Cartilago Articular Estado Actual Del Problema

Revista de Patologa de la Rodilla (edicin electrnica) Marzo de 2001
CARTILAGO ARTICULAR: ESTADO ACTUAL DEL PROBLEMA

Autor: J. A. Vega Alvarez
CARTILAGO ARTICULAR 1.Estructura y ultraestructura: El cartlago articular es un tejido elstico avascular, aneural y alinftico localizado en las articulaciones diartrodiales del esqueleto, que facilita el deslizamiento y la lubricacin de las superficies articulares, absorbe los traumatismos mecnicos y distribuye las cargas sobre el hueso subyacente. Al igual que otros tejidos conectivos del organismo, el cartlago articular est constituido por clulas, denominadas condrocitos, y por una matriz extracelular, siendo sta la que le confiere sus peculiares caractersticas mecnicas., El cartlago articular presenta cuatro capas en profundidad (Fig. 1). En cada una de ellas la estructura y composicin, as como el volumen y la forma celular, el dimetro y la orientacin de las fibras colgenas, y la concentracin de proteoglicanos son variables. Dichas capas son, desde la superficie hacia el hueso subcondral: -La zona superficial, que constituye la zona de deslizamiento articular. En ella los condrocitos son elongados y se disponen con su eje mayor paralelo a la superficie. Las fibrillas colgenas tambin son paralelas a la superficie. El contenido en proteoglicanos es el ms bajo de todo el cartlago; -La zona transicional, con fibras de colgeno de mayor dimetro y peor organizadas. Los condrocitos son ms redondeados; -La zona media o radial es la que presenta mayor concentracin de proteoglicanos y menor de agua. Las fibras de colgeno tienen un mayor dimetro y estn dispuestas perpendiculares a la superficie articular y los condrocitos son esfricos y forman a menudo columnas; -La zona ms profunda o zona del cartlago calcificado separa el hueso subcondral del cartlago hialino y se caracteriza por pequeas clulas picnticas distribuidas en una matriz cartilaginosa densamente incrustada de sales de apatita. La zona ms profunda se separa del hueso por una lnea ondulante observada con hematoxilina-eosina de color azul, denominada marca de agua o marca de marea (Mankin y Cols, 1997). Pero el cartlago articular no solamente puede estructurarse en cuatro capas de superficie articular a matriz sea subyacente, sino que gracias a las variaciones de la matriz extracelular puede dividirse asimismo en tres regiones: pericelular, territorial e interterritorial, presentando variaciones tanto en su composicin como en su funcin. As, las dos primeras se encargan de satisfacer las necesidades de los condrocitos, unir las membranas celulares a la matriz 1
que la rodea, proteger a las clulas del dao originado por las deformaciones y cargas de la articulacin y ayudar a transmitir seales mecnicas a los condrocitos cuando la matriz se deforma en los movimientos articulares. Por su parte, la misin principal de la regin interterritorial es proporcionar al tejido sus propiedades mecnicas. 1.1.Condrocitos: Los condrocitos son clulas altamente especializadas que producen y mantienen la matriz extracelular. Ocupan menos del 10 % del volumen tisular total, con variaciones de unas articulaciones a otras. Cada condrocito est rodeado por tres capas concntricas distinguibles por su composicin, que se denominan, desde la clula hacia la periferia regin pericelular, regin territorial y regin interterritorial. Al conjunto formado por un condrocito y el microambiente que le rodea (matriz pericelular y matriz territorial), se le denomina condrn o condrona. El trmino condrn fue utilizado por primera vez por Benninghoff (1925) y constituye la unidad anatmica, mecnica e histogentica del cartlago. Los condrocitos de las distintas capas del cartlago articular difieren en la forma, el tamao y, probablemente, en la actividad metablica. Todos ellos contienen las organelas necesarias para sintetizar cada uno de los componentes de la matriz extracelular, incluyendo aparato de Golgi y retculo endoplasmtico, si bien los condrocitos de la capa transicional presentan una mayor concentracin de organelas para la sntesis proteica y los de la zona de cartlago calcificado slo contiene unas pocas vesculas de retculo endoplasmtico y de membranas de Golgi. Adems, los condrocitos pueden contener filamentos intracitoplsmicos, lpidos, glucgeno y vesculas secretoras e incluso pequeos cilios que se extienden hacia el espesor de la matriz (Buckwalter y Mankin, 1998). Los condrocitos se rodean a s mismos con su matriz extracelular de forma que no se produce contacto intercelular. 1.2.Matriz extracelular: Los condrocitos del cartlago articular estn rodeados de un complejo microambiente constituido por agua y macromolculas denominado matriz extracelular (MEC), que determina las caractersticas biomecnicas del tejido, como la resistencia y la elasticidad. La composicin de la MEC presenta variaciones individuales, entre distintas localizaciones anatmicas dentro de un mismo individuo, entre las diferentes capas del cartlago de una misma articulacin. Es,
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adems, un sistema dinmico que sufre constantemente la accin de factores anablicos y catablicos. Pese a estas variaciones, la proporcin de agua oscila entre el 60 y 80% del peso total del cartlago, quedando el resto repartido entre el colgeno y los proteoglicanos principalmente, y en menor medida lpidos, fosfolpidos, glicoprotenas y otras protenas. Las macromolculas estructurales del cartlago (colgeno, proteoglicanos y protenas no colgenas) contribuyen al 20-40% del peso total del cartlago, variando sus proporciones y su contribucin a las propiedades tisulares dentro del propio cartlago; el colgeno contribuye al 60% del peso seco, los proteoglicanos al 25-25%, y las diversas glicoprotenas y las protenas no colgenas al 15-20%. Al igual que la morfologa y la funcin de los condrocitos vara segn la capa del cartlago en que se localicen, la composicin de la matriz extracelular es diferente dependiendo tanto de la profundidad del cartlago en que se localice, como de la distancia a las clulas. Adems, recientes estudios biolgicos y mecnicos (Buckwalter y Cols, 1982; Aydelotte y Cols, 1992) han demostrado que la organizacin zonal tiene importancia funcional: -Zona superficial: que presenta a su vez dos capas; una ms superficial, acelular, formada por finas fibrillas y escasos polisacridos, por debajo de la cual se encuentra una matriz con escasez de proteoglicanos respecto a otras zonas. Cultivos de clulas de esta capa han demostrado que sus condrocitos degradan proteoglicanos ms rpidamente y sintetizan menos colgeno y proteoglicanos que los de capas ms profundas. Adems presenta mayor concentracin de agua y fibronectina. -Zona de transicin: tiene un espesor varias veces mayor que el de la capa superficial y est constituida por fibras colgenas de mayor dimetro, una concentracin superior de proteoglicanos y una menor concentracin de agua y colgeno que en la capa superficial. -Zona media o radial: sta capa contiene las fibras colgenas de mayor dimetro, la mayor concentracin de proteoglicanos y la concentracin de agua ms baja. -Zona de cartlago calcificado: es una delgada capa constituida por condrocitos de pequeo tamao completamente rodeados por cartlago calcificado que separa el hueso subcondral de la capa media. En la figura 2 se observa la distribucin de las fibras colgenas en las diferentes capas del cartlago articular. La regin pericelular que rodea a los condrocitos est constituida fundamentalmente por proteoglicanos sulfatados (Poole y Cols. 1984), biglicanos (Miosge y Cols. 1994), hialuronato (Mason, 1981), una serie de glicoprotenas (Ratcliffe y Mow, 1996), fibronectina (Glant y Cols. 1985), laminina (Durr y Cols. 1996) y otros componentes como la Ancorina CII (molcula asociada a la membrana celular). Posee, asimismo, colgeno no fibrilar de tipo VI, que ha sido descrito exclusivamente en la matriz pericelular con niveles uniformemente bajos en las regiones territorial e interterritorial (Poole y Cols. 1988, 1992), no existiendo 2
apenas fibrillas colgenas. Se han descrito expansiones citoplasmticas de condrocitos que se proyectan dentro y a travs de la matriz pericelular hacia la matriz territorial, localizada perifricamente. La matriz territorial se dispone rodeando a condrocitos individuales o incluso parejas de condrocitos con sus respectivas matrices pericelulares y, en la zona radial, rodea a cada columna de condrocitos. Las delgadas fibras colgenas de la matriz territorial prxima a las clulas, se adhieren a la matriz pericelular. A distancia de la clula se entrecruza en diversos ngulos, formando una cesta de fibrillas alrededor de los condrocitos que los protege durante las cargas y la deformacin que sufre la articulacin. La matriz territorial posee una mayor concentracin que las dems de proteoglicanos ricos en condroitn-sulfato (Meachim y Stockwell, 1979). Un poco ms hacia la periferia, la frontera entre la regin territorial y la interterritorial viene marcada por un importante aumento en el dimetro de las fibras colgenas y un cambio en la orientacin de las mismas, disponindose de forma ms paralela. De todos modos, algunas fibras colgenas conectan ambas regiones, dificultando la diferenciacin precisa de la frontera entre ambas. Por ltimo, la matriz interterritorial ocupa la mayor parte del volumen del cartlago articular maduro y contiene las fibras colgenas de mayor dimetro. A diferencia de las fibras colgenas de la matriz territorial no estn organizadas alrededor de los condrocitos y su orientacin espacial presenta un cambio de 90 desde la zona superficial a la radial. De este modo, en la superficie las fibras poseen un dimetro relativamente pequeo, y generalmente se disponen paralelas a la superficie articular; en la zona de transicin, las fibrillas interterritoriales adoptan ngulos ms oblicuos, y en la zona radial se disponen, como su nombre indica, de manera radial o perpendicular a la superficie articular. En ella aparecen con mayor concentracin los proteoglicanos ricos en queratn sulfato. 1.3.Fisiologa del cartlago articular: Pese a que el tejido cartilaginoso, considerado globalmente, presenta una baja actividad metablica debido a la escasa densidad celular que posee, los condrocitos per se son clulas metablicamente muy activas, capaces de responder a diversos estmulos, como mediadores solubles (interleucinas y factores de crecimiento), agentes farmacolgicos, componentes de la matriz, cargas mecnicas y cambios de la presin hidrosttica (Buckwalter y Mankin, 1998). La nutricin de los condrocitos se realiza a partir de nutrientes del lquido sinovial, los cuales deben atravesar una doble barrera de difusin, el tejido sinovial y el lquido sinovial en primer lugar y, posteriormente la matriz cartilaginosa. Segn la mayora de los investigadores, en los sujetos inmaduros, la nutricin se realizara tambin por difusin desde el estrato seo subyacente. Sin embargo, en la madurez dicha capacidad desaparece dejando como nica fuente de nutricin al lquido sinovial. El paso de los nutrientes a travs de la matriz cartilaginosa y la concentracin
de las mismas que pueden atravesarla depende de la concentracin, composicin y organizacin de los proteoglicanos grandes, influyendo no solamente el tamao de las molculas (mximo de 20 Kd) sino tambin otros factores como pueden ser su carga elctrica o su composicin molecular (Fischer y Cols, 1995). El tiempo de difusin vara dependiendo del peso molecular, estructura, tamao y carga de las molculas. Los fragmentos de proteoglicanos y otros componentes de la matriz, productos del metabolismo normal, pueden salir rpidamente del cartlago. Las molculas del lquido sinovial (interleucinas, prostaglandinas...) y algunos factores de crecimiento parecen desplazarse sin lmite a travs del tejido. Esta complejidad para la nutricin de los condrocitos hace que sus requerimientos de oxgeno sean mucho menores que los de otras clulas del organismo y que dependan primariamente de un metabolismo anaerobio. La funcin y la actividad de los condrocitos es completamente diferente durante el desarrollo esqueltico y cuando el desarrollo ya est completado. As, durante el desarrollo, la densidad celular del tejido es elevada, encontrndose las clulas al mximo de su actividad metablica, dividindose y sintetizando rpidamente grandes cantidades de matriz extracelular. Sin embargo, cuando el desarrollo ha terminado, la actividad celular decae, disminuyendo la sntesis de matriz extracelular y la mayora de los condrocitos no se dividirn jams. No obstante continan degradando macromolculas de la matriz extracelular y sintetizando colgeno, proteoglicanos y otras protenas para mantener el remodelamiento de la superficie articular (Buckwalter, 1995; Buckwalter y Lane, 1996). Al ser el cartlago un tejido carente de terminaciones nerviosas, ste tipo de estmulos no son vlidos en l. Algo similar ocurre con la respuesta inmune, ya que tanto monocitos como inmunoglobulinas tienden a ser excluidos del tejido en funcin a su tamao. 1.4.Caractersticas mecnicas del cartlago: El cartlago articular en las articulaciones diartroidales est sometido a importantes cargas estticas y dinmicas a lo largo de la vida del individuo. Para soportarlas, el colgeno, los proteoglicanos y dems molculas deben organizarse en una matriz fuerte, resistente a la fatiga y muy slida, capaz de soportar las elevadas cargas y las tensiones de las mismas (Mankin y Cols., 1997). Las propiedades mecnicas del tejido dependen en gran medida de la interaccin entre las macromolculas de la matriz y el agua de la misma. As el volumen, la concentracin y la capacidad de respuesta a estmulos del agua tisular dependen de la interaccin entre el agua y las macromolculas estructurales, sobre todo con los grandes agregados de proteoglicanos que ayudan a mantener el fluido dentro de la matriz y las concentraciones de electrolitos. Dado que estas macromolculas presentan abundantes cargas negativas (debidas a los grupos sulfato y carboxilo de sus estructuras) se produce un aumento en la concentracin de sodio (carga positiva) y un 3
descenso del potasio (carga negativa), desencadenndose un aumento de la osmolaridad y crendose un efecto Donan que se logra controlar debido a la red de colgeno. Las propiedades biomecnicas del cartlago se comprenden mejor si se le considera como un material bifsico, integrado por una fase slida y otra lquida. La parte slida se describe como porosa y permeable; la parte lquida (el agua) puede hacerse fluir a lo largo de la fase slida. En lneas generales, el cartlago articular presenta una serie de propiedades, como son: -Permeabilidad, o capacidad de fluir el agua a travs del cartlago cuando se aplica un gradiente de presin. Al aplicarse una carga compresiva se compacta la matriz slida, elevndose la presin en el intersticio lo que fuerza al lquido a salir del tejido. En lneas generales, la forma en que se reparte una carga entre la fase lquida (presin hidrodinmica) y la fase slida (carga sobre la matriz slida) est determinada entre otros factores por la porosidad, la solidez, las tasas de carga y el tipo de carga (compresin, tensin y rozamiento). Los experimentos de permeabilidad han demostrado una relacin directa importante entre la permeabilidad y el contenido de agua, y una relacin inversa entre la permeabilidad y el contenido de proteoglicanos. -Viscoelasticidad, o capacidad para deformarse al aplicar una carga constante con relacin al tiempo en que acta la carga (hasta alcanzar un equilibrio). En el cartlago articular existen dos tipos de mecanismos responsables de la viscoelasticidad: uno dependiente y otro independiente del flujo. El mecanismo dependiente del flujo es el mayor contribuyente al comportamiento viscoelstico. Bajo una carga constante, el soporte de la carga se transfiere de manera gradual de la fase lquida a la slida. Propiedades tensiles: diversos estudios han puesto de manifiesto la respuesta tensil intrnseca de la matriz slida de colgeno-proteoglicanos, revelando que las muestras de la zona superficial del cartlago son ms rgidas que las de las zonas media y profunda. Esto se debe a la alta concentracin y al grado de orientacin de las fibrillas colgenas. Para mantener la estructura, composicin y propiedades mecnicas del cartlago articular maduro es necesario que la articulacin sufra carga y movimiento. De igual modo, alteraciones de carga y movimiento que excedan o no alcancen los niveles necesarios, pueden alterar el equilibrio entre los procesos de sntesis y degradacin, y provocar cambios en la composicin y en la ultraestructura del cartlago. Cuando se reduce la carga articular mediante una inmovilizacin rgida, se produce atrofia y degeneracin del cartlago (Buckwalter, 1995a; Buckwalter, 1995b). Por el contrario, la compresin continua y esttica de las dos superficies articulares puede producir lesiones degenerativas graves y muerte de condrocitos en las reas de contacto (Fig. 3).
2.BIOQUMICA 2.1. Colgenos El colgeno es una protena extracelular compuesta por tres cadenas polipeptdicas (cadenas a). En cada una de ellas hay una secuencia tripeptdica caracterstica (gly-x-y) que forma una hlice levgira. Los aminocidos prolina e hidroxiprolina son muy frecuentes, conteniendo tambin hidroxiprolina, hidroxilisina e hidroxilisina glicosilada. En cada molcula, tres cadenas a se enroscan entre s formando una estructura de soga que es estabilizada por puentes de hidrgeno. La glicina, situada cada tres residuos en la secuencia tripeptdica, ocupa el interior de la hlice, y da estabilidad a la hlice al permitir la formacin de puentes de hidrgeno intramoleculares. La hidroxilisina, por un lado, participa en la formacin de uniones covalentes que estabilizan principalmente el ensamblaje fibrilar del colgeno. Los precursores del colgeno o procolgenos son sintetizados con largos extremos Cy N-terminales, una de cuyas funciones es estabilizar la cadena, algo necesario para la formacin de la triple hlice. El colgeno existe en el cartlago tanto en forma de homotrmeros (las tres cadenas a son iguales entre s), como en los tipos II y X, como en forma de heterotrmeros (las tres cadenas a son diferentes), caso de los tipos VI, IX y X. Estas extensiones de los propptidos son escindidas por peptidasas especficas despus de la secrecin pero antes de la formacin de las fibras. El colgeno fibrilar, que es la forma biolgicamente funcional, es consecuencia de una serie de modificaciones postraduccionales, tanto intra como extracelulares, que requieren cierto nmero de enzimas. En el cartlago articular hay varios tipos de colgeno genticamente diferentes (Eyre, 1992; Eyre y Cols, 1995; Sandell, 1995), siendo el principal el tipo II, que representa entre el 90-95% del total, aunque tambin contiene los tipos I, V, VI, IX, X y XI. La proporcin de colgeno vara entre el 50 y el 90 % del peso seco del cartlago y es mxima en la superficie, donde sufre tensiones constantes, por lo que la condicin fsica de las fibras colgenas es crucial: una disminucin de la tensin del cartlago osteoartrtico produce un aumento del contenido de agua y un cartlago ms blando con separacin de las fibras colgenas. En general, la funcin principal del colgeno en el cartlago es proporcionar al tejido propiedades tensiles e inmovilizar los proteoglicanos en la MEC. Mas en detalle, el colgeno tipo X, que se localiza en el lmite entre el cartlago calcificado y el no calcificado (Poole y Cols, 1989; Erlebacher y Cols, 1995), podra intervenir en el soporte estructural del cartlago articular; el de tipo II forma el volumen principal de la fibrilla, el de tipo XI condiciona el tamao de la misma, y el de IX facilita la interaccin con las molculas de proteoglicanos. Los diferentes tipos de colgeno del cartlago articular varan no solamente en su distribucin en la MEC, sino tambin en su estructura tridimensional. As, el colgeno tipo II parece distribuirse de manera uniforme por la 4
MEC y sus monmeros se alinean cabeza con cola, de manera que se sobreponen y crean agujeros en la estructura tridimensional del cartlago. El colgeno tipo XI se asocia a la superficie de las fibrillas formando una nueva fibrilla heterotpica. Se ha observado que adems de las uniones covalentes entre las cadenas de colgeno de tipo II hay uniones entre los tipos II y IX, y entre las cadenas de colgeno de tipo XI (Eyre y Cols, 1987). An no se conocen las funciones de los colgenos de tipos VI y X en el cartlago articular, aunque parece que el tipo VI est localizado en la cpsula pericelular de los condrones, realizando una importante tarea en la unin del condrocito a la matriz pericelular (Poole y Cols. 1988 a, 1992). Por su parte, el de tipo X, que se localiza en la zona calcificada profunda de las articulaciones maduras (Poole y Cols, 1989; Erlebacher y Cols, 1995) parece jugar un papel determinante en el proceso de mineralizacin que tiene lugar inmediatamente por encima del hueso subcondral. Por su parte, se sabe que el colgeno tipo IX regula el dimetro de las fibras de colgeno tipo II de forma proporcional a la concentracin (Wotton y Cols. 1988) y se localiza en el condrn en los lugares donde el colgeno tipo II alcanza el dimetro mnimo necesario para formar la superestructura tan estrechamente tramada de la cpsula pericelular (Poole y Cols. 1988 b; Wotton y Cols. 1991). 2.2. Proteoglicanos Los proteoglicanos son macromolculas complejas que, por definicin, estn formadas por un ncleo proteico con varios dominios globulares al que se unen largas cadenas de polisacridos (glicosaminoglicanos) (Fig. 3). Los glicosaminoglicanos estn formados por una cadena larga, no ramificada, de unidades repetidas de polisacridos. El 80-90% de los proteoglicanos del cartlago son grandes (Heinegard y Cols, 1989; Linsenmayer y Cols, 1991; Sandell y Cols, 1994) y se denominan agrecanos debido a sus propiedades de agregacin. Estn formados por un gran centro proteico de 2.25 Kd, al que se adhieren cadenas de condroitn sulfato y queratn sulfato. En el extremo N-terminal de la protena central, uno de los dominios globulares (G1) tiene la funcin especfica de unin al hialuronato a travs de la llamada protena de unin, formada y sulfatada por los condrocitos, y que se ocupa de estabilizar la unin entre el hialuronato y el dominio G1, formando un complejo agrecano-hialuronato. Los principales agrecanos son el condroitin sulfato en sus distintas isoformas (principalmente el condroitin-6sulfato), el queratn sulfato y el dermatn sulfato. El hialuronato es tambin un glicosaminoglicano, aunque se diferencia de los agrecanos en que no est sulfatado, no posee protena central y no forma proteoglicanos. Dado que el hialuronato no est ramificado, pueden unirse a l mltiples molculas de agrecano, formndose grandes macromolculas, siendo sta la manera que se piensa que hace que los grandes proteoglicanos queden inmovilizados dentro de la red de colgeno del
cartlago. Tambin existen protenas de enlace que estabilizan la asociacin entre los monmeros y el hialuronato y que desempean la funcin de dirigir la unin de los agregados. La formacin de los agregados ayuda al anclaje de los proteoglicanos a la matriz, previniendo su desplazamiento durante la deformacin del tejido. Atendiendo a la proporcin condroitn sulfato/ hialuronato, se puede hablar de dos poblaciones de agregados de proteoglicanos: una, caracterizada por una baja velocidad de sedimentacin, con una baja proporcin condroitn sulfato/hialuronato y pocos monmeros por agregado y otra caracterizada por una elevada velocidad de sedimentacin, una proporcin condroitn sulfato/hialuronato ms alta y mayor nmero de monmeros por agregado (Buckwalter y Cols, 1994). Las regiones superficiales del cartlago articular contienen principalmente agregados de baja velocidad de sedimentacin mientras que las regiones ms profundas contienen ambos tipos de agregados. La prdida de los agregados ms grandes parece ser uno de los cambios precoces asociados con osteoartritis e inmovilizacin de la articulacin (Pita y Cols, 1992). El envejecimiento tambin se asocia con la prdida de los agregados de proteoglicanos ms grandes del cartlago articular (Buckwalter y Cols, 1985). Otros proteoglicanos de menor tamao presentes en el cartlago articular son el biglicano y la decorina, que poseen una protena central de 30 Kd, la fibromodulina y el colgeno IX (considerado un proteoglicano porque contiene una cadena de condroitin sulfato). El biglicano contiene dos cadenas de dermatn sulfato, y la decorina slo una. Estos proteoglicanos pequeos no rellenan un gran volumen de tejido, ni contribuyen directamente a su comportamiento mecnico, sino que se unen a otras macromolculas influyendo en la funcin celular. La decorina y la fibromodulina se unen al colgeno tipo II y pueden actuar organizando y estabilizando el entramado de ste. El biglicano se concentra en la matriz pericelular y puede interactuar con el colgeno tipo VI. Los proteoglicanos pequeos tambin pueden unirse al TGF-b, modulando la actividad del mismo en el cartlago (Hildebrand y Cols, 1994). La proporcin de proteoglicanos en las distintas capas del cartlago articular es variable, lo mismo que en las distintas zonas radiales alrededor del condrocito. El condroitn sulfato es el glicosaminoglicano ms abundante en el cartlago articular, estando formada cada cadena por 25-30 unidades de disacridos, con un peso promedio de 15-20 Kd; las cadenas de queratn sulfato del cartlago articular son ms cortas que las del condroitn sulfato, siendo su peso molecular medio de 5-10 Kd. Cada unidad de disacrido contiene al menos un grupo carboxilo o sulfato cargado negativamente, por lo que los glicosaminoglicanos forman largas fibras de cargas negativas, que repelen otras molculas cargadas negativamente y que atraen cationes. El cartlago contiene, asimismo, grandes proteoglicanos no agrecanos, aunque son similares a estos en estructura y funcin, y que podran representar 5
agrecanos degradados. Adems, el cartlago articular probablemente contenga otros pequeos proteoglicanos que an no han sido identificados. Las molculas de agrecanos rellenan casi todo el espacio interfibrilar de la matriz cartilaginosa, contribuyendo en aproximadamente el 90% de la masa total de proteoglicanos de la misma; los grandes proteoglicanos no agrecanos constituyen menos del 10%, y los pequeos proteoglicanos no agrecanos constituyen alrededor del 3%. Aunque estos ltimos contribuyen relativamente poco a la masa total de proteoglicanos comparados con los agrecanos, gracias a su pequeo tamao pueden estar presentes en un nmero de molculas igual o mayor. 2.3. Glicoprotenas Las glicoprotenas extracelulares, que constituyen entre el 5 y el 15 % del peso seco del cartlago, tienen funciones de unin y ensamblaje entre la matriz extracelular y los condrocitos. Estn constituidas por una base proteica a la que se unen algunos mono y oligosacridos. Las glicoprotenas estructurales son del tipo de la ancorina CII, fibronectina y laminina (Buckwalter y Mankin, 1998). -La ancorina CII, que forma parte de una familia de macromolculas adhesivas de la superficie celular conocidas como calpactinas, es una protena ligante de colgeno situada en la superficie del condrocito. Su funcin es contribuir al anclaje de los condrocitos a las fibras colgenas de la matriz extracelular (Pfaffle y Cols, 1990). -La fibronectina es una glicoprotena de gran tamao que se presenta en forma de agregados en la matriz extracelular y la superficie de los condrocitos. Tambin est presente en suero, donde acta como opsonina y agente quimiotctico. Tiene afinidad para unirse a otras molculas como fibrina, colgeno tipo II (Glant y Cols, 1985), heparina, hialuronato (Kielty y Cols, 1992), componentes de la pared bacteriana, etc. -La laminina es una molcula polivalente presente en membranas basales y, unida a receptores, en la superficie de las clulas. -La protena oligomrica de cartlago, una protena acdica, slo se ha observado en tejido cartilaginoso. Se concentra en la matriz de los alrededores del condrocito, unindose a l. Puede considerarse un marcador de recambio en el cartlago y de progresin de degeneracin cartilaginosa en pacientes con osteoartrosis (Lohmander y Cols, 1994). La interaccin de todas estas glicoprotenas con los condrocitos se efecta a travs de otras glicoprotenas, las integrinas (Dijkgraaf y Cols, 1995). Estas constituyen una familia de glicoprotenas que regulan los procesos de adhesin, migracin, proliferacin y diferenciacin celulares (Trelsta, 1989), siendo de gran importancia en las conexiones entre la matriz extracelular y los condrocitos. Las integrinas identificadas en la superficie de los condrocitos adultos del cartlago articular son: a1b1, a3b1, a5b1, avb5 y, en menor medida, avb3. Recientemente se ha aislado una nueva glicoprotena
aninica de alto peso molecular (aproximadamente 540 Kd) cuya funcin es por el momento desconocida (Chopra y Anastassaiades, 1998). Los condrocitos son capaces de sintetizar y organizar los componentes de la matriz extracelular. Un nmero de componentes de la superficie celular, como los receptores de integrinas (Loeser, 1993; Shakibaei et al, 1997; Shakibaei, 1998), de ancorina CII (Mollenhauer et al, 1984), sindecanos (Jalkanen et al, 1991) o el receptor de hialuronan (Maleski y Knudson, 1996) pueden estar involucrados en la interaccin entre los condrocitos y la matriz que los rodea. En el proceso de organizacin y estabilizacin de los componentes de la matriz del cartlago, las fibrillas de colgeno y los proteoglicanos interaccionan con molculas especficas como proteoglicanos pequeos, cido hialurnico y glicoprotenas. INTEGRINAS El reconocimiento de las integrinas como una familia de receptores de adhesin de la superficie celular es del ao 1987 (Hynes, 1987) y son los principales receptores por medio de los cuales las clulas (los condrocitos, en el caso del tejido cartilaginoso) se adhieren a la matriz extracelular. Algunas integrinas tambin median importantes procesos de adhesin clula-clula, desempeando un papel importante tanto en la etapa de desarrollo como en los organismos adultos. Todas las integrinas son heterodmeros transmembrana compuestos por subunidades ab y conectados al citoesqueleto. Las subunidades a tiene un tamao de entre 120 y 180 Kd y se unen no covalentemente a una subunidad b (90-110 Kd). La mayor parte de las integrinas se expresan en una gran variedad de clulas y la mayora de las clulas expresan varias integrinas. Se conocen 8 subunidades b y 14 subunidades a. Cada integrina puede unirse a ms de un ligando. Del mismo modo, todos los ligandos pueden ser reconocidos por ms de una integrina. Casi todos estos ligandos son protenas de la matriz extracelular implicadas en la adhesin de la clula al sustrato. Sin embargo, algunos sustratos como el fibringeno pueden mediar la agregacin celular, y algunas integrinas reconocen protenas integrales de la superfamilia de las inmunoglobulinas (molcula 1 de adhesin intercelular o ICAM-1, molcula 2 de adhesin intercelular o ICAM2, y molcula 1 de adhesin vascular o VCAM-1) y median la adhesin directa clula a clula. Estas molculas de adhesin son solubles y se encuentran en sangre. Tambin se segregan otros receptores de membrana celular como citoquinas, receptores de factores de crecimiento y el receptor de transferrina. En estudios de la localizacin e identificacin de integrinas en tejido cartilaginoso in vitro (Shakibaei, 1995), se han identificado integrinas no slo en la superficie del condrocito, en fibras de colgeno de la matriz pericelular, sino tambin, sorprendentemente, en la matriz extracelular del cartlago. El hallazgo de que las integrinas a1-, a3-, b1- y a5b1 se distribuyen a lo largo del cartlago y la matriz 6
pericondral in vivo e in vitro viene apoyado por los datos obtenidos con microscopa de fluorescencia y electrnica. Los resultados de inmunoprecipitacin de los sobrenadantes libres de clulas y de protenas celulares confirman la presencia de integrinas y de colgeno tipo II en la matriz cartilaginosa, aunque todava no est claro su significado funcional. Las funciones principales de la familia de las integrinas son: enlace en la organizacin de la matriz extracelular, estabilizacin de los componentes de la matriz extracelular, modulacin de la clula desde el interior de sta y modulacin del comportamiento celular a travs de la matriz extracelular. As, adems de su papel como receptores de adhesin, las integrinas son transductoras de seales desde la matriz extracelular al interior de la clula, controlando as tanto el crecimiento celular como su diferenciacin, morfologa y migracin. Las integrinas participan en procesos fisiolgicos importantes como el desarrollo embrionario, hemostasia y trombosis, curacin de heridas, mecanismos de defensa inmunitaria y no inmunitaria, y formacin de tumores. Ciertas integrinas ejercen un papel en el desarrollo vascular, de modo que la supresin de las mismas produce alteraciones en alguna de las etapas de la angiognesis: adhesin, migracin, proliferacin, diferenciacin y supervivencia de las clulas implicadas en la angiognesis (Hynes et al, 1999). Las integrinas a5- estn siendo estudiadas como herramienta teraputica en situaciones en que sea necesario inhibir la angiognesis o la osteoporosis. Sin embargo, la supresin del gen de la subunidad a5, aun siendo letal, permite un desarrollo considerable de rganos, y por tanto vasculognesis y angiognesis (Bader et al, 1998). Las integrinas, por medio de seales intracelulares producidas a travs de sus receptores, controlan la sobreproduccin de colagenasas presente en los pacientes con artritis reumatoide (Sarkissian y Lafyatis, 1999). Esta proliferacin de metaloproteinasas por los sinoviocitos contribuye a la destruccin sea y cartilaginosa caracterstica de la enfermedad. La integridad del cartlago articular requiere estimulacin mecnica. Cuando sta es anormal se desencadenan procesos de osteoartritis. Las integrinas intervienen en el mecanismo de hiperpolarizacin de la membrana celular que resulta de la estimulacin mecnica del cartlago, a travs de la secrecin de interleukina 4 (Millward-Sadler et al, 1999). El colgeno tipo VI conecta las fibrillas de colgeno y/o estabiliza los haces de fibrillas (Hagiwara et al, 1993). Estas interacciones son importantes para el establecimiento de la red tridimensional de componentes de la matriz del cartlago. Las interacciones de los componentes de la matriz con molculas especficas hace que las macromolculas se interrelacionen, proporcionando as una formacin ptima de la red tridimensional. Las integrinas desprendidas de la superficie del condrocito pueden actuar conectando molculas. Esta idea se confirma ya que los fibroblastos
que no sintetizan integrinas intactas no son capaces de contraer geles de colgeno. En esta contraccin pueden estar implicadas no slo las integrinas de la membrana celular, sino tambin las de la matriz, estabilizando y organizando las estructuras de sta (Mauch et al, 1998). La expresin de las integrinas est regulada por factores de crecimiento (Vega y Cols, 1999). Tanto el factor de crecimiento insulina-like 1 (IGF-1) como el factor de crecimiento transformante b (TGFb) estimulan la expresin en la superficie de las clulas de las subunidades de las integrinas a3-/ a5-, as como la adhesin de los condrocitos a la fibronectina y al colgeno II. Sin embargo, ambos factores tienen efectos contrarios en la expresin de otras integrinas como la a1b1 (el IGF-1 la aumenta y el TGFb la disminuye). El hecho de que las clulas tratadas con TGFb disminuyan su adhesin al colgeno VI sugiere que es precisamente la a1b1 la integrina que media la adhesin del condrocito al colgeno tipo VI. Los efectos de los factores de crecimiento sobre los condrocitos varan in vivo e in vitro, en funcin de la especie animal, la edad de los sujetos, etc... (Schafer y Cols, 1993; Martin y Cols, 1997; Nixon y Cols, 1998). Pero en trminos generales se admite que los factores de crecimiento estimulan la sntesis de los componentes de la matriz extracelular del cartlago, inhiben las proteasas y activan los sistemas de inhibicin de stas ( Daughaday y Rotwein, 1989; Seyedin y Rosen, 1990; Wang y Cols, 1995; Takigawa y Cols, 1997). Sin embargo, y con carcter general, se admite que en condiciones basales la mayora de los factores de crecimiento (bFGF, PDGF, EGF y TGF-b) salvo el IGF-1 no tienen ningn efecto sobre la sntesis de PG en el cartlago normal (Tyler, 1989; Demarquay y Cols, 1990); es ms, el EGF y el TGF-b la inhiben (Chandrasekhar y Cols, 1993; Van de kraan y Cols, 1992), pero el bFGF y el PDGF potencian al IGF-1 (Vega y Cols, 1999; Smith y Cols, 1991; Harvey y Cols, 1993)). Los factores de crecimiento tampoco producen ningn efecto tras inducir lesiones del cartlago, lo que podra atribuirse a defectos de los receptores y no a los propios factores. Los resultados obtenidos por los diferentes autores al analizar los efectos de los factores de crecimiento sobre el cartlago articular no son homogneos, y en algunos casos, son contradictorios. Ello se debe, no tanto a las tcnicas utilizadas para valorar la funcionalidad del cartlago articular, cuanto a factores dependientes del material estudiado. Entre ellos se encuentran la edad, las condiciones de estudio, la especie animal y la zona del cartlago o la articulacin analizadas. Normalmente los condrocitos poco diferenciados o jvenes responden mejor a los factores trficos (Schafer Y Cols, 1993; Martin y Cols, 1997) y los condrocitos de origen fetal son ms sensibles a los factores trficos anabolizantes que los adultos (Nixon y Cols, 1998). Adems, en el caso del cartlago articular humano, tambin se ha evidenciado un declive continuado de la respuesta de los condrocitos a algunos factores trficos y un cambio edad-dependiente en la sensibilidad a dichas sustancias; as, los condrocitos 7
jvenes (de donantes entre 10-20 aos) responden preferentemente a l PDGF-AA, mientras que en los adultos la mejor respuesta se obtiene con el TGF-b1 (Guerne y Cols, 1995). Las condiciones del cultivo, en grupo o en monocapa, tambin conllevan respuestas diferentes en las clulas y los resultados tampoco son iguales si se trata de estudios in vivo, cultivos primarios o de lneas celulares. Por otro lado es obvio que puedan existir diferencias especie-especficas de respuesta a los diferentes factores de crecimiento. Finalmente, la articulacin o la zona (oreja, tabique nasal) de donde se obtienen las muestras de cartlago influye en los resultados ya que la composicin de la MEC y la densidad celular vara de una a otra y de un tipo de cartlago a otro (hialino vs. fibroso). 2.- Factores catablicos: INTERLEUCINAS. Otros factores implicados en la regulacin del metabolismo del cartlago articular, y que en lneas generales desempean acciones opuestas a los factores de crecimiento, son las interleucinas. Las ms importantes son las interleucinas 1 y 6 y el TNF-a (Sipe, 1995; Westacott y Sharif, 1996; Combe, 1998). La interleucina 1 (IL-1) es producida por los condrocitos, y se relaciona con la destruccin del tejido cartilaginoso por lisis de la matriz (acelera la degradacin de proteoglicanos) y disminucin de los mecanismos de regeneracin, mediante su potente capacidad de inhibir la proliferacin condrocitaria (Matsumoto y Cols, 1994) y la sntesis de proteoglicanos. Dicho efecto lo consigue estimulando la produccin de enzimas proteolticos (Thumb, 1995). En cultivos aislados, adems de incrementar la degradacin de los proteoglicanos, parece producir un aumento en la degradacin del colgeno tipo II, extremo que no ha podido ser comprobado en explantes completos (Xu y Cols, 1996). Adems, existen evidencias que sugieren que la IL-1b regula la expresin de algunas isoformas del TGF. Concretamente estimula la sntesis de TGF-b3 mientras que reduce la de TGF-b1 y TGF-b2 (Villiger y Cols, 1993). Esto representa un mecanismo de proteccin contra el catabolismo del tejido conectivo inducido por las citoquinas. Por su parte, el TGF-b, in vivo, puede inducir la produccin de IL-6 por los condrocitos articulares (Guerne y Cols, 1990). Por otra parte el TNF-a estimula la produccin de enzimas proteolticos, principalmente metaloproteasas, (Mitchell y Cheung, 1991) e inhibe la sntesis de componentes de la MEC, permitiendo la degradacin del cartlago (Thumb, 1995). Recientemente se ha visto que la colagenasa-3 se expresa en los condrocitos durante el desarrollo y en determinadas patologas, y que su mRNA es inducido por el TNF-a ( Stahle-Backdahl y Cols, 1997; Borden y Cols, 1996). 3. - Proteasas de la matriz extracelular. Las proteasas son una serie de enzimas presentes en la matriz extracelular cartilaginosa y que son las responsables de la continua renovacin de los componentes de la MEC. Son sintetizadas por los condrocitos e intervienen tanto en el recambio normal como en el patolgico. Hay dos grupos principales de
proteasas, las metaloproteasas (colagenasa, gelatinasa y estromelisina) y las catepsinas (catepsina B y D). Las metaloproteasas deben su nombre a la necesidad de cinc en la zona activa para su funcionamiento. La accin de la colagenasa es altamente especfica, porque es la nica enzima capaz de separar en una sola zona la parte de la molcula de la triple hlice a tres cuartas partes de distancia del extremo aminoterminal de la molcula. Una vez que la colagenasa termina su accin, acta la gelatinasa separando las cadenas-a desnaturalizadas por ella. La estromelisina puede actuar tanto sobre el colgeno tipo II, como sobre el tipo IX (Gunja- Smith y Cols, 1989; Nguyen y Cols, 1989). Adems se cree que una de sus principales funciones es la degradacin de la protena central del agrecano, pese a que los productos especficos de dicha rotura que han sido identificados tanto en vivo como in vitro no se pueden atribuir a la estromelisina. Por tanto, se cree que existe otra protena an no identificada que sera la responsable de la degradacin del agrecano, o bien actuara sinrgicamente con ella. De todos modos, recientes estudios han demostrado que algunas proteasas, asociadas exclusivamente a la sinovitis en la artritis reumatoide, como por ejemplo la metaloproteasa-13 degrada colgeno tipo II y agrecano (Konttinen y Cols, 1999). Las metaloproteasas son sintetizadas, como muchas otras enzimas del organismo, en forma de proenzimas, requiriendo para su activacin modificacin enzimtica. As, la colagenasa puede ser activada a travs de la plasmina, activada a su vez a partir del plasmingeno por un factor activador del mismo (Campbell y Cols, 1988; Yamada y Cols, 1988). Adems, la estromelisina puede producir una superactivacin de la colagenasa para que sta alcance su actividad mxima. Los mecanismos por los cuales se produce la activacin de la proestroelisina y la progelatinasa permanecen sin identificar. Estas enzimas activadas pueden ser desactivadas por medio de factores sintetizados por el propio condrocito y que reciben el nombre de TIMPs (Inhibidores Tisulares de Metaloproteasas), que producen una inhibicin irreversible de las mismas (Cawston, 1998). En condiciones de normalidad, el cartlago articular contiene elevados niveles de inhibidores de las proteasas (principalmente a2macroglobulina, inhibidor del activador del plasmingeno y TIMPs), de manera que algunos autores han propuesto como causa de osteoartritis los desequilibrios entre factores activadores e inhibidores de las proteasas. El otro grupo de proteasas son las catepsinas, con capacidad para degradar el agrecano. Se conocen dos tipos diferentes, denominadas catepsina B y D respectivamente. Respecto a su capacidad para degradar proteoglicanos de la MEC se ha creado cierta controversia, ya que actan a un pH ptimo de 5.5; sin embargo, existen ciertas evidencias de que en el cartlago articular, y principalmente en la matriz pericelular, podran alcanzarse niveles de pH lo suficientemente bajos como para que las catepsinas acten. 8
C. FACTORES DE CRECIMIENTO DE LA FAMILIA DE LAS NEUROTROFINAS 1. - Neurotrofinas Las neurotrofinas constituyen una familia de receptores de factores de crecimiento que ejercen sus funciones principalmente sobre algunos tipos especficos de neuronas109, 110 y posiblemente sobre algunos tipos de tejidos no nerviosos (Lewin y Cols, 1996, Reichardt y Cols, 1997) que estn relacionadas estructural y funcionalmente. 2.- Receptores p75 y Trk. Las neurotrofinas actan por medio de dos tipos de receptores los de alta afinidad y los de baja afinidad, dependiendo de sus propiedades farmacolgicas (Bothwell, 1989, 1995; Chao y Hempstead, 1995; Lewin y Barde, 1996): -Los de alta afinidad (TrkA, TrkB y TrkC) son los que median sus efectos biolgicos y son codificados por los protooncogenes trk (Shibayama y Koizumi, 1996). Son glicoprotenas transmembrana que presentan a nivel intracitoplasmtico un dominio tirosn-kinasa. Se conocen dos protenas codificadas por el protooncogen trkA, a saber, TrkAI y TrkAII (ambas protenas de 140 kDa), siendo considerada la primera como neuronal y no neuronal, y la segunda como neuronal exclusivamente (Barker y Cols, 1993); ambas median los efectos biolgicos del NGF y ocasionalmente los de la NT-3 (Lewin y Barde, 1996). El protooncogen trkB codifica seis isoformas proteicas diferentes, de las que slo se conoce la funcin de la forma completa (145 kDa), y que liga fundamentalmente el BDNF y la NT-4/5. Algo similar ocurre con el protooncogen trkC, que codifica varias isoformas (Valenzuela y Cols, 1993; Escandon y Cols, 1994), de las que la principal liga preferentemente NT-3 (Meakin y Shooter, 1992; Chao, 1993; Barbacid, 1993, 1995; Heuman, 1994; Lindsay y Cols, 1994; Snider, 1994; Bothwell, 1995; Lewin y Barde, 1996). -El receptor de baja afinidad es comn para todas las neurotrofinas y se denomina protena p75LNGFR. Sin embargo, algunos estudios recientes consideran a la p75LNGFR como miembro de la superfamilia de factores del TNF (Yamamoto y Cols, 1996; Barbacid, 1995). Es comn para todas las neurotrofinas, y presenta afinidades similares para todas ellas (Rodrguez-Tebar y Cols, 1990,1992). Pese a haber sido el primer receptor clonado su funcin ha sido desconocida hasta que recientes estudios (Carter y Cols, 1996) han demostrado que es el mediador en la respuesta de las clulas de Schwann al NGF; posteriormente se descubri que presenta la misma afinidad para todas las neurotrofinas. Existen evidencias de que la p75NTR modula la funcin de los receptores Trk: aumenta la afinidad del TrkA por NGF (Hempstead y Cols, 1993) e incluso influencia la activacin de TrkB y TrkC (Hantzopoulos y Cols, 1986). Slo recientemente se ha podido aclarar que la p75NTR puede desencadenar respuestas celulares sin la participacin de los receptores Trk, ya que las clulas de Schwann son clulas gliales que poseen
una importante cantidad de p75NTR y no expresan receptores Trk. El cartlago expresa receptores de alta afinidad durante la etapa de diferenciacin celular (Bothwell, 1996), pero el efecto de sus ligantes es an desconocido por completo. Por otro lado, se ha detectado NGF en el cartlago de pollo durante el desarrollo (Carter y Lewin, 1997) y en los condrocitos durante el proceso de reparacin de las fracturas (Dechant y Barde, 1997). Recientemente se ha demostrado que el NGF produce una aumento tanto de la sntesis de DNA como de glicosaminoglicanos en el cartlago de desarrollo (Mitsiadis y Cols, 1996). Un estudio preliminar realizado sobre el cartlago articular de la rodilla de animales deficientes en p75LNGFR (Vega y Cols, datos no publicados) ha demostrado una reduccin en torno al 20% del espesor del cartlago articular y disminucin del nmero de mitosis en los condrocitos lo que sugiere que, por un mecanismo an desconocido y sin que se pueda asegurar cual es su ligando, la p75LNGFR est implicada en el desarrollo y maduracin de los condrocitos, y en la sntesis de los componentes de la matriz extracelular. D. Factor de crecimiento derivado de la gla (GDNF) Hoy en da es de sobra sabido que las neurotrofinas juegan un papel fundamental en el desarrollo del sistema nervioso, y cada da existen ms evidencias que indican que la funcin de las neurotrofinas persiste a lo largo de toda la edad adulta (Mendell y Cols, 1999). El factor de crecimiento derivado de las clulas de la gla (GDNF) fue identificado inicialmente como consecuencia de la teora de que las clulas gliales secretan sustancias que estimulan el crecimiento y el desarrollo de determinados tipos neuronales. El GDNF fue descubierto en 1993, y catalogado en pocos aos como factor neurotrfico por medio de abundantes en pocos aos. De especial inters resultaron los estudios que demostraron la efectividad del GDNF en la mejora en la degeneracin en modelos animales en la enfermedad de Parkinson (Grondin y Gash, 1999) y en la esclerosis lateral amiotrfica. Esta utilidad del GDNF en el tratamiento del Parkinson parece confirmarse en estudios en ratas con dicha enfermedad mediante terapia gnica (Bohn, 1999). La distribucin del GDNF en embriones de rata sugiere un importante papel del mismo en la diferenciacin temprana de los tbulos renales, la inervacin del tracto gastrointestinal y el proceso de diferenciacin del cartlago y del msculo (Suvanto y Cols, 1996). Familia del GDNF. El GDNF est lejanamente relacionado con la superfamilia del TGF-b, y aparece ampliamente expresado en muchos tejidos tanto neuronales como no neuronales (Grondin y Gash, 1999). Inicialmente fue descubierto como un potente factor de supervivencia para las neuronas dopaminrgicas cerebrales. Posteriormente se demostr que el GDNF es un factor de supervivencia ms potente para las neuronas dopaminrgicas del locus coeruleus que otros factores neurotrficos, y factor de supervivencia al menos cien veces ms potente para las motoneuronas de la mdula 9
espinal que las neurotrofinas (Saarma y Sariola, 1999). Los miembros de la familia del GDNF (GDNF, neuroturina, persefina y artemina) presentan siete residuos de cistena con spacing? Similar, que les convierte en miembros lejanos de la superfamilia del TGF-b. Son potentes factores de supervivencia para numerosas poblaciones neuronales tanto del sistema nervioso central como del perifrico. Al igual que otras neurotrofinas, la familia del GDNF son responsables del desarrollo y el mantenimiento de varios grupos de neuronas tanto sensitivas como simpticas, pero adems, el GDNF y la neuroturina (NTN) son tambin responsables del desarrollo y la supervivencia de neuronas entricas, y la NTN de neuronas parasimpticas. Se ha descrito un nuevo integrante de la familia del GDNF, la enovina, que es estructuralmente casi idntica a la recientemente descrita artemina. Aunque existen diferentes variantes en el mRNA de la enovina, solamente dos tienen capacidad de transformarse en protena fisiolgicamente activa. El mRNA de la enovina se expresa en multitud de tejidos humanos, tanto adultos como fetales, si bien los niveles de expresin ms altos se observan en tejidos perifricos, y entre ellos la prstata, la placenta, el pncreas, el corazn y el rin. Este patrn de distribucin concuerda, lgicamente, con el patrn de distribucin del receptor por el que muestra preferencia, el GFR alfa3. Asimismo, este patrn de distribucin perifrica, junto con sus efectos sobre las neuronas, sugiere que podra ser usada para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas en general, y en neuropatas perifricas en particular (Masure y Cols, 1999). La pleiotropina (PTN), tambin conocida como HB-GAM es una emergente familia de citoquinas no relacionada con otros factores de crecimiento. En el estudio llevado a cabo por Vanderwinden y Cols en 1992 mediante hibridacin in situ se observ su expresin durante el desarrollo en muchos, aunque no en todos los tejidos de lneas neuroectodrmicas y mesodrmicas, mientras que no se detect en ectodermo, endodermo ni trofoblasto. Pese a que la deteccin se realiza a lo largo de todo el desarrollo en el sistema nervioso, existe un pico postnatal, persistiendo en el adulto una significante expresin en las neuronas piramidales del hipocampo y en neuronas corticales, as como en clulas del nervio olfatorio, astrocitos cerebelosos, clulas de la pituitaria y clulas de Schwann que rodean a los ganglios sensitivos. Durante el desarrollo, se evidencia la presencia de PTN en otros tejidos no nerviosos como en mesnquima de pulmn, intestino, rin, tracto digestivo, hueso y progenitores del cartlago y pulpa dental entre otros (Vanderwinden y Cols, 1992; Suvanto y Cols, 1996). La pleiotropina proporciona un sustrato que puede influenciar la morfologa de las clulas progenitoras de oligodendrocitos, ayudar a la dispersin celular, y quizs tambin mejorar el crecimiento de los precursores de oligodendrocitos (Rumbsby y Cols, 1999). Por medio de anticuerpos monoclonales para PTN, se detecta inicialmente en el tejido nervioso en desarrollo
y posteriormente en el cartlago en formacin. La PTN se acumula de manera progresiva en la zona central del cartlago embrionario (difisis), y persiste hasta la semana 42-44 en regiones donde el cartlago est siendo reemplazado por mdula sea (Dreyfus y Cols, 1999). En animales adultos, el PTN permanece en clulas del iris, clulas de Leydig del testculo y en el tero. Las clulas de las capas basales del epitelio de la lengua son las nicas clulas epiteliales que expresan PTN, y adems, nicamente lo expresan despus del nacimiento. Los mecanismos de regulacin y sus funciones exactas no estn an bien determinados. El patrn de expresin durante el desarrollo sugiere importantes papeles en el crecimiento y diferenciacin. Ms an, la presencia de PTN en varios tejidos adultos y la estimulacin de la expresin de PTN en el tero grvido indican que tambin posee funciones fisiolgicas durante la edad adulta. Receptores Todas las neurotrofinas se unen al receptor de baja afinidad p75, pero su especificidad de ligando es determinada por receptores tirosn kinasa (Trk). En el caso del GDNF, la NTN, la persefina (PSP) y la artemina (ART) la seal tambin va a ser mediada por un receptor tirosn kinasa (RET), pero la especificidad de ligando es determinada por una nueva clase de protenas ancladas a glicosilfosfatidilinositol llamada receptor de la familia de GDNF alfa (GFR alfa). El GDNF se une preferentemente al GFR alfa 1, la NTN al GFR alfa 2, la ART al GFR alfa 3 y la PSP al GFR alfa 4 como correceptores para activar el receptor tirosn kinasa (Saarma y Sariola, 1999). Recientemente se ha puesto de evidencia que pueden mediar su respuesta va receptores GFR alfa independientemente de los RET. La oligomerizacin del receptor inducida por el ligando es un mecanismo ampliamente aceptado para la activacin de receptores de la superficie celular. Slo el GFR alfa 1 puede unirse directamente al GDNF, lo que hace pensar que la formacin del complejo receptor slo se puede iniciar por la unin del GDNF a dicho receptor. Se ha identificado una interfase en la estructura del GDNF formada por residuos acdicos e hidrofbicos que es crtica para la unin al GFR alfa1 (Ekejtall y Cols, 1999). An as, y de manera impensable, varias mutaciones de GDNF deficientes en su capacidad de unin al GFR alfa1, conservan la capacidad de unin y activacin del Ret a niveles normales, pero an as requieren GFR alfa1 para la activacin del Ret. Esto hace suponer un papel del Ret en la unin del ligando, e indica que el GDNF no inicia la formacin del complejo receptor, sino que ms bien interacta con un complejo GFR alfa1 pre-ensamblado (Ekejtall y Cols, 1999). En msculos enfermos de esclerosis lateral amiotrfica (ELA) se han observado niveles significativamente elevados de mRNA de GDNF respecto al msculo sano, junto con una variabilidad en la distribucin de las diferentes isoformas del mismo. Sin embargo los niveles del mRNA del GFR alfa1 no varan significativamente, y no se detecta mRNA de Ret. Estos resultados sugieren 10
que el GDNF muscular elevado acta como una seal para las motoneuronas en las enfermedades de neurona motora, lo que implicara una posible aplicacin teraputica del mismo (Yamamoto y Cols, 1999). Asimismo, el GDNF puede jugar un importante papel en la regulacin del nmero de clulas de Sertoli, actuando como un factor local durante el periodo postnatal temprano en el desarrollo testicular en ratas (Hu y Cols, 1999). Mediante estudios por hibridacin in situ de la expresin del mRNA de NRTN, GDNF, Ret, GFR alfa1 y GFR alfa 2 se demuestra que: los receptores de GDNF se expresan principalmente durante el desarrollo embrionario en sistema nervios, tracto urogenital, tracto digestivo, rbol respiratorio y en piel, hueso, msculo y glndulas endocrinas en desarrollo. NRTN y GDNF se expresan zonas de inervacin trigeminal durante el desarrollo embrionario, tales como el epitelio nasal, los dientes y en folculos pilosos de la barba. Tambin se expresan en tracto urogenital. En el ratn adulto, la NRTN se expresa principalmente en el intestino, prstata, testculo y trompa; el GDNF lo hace principalmente en el ovario (Golden y Cols, 1999). E. Factor de crecimiento derivado del endotelio vascular (VEGF) Para el crecimiento y la reparacin de los huesos es fundamental la presencia de una red microvascular, cuya formacin se denomina angiognesis (Streeten y Brendi, 1990; Mori y Cols, 1998). Los mecanismos moleculares que regulan la angiognesis en la placa de crecimiento an estn por aclarar. Diversos estudios han demostrado que los propios condrocitos producen factores responsables de inhibir la proliferacin de clulas endoteliales y la angiognesis, como el TGF-b1 y el hCHIAMP (inhibidor de la angiognesis y metaloproteinasas derivado de condrocitos)(Moses y Cols, 1990; Moses, 1993; Ohba y Cols, 1995) o de estimular la angiognesis, como la transferrina (Carlevaro y Cols, 1997). La produccin de unos u otros depende del estado de diferenciacin de los condrocitos y de la presencia de matriz extracelular (Canceda y Cols, 1995; Alini y Cols, 1996; Carlevaro y Cols, 1997). Los condrocitos se originan de precursores mesenquimales pluripotenciales que tambin originan otras clulas como osteoblastos y adipocitos (Rodan y Noda, 1991). Un aumento en la diferenciacin de osteoblastos, adipocitos y mioblastos estimula la expresin de VEGF, lo que sugiere que la produccin del mismo est asociada a la diferenciacin de clulas mesenquimatosas (Claffey y Cols, 1992; Harada y Cols, 1994). Familia del VEGF: Los VEGF son una familia de mitgenos especficos del endotelio vascular que inducen una proliferacin de clulas endoteliales y angiognesis, junto con un aumento de la permeabilidad capilar (Gospodarowicz y Cols, 1989; Conn y Cols, 1990; Streeten y Brandi, 1990; Koochekpour y Cols, 1995; Ferrara y Davis-Smith, 1997). El estudio llevado a cabo por Horner y Cols. en 1999
ha demostrado la expresin de VEGF en las costillas de neonatos as como en la placa de crecimiento de las vrtebras. Algunos condrocitos profundos, localizados cerca de la zona hipertrfica han mostrado tambin un discreto marcaje, siendo ms intenso en las zonas hipertrficas y mineralizadas. Existen cinco isoformas diferentes del VEGF como consecuencia de un splicing alternativo del mRNA de un nico gen (Houck y Cols, 1991). Las cinco formas estn constituidas por 121, 145, 165, 189 y 206 aminocidos. No obstante, recientemente se han aislado y caracterizado nuevos genes que originan molculas de la misma familia (Grimmond y Cols, 1996; Fitz y Cols, 1997; Hu y Cols, 1997; Yamada y Cols, 1997). Los distintos genes que codifican protenas de la familia del VEGF se regulan de forma diferente, lo que sugiere que sus productos desempean funciones complementarias pero independientes. Una propiedad biolgica importante que distingue las diferentes isoformas es su capacidad de unin a heparina y a heparn-sulfato. El VEGF121 carece de los aminocidos codificados por los exones 6 y 7 del gen del VEGF (Tischer y Cols, 1991), y tampoco posee la capacidad de unirse a heparina ni a la matriz extracelular (Park y Cols, 1993). El VEGF165 se produce al aadir los aminocidos codificados por el exn 7, y le confiere la capacidad de unirse a heparina (Park y Cols, 1993; Cohen y Cols, 1995). Si al VEGF121 se le aaden los aminocidos codificados por el exn 6, se obtiene el VEGF145. Estos aminocidos conforman un segundo dominio independiente capaz de fijar heparina, y tambin contienen elementos que le conceden la capacidad de unirse a la matriz extracelular (Poltorak y Cols, 1997). El VEGF189 y el VEGF206 contienen los pptidos codificados por los exones 6 y 7, y presentan una mayor afinidad por la heparina y el heparn-sulfato que los VEGF145 y VEGF165. El VEGF189 no se secreta al medio, y se presenta unido a los proteoglicanos de la superficie celular y de la matriz, y parece menos activo in vivo, que las isoformas 121 o 165 (Cheng y Cols, 1997). Algunas proteasas como la plasmina pueden escindirlo y liberar un fragmento proteoltico soluble de 110 aminocidos (VEGF110). Las tres isoformas secretadas (VEGF121, 145, 165) inducen la proliferacin de clulas endoteliales y la angiognesis in vivo (Poltorak y Cols, 1997; Park y Cols, 1993; Zhang y Cols, 1995). Se ha comprobado que las clulas pueden sintetizar varias isoformas simultneamente, si bien, las ms frecuentes son la 121 y la 165, aunque la 189 puede observarse en la mayora de los tipos celulares productores de VEGF (Bacic y Cols, 1995). La isoforma menos frecuente es la 145, y aparece en clulas derivadas de rganos reproductores (Poltorak y Cols, 1997; Charnock-Jones y Cols, 1993; Cheng y Cols, 1995). La sntesis de VEGF est regulada por una serie de factores como son el FGF-4 (Deroanne y Cols, 1997), PDGF (Finkenzeller y Cols, 1997), TNF-a (Ryuto y Cols, 1996), TGF-b (Pertovaara y Cols, 1994), KGF (factor de crecimiento derivado de queratinocitos)(Frank y Cols, 1995), IGF-I (Goad y Cols, 1996), IL-1b (Li y Cols, 11
1995) e IL-6 (Cohen y Cols, 1996). Por el contrario, otras interleucinas como las IL-10 e IL-13, pueden inhibir la liberacin de VEGF (Matsumoto y Cols, 1997). Otra molcula que estimula la liberacin de VEGF es el xido ntrico, que adems contribuye al aumento de permeabilidad y vasodilatacin producidos por el VEGF. (Tuder Y Cols, 1995; Chin y Cols, 1997; Murohara y Cols, 1998). Entre ambos existe una retroalimentacin positiva (Dembinskakiec y Cols, 1997; Hood y Cols, 1998). De todos modos los mayores estmulos para la expresin de VEGF son la hipoxia y la hipoglucemia. Receptores de VEGF: Se han descrito dos tipos de receptores a los que pueden unirse las diferentes isoformas del VEGF, el VEGFR-1 y el VEGFR-2 (Devries y Cols, 1992; Terman y Cols, 1992; Mathews y Cols, 1991; Shibuya y Cols, 1990), los cuales se expresan casi exclusivamente en las clulas endoteliales, aunque cualquiera de los dos puede aparecer en otros tipos celulares. As por ejemplo, el VEGFR-1 puede aparecer en clulas trofoblsticas (Charnockjones y Cols, 1994), monocitos (Barleon y Cols, 1996) y clulas mesangiales del rin (Takahashi y Cols, 1995). Por su parte, el VEGFR-2 puede encontrarse en clulas pluripotenciales hematopoyticas, megacariocitos y clulas progenitoras de la retina (Katoh y cols, 1995; Yang y Cols, 1996). Junto con el VEGFR-3, localizado en los vasos linfticos y que presenta capacidad de unirse al VEGF-C y al VEGF-D, los receptores de VEGF se caracterizan por la presencia de siete dominios similares a las inmunoglobulinas en su porcin extracelular y un dominio intracelular con actividad tirosn-kinasa (Devries y Cols, 1992; Terman y Cols, 1992; Fournier, 1997). Adems, las clulas endoteliales los expresan junto a correceptores neuropilin-1 y neuropilin-2, que van a unirse selectivamente a los 165 aminocidos de la isoforma VEGF165. Probablemente todas las isoformas de VEGF activen a ambos receptores (VEGFR-1 y VEGFR-2) pero realicen diferentes funciones in vivo, como revelan distintos estudios (Shalaby y Cols, 1995; Fong y Cols, 1995). Ambos receptores estn glicosilados; en el caso del VEGFR-2 slo la forma glicosilada es capaz de autofosforilarse en respuesta al VEGF (Takahashi y Cols, 1997). La expresin de ambos tipos de receptores se puede afectar por la hipoxia, aunque en menor medida que al VEGF. La hipoxia aumenta la transcripcin de VEGFR1, pero no del VEGFR-2 (Gerber y Cols, 1997). Esto no quiere decir que la hipoxia no produzca un aumento en la actividad de los receptores VEGFR-2, sino que ste se lleva a cabo por un mecanismo postranscripcional (Waltenberger y Cols, 1996). Con los receptores VEGFR1 y VEGFR-2 interactan dos dominios diferentes de VEGF. Se ha demostrado que para que el VEGF se una al receptor VEGFR-2 es necesaria la presencia de Arg (posicin 82), Lys (posicin 84) e His (posicin 86), mientras que para que lo haga al VEGFR-1 requiere Asp (posicin 63), Glu (posicin 64) y Glu (posicin 67). Los dominios de unin a los receptores se localizan en los extremos opuestos de cada uno de los dos
monmeros del VEGF. Estos monmeros se disponen de forma cabeza-cola unidos por puentes disulfuro. De esta manera, los dominios de unin al VEGFR-2 estn en extremos opuestos de la molcula, y lo mismo ocurre con los del VEGFR-1 (Keyt y Cols, 1996; Muller y Cols, 1997). En el caso del VEGFR-1 se ha determinado recientemente que el sitio de unin al VEGF est localizado en el segundo y tercer lazos inmunoglobulinlike de su estructura, y que dos receptores VEGFR-1 pueden unirse por medio de un puente de VEGF (Wiesmann y Cols, 1997). Tambin se ha determinado que el cuarto lazo inmunoglobulin-like contiene un dominio de dimerizacin del receptor (Wiesmann y Cols, 1997; Davis-Smith y Cols, 1996; Davis-Smith y Cols, 1998; Barleon y Cols, 1997). Algo similar ocurre en el caso del VEGFR-2, en el que el segundo y tercer lazos inmunoglobulin-like tambin son suficientes para la unin del VEGF (Fuh y Cols, 1998); su cuarto lazo contiene asimismo un dominio de dimerizacin del receptor. Esta estructura y propiedades de los receptores para VEGF son muy similares a la de los receptores tirosn-kinasa del PDGF. Respecto a los efectos biolgicos de la activacin del VEGFR-2 por el VEGF en clulas carentes de VEGFR-1 produce una respuesta mitgena, mientras que la activacin del VEGFR-1 en clulas desprovistas de receptores VEGFR-2 no induce dicha proliferacin celular sin que la causa est an aclarada (Seetharam y Cols, 1995; Waltenberger y Cols, 1994). La activacin de ambos receptores induce migracin celular. Ocasionalmente, la activacin de los receptores VEGFR conduce a la formacin de proteasas que son necesarias para la ruptura de la membrana basal de los vasos sanguneos en el primer paso de la angiognesis (Unemori y Cols, 1992; Pepper y Cols, 1991; Lamoreaux y Cols, 1998), en la expresin de integrinas especficas necesarias para la angiognesis (Friedlander y Cols, 1995) y en el inicio de la proliferacin y de la migracin celular. Adems de los receptores VEGFR-1 y VEGFR-2, las clulas endoteliales contienen otros receptores con menor masa (Gitay-Goren y Cols, 1992). Estos receptores son isoformas que se unen especficamente al VEGF165 pero no al VEGF121. La unin del VEGF165 a estos receptores es mediada aparentemente por aminocidos localizados en el extremo carboxi-terminal del pptido de VEGF165 codificado por el exn 7 (Soker y Cols, 1996; Soker y Cols, 1997).. Realmente no se observa ningn tipo de respuesta cuando las clulas que expresan neuropilina-1 pero no otros tipos de receptores son activadas por el VEGF165 (Soker y Cols, 1998). Se piensa que la neuropilina-1 es un coreceptor del VEGF165 , sobre la base de diversos estudios que demuestran que el VEGFR-2 une VEGF165 ms eficientemente en clulas que expresan neuropilna-1, lo que se traduce como una mejor respuesta migratoria que en clulas que expresan VEGFR-2 pero no neuropilina1 (Soker y Cols, 1998). La identificacin de la neuropilina1 como coreceptor del VEGFR-2 explica porque VEGF121 una variante del VEGF165 incapaz de unirse a la neuropilina-1, parece ser un mitgeno menos activo 12
que el VEGF165. De todos modos, hay que destacar que la capacidad mitognica del VEGF121 y del VEGF165 varan ampliamente segn los diferentes estudios sin que se sepa muy bien porqu (Poltorak y Cols, 1997; Siemeister y Cols, 1996).
CORRESPONDENCIA Dr. J.A. Vega Departamento de Morfologa y Biologa Celular Facultad de Medicina C/ Julin Clavera s/n 33006 OVIEDO Spain javega@correo.uniovi.es
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Cartilago Articular Estado Actual Del Problema

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Revista de Patologa de la Rodilla (edicin electrnica) Marzo de 2001