Indice

1.INTRODUO...........................................................................2 2.ACTIVIDADES REALIZADAS........................................................3

1. Introduo O meu primeiro periodo de estgio no laboratrio do HDP realizou-se na rea de Serologia no periodo compreendido entre 02 a 30 de Agosto do ano em curso. Serologia ou sorologia uma rea do laboratrio, de diagnstico indirecto que se baseia no estudo do sistema imunolgico. A rea de serologia tal como outras de laboratrio importante por fornecer aos mdicos uma informao diagnstico indirecto de doencas e permitir a tomada de deciso de tratamento mais efectiva. Nesta area so realizados os seguintes exames: 1. R. Widal 2. PCR

3. HBSAG 4. HCV 5. HIV 6. VDRL 7. TPHA

8. PCR 9. DU 10.Falsiformao

2. Actividades realizadas Durante o periodo em anlise participei na realizao dos exames laboratoriais que abaixo se descrevem de forma resumida. Para cada teste apresentado o objectivo do teste, o material necessrio, os procedimento e a leitura e interpretao dos resultados entre outros aspectos.

O serodiagnstico de Widal baseia-se numa reaco antigno-anticorpo. Uma quantidade do soro do paciente se adiciona a uma quantidade conhecida de antigno O (somtico) e H (flagelar). A reaco positiva (reaco de aglutinao) j no incio da segunda semana e por alguns meses.

2.1

WIDAL

uma tcnica de aglutinao para a deteo qualitativa e quantitativa de uma infeco por salmonella tiphy (serotipos A,O, AH, BH). Material necessrio Placa com fundo branco

Vareta Agitador mecnico rotatorio Banho-maria Pipeta Micromtrica de 50l Ponta

[3]

Reagentes Os reagentes utilizados para este teste so: Salmonella tiphy O (TO)

Salmonella tiphy H (TH) Salmonella paratiphy AH (AO) e (AH) Salmonella paratiphy BH (BO) e (BH)

Amostra utilizada Soro Plasma

Procedimento Metdo qualitativo

o o

Preparar para cada paciente uma placa com 4 cavidades Numerar a placa com o nmero do paciente e identificar em cada cavidade o tipo de reagente a utilizar. Pipetar 50 l de amostra e colocar no crculo da placa

o Adicionar uma gota do reagente o Homogeneizar com a vareta

o

Levar ao agitador durante um (1) minuto

o Fazer a Leitura

Leitura e interpretao de resultados

o o

Pesena de aglutinao: positivo (+) Ausncia de aglutinao: Negativo (-)

Metdo Quantitativo: Usado s para amostras positivas no teste qualitativo. Neste caso usa-se o reagente que agluitinou no teste qualitativo o Colocar 4 tubos de ensaio no suporte [4]

Numerar os tubos com:

Nmero da amostra O antigene que aglutinou Percentagen de aglutizao

o o o o

Fazer a diluio Pipetar 2000 l de soro fisiolgico e colocar no primeiro tubo Pipetar 1000 l de soro fisiolgico para os restantes trs tubos Tirar 50 l de soro fisilogico no primeiro tubo e dispersar, subistituir com 50 l de amostra Tirar 1000 l de soro fisilogico no primeiro tubo e colocar no segundo para o terceiro, do terceiro para o quarto e dispersar 1000 l do quarto. Colocar uma gota de reagente em cada um dos 4 tubos Homogeneizar e incubar por 24 horas a 37 C. No dia seguinte retirar os 4 tubos e verificar que houve aglutinao em todos os tubos

o o o

Leitura e interpretao de resultados

o

Considerando os 4 tubos com leituras de 1/40, 1/80, 1/160 e 1/320 de cada conjunto de tubos em que houve aglutinao escolher-se-a a maior leitura.

2.2 PCR Proteina C-Reativa

O PCR e uma tcnica de aglutinao para a deteco qualitativa e semi quantitativa de PCR em soro humana. As particulas de latex recobertas com anticorpos anti PCR humanas sao agluitinadas por moleculas de PCR presentes na amostra do paciente. PCR serve para determinar o processo inflamatrio Material necessrio Agitador mecnico rotatorio de velocidade regulda a 80/100 RPM

[5]

Uma placa com cavidades pretas Vareta Pipeta Micrometrica de 50l Ponta

Reagentes Os reagentes utilizados para esta teste sao: Latex

Controlo positivo Controlo negativo

Amostra utilizada Soro Procedimento Metodo qualitativo

o

Numera a placa fazendo cada cavidade para um paciente

o Colocar o soro do paciente na cavidade correspodente o Adicionar o reagente o Homogeneizar com a vareta o Levar ao agitador durante dois (2) minutos o Fazer a Leitura Leitura e interpretacao de resultados
o Positivo (+): presena de aglutinaes que podem ser mais ou menos evidentes.

Ausncia de aglutinao: Negativo (-)

[6]

2.3

Teste de Falciformao

Este exame serve para determinar a presena de hemacias em forma de foice. Material necessrio o Lmina sem bordo o Lamela
o

Pipeta de 10l

o Ponta de 10 Reagentes
Preparao do reagente o

Colocar 10 ml de soro fisiologico num tubo de ensaio e adicionar 1 copinho (1 cc) de metabisufito de sdio em po

o Homogeneizar
o

Rotular o tubo

Os reagentes utilizados para esta teste so: Metabisufito de sodio em diluio com gua destilada 1:10 Amostra utilizada Sangue total Procedimento
o

Colocar duas gotas so sangue do paciente em cada lado da lmina

o Colocar a lamella numa das gotas

o

Pipetar 10 l de metabisufito e adicionar com a gota de sangue e homogeneizar

o Parafinar
o o o

Levar ao banho-maria durante 30 minutos ou mais Observar com objectiva 40x Dar os resultados [7]

Leitura e interpretao de resultados

o o

Presena de clulas falciformes: Positivo (+) Ausencia de celulas falciformes: Negativo (-)

2.4

HIV RDT

Para a deteo do HIV utilisam se os seguintes testes:

Determine HIV um imunoensaio qualitativo de leitura visual para a deteco de anticorpos contra o HIV-1 e HIV-2

Uni-gold- usado para reconfirmar os resultados positivos do teste Determine HIV

Material necessario Pipeta Micromtrica de 50l Ponta

Amostra utilizada Soro Sangue total

Procedimento o Colocar uma gota do soro do paciente no carto de ensaio o Aguardar por 15 minutos o Fazer a leitura

Leitura e interpretao de resultados

o o

Presena de dois riscos (paciente e control): positivo (+) Presena de um risco (control): Negativo (-)

[8]

2.5

Uni-Gold RDT

O teste Uni-Gold ( Trinity Biotech) e um reagente nico de ensaio para a deteco de anti-corpos do virus de immunodeficincia do tipo 1 e 2 no soro, plasma ou sangue total. O virus da imunodeficincia humana (VIH ) tem sido reconhecido como o agente etiologico do sindroma da imonodeficiencia adquirida (SIDA).

Procedimento
o o

Retirar a aparelho da capa protectora Rotular cada teste com a informao apropriada do paciente

o Usando uma pipeta descartavel fornecida com o kit, enche-lo com soro/plasma/sangue total o Segurando a pipeta por cima do porta da amostra adicionar 2 gotas de amostra (aproximadamente 60 l) cuidadosamente
o

Esperar por 10 minutos para que occora a reaco. O resultado deve ser imediatamente lido depois de 10 minutos depois do tempo de incubacao mas pode ainda estar estavel nos 10 minutos seguintes. Recomenda-se nao ler resultados depois de 20 minutos

Leitura e interpretao de resultados

o

Uma linha de qualquer intensidade que se forma na regio de teste, mais uma linha formada na regio de controlo indica resultado positivo (+) Uma linha que se forma so na regio de controlo indica resultado negativo (-) Se nenhuma linha aparece na regio de controlo o teste e inconclusivo. Deve ser repetido com outro aparelho

[9]

A reaco positiva e visualizada pelo risco rosa/vermelho na regio de controlo do aparelho. A reaco negativa ocorre na ausencia de anticorpos de imunoglobulina ao VIH no specimen analizado. Em consequncia nao sera desenvolvida nenhum risco visualmente detectavele no aparelho O aparecimento de um risco rosa/vermelho na regio de controlo indica performance apropriada dos reagents no kit.

2.6

HBSAG RDT

Utilizao do teste um teste rapido (RDT) que permite a deteco qualitativa dos antigen hbs no soro, plasma ou sangue total humano. Hbs e o virus da hepatite B e responsavel por hepatites agudas e cronicas. O HBS aparece varios dias a varias semanas apos uma exposio ao virus e pode persistir durante varios meses.

Material necessrio Pipeta Micrometrica Ponta

Amostra
Soro, plasma e sangue total

Procedimento
Com amostras de soro ou plasma o Retirar o dispositivo da saqueta selada e utilize-lo rapidamente Colocar o dispositivo numa superficie plana e limpa Colocar trs gotas de amostra aproximadamente 50l.

o o

[10]

Depois de ter introduzido a amostra, esperar que apareca a linha de control (C ) e eventualmente a linha T (teste). Ler o teste 15 minutos apos ter introduzido a amostra. Nao fornecer um resultado negative antes de 30 minutos

Com amostra de sangue total (puno venosa) o Retirar o dispositivo da saqueta selada e utilize-lo rapidamente Colocar o dispositivo numa superficie plana e limpa Transferir tres gotas de sangue total (aprox 50l) com a pipeta de transferencia no poco amostra (S) do dispositivo Colocar uma gota de tampo (aprox 40l) evitando a formao de bolhas de ar no poco S. Ligar o cronmetro Apos ter introduzido a amostra esperar que aparea a linha de controlo (C) e eventualmente a linha de teste (T). Ler o teste apos 15 minutos. No fornecer um resultado negativo antes de 30 minutos

o o

o o

Com amostra desangue total (ponta do dedo) o Retirar o dispositivo da saqueta selada e utilize-lo rapidamente Colocar o dispositivo numa superficie plana e limpa Colher aproximadamente 75l de amostra com o tubo capilar Dispensar utilizando uma pera na zona de introducao de amostra Colocar uma gota de tampao (aprox 40l) evitando a formacao de bolhas de ar no poco S. Apos ter introduzido a amostra esperar que apareca a linha de controlo (C) e eventualmente a linha de teste (T). Ler o teste apos 15 minutos. Nao fornecer um resultado negativo antes de 30 minutos

o o o

[11]

Interpretao dos resultados o Positio (+): Aparecem duas limhas de cor distinta: uma de cor azul na zona de controlo C evermelha na zona de teste (T), uma linha (T) rosada avermelhada, mesmo muito fina indica um resultado positivo Negativo (-): Aparece uma limha azul na zona de controlo C. Nao aparece nenhuma linha na zona de teste Invlido: A linha de controlo no aparece ou ausencia de linhas C e T, um volume de amostra insufieciente ou uma execuo incorrecta do teste so as causas provaveis. Ler de novo as instrucoes e efectuar de novo o teste com u novo dispositivo. Se o problema persistir nao utilizar mais a emabalagem e contactar o seu distribuidor local.

1.1 HCV RDT

Utilizao do teste um teste rapido que utilize a tecnologia imunocromatografica e que permite a deteco qualitativa do antgigeno do virus da hepatite C no soro ou plasma.

Reagentes O teste contm particulas finas de proteina A e antigeno de HCV na membrana Material necessario
Pipeta descartavel Centrifugadora Cronometro

Amostra
Soro, plasma

Procedimento [12]

Retirar o dispositivo da saqueta selada e utilize-lo rapidamente Colocar o dispositivo numa superficie plana e limpa Transferir a amostra atraves da pipeta ou conta-gotas Se usar a pipeta: Trasnferir 5l de soro ou plasma para o orificio da amostra (S), do dispositivo de teste depois adicionar 2 gotas de buffer (aprox 80 l) e iniciar o cronmetro.

o o o

Se usar frasco conta gotas descartavel: Mantenha o conta gotas na posicao vertical, deixa cair a amostra ate a linha de enchido, aproximadamete 5 l. Transferor a amostra para o orificio da amostra do dispositivo de teste, depois acrescentar duas gotas do buffer aproximadamente 80l e iniciar o cronmetro

Espere que a linha vermelha apareca. Ler dentro de 10 minutos Interpretao dos resultados o Positio (+): Aparecem duas linhas de cor vermelha bem distinta: uma deve estar na regio de controlo (C) e outra na regio de teste (T) Negativo (-): Aparece uma limha vermelha zona de controlo C. Nao aparece nenhuma linha vermelha ou rosa na regiao de teste. Invalido: A linha de controlo nao aparece. Um volume de amostra insufieciente ou uma execuo incorrecta do teste sao as causas provaveis. Ler de novo as instrucoes e efectuar de novo o teste com u novo dispositivo. Se o problema persistir no utilizar mais a embalagem e contactar o seu distribuidor local.

[13]

2.7 TPHA (Treponema Hemoagglutination Assay)

o o

Pallidum

E teste confirmatrio que se faz quando o VDRL for positivo E uma reaco serolgica que procura antigenios do agente etiolgico causador da sifilis. E uma hemoaglutinao

Material necessrio
Uma placa com multiescavaes Pipeta de 25 l Pipeta de 75 l Pipeta de 100 l

Reagentes
Clula teste Celula controlo Controlo positivo Controlo negativo

Procedimento: Numa placa de multiescavaes devidamente assinalada colocamos:

Primeira coluna coloca-se a celula teste o Nas duas primeiras escavaes coloca-se 75 l de celula teste o Adiciona-se 25 l de controlo positivo (+)

[14]

o Na segunda escavacao coloca-se 25 l de controlo negativo (-) o Nas outras 6 escavacoes coloca-se 75 l de celula teste

Na segunda coluna coloca-se o diluente o Na primeira escavao coloca-se 200 l de diluente

o Da segunda a sexta escavao coloca 100 l de diluente o Retirar 10 l de diluente da primeira escavacao e despresa-se. De seguida adicionar 10 l de soro do paciente. o Homogeneisamos com uma pipeta de 100 l e retira-se 100 l da mistura da primeira escavacao e coloca-se na segunda escavacao. o Homogeneizar e passar para a terceira escavacao e assim sucessivamente ate a sexta escavao. o H omogeneizar e deprezar 100 l da 6 escavacao.

Com uma micropipeta de 25 l: o Retira-se 25 l da mistura e coloca-se na coluna da celula teste da primeira a sexta escavao. o Repetir o mesmo processo (usando 25 l) da mistura na coluna da celula controlo da primeira a sexta escavao. o Parafina-se para impeder o vapor proteger contra a luz e poe-se numa gaveta escura durante 45-50 minutos

Leitura e interpretao de resultados A leitura feita macroscopicamente: Positivo (+): Presena de aglutinaes na diluio do paciente. A quantificao da positividade em relao aglutinao de cada escavao da coluna de diluio do paciente. O titulo fornecido a partir de 1/80 at 1/2560.

[15]

Negativo (-): No se apresentam aglutinaes na diluio do paciente.

2.8

VDRL

um exame de tipo antigenio-anticorpo para dectectar a doena de Syphilis.

Material

Placa com fundo branco Vareta Agitador mecanico rotatorio Pipeta Micrometrica de 50l Ponta

Reagentes RPR- carbon ou VDRL .

Amostra Procedimento Pipetar 50l de soro do paciente e colocar na placa Soro Plasma

[16]

Adicionar o reagente Homogeneizar Levar ao agitador durante 8 minutos Fazer a leitura

Interpretao de resultados feito macroscopicamente.

Positivo (+): presena de aglutinaes que podem ser mais ou menos evidentes. Da que o resultado dado por cruzes: Uma a trs cruzes.

2.9

Grupo sanguineo

Determinao do Du
um teste que faz quando o antigenio anti-D Monoclonal IgG/IgM durante a determinao do grupo sanguneo em placa no aglutinar. Material
Dois tubos de ensaio Uma pipeta de 50 l Uma pipeta de 100 l Ponta Banho-maria Centrifugadora

Amostras
Sangue total

Reagentes
Anti-D Reagente de Coombs

[17]

Procedimento
Pipetar 100 l de soro fisiologico Colocar no primeiro tubo de ensaio Adicionar 100 l de sangue total do paciente Homogeneizar Retira-se 100 l da mistura do primeiro tubo Colocar no segundo tubo Adicionar duas gotas do reagent anti D no Segundo tubo Leva-se ao banho-maria durante 18-20 minutos Faz-se a leitura macroscopica e se no houver aglutinaes: o o o o o o Faz-se a lavagem dos globulos vermelhos com soro fisiologico Levamos na centrfuga por 15 minutos Decanta-se e volta-se a lavar os globulos vermelhos por trs vezes Na ltima decantao acrescenta-se o reagente de Cumbs Retira-se uma gota da amostra Coloca-se na lamina e cobre com a lamella e leva-se ao microscopio para observar com objectiva 10x ou 40x.

Interpretao dos resultados Positivo (+): Observa-se as hemcias agrupadas Negativo (-): Observa-se as hemcias separadas umas das outras

[18]

3. Concluso
A minha experincia nesta sesso permitiu-me alicerar os meus conhecimentos e habilidades no uso das tcnicas de diagnstico teraputico realizadas na mesma. Foi tambm um momento que permitiu o aumentar da consciencializao da problematica real do HIV-SIDA graas ao contacto dirio com casos dessa doena De agradecer os tcnicos que nos acompanharam pelo empenho e boa vontade em partilhar a sua experiencia connosco bem como o espirito de equipa verificado durante esta fase do estgio.

[19]