, algo verdoso y muy fino. Nos fue remitido por e l profesor Serrano. 1 . " Cantidad de p i r e t r i n a s en 1 . 0 0 0g r . ,2 , 2 1 9 gr. 2 . * Cantidad de p i r e t r i n a s en 1 . 0 0 0g r . ,2 , 6 8 g r . El procedimiento es largo, necesita grandes cantidades de mater i a l y conduce a nmeros bajos, porque se trata de un modo de aislamiento que es d i f c i l de transportar al terreno del anlisis. Queda indicado que l a formacin de semicarbazonas presupone la ( 3 ) Acad. S c i . Fennicea. A. 2 9 nm. 18, 1 1 4 1 9 2 4 . ( 4 ) "Helv. Chim. A.", 1994, 7 . 1 7 7 .

ANALES DELJARDNBOTNICO DE MADRID

39

de hidrazonas sin s u s t i t u i r y sustituidas. Una de las ltimas es la paranitrofenlica, que c i t a Ripert en uno de sus trabajos de c r t i c a (5). En general, resulta ms ventajoso e l empleo de hidracinas de mayor grado de sustitucin, y al efecto se u t i l i z sin xito la 2.4 binitrofenilhidracina para evaluar piretrolona por M . Castillo (6). N o se detalla en esta Memoria la tcnica para l a condensacin con la piretrolona, por lo que nos vimos compelidos a ensayarla con e l reactivo Fernndez Sodas (7). Y en alcohol butlico y sin cido slo hemos conseguido resultados idnticos a los de M , Castillo, o sea una hidrazona espesa e incristalizable que no se puede pesar. Por lo tanto, el procedimiento obligara, como en l a semicarbazona, a tina cuantitativa de nitrgeno, que es justamente lo que alarga la tcnica de un modo innecesario.

SEGUNDO

GRUPO

Mtodo de redaccin de Gnadinger y Corl (8). La serie de mtodos de reduccin poda iniciarse con e l de Totu, fundado en e l empleo del reactivo de Fehling, y practicando l anlisis en los trminos usuales. Advertidos ya de que el camino es inexacto, porque no hay seguridad en e lfinalde la reduccin, se ha prescindido de l. Los autores fundaron su tcnica en e l poder reductor de la piretrolona, por su condicin de alcohol-cetona, ya mencionado por Staudinger y Harder; por tener las piretrinas sta misma propiedad, quisieron u t i l i z a r l a como se hace en los azcares reductores, as como l a disolucin alcalina de hidrato cprico (reactivo de Fehling); pero como aqu e l mtodo no puede ser gravimtrico, porque la cantidad de piretrina es muy pequea, utilizaron ellos e l mtodo colorimtrico de Folin para determinar glucosa en sangre. En este mtodo, para determinar piretrinas en disolucin alcohlica, se emplea e l tubo Folin, modificado por Benedit, que es un tubo de una capacidad determinada para evitar l a oxidacin del xido cuproso: l a de la bola es 15,5 cm.s, y l a de la parte estrecha, de 4,5 cm.3. ( 5 ) ( 6 ) ; 7 ) 8 ^ "An. F a l s i f i c a t i o n " ,1 9 3 1 , 24, S 2 5 . T e s i s Doctoral. Madrid, 193j, pg. 2 6 . " R e v i s t a de l a R. Academia de C i e n c i a s " , 1 9 4 1 , 36, 7 5 . 'Ame. Chem. S o c i e t y " ,1 9 2 9 , 51, 3 . 0 B 4 .

40

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

Tcnica. Se extraen 10 gr. de polvo de pelitre con ter de petrleo de punto de ebullicin bajo, en un Soxhlet durante ocho horas. Se enfra la disolucin, cuyo volumen ha de ser inferior a 100 cm." a 20, y se deja a esta temperatura media hora o toda la noche. Se filtra por unfiltrode porofinoel! un vaso de 400 cm.3, de boca ancha, aadindole 0,6 gr. de arena pura y calcinada y se evapora a una temperatura inferior a 75. Desaparecidos los ltimos vestigios del disolvente, se traslada e l residuo con alcohol de 95 caliente, exento de aldehido, a un frasco de 100 cm.8 (previamente marcados los 80 cm.3), usando suficiente alcohol para completar e l volumen a 80 cm.8; a l a disolucin caliente se le aade con una pipeta 15 cm.3 de otra de acetato de plomo bsico, y se completan 100 cm.8 con alcohol caliente, agitando fuertemente el frasco y enrasando de nuevo con alcohol. Se filtra, y alfiltradose le aaden 2 gr. de carbonato sdico anhidro para precipitar el plomo; se deja quince minutos, agitando de vez en cuando, y sefiltra.Inmediatamente, del lquidofiltradose colocan 10 cm.3 en un tubo de Folin y se aaden con una pipeta 6 cm.3 de la disolucin alcalina de Cu (OH)2 preparado as: Disulvase 2,5 gr. de SO4Cu . 5 HzO en 100 cm.3 de agua templada; enfrese una vez disuelto. Disolver 5 gr. de tartrato N a K y 7,5 gr. de N a O H de (96 por 100 de N a O H ) separadamente en 100 cm.3 de agua fra. Llvense las disoluciones a un frasco de 500 cm.3 de volumen, mzclese y compltese ste. La disolucin slo es estable siete das. Mzclese agitando y teniendo cuidado de que quede lquido en la parte estrecha del bulbo del tubo de Folin, En otro tubo se miden 10 cm.8 d la disolucin tipo de glucosa (que contenga 2 mlg.) y se aaden 6 cm.3 del reactivo cprico. Puestos los tubos verticales en un bao a la temperatura de 78 durante cuarenta y cinco minutos, se separan del bao, se enfran a 20 y se les aade con una pipeta a los dos tubos 10 cm.3 del reactivo de Folin, dejndolos verticales tres minutos; se tapan los tubos y se mezcla bien e l contenido, que se traslada a un frasco de 100 cm.3, completando con agua e l volumen. Sefiltrae l problema a travs de un Gooch con una capa gruesa de asbesto, usando dbil succin. Compranse al mismo tiempo en un colormetro Duboscq las disoluciones y por la lectura de l a escala se calcula la glucosa equivalente, y leyendo en l a tabla de los autores e l nmero correspondiente a la cifra de dextrosa se tiene la de piretrina. Para los clculos hemos hecho siempre cinco lecturas y se ha tomado l a media. El reactivo de Folin se prepara disolviendo 150 gr. de molibdato

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

41

sdico bihidratado en 30 cm.3 de agua, para agregar sobre la disolucin obtenida 2 cm.3 de bromo, agitando. Luego de disuelto ste, se adicionan 225 cm.3 de cido fosfrico y seguidamente 150 de cido sulfrica al tercio. Antes de mezclar 75 d cido actico y de completar un l i t r o de agua, se expulsa e l exceso de bromo pasando con lentitud una corriente de aire. A) Pelitre de secano, Casa de Campo, Madrid. 1 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 7 , 9 3 gr. 8 , 0 3 gr. 8 , 9 3 gr.

B) Pelitre de Granada, (Esta muestra y las siguientes las proporcion el farmacutico seor Albesa Sanz, cultivador del pelitre en Zaragoza.) I . Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 C) Pelitre de Aragn,floresabiertas. 1 . Ensayo.Piretrinas t o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . " Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 D) 6 , 1 0 gr. 6 , 1 1g r . 6 , 2 2g r . 4 , 9 4g r . 5 , 0 6 gr. 5 , 1 1g r .

Pelitre de Aragn (finca "El Carrascal",floresabiertas). 1 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 6 , 0 5 gr. 6 , 2 3g r . 6 , 3 0 gr.

E)

Pelitre de Catalua, en polvo fino. 1 . " Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 , 7 5 gr. 3 , 9 7g r . 4 , 4 4g r .

El procedimiento, aparte de la extraccin, no es ms complicado que una colorimetra de glucosa en sangre, tcnica que es familiar a muchos profesionales. Como es resultante de muchsimos ensayos, es necesario atenerse estrictamente a las prescripciones que se mencionan respecto a l a temperatura del bao y preparacin de l a disolucin cprica.

42

ANALES DELjardnBOTNICO DE MADRID

Como todos los procedimientos fsicos, tiene e l error personal, y, como anlogo a un procedimiento de aplicacin a la clnica, es cmodo. Las cifras obtenidas son mayores que con la tcnica de Staudinger, pero ms pequeas que con otros procedimientos.

Mtodo de Martn y Tattersfield (9). Por analoga con e l mtodo anterior, en que se busca una semejanza con la reduccin del xido cprico, estos autores describen un nuevo mtodo muy rpido, empleando pequeas cantidades de material, una cabezuelafloral,por ejemplo. Estilo de micromtodo, es una adaptacin del de Hagedorn y Jeusen para determinar la glucosa sangunea (10) suficientemente sensible para volumetra de pequeas cantidades de piretrina. La reduccin parcial de una disolucin alcalina de ferricianuro potsico, 1,648 gr. por l i t r o de agua, se efecta por medio del grupo C H O H - C O de la fraccin de piretrolona de l a molcula de las piretrinas. Averiguase la reduccin por l a medida del volumen de f e r r i cianuro antes y despus de la reaccin, liberando e l I equivalente de yoduro potsico, con disolucin de tiosulfato sdico. Fe (CN), K, + I K = Fe (CN), K, + 1 Tcnica.0,5 gr. de polvo se extraen con ter de petrleo de punto de ebullicin de 40 a 50 en un Soxhlet; e l disolvente se separa a baja temperatura en corriente de anhdrido carbnico, y las ltimas porciones, en un desecador de vaco; e l residuo se extrae varias veces con alcohol absoluto, calentando en bao de agua hirviendo. A esta disolucin alcohlica se la depura de l a pequea cantidad de protena que pueda contener, aadiendo 1 cm.3 de Na O H , 0 , 1 N y 4 cm.3 de otra de sulfato de cinc, agitando en bao de agua. Al lquido resultante f r o a 20 se aade 25 cm.3 de alcohol absoluto, se agita y se deja vertical; sefiltrapor papel analtico, en un matraz de 50 cm.3, y se completa con alcohol absoluto e l volumen. Para la valoracin se toman, medidos exactamente, 2 cm,3; se colocan durante cuarenta y cinco minutos sobre un bao maria hirviendo con 10 cm.3 de disolucin alcalina de ferricianuro potsico reciente( ) G. B. Gnadinger: "Pyrethrum Flowers", pg. 6 6 . ( 1 0 ) Surez Peregrln: "Manual t c n i c o de a n l i s i sc l n i c o s " , pg. 2 5 2 .

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

43

mente preparado, en un tubo de Folin. El lquido f r o se traslada a un matraz cnico y se evala inmediatamente e l exceso de ferricianuro por el yodo que deja en libertad al aadir 10 cm.3 de solucin IK en sulfato de cinc (el sulfato cncico evita el retroceso de ferrocianuro a ferricianuro en presencia del yodo) y 10 cm.3 de cido actico al 3 por 100; e l I liberado se valora con tiosulfato, usando engrudo de almidn para ver elfinalde l a reaccin. Se hace al mismo tiempo y en las mismas condiciones un ensayo en blanco, colocando en otro tubo 10 cm.3 de la disolucin alcalina de ferricianuro potsico y 2 cm.3 de alcohol de 80. 1 cm. de S2O3Na2 0,005 N. equivale a 0,000862 gr. de piretrina. Nosotros modificamos e l mtodo convirtindolo en un macromtodo, extrayendo 10 gr. de polvo. A) Pelitre de secano. Casa de Campo, Madrid. 1 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . " Ensayo.P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . " Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 B) Pelitre de Aragn. i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 1 . " Ensayo. P 2 . " Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 3 . Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 C) Pelitre de Catalua. 1 . " Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 2 . Ensayo. P i r e t r i n a st o t a l e s por 1 . 0 0 0 4 , 9 9g r . 5 , 0 2 gr. 6 , 1 7g r . 6 , 5 2g r . 7 , 2 4g r . 8 , 9 3g r . 9 , 1 5 gr. 9 , 2 5 gr.

TERCER

GRUPO

EVALUACIN DE LOS CIDOS CRISANTEMOCARBOXLICOS Mtodo de Wilcoxon (11). Este es un mtodo rpido de valoracin, que se funda en l a saponificacin y formacin de la sal soluble de bario del cido monocarboxlico, en la descomposicin de esta sal y medida del cido, desdi) W. Fischer: " Z e i t . Analy. Chem.", 1 9 3 8 . 18, 1 1 3 .

4t

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

ilado en corriente vapor, por una alcalimetra. N o se evala, por tanto, ms que l a piretrina I . Tcnica.15 gr. de polvo de pelitre se extraen en un Soxhlet con ter de petrleo de ebullicin (30 a 50), durante ocho horas como mnimum; se evapora e l ter a temperatura inferior a 60, al residuo se l e aaden de 10 a 15 cm.3 de N a O H alcohlica 0,5 N, y se tiene en reflujo de una a dos horas; se aaden despus de f r o 150 cm.3 de agua destilada y se traslada a un vaso de 250 cm.3; se agregan un gramo de t i e r r a de infusorios o de caoln y 10 cm.3 de cloruro brico al 10 por 100; se completan a los 250 cm.3 de agua destilada, y sobre 200 cm.3 delfiltradose vierte 1 cm.3 de cido sulfrico concentrado y se destila en corriente de vapor recogiendo 150 cm.3. Estos se extraen en un embudo de separacin varias veces con ter de petrleo puro, que se lava con unos centmetros cbicos de agua destilada, y se evapora e l ter en e l residuo. Se evala l a acidez con sosa 0,02 N., usando fenolftalena como indicador: 1 cm.3 de N a O H 0,02 N. equivale a 6,6 mlg. de piretrina I . A) Pelitre de secano. Casa de Campo, Madrid.

1 Ensayo: Na OH 0 , 0 2 N. gastada. 2 0 , 5 2 cm. X 6 , 6 s= 1 3 5 , 4 3 mlg. e= 9 , 0 2 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . 2 . " Ensayo: NaOH 0 , 0 2 N. gastada. 2 1 , 8 cm. X 6 , 6= 1 4 3 , 8 8 mlg. = 9 , 5 9 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . 3 . Ensayo: NaOH 0 , 0 2 N. gastada, 1 9 , 9 7 cm. X 6 , 6= 1 3 1 , 8 0 mlg. = 8 , 7 8 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . B) 1 . " NaOH 2 . " NaOH 3 . NaOH Pelitre de Granada, polvo fino amarillo, algo verde.

Ensayo: 0 , 0 2 N. gastada. 9 , 2 2 cm. X 6 , 6= 6 0 , 8 5 2 mlg. = 4 , 0 5 6 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . Ensayo: 0 , 0 2 N. gastada. 1 3 , 5 3 cm. X 6 , 6= 8 9 , 2 8 9 mlg. = 5 , 9 5 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . Ensayo: 0 , 0 2 N. gastada. 1 1 , 5 cm. X 6 , 6= 7 5 , 9 0 mlg. = 5 , 0 6 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 Pelitre de Aragn, polvo grosero.

C) 1 . " NaOH 2 NaOH

Ensayo: 0 , 0 2 N. gastada. 1 2 , 5 1 cm. X 6 , 6= 7 6 , 1 7 mlg. = 5 , 0 7 8 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . Ensayo: 0 , 0 2 N. gastada. 1 1 , 8 6 cm. X 6 , 6= 7 8 , 3 mlg. = 5 , 2 2 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 .

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

45

D ) Pelitre de Aragn de lafinca"El Carrascal", cultivado en secano, cosecha 1940. 1 . " NaOH 2 . " NaOH 3 . " NaOH Ensayo: 0 . 0 2 N. gastada. 1 4 , 2 7 an. X 6 , 6 94,182 mlg. = 6 , 2 7 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . Ensayo: 0 , 0 2 N. gastada. 1 4 , 3 9 cm. X 6 , 6 9 4 , 9 7 mlg. = 6 , 3 3 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . Ensayo: 4 , 3 2 cm. X 6 , 6 = 94,512 mlg. = 6 , 3 0 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . 0 , 0 2 N. gastada. 1

E) Flores completamente abiertas, cultivadas en Catalua en terreno apropiado, cosecha 1940. 1 . " Ensayo: NaOH 0 , 0 2 N. gastada. 1 3 , 1 1 cm. X 6 , 6= 8 6 , 5 5 mlg. = 5 , 7 7 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . 2 . " Ensayo: NaOH 0 , 0 2 N. gastada. 1 2 , 1 8 cm. X 6 , 6= 8 0 , 4 mlg. = 5 , 3 6 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . 3 . " Ensayo: NaOH 0 , 0 2 N. gastada. 1 3 , 3 8 cm. X 6 , 6 = 88,308 mlg. 5 , 8 8 gr. P. I . por 1 . 0 0 0 . Los pesos dados de piretrina I son mayores que la suma de las dos piretrinas en el mtodo de Tattersfields y Martn. La purificacin en l es mejor y e l empleo de sales de bario supone, formacin de sales bricas de otros cidos que destilan tambin en corriente de vapor y contribuyen a aumentar la cifra de cido monocarboxlico (12). Tiene la ventaja de ser muy cmodo.

Mtodo de Tattersfields y Hobson (13). Estriba en liberar los cidos crisantemocarboxlicos previa saponificacin, separando por destilacin en corriente de vapor el monocarboxlico, que representa la piretrina I, y extrayendo el bicrboxlico no destilable por medio del ter de petrleo. Estos autores aislaron una mezcla de semicarbazona siguiendo e l mtodo de Staudinger y Ruzicka (14); pero no consiguieron aislar l a piretrina II, sino que obtenan una mezcla de semicarbazonas que no tena punto de fusin fijo. Como e l mtodo original daba resultados bajos, fue modificado. ( 1 3 )" J . Agri. Se", 1 9 2 9 , 19, 2 6 6 9 6 . 1 9 3 8 ,1 , 1 1 3 . ( 1 3 ) "J. Agri. Se", 1 9 2 9 , 19, 2 6 6 9 6 . ( 1 4 ) Loe. C l t .

46

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

asegurndose una completa saponificacin y extraccin de los cidos crisantemocarboxlicos liberados. Fundndose en l a saponificacin de las piretrinas en medio alcohlico con K O H , en disolver los jabones formados en descomponer l a s sales y valorar los cidos liberados, de los cuales e l primero es arrastrable en corriente de vapor y e l segundo extrable con ter de petrleo, lograron notable mejora. Tcnica. Diez gramos de polvo se extraen en un Soxhlet con ter de petrleo en punto de ebullicin (45 a 55) durante ocho horas. Despus se destila e l disolvente en corriente de anhdrido carbnico, calentando suavemente, y se completa l a evaporacin en un desecador de vaco; e l residuo se extrae varias veces con metanol poco caliente, y sefiltra,despus de fro, por algodn en un matraz de cuello largo de 100 cm.3, lavando e l matrazfinalmentecon metanol fro; se aaden unas gotas de disolucin metlica de fenolftalena, y despus, con lentitud, hasta alcalinidad, disolucin metlica de K O H . N., aadiendo un exceso de 5 cm.3 se mantienen en reflujo durante ocho horas, y luego se evapora el metanol a presin reducida y baja temperatura (no pasando de 25). Los jabones formados se disuelven en agua, l a disolucin se acidula con 6 cm. de cido sulfrico N., y e l cido v o l t i l se destila en corriente de vapor, para recoger dos porciones d 50 cm.3 cada una. Los primeros 50 cm.3 se llevan a un embudo de separacin, y se extraen dos veces con 50 cm.3 de ter de petrleo, y cada extraccin se lava con 20 cm.3 de agua destilada. A las dos extracciones etreas reunidas se aaden 20 cm.3 de agua destilada, se evapora el ter a baja temperatura y en e l residuo se valora con 0,02 N. N a O H , usando fenolftalena como indicador. En esta primera porcin se determina e l cido monocarboxlico correspondiente a la piretrina I . Los segundos 50 cm.3 del destilado, s i se extraen directamente con ter de petrleo, slo revelan indicios de acidez valorable. El residuo no destilable por e l vapor se trata con 0,2 gr. de sulfato calcico puro y se deja toda l a noche; sefiltrapor algodn y se extrae con ter de petrleo en un aparato percolador que nos fabricaron idntico al de Tattersfields; la extraccin dura veinte horas; despus, al ter se l e aaden 20 cm.3 de agua destilada, y se destila. La capa acuosa se calienta hasta hervir y se deja enfriar; sefiltrapor algodn y se vuelve a calentar, para valorar con N a O H 0,02 N., usando como indicador fenolftalena. El nmero de centmetros cbicos gastados representa e l cido dicarboxlico que corresponde a l apiretrinaII.

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID 1c m . 1 de l c a l i0 , 0 2 N. e si g u a l3 , 3 6 mlg, de cido monocarboxlico. 1c m . * de l c a l i0 , 0 2 N. e si g u a l6 , 6 mlg. de P i r e t r i n a I . 1c m . 1 de l c a l i0 , 0 2 N. e si g u a l1 , 9 8 mlg. de c i d o d i c a r b o x l i c o . 1 cm.' de l c a l i0 , 0 2 N. e si g u a l3 , 7 4 mlg. de P i r e t r i n a I I . A) Pelitre de Madrid. P i r e t r i n aI 1 . " Ensayo. 2 . " Ensayo; 3 . " Ensayo B) P i r e t r i n aI I

47

P i r e t r i n at o t a l e s

4 , 9 5 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 4 4 gr. por 1 . 0 0 0 8 , 9 9 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 0 8 gr; por 1 . 0 0 0 2 , 3 3 gr. por 1 . 0 0 0 7 , 4 1 gr. por 1 . 0 0 4 , 7 6 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 1 5 gr. por 1 . 0 0 0 7 , 9 1g r . por 1 . 0 0 0

Pelitre de Aragn. Piretrina I P i r e t r i n a II P i r e t r i n at o t a l e s

1 . " Ensayo 2 . " Ensayo 3 . " Ensayo

4 , 7 8 gr. por 1 . 0 0 0 1 , 9 4 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 7 2 gr. por 1 . 0 0 0 4 , 4 2 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 1 7 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 5 9 gr. por 1 . 0 0 0 4 , 5 6 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 0 9 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 6 5 gr. por 1 . 0 0 0

Justamente, los nmeros que se obtienen' son dobles que los que suministra e l procedimiento de- Staudinger, pues l a - carbazona es relativamente soluble en agita; y lleva impurezas. En este procedimiento, como en todos los que se destila e l cido crisanlemomonocarboxlico en corriente de vapor, queda una duda que no hemos podido disipar por carecer del cido en cuestin. Algn experimentador (15) ha afirmado que- este cido es descomponible en corriente de vapor de agua, y claro es que l a consecuencia inmediata que ha deducido es que e l nmero que se obtiene es bajo; por tanto, este procedimiento, como los parecidos a l, son inexactos. A esta c i r cunstancia hay que agregar otra sealada por W . Fischer (16), cual es que e l cido monocarboxlico no es lo bastante destilable en vapor. El propio Tattersfield reconoce l a delicadeza de la segunda parte del procedimiento, o sea l a extraccin en e l residuo no destilable del cido crisantemobicarboxlico. La lentitud' de la extraccin hace esta tcnica larga, y de resultado' algo incierto; por t a l causa, las cifras de piretrina. II; en varias ocasiones no ofrecen garantas. Esto obliga a repetir muchas veces, y como cada1 extraccin necesita veinte horas, por lo menos, e l procedimiento no es adecuado para usos corrientes de laboratorio. ( 1 5 ) "Fhar. Pantsios. I n d u s t r i . Einge. Chemist. Anal.", 1 9 3 8 , 1 0 . 3 8 * . ( 1 6 )" Z e i t . Anal. Chemi.", 1 9 3 8 , 1 1 3 .

48

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

Semejante a este procedimiento analtico es el de Seil (17), que modific ligeramente O. Raup (18).

Mtodo de Ripert (19). Se funda en l a saponificacin completa de las piretrinas, en la formacin de las sales bricas de los cidos crisantemocarboxlicos, descomposicin de dichas sales por cido sulfrico, evaluacin de I o s dos cidos juntos y destilacin en corriente de vapor sobrecalentado, para separar e l monocarboxlico (I). Tcnica.-20 gr. de polvo de pelitre se extraen en un Soxhlet con. ter de petrleo de punto de ebullicin de 45 a 55 durante diez horas, se evapora e l disolvente, y sobre e l residuo se aaden 20 cm.8 de K O H metlica N. y se hierve hora y media; ya f r a se agita con 150 cm.3 de agua, y sta s agita dos veces con 50 cm.8 de ter de petrleo para separar lo insoluble. Se mezclan las aguas alcalinas con el ter en una ampolla y se i se emull e aaden 50 cm.3 de disolucin de Cl Na al 25 por 100, y s siona se aade un poco de alcohol. Se separa la capa acuosa y se lava la etrea con 20 cm.3 de solucin salina al 25 por 100. Las disoluciones acuosas se renen y se les agrega 10 cm.3 de solucin saturada de Cl2 Ba, se agitan y se aaden 100 cm.3 de ter, con lo cual el precipitado se rene en e l lmite de separacin de las dos capas. Este precipitado lo forman las sales bricas de los cidos extraos a los de las piretrinas. La capa acuosa sefiltrasobre un filtro* rpido, y la etrea se lava con 25 cm.3 de agua, que servirn para lavar e l filtro. Las aguas que contienen los crisantematos se acidulan con Cl H. N. y se extraen agitando con 200 cm.8 de ter e t l i c o , para separar la capa etrea, que se lava varias veces con disolucin saturada y neutra de Cl Na para eliminar e l Cl H que pudiera quedar. El ter se traslada a un matraz de cuello largo y se destila; al residuo del matraz se le aaden 5 cm.8 de alcohol neutro a la fenolftalena y s evalan los cidos totales con K O H 0,2 N.; esta cifra da la suma de los cidos crisantemocarboxlicos. Procede ahora separar el cido I por destilacin en vapor, para ( 1 7 ) "Soap.", 1 8 3 4 ,i . " , 8 9 . ( 1 8 ) "Suddeutsch. Apothe. Z e i t . " , 1 9 3 5 , 75, *18. ( 1 9 )J . Ripert: "Le pyretrhe f r a n a i s e " ,1 9 8 6 .

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

49

medirlo con potasa 0,2 N. y descontar e l volumen de sta que se invierte en la neutralizacin, del obtenido en la medida de la acidez total. Se aaden al matraz en que se acaba de hacer l a titulacin algunos centmetros cbicos de cido sulfrico N., o sea un volumen l a mitad menor que el de la K O H 0,2 N. encontrada para la neutralizacin; se une e l matraz a un aparato de arrastre de vapor sobrecalentado, que acorta mucho el tiempo en l a destilacin, regulando de modo que e l vapor pase a 125; deben recogerse 100 cm.3 en diez minutos. Sepranse dos fracciones de 100 cm.3 cada una. Los primeros 100 cm.8 del destilado se extraen con 100 cm.3 de ter de petrleo en varias fracciones; e l ter se rene y se lava con 25 cm.3 de disolucin salina, para eliminar los cidos solubles; se guarda separadamente e l agua y la disolucin salina. En un matraz se ponen 25 cm.3 de agua destilada, teida de rosa por la fenolftalena, vertiendo sobre e l l a el ter, cuya acidez se valora con K O H 0,2 N. Se vierte sobre e l ter de petrleo e l ter de l a extraccin de la segunda fraccin de 100 cm.3 de agua de arrastre, despus de lavados con disolucin salina, y e l matraz con 25 cm.3 de ter de petrleo. Las aguas se renen con las primeras aguas, a las cuales se les aade los 25 cm.3 de la disolucin salina que acaba de servir para lavar el ter de petrleo de l a segunda fraccin. Este ter se vierte en e l Erlenmeyer que haya servido para la primera titulacin, e l cual ha debido de conservar e lt i n t e rosa del agua; se neutraliza hasta rosa persistente; e l nmero de centmetros cbicos gastados da la cifra de piretrina I. Neutralizando en presencia de fenolftalena con K O H 0,2 N. las aguas de arrastre, la cifra encontrada tiene importancia y corresponde a los cidos d bajo peso molecular y se restan para calcular la piretrina II. Ejemplo. Supongamos que se han extrado con ter de petrleo 40 gramos de polvo, y que se emplean para neutralizar los cidos totales de 9,5 cm.3 de K O H 0,2 N., o sea 95 cm.3 de K O H 0,02 N. La neutralizacin del cido I necesita 27,4 cm.3 para e l primer ter y 3 cm.3 para e l segundo, o sea 30,4 cm.3 totales. Las aguas necesitan 8 , 1 cm.3 para la primera y 5 cm.3 para la segunda. Queda por neutralizar e l cido dicarboxlico, que representa la piretrina II.

50

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

95 ( 3 0 , 4+ 1 3 , 1 )= 5 1 , 5 c m . 3 . 1c m . 8 de KOH 0 , 0 2 N. e si g u a l6 , 6 mlg. P. I .y 3 , 7 mlg. P. I I . P i r e t r i n a I 3 0 , 4X 6 , 6 = 200 . m l g . en 40 g r . ,o s e a5 , 0 g r . por 1 . 0 0 0 . P i r e t r i n aI I= 5 1 , 5X 3 , 7 190 mlg. en 40 g r . , o sea 4 , 7 5 gr. por 1 . 0 0 0 . P i r e t r i n a st o t a l e s :9 , 7 5 gr. por 1 . 0 0 0 . A) Pelitre de secano. Casa de Campo, Madrid. P i r e t r i n aI 1 . " Ensayo 2 . Ensayo 3 . " Ensayo B) P i r e t r i n aI I P i r e t r i n at o t a l e s

4 , 4 8 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 6 6 gr. por 1 . 0 0 0 7 , 1 4 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 2 8g r . por 1 . 0 0 0 3 , 1 0 gr. por 1 . 0 0 0 8 , 3 8 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 3 0 gr. por 1 . 0 0 0 4 , 4 8 gr. por 1 . 0 0 0 9 , 7 8 gr. por 1 . 0 0 0

Pelitre de Granada. P i r e t r i n aI P i r e t r i n aI I P i r e t r i n at o t a l e s

1 . " Ensayo 2 . Ensayo 3 . " Ensayo C)

2 , 6 9 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 6 1 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 3 0 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 6 9 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 2 9 gr. por 1 . 0 0 0 4 , 9 8 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 6 0g r . por 1 . 0 0 0 2 , 0 1 gr. por 1 . 0 0 0 4 , 6 1 gr. por 1 . 0 0 0

Pelitre de Aragn, de origen cataln. P i r e t r i n aI P i r e t r i n aI I P i r e t r i n a t o t a l e s

1 . " Ensayo 2 . " Ensayo 3 . " Ensayo D)

2 , 9 2 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 3 4 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 2 6 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 3 1 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 5 7 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 8 8 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 4 2 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 5 6 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 0 4 gr. por 1 . 0 0 0

Pelitre de l afinca"El Carrascal". P i r e t r i n aI P i r e t r i n aI I P i r e t r i n at o t a l e s

1 . Ensayo 2 . " Ensayo 3 . Ensayo E)

. 0 0 0 2 , 8 6 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 8 2 gr. por 1 . 0 Q 0 2 , 9 6 gr. por 1 3 , 3 5 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 5 6 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 9 1 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 3 9 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 7 5 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 1 4 gr. por 1 . 0 0 0

Flores abiertas cultivadas en Catalua. P i r e t r i n aI P i r e t r i n aI I P i r e t r i n at o t a l e s

1 . " Ensayo 2 . " Ensayo

2 , 7 1g r . por 1 . 0 0 0 2 , 3 9 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 0 1 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 1 4 gr. por 1 . 0 0 0 2 , 4 6 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 6 1 gr. por 1 . 0 0 0

El procedimiento de Ripert es largo, y como se emplea el vapor sobrecalentado para l a destilacin del cido crisantemomonocarboxlico, es enojoso y expuesto a destruccin en mayor escala que cuando se

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

SI

u t i l i z a el vapor normal. Se percibe claramente para la piretrina I, comparando los resultados con los d Canneri, que las cifras 5 y 4 se convierten en 3. Como las cantidades de piretrina II no son ms altas. el total es bajo; pero ms parecido al de Wilcoxon que a los dems. Lo mismo se observa en el d Wilcoxon, en que la cifra de 6 de piretrina I se convierte en 3, lo cual no puede atribuirse ms que a desaparicin del cido durante la destilacin en vapor sobrecalentado.

Mtodo de Canneri y Bigalli (20). El fundamento del mtodo reside en la extraccin de las p i r e t r i nas, en su saponificacin y en el aislamiento de los cidos con ter e t lico, para separarlos de ste por medio del agua, en cuya disolucin seprecipitanlos no crisantmicos por el cloruro de bario, en tanto que los crisantmicos quedan disueltos en forma de sal brica. Por medio del ter e t l i c o se separa de una fraccin e l II, y en otra fraccin de la sal brica se aisla por medio del ter de petrleo de 40 de ebullicin e l cido I, que se evala transformando e l reactivo Deniges (reaccin de Seil) en sal mercuriosa, que a su vez se mide por yodato potsico centesimo normal. En este procedimiento se recoge lo mejor de las tcnicas de otros, entre ellos del de Seil, que ha sido objeto de c r t i c a severa por parte de Wilcoxon. Tcnica.25 gr. de polvo de pelitre se secan a la estufa a un calor moderado, y se extraen en un Soxhlet durante ocho horas con cloroformo. Se separa a presin reducida y temperatura moderada la mayor parte del disolvente. El residuo de la destilacin se trata en un matraz con 20 cm.s de K O H metlica N. y se mantienen en bao maria a reflujo a una temperatura no superior a 85, por espacio de media hora. Terminada la saponificacin, se evapora el exceso de alcohol, y e l residuo se trata de nuevo con agua hirviendo. 100 cm.s son suficientes para trasladar l contenido del matraz al embudo de separacin. Despus de f r o se mezcla esta disolucin con 100 cm.3 de disolucin de cloruro sdico al 25 por 100. El ter se vuelve a lavar con 20 cm.3 de agua, a la cual se aaden 25 cm.3 de la disolucin salina. Despus se agitan; stas dos porciones se renen con las primeras y se tratan ( 2 0 ) "Annali d i Chimica Appl.", 1 3 3 8 , 28, 1 5 .

52

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

con 10 cm.3 de la solucin saturada de cloruro brico; sefiltrapor papel de anlisis, lavando e l precipitado de las sales de bario de los cidos extraos con agua que contenga un poco de cloruro brico. El filtrado que contiene las sales de bario de los cidos crisantemocarboxlicos se lleva a un matraz aforado para completar a 500 cm.3. Se toma l a mitad para la determinacin del cido dicarboxlico. Esta fraccin se traslada a un embudo de separacin y se acidula con 2 cm.3 de Cl H concentrado, para dejar en libertad los dos cidos crisantmicos. Se agita e l lquido con 250 cm.3 de ter e t l i c o en varias veces, se rene e l ter y se lava con 30 cm.3 de solucin de Cl Na al 25 por 100. Se filtra la capa etrea por algodn y se destila. El residuo, constituido por un aceite amarillo, se somete en e l mismo matraz a destilacin en corriente de vapor y se recogen 200 cm.3 de destilado, que al principio sal turbio, por l a suspensin del cido crisantmico, insoluble en e l agua; despus destila claro. Hay que regular la operacin de manera que se condense en e l matraz tanto lquido como e l que destila. En este momento se interrumpe la destilacin, se enfra e l lquido del matraz, que sefiltrapor un Gooch, para eliminar los grumos de mat e r i a resinosa. Se lavan e l matraz y e l Gooch con agua t i b i ay e l f i l l lquido trado se neutraliza con bicarbonato sdico. Despus de fro, e se agita dos veces con 30 cm.3 de cloroformo. Se lava e l primer cloroformo con 10 cm.3 de agua salada, que servir para lavar e l segundo. Se separa e l agua del lavado del cloroformo, se acidula con unas gotas de clorhdrico concentrado y se t l i c o , en varias porciones, en un embudo extraen con 250 cm.3 de ter e de separacin; se rene1 e l ter y se lava con 30 cm.3 de solucin de Cl Na al 25 por 100. Se confirma la neutralidad del agua de! lavado, se traslada e l ter,filtrndolopor algodn, a un matraz, para destilarle. El residuo del matraz se calienta en bao de agua hirviendo durante diez minutos, se extrae con 2 cm.3 de alcohol neutro y 20 cm.3 de agua caliente. Se deja enfriar, sefiltrapor un Gooch, se lava con agua y se valora con 0,02 N. de Na O H y fenolftalena. 1 cm.3 de Na O H 0,02 N. corresponde a 3,74 mlg. de piretrina I. Para la determinacin de la piretrina I es absolutamente necesario que la cantidad de cido que produzca no corresponda a ms de 50 a 70 mlg. de aqulla. Del valor encontrado de piretrina I I se deducir la cantidad de disolucin de sal brica que se ha de tomar para determinar el cido monocarboxlico. Se emplea e l reactivo Deniges, que da, segn Seil. un color variable, que en pocos minutos va del rosa al rojo de la fe-

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

53

nolftalena yfinalmenteal azul. La reduccin del sulfato mercrico no es caracterstica del cido monocarboxlico, pues depende verosmilmente del grupo isobutilnico, el cual se encuentra en e l cido dicarboxlico; pero e l color que se produce simultneamente con la reduccin es caracterstico del cido monocarbnico, e l cual parece poseer como carcter especifico l a propiedad de dar origen a un complejo interno con e l mercurio, l a cual explica l a presencia de l a intensa coloracin. Se toma una parte de los 250 cm.3, o l a totalidad de l a solucin de sal de bario, de cuya concentracin en piretrina I oscila entre 50 a 70 mlg.; se acidula con Cl H y se enfra con hielo, al mismo tiempo que e l ter de petrleo de punto de ebullicin 40, necesario para extraer e l cido monocarboxlico. Cuando se ha alcanzado el equilibrio de temperatura, se pasa e l lquido a un embudo de separacin, con algunos trocitos de hielo, y se lava e l matraz con ter fro. Se agita despus e l lquido tres veces con porciones de ter fro, de modo que e l volumen de ter sea cerca de 1/3 del total del lquido acuoso, cuidando de aadir cada vez en e l embudo de separacin algunos trocitos de hielo. Se rene e l ter, sefiltrapor algodn y se destila. Al residuo se le aaden 2 cm.3 de alcohol neutro y 2 cm.3 de solucin Na O H 0,02 N., para formar la sal sdica del cido I y hacerlo soluble en agua; se l e agregan despus al matraz 10 cm.3 del reactivo Deniges; pasada una hora se aaden al lquido 3 cm.3 de disolucin saturada de Cl Na y se agita durante algn tiempo. Sefiltranlos calomelanos sobre un embudo de porcelana agujereado y se lavan con cloroformo. El color verdoso de los calomelanos, que a veces se mezclan con indicios de sulfato mercurioso, no tiene influencia en e l resultado. Se traslada e l precipitado de calomelanos a un Erlenmeyer de tapn esmerilado, y se aaden 50 cm.3 de Cl H (tres volmenes de cido concentrado y dos de agua), que bastan para trasvasar e l precipitado al Erlenmeyer; hecho esto, se valoran los calomelanos con yodato potsico 0,01 N., siguiendo la tcnica Jamiesons (21), aadiendo algunas notas de cloruro de yodo (recin preparado, como e l que se emplea en l a tcnica d ndices de yodo) y 5 cm.3 de cloroformo. Para cada adicin de yodato potsico se agita vigorosamente, hasta que l a coloracin rosa desaparezca del cloroformo. Una molcula de yodato potsico corresponde a cuatro tomos de ( 2 1 )J . S. Jamiesons: "Volumetric Ydate methods", pg. 66. Nueva York, 1 9 2 6 .

54

ANALES DELJARDNBOTNICO DE MADRID

mercurio (mercurioso), y una molcula de piretrina I corresponde a tres tomos de mercurio. 0 , 0 4 , 0 1N = 1 cm.' de IO, K 0 330 = mlgr. p i r e t r i n a I .

A)

Pelitre d secano. Casa de Campo, Madrid. P i r e t r i n aI P i r e t r i n a II P i r e t r i n at o t a l e s

1 . Ensayo 2 . Ensayo 3 . Ensayo. B)

4 , 9 6 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 5 0 gr. por 1 . 0 0 0 9 , 4 6 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 0 1 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 6 0 gr. por 1 . 0 0 0 9 , 6 1 gr. por 1 . 0 0 0 6 , 0 7 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 6 2 gr. por 1 . 0 0 0 9 , 6 9 gr. por 1 . 0 0 0

Pelitre aragons. P i r e t r i n aI P i r e t r i n a II P i r e t r i n at o t a l e s

l . Ensayo V Ensayo 1* Ensayo C)

5 , 1 5 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 3 3 gr. por 1 . 0 0 0 8 , 5 2 gr. por 1 . 0 0 0 4 , 7 9 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 9 6 gr. por 1 . 0 0 0 8 , 7 5 gr. por 1 . 0 0 0 5 , 3 1 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 5 5 gr. por 1 . 0 0 0 8 . 8 6 gr. por 1 . 0 0 0

Pelitre cataln. P i r e t r i n aI P i r e t r i n a II P i r e t r i n at o t a l e s

1 . Ensayo 2 . " Ensayo

4 , 4 4 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 5 0 gr. por 1 . 0 0 0 7 , 9 4 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 9 6 gr. por 1 . 0 0 0 3 , 6 0 gr. por 1 . 0 0 0 7 , 5 6 gr. por 1 . 0 0 0

Elimnase en esta tcnica la posibilidad de descomposicin del cido crisantemomonocarboxlico en la corriente de vapor de agua, y se e l i minan tambin los cidos extraos por la formacin previa de sal brica insoluble. Como en todos los casos en que el cociente de reparto juega papel r i importante, en ste, la separacin por medio del ter de los cidos c santemocarboxlicos puede hacerlo, y va en demrito de la cantidad a separar del agua. En los dos cidos puede haber insuficiencia de extraccin. El mtodo es largo y con todos los defectos inherentes a la reduccin ms o menos completa del reactivo de Deniges y a la cuant i t a t i v a del mercurio; pero da nmeros ms constantes y ms altos, salvo en el caso del mtodo de Wilcoxon, en e l que la cifra hallada es elevada. Con la tcnica de Canneri se obtienen pesos ms altos en piretrinas que con los dems. Reduce considerablemente e l valor del mtodo suministrar datos

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

55

satisfactorios dentro de lmites marcados por la riqueza en piretrinas, no previsible ms que en algunos casos. Estos son los defloresque contengan prximamente cantidades iguales de las dos piretrinas. RESUMEN E LOS RESULTADOS OBTENIDOS

S t u d i n -G a r t ny n a d l o -M ger yg e r yT a t t e r s -c a t t e r s f i e lyH o b s o n R i p e r t C a n n e r i y Bigalli o x o n T H a r d e r C o r t f i e l d i r e t r i i r e t r i -P e r e t r i -P i r e t r i -P T o t a l e s T o t a l e s T o t a l e s M U E S T R A S P n a s n a s a s nas V o s V o s / o o i . p. i P .1 1 P . 1 p. i i P .1 .p. i o t a l e s T o t a l e sT o t a l e sT o t a l e sT G r a m o s G r a m o s G r a m o s r a m o sG r a m o s G r a m o sG r a m o sG V e o V e o / s o %. P e l i t r e de\ , 9 3 2 , 5 97 Madrid.. , 9 3 3 , 4 78 P e l i t r e de\ , 9 4 2 , 5 44 Granada. , 1 1 2 . S 85 Pelitre \ 6 , 1 0 aragons ) 6 , 2 2 P e l i t r e ca3 , 7 5 taln.... 4 , 4 4 8 , 0 3 8,78 5 , 0 8 8 , 4 5 9 , 9 5 , 0 2 4 4 , 0 6 5 . 0 6 , 5 6 6 , 3 4 6 , 2 7 4 , 3 3 4 , 7 8 6 , 4 2 6 , 3 6 4 , 9 9 5 5 , 3 6 5 , 7 7 , 4 1 4 , 4 8 2 , 3 4 7 3 , 4 4 8 , 3 0 , 3 9 5 2 , 6 9 2 , 6 9 , 9 4 2 , 0 9 6 , 6 5 2 1 , 9 4 6 , 7 2 3 , 4 2 2 , 7 1 3 , 1 4 2 , 6 6 4 , 4 8 2 , 2 9 2 , 6 1 2 , 3 4 2 , 5 6 2 , 3 9 2 , 4 6 7 , 1 4 9 , 7 4 4 , 3 8 5 , 3 0 5 , 2 8 6 , 0 4 5 , 1 0 5 , 6 1 5 , 9 6 3 , 4 6 , 5 0 9 6 , 0 7 3 , 6 2 9 , 6 9

5 , 1 9 5 , 3 1 3 , 9 6 4 , 4 4

, 5 2 3 , 3 3 8 , 8 6 3 , 5 5 8 , 5 6 3 , 6 0 7 , 9 4 3 , 5 0 7

C O N C L U S I O N E S 1 . a Que los mtodos del primer grupo (formacin de semicarbazonas), por no dar compuestos cristalinos, resultan de tcnica larga y nmeros bajos. 2 . a Los mtodos fundados en e l poder reductor son de aplicacin prctica, y por eso son de uso corriente en los laboratorios. 3 . a De los mtodos del tercer grupo, de tcnica larga y enojosa, resulta e l ms cmodo y rpido e l de Wilcoxon, que da nmeros constantes. Facultad de Farmacia de Madrid.