Universidade Estadual de Campinas Faculdade de Engenharia de Alimentos TA 514 Bioqumica de Alimentos

Preparo de Soluo Tampo

Grupo II: Camila Sousa Natlia Carvalho Renan Alex Lazarin Tatiana Sakamoto 092470 092810

Campinas, 21 de Maro de 2011

Sumrio Sumrio..................................................................................................................................2 Introduo...............................................................................................................................3 Objetivos................................................................................................................................5 Materiais e Mtodos...............................................................................................................5 Preparo de Soluo Tampo..............................................................................................5 Verificao da Capacidade Tamponante...........................................................................5 Resultados e Discusses........................................................................................................5 Preparo de Soluo Tampo..............................................................................................5 Verificao da Capacidade Tamponante...........................................................................6 Solubilidade das Proteinas do Leite...................................................................................8 Capacidade Tamponante de Diversos Sistemas................................................................8 Curvas de Titulao de Solues:......................................................................................9 Concluses...........................................................................................................................10 Referncias Bibliogrficas...................................................................................................10

Introduo
Qualquer soluo que contenha um cido fraco e uma base fraca tem a capacidade de absorver pequenas quantidades de um cido forte ou de uma base forte com uma variao muito pequena no pH. Quando pequenas quantidades de um cido forte so adicionadas, elas so neutralizadas pela base fraca, enquanto que pequenas quantidades de uma base forte so neutralizadas pelo cido fraco. Tais solues so chamadas tampes, pois elas resistem a variaes significativas no pH. Um tampo cujo pH seja menor que 7 pode ser preparado misturando-se um cido fraco com um sal derivado do cido fraco, e um tampo cujo pH seja, maior que 7 pode ser preparado misturando-se uma base fraca com um sal derivado de base fraca. Pelo conveniente ajuste entre a razo de concentraes dos constituintes do tampo, pode ser preparado um tampo com qualquer pH desejado. Contudo, a faixa de pH mais efetiva para qualquer tampo est sobre ou prxima do pH em que as concentraes do cido (ou base) e do sal so iguais. Em um tampo cido, a concentrao de H+ (e o pH) so determinados pelas concentraes relativas do cido fraco (HA) e sua base conjugada (que o nion, A-): Ka = [H+][A-] / [HA] Resolvendo para [H+] e aplicando logaritmo, temos: pH = pKa + log {[A-] / [HA]} E esta a equao de Henderson-Hasselbalch para o clculo do pH, vlida para pHs entre 4 e 10. Um fator determinante da eficincia do tampo a sua concentrao que a soma das concentraes do cido e da base conjugada. Quanto maior a concentrao de um tampo, maior a disponibilidade das espcies capazes de doar ou receber prtons e sua eficincia mxima no pH igual ao pKa. - Qual a importncia do sistema tampo no sistema biolgico? Os tampes biolgicos so aqueles encontrados nos seres vivos. Eles so responsveis pela regulao dos lquidos do organismo que inclui a monitoramento da concentrao do on hidrognio, de modo a assegurar o ambiente timo para as funes celulares. A reduo do pH no sistema biolgico denominada acidose e o seu aumento constitui a alcalose. Ambos, acidose e alcalose, podem diminuir acentuadamente a eficincia das reaes qumicas celulares, por isso, o metabolismo celular exige um estreito limite para a concentrao do on hidrognio. Como o metabolismo celular produz cidos que devem ser neutralizados, a fim de preservar o pH ou, em outras palavras, manter estvel a concentrao do on hidrognio, a regulao do equilbrio entre os cidos e as bases do organismo depende de um mecanismo imediato, representado pelo sistema tampo - Explique se a adio de qualquer volume de base interfere significativamente no valor final do pH de uma soluo tampo. A soluo de um cido fraco em gua apresenta uma concentrao de HA muito maior do que a de A, como resultado da pequena dissociao que caracterstica do cido fraco. Se esta soluo for submetida a uma contnua adio de lcali, haver uma progressiva dissociao do cido, cuja concentrao diminuir, e um conseqente aumento da concentrao de A, acompanhados do aumento do valor do pH. Se a quantidade de lcali adiciona for grande, a concentrao de H acaba tornando-se to reduzida que passa a ser insuficiente

para compensar, com sua dissociao, novas adies de lcali. A partir desse ponto, o pH sofrer aumentos significativos a cada nova adio de lcali, mostrando que o sistema perdeu suas propriedades tampo.

Figura. Titulao de um cido fraco com lcali. Na regio assinalada, as adies de lcali provocam pequenas variaes do pH; fora dessa regio, a variao grande.

- Qual a importncia das solues tampes na ao das enzimas? Mudanas extremas de pH podem alterar a estrutura da enzima devido a uma repulso de cargas. Mudanas mais brandas de pH podem levar a uma dissociao de enzimas oligomricas. Por outro lado, as mudanas de pH que no afetam totalmente a estrutura de uma enzima podem diminuir sua atividade apenas por estar afetando resduos do stio cataltico. Sendo assim, o pH um fator de grande importncia para atividade enzimtica, podendo esta ser maior ou menor em determinadas faixas de pH. O sistema tampo importante justamente para garantir uma faixa de pH em que a atividade enzimtica se d com sua maior eficincia, garantindo processos enzimticos mais rpidos, como mostra a Figura 2, por exemplo.

Figura 2: Curva da atividade enzimtica com variao de pH.

Objetivos
- Preparo de solues tampo e verificao da capacidade tamponante. - Clculo de pH, concentrao de cido fraco e sua base conjugada empregados no - preparo de sistemas tampo. Conhecimento da faixa de capacidade tamponante de diferentes solues tampo.

Materiais e Mtodos
Bquer; Bagueta; Pipeta; Balo volumtrico; Potencimetro; cido clordrico (HCl); Fosfato de Sdio monobsico; Fosfato de sdio dibsico; gua destilada; Suco de fruta comercial (sabor uva)

Preparo de Soluo Tampo

- Preparou-se 100 mL de fosfato de sdio monobsico 0,2 Mol/L e 100 mL de soluo de fosfato de sdio dibsico 0,2 Mol/L. - Preparou-se 100 ml de tampo fosfato 0,2 Mol/L pH 7,0 em um bquer e medindo o pH em potencimetro.

Verificao da Capacidade Tamponante

- Adicionou-se 5 mL de HCl 0,1 Mol/L no bquer contendo 100 mL de tampo fosfato 0,2 Mol/L pH 7,0 e verificou-se o pH em potencimetro. - Transferiu-se 100 mL de gua destilada em um bquer e adicionou-se 5 mL de HCl 0,1 Mol/L, medido o pH antes de depois da adio de cido. - Verificou-se o pH do suco de fruta comercial (100 mL). Adicionou-se 5 mL de HCl 0,1 Mol/L no bquer contendo 100 mL de suco de fruta e mediu-se novamente o pH.

Resultados e Discusses
Preparo de Soluo Tampo

a) Clculo para preparo 100 mL de fosfato de sdio monobsico 0,2

Mol/L e 100 mL de soluo de fosfato de sdio dibsico 0,2 Mol/L.

Dados: Fosfato de sdio monobsico PA: (NaH2PO4.H20) PM = 138,00 Soluo de fosfato de sdio dibsico 0,5 M cido fosfrico: pKa = 2,1; pKa2 = 7,2; pKa3 = 12,4 NaH2PO4.H20 1 mol ---- 138g 0,2 mol ---- x x = 27,6 g/L = 2,76 g/100mL

Fosfato de sdio dibsico (0,5M) C1.V1 = C2.V2 0,5.V1 = 0,2.100 gua destilada V1= 40mL Completar volume pra 100mL com

b) Clculo para a quantidade de fosfato de sdio monobsico 0,2 Mol/L e

de soluo de fosfato dibsico 0,2 Mol/L para preparo de 100 mL de tampo fosfato 0,2 Mol/L pH 7,0.

[HA] 7 = 7,2 + log [A-] [HA]

pH = pKa + log [A-]

log [A-] = -0,2 [HA] [HA] = 1,585 [A-] [HA] = 1,585.[A-]

[A-] + [HA] = 0,2 [HA] = 1,585.[A-] [A-] + [HA] = 0,2 2,585.[A-] = 0,2 Para [A-]: C1.V1 = C2.V2 0,2.V1 = 0,077.100 Para [HA]: C1.V1 = C2.V2 0,2.V1 = 0,123.100

[A-] = 0,077mol e [HA] = 0,123mol

V1 = 38,5mL

V1 = 61,5mL

c) Verificao de pH em potencimetro. Foi verificado que o tampo tem pH = 6,96

O pH esperado era 7, porm o valor de 6,96 bem aceito em termos prticos, j que para que o pH se dar com tanta exatido, seria necessrio pesar massas muito precisas e no haver nenhum tipo de resduo ou sobras de reagentes em qualquer um dos materiais utilizados, o que se distancia um pouco da realidade de um laboratrio qumico.

Verificao da Capacidade Tamponante

a) Clculo do pH terico esperado, aps adio de 5 mL de HCl 0,1mol/L

em 100 ml de soluo tampo fosfato 0,2 mol/L e pH 7. pH terico esperado:

NaH2PO4 + H2O

NaH-PO4 + H3O+

0,123 + 0,0005 = 0,1235 pH = pKa + log [A-] pH = 7,2 + log 0,075 pH = 6,983 [HA] 0,1235 pH antes de adicionar 5mL de HCL 0,1Mol/L: pH (antes) = 6,96 pH depois de adicionar 5mL de HCL 0,1Mol/L: pH (depois) = 6,32 O pH esperado era de 6,983, porm, na prtica o pH foi de 6,32. Essa diferena pode ter ocorrido por dois motivos: - a maneira de calcular o pH terico se d de uma forma generalizada, ou seja, no levado em conta qual sistema tampo se est trabalhando, sendo assim, muito natural o terico desvencilhar-se da prtica; - cada sistema tampo tem uma capacidade tamponante especfica e uma faixa de pH atuante tambm especfica, o que poderia representar que o sistema tampo fosfato no tem uma grande capacidade de manter o pH ou sua eficincia no se d nessa faixa de pH=7, porm, esta ltima afirmao no verdadeira de acordo com a literatura.

b) Adico de 5 mL de HCl 0,1 Mol/L em 100 mL de gua destilada pH (antes) = 6,02 pH (depois) = 3,0
Ao adicionarmos HCl gua destilada, verificamos que o pH reduziu-se. Isso ocorreu pelo fato de o cido clordrico, quando dissociado, liberar prtons. A gua destilada possui molculas de H+ dissociado. Quando adicionamos o HCl que, quando dissociado libera prtons, a soluo passa a mais molculas de H+. Esse aumento da concentrao de prtons torna a soluo cida e, conseqentemente, diminui o pH. H2O H+ + OH- (antes)

H2O H+ + OHHCl H+ + Cl(depois)

c) Adico de 5 mL de HCl 0,1 Mol/L em 100 mL de suco de fruta.

pH do suco de fruta comercial: pH (antes) = 3,63 pH do suco de fruta + 5mL de HCL 0,1Mol/L: pH (depois) = 3,53

notvel que o pH do suco diminui muito pouco com a adio de cido clordrico, podendo indicar a presena de um sistema tamponante em sua composio. Os cidos presentes em frutas so cidos orgnicos e, portanto cidos fracos (exemplo: cido ctrico, cido majoritrio em vrias frutas), estas apresentam complexa e diversificada composio podendo haver associao desses cidos com ons presentes e formao de um sistema tampo, ou reao dos ons H+ adicionados com algum componente, explicando assim o motivo de no ocorrer acentuado decrscimo no pH com a adio de cido como ocorre na gua destilada,

na qual nenhuma associao ou reao com os ons hidrognio adicionados possvel.

Solubilidade das Proteinas do Leite

Em 200 mL de leite desnatado 2% adio de : pH Aspecto 10 mL de soluo HCl 0,6 mol/L 5,57 Muito precipitado, pouco turvo 10 mL de soluo NaOH 0,6 mL/L 11,63 Sem precipitado, lmpido

10 mL de gua 6,81 Pouco precipitado, bastante turvo

A casena, protena majoritria no leite, carregada negativamente, o que garante repulso das molculas e, portanto, disperso no produto. Com adio de cido, as cargas so neutralizadas, o que causa aproximao das molculas e conseqente precipitao. A formao de precipitado se deve, portanto, aglomerao da casena. Na 2 soluo ocorreu turbidez, decorrente dos slidos em suspenso no leite. J na 1 soluo, a turbidez foi pouca, uma vez que as protenas foram precipitadas, ocorrendo menor concentrao de slidos solveis no restante do sistema e provocando menor turbidez.

Capacidade Tamponante de Diversos Sistemas

Sistema tampo T. acetato T. fosfato T.citrato T.citrato fosfato T. borato T. borato NaOH T. tris HCl T. glicina HCl T. glicina NaOH T. carbonato - bicarbonato Faixa de pH Capacidade Tampo 4,26 - 5,26 6,36 7,36 2,2 8,0 2,0 12,0 8,23 10,23 7,8 10,0 7,2 9 1,2 3,6 8,4 13,0 9,2 10,7 pH de capacidade tampo mxima 4,76 6,86 3,04; 4,75; 5,41 3,04; 4,75; 5,41 9,23 9,0 8,3 2,34 9,6 10,2
Fonte: [1] e [2]

Curvas de Titulao de Solues:

Figura: a)Titulao de 25 mL de soluo HCl 0,1 Mol/L com soluo de NaOH 0,1 Mol/L ; b)Titulao de 25 mL de soluo de glicina 0,1 Mol/L com soluo de NaOH 0,1 Mol/L ; c)Titulao de 25 mL de soluo de cido actico 0,1 Mol/L com soluo de NaOH 0,1 Mol/L.

Pelos formatos apresentados pelas curvas de titulao, observa-se que a titulao de HCl com NaOH tpica de uma titulao cido forte x base forte, no havendo formao de soluo tampo intermediria j que todo cido e toda base esto nas formas totalmente dissociadas, a reao envolvida : H+ + OH H2O

J nas curvas de titulao das solues de Acido Actico e de Glicina, observa-se o efeito tamponante, caracterizado pelos plats quando pH ~ pka. cido actico trata-se de um cido fraco, no qual a dissociao no completa, e h equilbrio entre as formas dissociada e no dissociada (na regio pH~pka):
H | C | H H | C | H

COOH H

COO

Acetato (Ac-)

Ac. Actico (HAc)

Quanto mais prximo do pKa, menor a variao de pH causada por adio de base. Entre pKa +1 e pKa -1, a variao de pH reduzida (menor declive da curva), pois essa a regio na qual a soluo tem poder tamponante.

Em pH < (pKa 1) h predomnio da forma no dissociada e em pH > (pKa +1) h predomnio da forma dissociada, j em pH~pKa temos equilbrio entre as duas formas. A glicina um aminocido e sua curva de titulao apresenta dois plats, como no caso dos cidos diprticos, j que a reao tem duas etapas, e dois valores de pka:
H H | C | + NH 3 COOH H H | C | NH 3+ COO H H | C | NH 2

COO

Glicina:

Forma 1

Forma 2

Forma 3

Em pH < (pKa1-1) h predomnio da forma 1, em pH > (pKa2+1) h predomnio da forma 3 e a forma 2 predomina na faixa (pKa1 + 1)< pH < (pKa2 1). Nas regies pH~pKa 1 temos equilbrio entre as formas 1 e 2 e quando pH~pKa2, equilbrio entre as formas 2 e 3. A faixa de maior capacidade do sistema tamponante corresponde parte da curva onde o pH sofre pouca alterao com adio de volumes maiores de NaOH. Na curva de HCl nota-se que essa faixa no existe, j que NaOH neutraliza HCl na medida em que adicionado ao sistema. Na curva do cido actico, entre os pH 2 e 4 possvel observar pequeno efeito tamponante no sistema. A curva de titulao para a glicina apresenta resultado tamponante entre os pH 1 e 3 com melhor eficincia, uma vez que possvel adicionar grande quantidade de titulante sem alterar significativamente o pH do sistema. Outra faixa possvel de tamponamento para glicina entre 9 e 10, sem entretanto, ter mesma eficincia.

Concluses
Sistemas tamponantes podem ser complexos, como o caso do leite e do suco utilizados em aula prtica, e podem ser simples e possveis de serem sintetizados em laboratrio, como a soluo tampo de fosfato preparada. Eles so de extrema importncia para manuteno das funes biolgicas, auxiliam na conservao de alimentos e fornecem caractersticas intrnsecas de produtos, j que o pH influencia velocidade, intensidade e mecnica de reaes bioqumicas.

Referncias Bibliogrficas
[1] HANDBOOK, HANBOOK OF BIOCHEMISTRY. 2 ed., Editora CRC, E.U.A, 1996 [2] LEHNINGER, A.L., et al PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY. 2 ed., Editora Worth Publisher, E.U.A, 1993. [3] MARZZOCO, ANITA; TORRES, BAYARDO B. BIOQUMICA BSICA. 3ed., Editora Guanabara Koogan, R.J., 2007