Z

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Lo que en una primera etapa fue considerado como un sueo cientfico, la manipulacin de las clulas, es hoy una apasionante realidad. El vulo fecundado por un espermatozoide se reproduce rpidamente y en cinco das, al microscopio electrnico se muestra como un paquete diminuto y que no posee restos de sistema nervioso. Las clulas madre son clulas con el potencial de convertirse en muchos tipos distintos de clulas en el organismo. Funcionan como un sistema reparador del cuerpo. Existen dos tipos principales de clulas madre: clulas madre embrionarias y clulas madre adultas. Los mdicos y los cientficos estn entusiasmados con las clulas madre porque tienen mucho potencial en muchas reas de la salud y la investigacin mdica. El estudio de estas clulas puede ayudar a explicar cmo se producen algunos cuadros serios tales como los defectos congnitos y el cncer. Algn da, las clulas madre podrn utilizarse para producir clulas y tejidos para el tratamiento de muchas enfermedades, inclusive la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, los traumatismos en la mdula espinal, las enfermedades cardacas, la diabetes y la artritis. Existen, en las clnicas de fertilidad, embriones cuyas clulas pueden ser empleadas para efectuar la reparacin de rganos y combatir las leucemias y linfomas; muchos de ellos por cuestiones ticas son incinerados para evitar su manipulacin. Como se ver a lo largo del presente trabajo, las investigaciones sobre las clulas madre son un tema relativamente reciente, lo cual constituye un campo especial de la medicina reparativa o medicina regenerativa. En este trabajo se pretende tener un mejor conocimiento sobre clulas madre, su clasificacin y tipologa; adems se abordar el tema de la criopreservacin y por ltimo hablaremos sobre la importancia mdica que radica en este tipo de investigaciones.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Llamamos clulas madre, o clulas troncales, a un tipo especial de clulas indiferenciadas que tienen la capacidad de dividirse indefinidamente sin perder sus propiedades y llegar a producir clulas especializadas. La mayora de las clulas de un individuo adulto (nos estamos refiriendo al hombre y los mamferos superiores) no suelen multiplicarse, salvo para mantenimiento de algunos tejidos como la sangre y la piel. Las clulas del msculo y de la grasa en condiciones normales no se dividen. Si engordamos, no es que tengamos ms clulas, en realidad tenemos la misma cantidad de clulas, pero stas han aumentado de tamao. Las clulas madre tienen dos caractersticas importantes que las distinguen de otros tipos de clulas. La primera de ellas es que son clulas no especializadas que se renuevan ilimitadamente. La segunda es que bajo ciertas condiciones fisiolgicas o experimentales, se las puede inducir a que se conviertan en clulas con funciones especiales tales como clulas musculares cardacas o clulas de pncreas que produzcan insulina. Los cientficos trabajan sobre todo con dos clases de clulas madre de animales y de seres humanos: clulas madre embrionarias y clulas madre adultas, que poseen diversas funciones y caractersticas. Los cientficos descubrieron diversas maneras de obtener o aislar las clulas madre de embriones tempranos del ratn hace ms de 20 aos. Muchos aos de estudio detallado de la biologa de las clulas madre del ratn condujeron al descubrimiento, en1998, de cmo aislar las clulas madre de embriones humanos y hacerlas crecer en el laboratorio. stas se denominan clulas madre embrionarias humanas. Los embriones usados en estos estudios fueron creados con el propsito de tratar la infertilidad mediante

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

procedimientos de fertilizacin inVitro y cuando ya no fueron necesarios para ello, fueron donados para la investigacin con el consentimiento informado del donante. Las clulas madre son

importantes para los organismos vivos por muchas razones. En algunos tejidos adultos, tales como la mdula sea, msculo, y cerebro, pequeas poblaciones definidas de clulas madre adultas pueden migrar y reemplazar a las clulas que se pierden en diferentes rganos como resultado de un desgaste normal, por lesiones o enfermedades.

A. Qu etapas del desarrollo embrionario temprano son importantes para generar clulas madre embrionarias? Las clulas madre embrionarias , como su nombre indica, se derivan de embriones. La mayora de las clulas madre embrionarias se derivan de embriones que se desarrollan a partir de huevos que han sido fertilizados in vitro , en un in vitro fertilizacin clnica y despus donados para fines de investigacin con el consentimiento informado de los donantes. Es decir este tipo de clulas madre no derivan de los huevos fertilizados en el cuerpo de una mujer. B. Cmo son las clulas madre embrionarias cultivadas en el laboratorio? Clulas que crecen en el laboratorio se conoce como el cultivo de clulas . Las clulas madre embrionarias (hESCs) son generados por la transferencia de clulas de un previo a la implantacin del embrin en estadio a un plato de laboratorio de cultivo de plstico que contiene un caldo nutritivo conocido como medio de cultivo . Las clulas se dividen y se extienden sobre la superficie del plato. La superficie interior de la placa de cultivo es tpicamente revestidos con clulas embrionarias de ratn de la piel que han sido tratadas para que no se dividan. Esta capa de revestimiento de las clulas se denomina una capa alimentadora . Las clulas de ratn en la parte inferior
UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

de la placa de cultivo de las clulas proporcionan una superficie pegajosa a la que se puede adjuntar. Adems, las clulas alimentadoras liberan los nutrientes en el medio de cultivo. Los investigadores han ideado maneras de hacer crecer las clulas madre

embrionarias de ratn sin clulas alimentadoras. Este es un avance

significativo cientfico debido al riesgo de que los virus u otras

macromolculas en las clulas de ratn puedan ser transmitidos a las clulas humanas. El proceso de generacin de una lnea de clulas madre embrionarias es algo ineficaz, por lo que las lneas no se producen cada vez que clulas del embrin de preimplantacin se colocan en un plato de cultivo. Sin embargo, si las clulas cultivadas en placas sobreviven, se dividen y multiplican lo suficiente como para cubrir el plato, se retiran con cuidado y se siembran en varias placas de cultivo fresco. El proceso de re-siembra o subcultivo de las clulas se repite muchas veces y durante muchos meses. Cada ciclo de subcultivo de las clulas se conoce como un pasaje . Una vez que la lnea celular se ha establecido, las celdas originales pueden producir millones de clulas madre embrionarias. Las clulas madre embrionarias que han proliferado en el cultivo de clulas por un perodo prolongado de tiempo sin hacer diferencias, son pluripotentes , y que no han desarrollado anormalidades genticas se conoce como una lnea de clulas madre embrionarias .En cualquier etapa en el proceso, los lotes de clulas pueden ser congeladas y enviadas a otros laboratorios para el cultivo y experimentacin.

C. Qu pruebas de laboratorio se utilizan para identificar a las clulas madre embrionarias? En varios momentos durante el proceso de generar lneas de clulas madre embrionarias, los cientficos analizan las clulas para ver si presentan las caractersticas

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

fundamentales que las convierten en clulas madre embrionarias. Este proceso se denomina caracterizacin. Los cientficos que estudian las clulas madre embrionarias todava no han acordado una batera estndar de pruebas que miden las propiedades de las clulas fundamentales. Sin embargo, los laboratorios que producen las lneas embrionarias humanas de clulas madre emplean varios tipos de pruebas, incluyendo:

Crecimiento y subcultivo de las clulas madre durante muchos meses. Esto asegura que las clulas son capaces de crecimiento a largo plazo y autorenovacin. Los cientficos inspeccionan los cultivos a travs de un microscopio para ver que las clulas se ven saludables y permanecen indiferenciadas.

Utilizando tcnicas especficas para determinar la presencia de factores de transcripcin que son tpicamente producidas por las clulas no

diferenciadas. Dos de los factores de transcripcin ms importantes son OCT4 y Nanog. Los factores de transcripcin ayudan a convertir los genes de encendido y apagado en el momento adecuado, que es una parte importante de los procesos de la clula de la diferenciacin y el desarrollo embrionario. En este caso, tanto el OCT4 y Nanog estn asociados con el mantenimiento de las clulas madre en un estado indiferenciado, capaces de auto-renovacin.

Utilizar tcnicas especficas para determinar la presencia de marcadores particulares en la superficie celular que son tpicamente producidas por las clulas no diferenciadas.

Examinar los cromosomas bajo un microscopio. Este es un mtodo para evaluar si los cromosomas estn daados o si el nmero de cromosomas ha cambiado.

La determinacin de: si las clulas pueden volver a crecer, o se subcultivan, despus de la congelacin, descongelacin, y re-chapado.

Comprobar si las clulas humanas embrionarias son pluripotentes por 1) permitir que las clulas se diferencien espontneamente en cultivo celular, 2) la manipulacin de las clulas de modo que se diferencien para formar

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

clulas caractersticas de las tres capas germinales, o 3) inyectando las clulas en un ratn con un sistema inmunitario debilitado

para detectar la formacin de un tumor benigno

llamado teratoma. Dado que el sistema inmune del ratn se suprime, las

clulas madre humanas inyectadas no son

rechazadas por el sistema inmune del ratn y los cientficos pueden observar el crecimiento y la diferenciacin de las clulas madre humanas. Los teratomas generalmente contienen una mezcla de muchas clulas diferenciadas una indicacin de que las clulas madre embrionarias son capaces de diferenciarse en mltiples tipos de clulas. D. Cmo son las clulas madre embrionarias estimuladas para diferenciarse? Mientras que las clulas madre embrionarias en cultivo crecen bajo condiciones apropiadas, estas pueden permanecer indiferenciadas (no especializadas). Pero si las clulas pueden agruparse para formar cuerpos embrionarios, comienzan a diferenciarse espontneamente. Se pueden formar las clulas musculares, clulas nerviosas, y muchos otros tipos de clulas. Aunque la diferenciacin espontnea es una buena indicacin de que un cultivo de clulas madre embrionarias es saludable, no es una forma eficiente de producir cultivos de tipos celulares especficos. Por lo tanto, para generar cultivos de determinados tipos de clulas diferenciadas de las clulas musculares de corazn, las clulas de la sangre, o clulas nerviosas, por ejemplo, los cientficos tratan de controlar la diferenciacin de clulas madre embrionarias. Se cambia la composicin qumica del medio de cultivo, alteran la superficie de la placa de cultivo, o modifican las clulas mediante la insercin de genes

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

especficos. A travs de aos de experimentacin, los cientficos han establecido unos protocolos bsicos o "recetas" para la diferenciacin dirigida de clulas madre embrionarias en algunos tipos de clulas especficas Si los cientficos de forma fiable puede dirigir la diferenciacin de las clulas madre embrionarias en tipos celulares especficos, pueden ser capaces de utilizar las clulas resultantes y diferenciadas para el tratamiento de ciertas enfermedades en el futuro. Las enfermedades que pueden ser tratadas mediante el trasplante de clulas generadas a partir de clulas madre embrionarias humanas incluyen la enfermedad de Parkinson, diabetes, lesin traumtica de la mdula espinal, distrofia muscular de Duchenne, enfermedad cardaca, y la visin y prdida de la audicin.

Una clula madre adulta se cree que es un indiferenciado de clulas, que se encuentra entre las clulas diferenciadas en un tejido u rgano que puede renovarse y pueden diferenciarse para producir todos o algunos de los principales tipos de clulas especializadas del tejido u rgano. Las principales funciones de las clulas madre adultas en un organismo vivo son mantener y reparar el tejido en el que se encuentran. Los cientficos tambin usan el trmino de clulas madre somticas en lugar de clulas madre de adultos, donde se refiere a las clulas somticas del cuerpo (no de las clulas germinales, espermatozoides o los vulos). A diferencia de las clulas madre embrionarias, que se definen por su origen (las clulas de la preimplantacin de embriones en estadio), el origen de las clulas madre adultas en algunos tejidos maduros todava est bajo investigacin. La investigacin sobre clulas madre adultas ha generado una gran expectacin. Los cientficos han encontrado clulas madre adultas en muchos tejidos ms de lo que alguna vez pensaron posible. Este hallazgo ha llevado a los investigadores y mdicos a preguntarse si las clulas madre adultas podran ser utilizadas para trasplantes. Ahora los cientficos tienen pruebas de que las clulas madre existen en el cerebro y el corazn. Si la diferenciacin de las clulas madre adultas pueden ser controlados en el laboratorio, estas clulas pueden llegar a ser la base de las terapias basadas en el trasplante.
UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

La historia de la investigacin en clulas madre adultas comenz hace unos 50 aos. En la dcada de 1950, los investigadores descubrieron que la mdula sea contiene al menos dos tipos de clulas madre. Una poblacin, llamados clulas madre hematopoyticas, forma todos los tipos de clulas sanguneas en el cuerpo. Una segunda poblacin, llamadas clulas de la mdula sea madre estromales (tambin llamados clulas madre mesenquimales o clulas madre esquelticas por algunos), fueron descubiertos unos aos ms tarde. Estas clulas madre no hematopoyticas constituyen una pequea proporcin de la clula estromal poblacin en la mdula sea, y puede generar hueso, cartlago, grasa, son clulas que apoyan la formacin de sangre y tejido conectivo fibroso. En la dcada de 1960, los cientficos que estudiaban las ratas descubrieron dos regiones del cerebro que contiene las clulas en divisin que pasan a formar las clulas nerviosas. A pesar de estos informes, la mayora de los cientficos crean que el cerebro adulto no poda generar nuevas clulas nerviosas. No fue sino hasta la dcada de 1990 que los cientficos coincidieron en que el cerebro adulto contiene clulas madre que son capaces de generar en el cerebro de los tres principales tipos de clulas de astrocitos y oligodendrocitos, que son las clulas no neuronales, y las neuronas , o clulas nerviosas. A. Dnde se encuentran las clulas madre adultas, y qu es lo que hacen normalmente? Las clulas madre adultas han sido identificados en muchos rganos y tejidos, incluyendo cerebro, mdula sea, sangre perifrica, los vasos sanguneos, msculo esqueltico, piel, dientes, corazn, intestino, hgado, ovario epiteliales y en los testculos. Se cree que residen en una zona especfica de cada tejido (llamado un "nicho de clulas madre"). En muchos tejidos, la evidencia actual sugiere que algunos tipos de clulas madre son los pericitos, clulas que componen la capa ms externa de los vasos sanguneos pequeos .Las clulas madre pueden permanecer en reposo (no se dividen) durante largos perodos de tiempo hasta que se activan por una necesidad normal de ms clulas para mantener los tejidos, o por una enfermedad o lesin de los tejidos.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Tpicamente, hay un nmero muy pequeo de clulas madre en cada tejido, y una vez eliminado del cuerpo, su capacidad para dividirse es limitada, por lo que la generacin de grandes cantidades de clulas madre es difcil. Los cientficos en muchos laboratorios estn tratando de encontrar mejores maneras de hacer crecer grandes cantidades de clulas madre adultas en cultivo celular y manipularlas para generar tipos especficos de clulas para que puedan ser utilizados para tratar la lesin o enfermedad. Algunos ejemplos de tratamientos potenciales incluyen la regeneracin sea con clulas derivadas del estroma de la mdula sea, el desarrollo de clulas productoras de insulina para la diabetes tipo 1, y reparar el msculo cardiaco daado tras un ataque al corazn con clulas del msculo cardaco.

B. Qu pruebas se utilizan para la identificacin de las clulas madre adultas? Los cientficos a menudo utilizan una o ms de los siguientes mtodos para identificar las clulas madre adultas: (1) identificar a las clulas en un tejido vivo con marcadores moleculares y luego determinar los tipos de clulas especializadas que generan, (2) eliminar las clulas de un animal vivo, etiquetarlos en el cultivo celular, y trasplantarlas de nuevo en otro animal para determinar si las clulas reemplazan (o "repoblar") su tejido de origen. Es importante destacar que se debe demostrar que una sola clula madre adulta puede generar una lnea de clulas genticamente idnticas, que luego da lugar a todos los tipos adecuados de clulas diferenciadas del tejido. Para confirmar experimentalmente que una clula madre adulta es de hecho un supuesto de clulas madre, los cientficos tienden a demostrar o bien que la clula puede dar lugar a que estas clulas son genticamente idnticas en el cultivo, y/o que una poblacin purificada de estas clulas madre pueden repoblar o reformar el tejido despus del trasplante en un animal. C. Qu se sabe acerca de la diferenciacin de clulas madre adultas? En un animal vivo, las clulas madre adultas estn disponibles para dividirse, cuando sea necesario, y pueden dar lugar a tipos de clulas maduras que tienen formas caractersticas y las estructuras y funciones especializadas de un tejido en

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

particular. Los siguientes son ejemplos de vas de diferenciacin de clulas madre adultas que han sido demostrado in vitro o in vivo.

Las clulas madre hematopoyticas dan lugar a todos los tipos de clulas sanguneas: glbulos rojos, los linfocitos B, linfocitos T, clulas asesinas naturales, neutrfilos, eosinfilos, basfilos, monocitos y macrfagos.

Las clulas madre mesenquimales dan lugar a una variedad de tipos de clulas: las clulas seas (osteocitos), clulas del cartlago (condrocitos), las clulas grasas (adipocitos) y otros tipos de clulas del tejido conectivo, como las de los tendones.

Las clulas madre neurales en el cerebro dan lugar a los tres tipos principales de clulas: las clulas nerviosas (neuronas) y dos categoras de clulas no neuronales de los astrocitos y oligodendrocitos .

Las clulas madre epiteliales en el revestimiento del tracto digestivo ocurren en criptas profundas y dan lugar a varios tipos de clulas: las clulas absorbentes, clulas caliciformes, clulas de Paneth y clulas neuroendocrinas.

Las clulas madre de la piel ocurren en la capa basal de la epidermis y en la base de los folculos pilosos. Las clulas madre epidrmicas dar lugar a los queratinocitos, que emigran a la superficie de la piel y forman una capa protectora. Las clulas madre foliculares puede dar lugar a ambos el folculo del pelo y la epidermis. Transdiferenciacin. Una serie de experimentos han indicado que ciertos tipos de

clulas madre adultas pueden diferenciarse en tipos celulares que se ven en los rganos o tejidos distintos de los esperados del linaje de las clulas (es decir, clulas madre del cerebro que se diferencian en clulas de la sangre o las clulas que forman

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

10

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

la sangre que se diferencian en clulas del msculo cardaco, y as sucesivamente). Este fenmeno se llama transdiferenciacin. A pesar de casos aislados de transdiferenciacin que se han observado en algunas especies de vertebrados, si este fenmeno ocurre realmente en los seres humanos es objeto de debate por la comunidad cientfica. En lugar de transdiferenciacin, los casos observados puede implicar la fusin de una clula donante con una clula receptora. Otra posibilidad es que las clulas madre trasplantadas sean

factores que estimulen a las clulas secretoras propias del receptor madre para comenzar el proceso de reparacin. Aun cuando se ha detectado transdiferenciacin, slo un porcentaje muy pequeo de clulas se someten al proceso.

Una diferencia importante entre las clulas madre adultas y embrionarias son sus diferentes habilidades en el nmero y tipos de clulas diferenciadas que pueden llegar a ser. Las clulas madre embrionarias pueden convertirse en todos los tipos celulares del cuerpo porque son pluripotentes. Las clulas madre adultas se cree que se limitan a diferenciarse en diferentes tipos de clulas de su tejido de origen. Las clulas madre embrionarias pueden cultivarse con relativa facilidad. Las clulas madre adultas son raras en tejidos maduros, por lo que aislar estas clulas de un tejido adulto es un reto, y los mtodos para ampliar su nmero en el cultivo de

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

11

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

clulas an no se han resuelto. Esta distincin es importante, ya que un gran nmero de clulas se necesitan para las terapias de clulas madre de reemplazo. Los cientficos creen que los tejidos derivados de clulas madre embrionarias y adultas pueden diferir en la probabilidad de rechazo despus del trasplante. No sabemos todava si los tejidos derivados de clulas madre embrionarias podra causar el rechazo de trasplantes, ya que los primeros ensayos clnicos de pruebas de la seguridad de las clulas derivadas de clulas madre embrionarias humanas han sido recientemente aprobado por la Food and Drug Administration (FDA). Se cree que actualmente las clulas madre adultas, y los tejidos derivados de ellos, tienen menos probabilidades de iniciar el rechazo despus del trasplante. Esto es porque las propias clulas de un paciente podran ampliarse en cultivo, (diferenciacin), y luego volver a introducirse en el paciente. El uso de clulas madre adultas y tejidos derivados de clulas madre propias del paciente adulto significara que las clulas son menos propensas a ser rechazadas por el sistema inmune.

DIFERENCIAS

CLULAS MADRE EMBRIONARIAS

CLULAS MADRE ADULTAS

Pluripotenciales

Multipotenciales

Ms verstiles

Menos verstiles Poco numerosas y repartidas por todo el cuerpo Difciles de obtener Crecimiento celular normal y no crean masas tumorales Se obtienen de tejidos de adultos o del cordn umbilical sin necesidad de destruir embriones. No conlleva problemas ticos

Muy numerosas

Fciles de obtener Favorecen el crecimiento celular descontrolado y la aparicin del cncer

Se obtienen destruyendo embriones. Conlleva a problemas ticos

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

12

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Como vemos en el cuadro, las clulas madre embrionarias tienen una serie de ventajas frente a las clulas madre adultas ya que son pluripotenciales, es decir, pueden dar lugar a cualquier tipo celular, mientras que las clulas madre adultas son multipotenciales pudiendo dar lugar a muchos tipos celulares pero no a todos. Adems las clulas madre embrionarias son ms verstiles, ms numerosas y ms fciles de obtener que las clulas madre adultas. Pero a su vez, las clulas madre embrionarias tienen dos desventajas importantes: tienen un desarrollo descontrolado produciendo cncer y conlleva a un problema tico. Este problema tico se debe que para obtenerlas se tiene que destruir el embrin. Las clulas madre adultas no presentan ninguna de estas dos desventajas, ni producen cncer ni hay que destruir embriones para obtenerlas.

Las clulas madre o stem cell son consideradas una de las terapias ms prometedoras del futuro. En los ltimos aos se han abierto mltiples lneas de investigacin para el

tratamiento de enfermedades graves clulas o invalidantes. de Las

madre

cordn

umbilical son consideradas una de las terapias ms

prometedoras del futuro. Existe, en la actualidad, la facilidad de obtener clulas madre en el momento que se produce el parto, tomndolas directamente del cordn umbilical del beb. Esto quiere decir, que si el beb de quien hoy se criopreservan las clulas de cordn, tiene en un futuro una enfermedad que requiera un trasplante, este podra evitarse, al utilizar sus propias clulas madre con un 100% de compatibilidad gentica.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

13

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Asimismo estas clulas madre pueden tener alta compatibilidad con familiares directos, razn por la cual pueden ser utilizadas por estos. Se cree que las clulas madre podran utilizarse en nuevas terapias como la reparacin de dao cerebral y de mdula espinal y tratamientos de enfermedades cardiovasculares, metablicas como la diabetes o degenerativas como el Alzheimer. Las clulas madre tienen el poder de diferenciarse en todas las clulas que componen todos los tejidos del cuerpo humano. La criopreservacin de clulas madre de cordn umbilical se realiza para brindar tranquilidad a los padres quienes saben que pueden tener acceso a ellas en caso de necesidad. Cules son las ventajas de la recoleccin de clulas madre de cordn umbilical? Fcil recoleccin de las clulas madre sin que sin la madre o el beb sufran ningn dolor o riesgo. Posibilidad de Crio-Preservar las clulas madre durante al menos 20 aos, sin que las clulas sufran dao alguno o pierdan sus propiedades. Disponibilidad inmediata de las clulas madre sin tener que realizar bsquedas de donantes compatibles. Ausencia de riesgo de transmisin de enfermedades virales. Menor incidencia de una de las principales causas de muerte en los trasplantes, la enfermedad de Injerto contra Husped (EICH), donde las clulas trasplantadas reaccionan contra el paciente. Menores requerimientos de compatibilidad (HLA) en caso de trasplante entre familiares y 100% compatibles con el propio beb. La criopreservacin tiene como objetivo el mantenimiento de la viabilidad y funcionabilidad celular a temperaturas bajas. La criobiologa se refiere a entender los efectos de las temperaturas bajas sobre los sistemas celulares ya que el tiempo biolgico es una consecuencia de determinadas reacciones bioqumicas y el fro prolonga el tiempo biolgico puesto que enlentece estas reacciones. Sin embargo, este no es un proceso exento de problemas ya que puede inducir variaciones extremas en
UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I Semestre Acadmico 2012-I

14

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

las propiedades qumicas, trmicas y elctricas las cuales pueden alterar las membranas celulares, los organelos y la delicada interaccin clula-clula inherente en las clulas y tejidos a criopreservar. La estructura y composicin de las membranas plasmticas determinan los principales eventos celulares que tienen lugar durante los procesos de criopreservacin, su comportamiento durante la congelacin y descongelacin definir los ndices de supervivencia de la clula congelada. Los periodos crticos para la sobrevida celular durante la criopreservacin son la fase inicial del congelamiento y el periodo de retorno a condiciones fisiolgicas. El entender y aplicar adecuadamente la criopreservacin de material biolgico es fundamental para los bancos de clulas de humanos y de clulas animales, los laboratorios de cultivo celular (mantener una lnea celular en cultivo continuo por largos periodos de tiempo es costosa, hay un gran riesgo de contaminacin as como la posibilidad de una alteracin gentica) y los laboratorios de farmacia, por lo cual hay una especial atencin a la conservacin de tejidos, rganos y embriones humanos para ser utilizados en investigacin y su posterior aplicacin teraputica (trasplantes) llegando a crear verdaderos archivos biolgicos. Sin embargo, aunque desde hace mucho tiempo se han implementado protocolos para criopreservacin, estos son an sub-ptimos en la mayora de los casos. Los lpidos (colesterol y cidos grasos) como componentes ms abundantes de la membrana plasmtica, determinan la fluidez y resistencia de la membrana durante los procesos de criopreservacin. El empaquetamiento y la posicin de estas molculas en las bicapas determinarn la rigidez de las membranas y por tanto el transporte de molculas. Este transporte a travs de las membranas es el punto crtico para la supervivencia celular posdescongelacin.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

15

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

El potencial de les clulas madre, que son capaces de producir cualquier tipo de tejido, ha creado enormes expectativas sobre su aplicacin en medicina. En concreto, ha dado paso al nacimiento de la medicina regenerativa: una rama biomdica cuyo objetivo es curar enfermedades debidas al funcionamiento anmalo de determinadas clulas, tejidos u rganos mediante su reemplazo por clulas, tejidos u rganos funcionales, inmunolgicamente compatibles con el paciente. En el caso de resultar viable, la medicina podra a la

regenerativa ofrecer

solucin como

enfermedades

diabetes de tipo I, el Alzheimer, el Parkinson, y tambin a las quemaduras o a las lesiones medulares que producen parlisis. Asimismo, podra ser la solucin definitiva para realizar trasplantes sin que se produzca rechazo inmunolgico por parte del paciente, que es una de las principales causas de mortalidad de estos enfermos. Las aplicaciones seguiran en un largo etctera que todava resulta imposible de precisar o confirmar. Actualmente, el gran reto de la investigacin en clulas madre es descubrir cules son los factores que determinan que una clula madre se convierta en un tipo celular u otro. Esta investigacin se encuentra todava en una fase inicial. Por este motivo, tenemos que ser prudentes y no afirmar a la ligera que pronto seremos capaces de curar determinadas enfermedades. Sin embargo, hay muchas esperanzas puestas en las clulas madre, por ello es fundamental que la investigacin en este campo cuente con recursos y no se detenga.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

16

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

En el futuro se podran obtener clulas madre que produjeran tejidos y rganos inmunolgicamente compatibles con el paciente que los necesita, incluso tejidos que hoy en da son imposibles de trasplantar, como el tejido nervioso.

APLICACIONES DE LAS CLULAS MADRE Son muchas las aplicaciones que pueden llevarse a cabo con las clulas madre. Muchas de ellas an no han podido llevarse a cabo. Entre ellas tenemos: Terapias celulares: Las clulas madre ofrecen frecuentemente la posibilidad de reemplazar clulas y tejidos daados. Se podrn emplear para curar: Parkinson. Alzheimer. Lesiones medulares. Lesiones cardiacas. Lesiones cerebrales. Regenerar el pncreas de los diabticos. Regenerar las clulas epiteliales. Etc. Adems, si obtenemos estas clulas madre de un embrin resultante de la clonacin del enfermo y mediante cultivo y diferenciacin celular conseguimos diferentes tipos de tejidos y rganos, el paciente se convierte en su propio donante evitndose los problemas de rechazo al trasplante de clulas, tejidos y rganos sanos formados a partir de sus propias clulas madre. Conocer los mecanismos de activacin e inhibicin de genes: Si llegamos a conocer cul es el proceso por el que una clula se especializa, cules son los genes que activan y desactivan en este proceso y que es lo que causa esa activacin podramos dirigir el proceso de especializacin para fabricar los tipos

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

17

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

celulares que queramos. Adems como el cncer se produce por una activacin de genes se podra llegar incluso a lograr la curacin del cncer. Experimentacin de nuevos medicamentos: A partir de clulas madre dirigiendo su diferenciacin podemos obtener cualquier tipo de tejidos. Sobre estos tejidos se podrn probar los nuevos medicamentos y evitar as la realizacin de ensayos clnicos con animales y con seres humanos. Terapia gnica: Se lleva a cabo mediante la incorporacin de un gen sano y funcional en clulas madre que son introducidas en el paciente con el fin de compensar el defecto gnico que causa su enfermedad. Histocompatibilidad El trasplante de sangre del cordn umbilical implica obtener una fuente de clulas troncales hematopoyticas compatible en el mximo grado con el tipo de tejido del receptor, el que est determinado por un conjunto de genes en el cromosoma G y que codifican las protenas de histocompatibilidad llamados antgenos leucocitarios humanos (HLA) de la sangre a transfundir. Bancos de Sangre del Cordn umbilical Ante las ventajas manifiestas del trasplante de sangre del cordn umbilical, numerosos hospitales e institutos han establecido bancos donde la madre puede depositar la sangre del cordn umbilical de un hijo en beneficio de algn receptor compatible. El porvenir de esta teraputica es cada vez ms apasionante. ltimamente se encontr que el tejido del cordn umbilical contiene clulas mesenquimales que pueden generar hueso y cartlago. Son avances que presagian una transformacin de la medicina, por el uso de clulas madre adultas. Leucemia y Cncer En estudios recientes, pacientes leucmicos tratados con clulas madre de mdula sea y cordn umbilical se han librado de la enfermedad; clulas madre de la sangre han reducido el linfoma no Hodgkin y el cncer de pncreas y de ovario.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

18

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Enfermedades Cardiacas Uno de los ms relevantes avances es la aplicacin de clulas madre adultas de la mdula sea a la recuperacin del tejido cardiaco pues mejora la funcin del rgano en vctimas de infartos o paros cardiacos. Se inyectaron clulas madre de la mdula sea del mismo paciente en las arterias coronarias y se observ aumento de la funcin cardiaca. Mal de Parkinson Como los implantes de tejido fetal ha tenido xito parcial en la reduccin de sntomas neurolgicos, algunos investigadores consideran, y lo estn intentando, que sera posible estimular a las clulas madre del propio paciente para que genere dopamina. Artritis reumatoide Las clulas madre adultas se emplean en la reparacin del cartlago lesionado por la enfermedad, y es posible lograr la reduccin del dolor aun temporalmente. Diabetes del tipo I Se encuentran en desarrollo su aplicacin en esta enfermedad empleando protenas sobre clulas madre embrionarias para que puedan capacitarse para formar tipos de clulas pancreticas que segreguen insulina. Muchas de estas aplicaciones an no se han podido realizar pero otras s. Todas las aplicaciones con clulas madre que han tenido xito se han llevado a cabo con celular madre adultas. Con las clulas madre embrionarias no se han conseguido ni un solo xito debido a su crecimiento descontrolado que produce la formacin de cncer. Una de las aplicaciones con clulas madre adultas que se realiza con ms frecuencia y es una de las ms conocidas es el trasplante de clulas madre de la mdula sea para el tratamiento de leucemias y otros tipos de cncer.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

19

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

El primer xito de curacin mediante terapia gnica con clulas madre, tuvo lugar en abril de 2000. Dos bebs nacieron con un defecto gnico, se les extrajeron clulas madre de sus mdulas seas. Estas clulas se cultivaron, se les reemplaz el gen defectuoso por el sano y fueron introducidas en los bebs que sanaron.

En Espaa, en octubre de 2007, se realiz por primera vez la implantacin en un corazn infartado de clulas madre adultas de la mdula sea del propio paciente con unos resultados excelentes. Recientemente se han hallado reservas de clulas madre adultas en el cerebro. Este es un descubrimiento muy importante porque a partir de ellas podremos obtener las distintas clases de clulas nerviosas. Si esto es as podremos regenerar neuronas y los enfermos con algn trastorno del sistema nervioso se podran curar. Entre ellos los pacientes que sufren de lesiones medulares, los parapljicos y los tetrapljicos.

Todas estas aplicaciones llevadas a cabo y todos los avances que se estn alcanzando aumentan las esperanzas para la curacin de muchas enfermedades actualmente incurables. Pero todava falta mucho por investigar y conocer. LAS CLULAS MADRE Y LA BIOTICA La biotica es una disciplina que estudia los problemas ticos y los principios morales que surgen en la aplicacin de las ciencias biolgicas y de la medicina. Como hemos visto, son muchas las aplicaciones que se pueden realizar con las clulas madre. Al igual que el resto de los avances cientficos, influyen en las condiciones de vida de la humanidad por lo que no es posible ser neutral sobre este tema desde el punto de vista tico. El problema tico que conlleva la investigacin y utilizacin de las clulas madre radica en el origen de las mismas y en concreto en el origen de las clulas madre embrionarias ya que como hemos dicho antes las clulas madre adultas no conllevan problemas ticos porque se obtienen de personas adultas y no de embriones.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

20

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Para obtener las clulas madre embrionarias hay que matar al embrin, y es necesario determinar ni esto es lcito o no, si est bien o no sacrificar embriones para curar a otras personas. El problema es que es difcil que todo el mundo se ponga de acuerdo en lo fundamental, es el embrin solo un conjunto de clulas o es una persona? Aqu est el gran conflicto tico, porque si es una persona en sus primeros estados de desarrollo no podemos matar a una persona para curar a otra. De todas formas el problema tico parece solucionarse con el empleo de clulas madre adultas que adems se ha comprobado que son mucho ms efectivas que las embrionarias a la hora de curar enfermedades porque no producen cncer. Las clulas madre, junto con la manipulacin gentica, van a constituir dos pilares bsicos de la medicina de los prximos aos. La tecnologa gentica impedir la aparicin de muchas enfermedades inscritas en nuestros genes. Las clulas madre, por su parte, proveern de tejidos y rganos de repuesto a medida que los nuestros se vayan deteriorando. Todo ello contribuir a la mejora de la salud y de la vida de las personas y deben ser saludados con satisfaccin. Pero ello no nos puede hacer perder de vista los riesgos del desarrollo tecnolgico. Los problemas bioticos que plantea la manipulacin gentica son objeto de otro estudio. Aqu nos hemos centrado en los suscitados por la investigacin con clulas madre. La principal fuente de problemas deriva del uso de embriones como materia prima para obtener esas clulas. El embrin es un ser completamente desprotegido, incapaz de defender sus intereses por s mismo y con una apariencia nada semejante a la de un ser humano adulto. Esas tres circunstancias han conducido a muchos a considerar que el embrin no es todava un ser humano y que, por tanto, puede ser utilizado al servicio suyo. Pero esas circunstancias no quieren decir que todava no estemos ante un ser humano, sino que la fragilidad es inherente a la condicin humana y que esa condicin se manifiesta mximamente en los inicios del ser humano. Considerado as el embrin, no puede ser lcito, en ningn caso, su instrumentalizacin al servicio de otros seres humanos. Si no existiesen fuentes alternativas para obtener las clulas madre que no plantean

problemas ticos, nos encontraramos ante un dilema cuya respuesta no admitira dudas pero que resultara bastante trgico. Pero lo cierto es que la ciencia ha provisto

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

21

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

de unas alternativas ms que satisfactorias, que permiten desarrollar la investigacin con clulas madre sin sacrificar vidas humanas.

Una clula madre es una clula que tiene capacidad de autorenovarse mediante divisiones mitticas o bien de continuar la va de diferenciacin para la que est programada y, por lo tanto, producir clulas de uno o ms tejidos maduros, funcionales y plenamente diferenciados en funcin de su grado de multipotencialidad.

Cada tipo celular debe ser congelado conociendo el perfil biofsico de la clula, el cual dictar mediante ensayos de permeabilidad y volumen osmticamente inactivo con diferentes criopreservantes y/o soluciones criopreservantes (mezcla de crioprotectores penetrantes y no penetrantes) el mejor protocolo de criopreservacin de esa clula.

Las Clulas Madre, junto con la manipulacin gentica, van a constituir dos pilares bsicos de la Medicina de los prximos aos. La tecnologa gentica impedir la aparicin de muchas enfermedades inscriptas en nuestros genes. El problema tico que conlleva la investigacin y utilizacin de las clulas madre radica en el origen de las mismas y en concreto en el origen de las clulas madre embrionarias ya que las clulas madre adultas no conllevan problemas ticos porque se obtienen de personas adultas y no de embriones. En el futuro se podran obtener clulas madre que produjeran tejidos y rganos inmunolgicamente compatibles con el paciente que los necesita, incluso tejidos que hoy en da son imposibles de trasplantar, como el tejido nervioso. La criopreservacin de clulas madre de cordn umbilical se realiza para brindar tranquilidad a los padres quienes saben que pueden tener acceso a ellas en caso de necesidad.

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

22

Clulas Madre - Biologa General, Celular y Molecular

Pasion A. Cardiomioplastia celular: una alternativa teraputica? Avances Cardiologa 2005; 25(4):91-108. Servicio de Biblioteca Nacional de Medicina de EE.UU. NIH Institutos Nacional de la Salud http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/stemcells.html

BIBLIOGRAFA EN INGLS:

Schachinger V, Assmus B, Britten MB, Honold J, Lehmann R, Teupe C et al. Transplantation of progenitor cells and regeneration enhancement in acute myocardial infarction

Krbling, M. y Zeev, E. 2003. Adult Stem Cells for Tissue Repair. A New Therapeutic Concept?. N Engl J Med. 349: 570-582 (on line http://content.nejm.org/cgi/content/extract/349/6/570)

UNJFSC FMH EAP Medicina Humana. Ciclo. I

Semestre Acadmico 2012-I

23