Pruebas Rpidas para la Deteccin de Antgenos Microbianos

Lic. TM Luis Alvarado Rios

Antgenos
Un antgeno es una molcula de superficie celular, que puede inducir la formacin de anticuerpos. Eptopo, es la zona del antgeno donde se une el anticuerpo. Cada eptopo est definido por su anticuerpo, los cuales interactan por complementariedad espacial. Las protenas son las principales molculas antignicas

Anticuerpos
Los anticuerpos son molculas proteicas secretadas por un tipo celular del sistema inmune, los anticuerpos tienen una altsima afinidad por sus antgenos correspondientes. Anticuerpos: Defensa natural Utilidad teraputica Utilidad Diagnstica Marcador de Infeccin o exposicin. Deteccin de antgenos

Diagnstico Microbiolgico
Conjunto de procedimientos empleados para establecer la etiologa del agente responsable de una enfermedad infecciosa. Diagnstico Microbiolgico Directo. Implica la demostracin del agente, sus metabolitos o componentes antignicos en los fluidos orgnicos. Diagnstico Microbiolgico Indirecto. Implica la demostracin de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el sistema inmune.

Mtodos en el Diagnstico Microbiolgico

Directo: Tinciones Cultivos Mtodos Inmunolgicos Mtodos Moleculares Indirecto Deteccin de Anticuerpos

Mtodos Inmunolgicos en el Dx. Microbiolgico

Aglutinacin Precipitacin ELISA Inmunofluorescencia Inmunocromatografa-Lateral Flow.

Pruebas Rpidas en el Diagnstico Microbiolgico

El diagnstico microbiolgico requiere ser oportuno y confiable. La microbiologa convencional suele requerir un tiempo prolongado para obtener el diagnstico. Las pruebas inmunolgicas permiten acortar el tiempo requerido para el diagnstico. No recuperan el agente etiolgico, solamente detectan su presencia. No requieren equipos sofisticados en su procedimiento. Su principal desventaja la lectura subjetiva, la disponibilidad en el mercado y el costo.

Pruebas Rpidas en el Diagnstico Microbiolgico

Una prueba rpida ideal es aquella que brinda resultados en corto tiempo, no requiere mayor entrenamiento para su realizacin e interpretacin, no requiere instrumentacin, de fcil conservacin, de bajo costo y disponibilidad en el mercado. Debe tener un rendimiento adecuado en cuanto a sensibilidad y especificidad.

 Sensibilidad
Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo enfermo. Es la probabilidad de que para un sujeto enfermo se obtenga en la prueba un resultado positivo. La sensibilidad es, la capacidad del test para detectar la enfermedad.

 Especificidad
Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo sano. Es la probabilidad de que para un sujeto sano se obtenga un resultado negativo. Se puede definir la especificidad como la capacidad del test para detectar a los sujetos sanos.

Mtodos Inmunolgicos en el Dx. Microbiolgico

Aglutinacin
Reaccin Ag-Ac donde el antgeno esta formando parte de clulas, bacterias o se encuentra unido a partculas inertes. La reaccin Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por el aglutinado celular o bacteriano formado. Serotipificacin bacteriana. Ltex. Partculas de poliestireno de 0.25 0.8 m de dimetro. Coaglutinacin. Staphylococcus aureus COWAN I, proteina A. Hemaglutinacin.

Aglutinacin de Ltex
Rotavirus. Meningitis. Antgenos bacterianos. Antgeno capsular de Cryptococcus.

Rotavirus
Pertenece a la familia de los reovirus, se clasifican en serogrupos de la A a la G. Rotavirus grupo A es una de las principales causas de diarrea infantil severa en nios de 6 a 24 meses. Pruebas diagnsticas:
Ltex Elisa Inmunocromatografa

Rotavirus Ltex

Rotavirus Ltex
Test Rpido para la deteccin de rotavirus grupo A en heces Ac. Polivalentes de conejo contra Rotavirus Grupo A, ligados a partculas de ltex Sensibilidad frente a PCR 97.2% Especificidad frente a PCR 97.1%
Periodo: Enero Marzo - Nios menores 2 aos 2006 12% 2007 4% 2008 2%

Meningitis. Antgenos Bacterianos

Test Ltex para deteccin de polisacridos capsulares solubles en LCR, suero y orina. Anticuerpos policlonales de conejo y monoclonales de ratn. Tratamiento previo de la muestra con calor. BM 100C. Especificidad entre 97% y 100%

Meningitis. Antgenos Bacterianos

Deteccin de los siguientes agente etiolgicos Haemophilus influeza b Streptococcus pneumoniae Streptococcus grupo B Neisseria meningitidis (A, B, C, Y, W135) Escherichia coli K1

Meningitis. Antgenos Bacterianos

Cryptococcus neoformans
Hongo levaduriforme capsulado Hbitat ambiental, excretas de aves Ingreso por vas respiratorias Diseminacin en inmunosuprimidos Infeccin frecuente en pacientes HIV

Antgeno de Cryptococcus
Deteccin del antgeno polisacrido capsular glucuronoxilomanano (GXM). Sensibilidad y especificidad 100% Tratamiento previo de las muestras. BM 100C. Muestras de suero tratamiento con la enzima pronasa. Efecto de prozona Enero Marzo 2008
55 pruebas 6 positivos (aprox 10%)

Cryptococcus neoformans

Precipitacin
Participan Ag y Ac solubles que van a formar inmunocomplejos que precipitan cuando estn en proporcin equivalente. La precipitacin es mxima donde la proporcin entre ambos es ptima (parte central de la curva), pero va disminuyendo a medida que predomine el Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva respectivamente)

Inmunodifusin doble
Utilizada para detectar Anticuerpos generados en micosis invasivas Aspergillus Coccidioides Histoplasma Candida

ELISA
ELISA: competitivo no competitivo Indirecto deteccin de anticuerpos Sndwich o de Captura deteccin de antgenos

Campylobacter
Es uno de los principales agentes causales de diarrea en nios. El Dx. de laboratorio se puede realizar con un frotis coloreado. til en pacientes que han iniciado el tratamiento antibitico, pacientes con baja carga bacteriana. Elisa de captura.
Anticuerpo policlonal de conejo contra antgeno especfico de Campylobacter jejuni

Sensibilidad 100% Especificidad 99%

Campylobacter ELISA

Clostridium difficile toxinas AyB

Elisa de captura de antgenos de toxina de A y B de C. difficile a partir de muestras de heces.

Imunocromatografa-Lateral Flow
Pruebas de gran desarrollo en los ltimos aos. Posibles de implementar en estaciones de campo. No requieren mayor entrenamiento ni equipamiento. Resultados rpidos ( 10 60 minutos) tiles para detectar antgenos y anticuerpos

TCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFA
C T S

ESQUEMA DE INMUNOCROMATOGRAFA PARA DETECCIN DE ANTGENOS

Anticuerpos de deteccin detecci marcados con Oro Coloidal Antgeno en muestra Ant

TIRA NITROCELULOSA
Anticuerpo de Captura contra anticuerpo de deteccin detecci Anticuerpo de Captura contra antgeno ant especfico espec

www.biogenix.com.co/internas/libreria/documentos/ICT.ppt

Estreptococo -hemoltico grupo A

Los estreptococos del grupo A son la principal causa de Faringitis bacteriana. Un diagnstico oportuno pueden evitar las enfermedades post estreptoccicas: fiebre reumtica, glomerulonefritis. Las pruebas diagnsticas:
Cultivo Inmunocromatografa

Estreptococo -hemoltico grupo A

Inmunoensayo, deteccin de polisacridos de grupo A con anticuerpo policlonales de conejo. Extraccin del antgeno: tratamiento del hisopado con nitrito de sodio y cido actico. Deteccin 1x105 UFC/test

Estreptococo -hemoltico grupo A

Enero - marzo 2008 74 pruebas 7 positivos (10%)

Virus Respiratorios
Las infecciones virales son las responsables de la mayora de infecciones respiratorias altas. Virus de la Influenza, Adenovirus, Virus Respiratorio Sincicial. Importantes por su patogenicidad y capacidad de causar brotes y epidemias. Pruebas diagnsticas. Cultivo. Inmunofluorescencia Inmunocromatografa

Influenza A
Test inmunocromatogrfico, con anticuerpos monoclonales de pollo frente a la nucleoproteina del virus Influenza A. Buffer de extraccin con EDTA y nitrito de sodio. Importante. Coleccin de muestra nasofarngea Detectabilidad 7.2 x 106 pv/mL Sensibilidad especificidad 76.6 % 100% frente RT-PCR 96.9 % 100% frente IFI

Influenza A
Enero - marzo 2008 93 pruebas 15 positivos (16%)

Toxina A de Clostrium difficile

C. difficile es una causa importante de diarrea asociada a antibiticos. Puede causar una colitis pseudomembranosa. Toxinas de C. difficile
Toxina A: Enterotoxina. Toxina B: Citotoxina in vitro.

Pruebas Diagnsticas
Aglutinacion Ltex. Detecta antgenos de C. difficile no de la toxina Citotoxicidad en cultivo celular Inmunocromatografa Elisa

Toxina A de Clostrium difficile

Toxina A de Clostrium difficile

Lmite de deteccin: Sensibilidad 90% Especificidad 99% 1.38 ng/mL

Gracias por su atencin