UNMSM

Determinacin de Carbohidratos
Bioqumica de Recursos Vegetales
Mara Isabel Hurtado Yanac / 09100100 04 de Mayo del 2012

Los hidratos de carbono se clasifican en monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los monosacridos son aldehdos o cetonas polihidroxilados. Los oligosacaridos y polisacridos por hidrlisis dan monosacridos. Para la identificacin de los hidratos de carbono se emplean reacciones generales y particulares.

Determinacin de Carbohidratos

Materiales
Carbohidratos: Lactosa 1%, Glucosa 1%, Almidn 1%, Fructosa 1%, Sacarosa 1%, Maltosa 1% Reactivos: Molish (-naftol y Acido sulfrico); Benedict; Fehling A,B y C; Reactivo de Selivanoff

Reconocimiento General
1. Prueba de Molish Para el reconocimiento general de carbohidratos usamos la reaccin de Molish, que consta de agregar primero a la muestra -naftol y luego Acido sulfrico. Despus de esperar un rato, si la prueba es positiva se observara un anillo de color lila o morado, denominado anillo fural, esto se debe a la deshidratacin del glcido. En la prctica:

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Los nicos glcidos que pudieron formar el anillo fural fue la Fructosa, y luego de mucho tiempo el otro glcido fue sacarosa. Lo que sucede a nivel molecular es que el H2SO4, hidroliza los carbohidratos complejos (Sacarosa, disacarido) y deshidrata excesivamente los monosacridos (Fructosa, una hexosa) resultantes formando furfural y derivados. Finalmente producen compuestos color purpura, por reaccin del -naftol.

Reaccin ocurrida durante la prueba de Molish

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Reconocimiento Especfico
1. Azucares Reductores Realizamos la prueba de Benedict en simultneo con la Prueba de Fehling. El procedimiento es agregar 1ml de la muestra problema y luego agregar 1ml de Benedict o 1mL de Fehling. Prueba de Benedict Benedict: 1mL Prueba de Fehling Fehling A: 0,5 mL Fehling B: 0,5 mL

Por lo tanto en cada tubo hubo 1mL de la muestra problema y 1mL de reactivo Lactosa + Formacion Prueba de de precipitado Benedict rojo ladrillo Glucosa Almidn Fructosa Sacarosa Maltosa

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+ 2 + 40 + 25 + 30

Prueba de Fehling

+ Precipitado de oxido cuproso + 130 + 5 + 20 + 25

Fundamento Reactivo de Benedict: se utiliza para reconocer monosacridos y disacridos; exepto sacarosa y estos son oxidados por el reactivo de Benedict. Hay formacin de precipitado rojo ladrillo, el cual indica la presencia de azcar reductor.. Licor de Fehling: se utiliza pare conocer monosacridos y disacridos; excepto la sacarosa. Los azucares reductores reducen al ion cprico a cuproso, formando el precipitado de oxido cuproso rojo. E.A.P. Ciencias Biolgicas

Determinacin de Carbohidratos El licor Felhling fue la que reacciono ms rpido, por lo cual se puede decir que es ms sensible que la prueba de Benedict. Ambas pruebas producen precipitacin de Cu, pues ambas estn hechas a base de cobre. 2. Reactivo de Selivanoff El reactivo est hecho a base de resorcinol y ac. Clorhdrico concentrado. Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de carbohidratos, es positiva para el grupo de cetona (color rojo); se basa en que al calentar la muestra, esta se deshidrata y reacciona con el resorcinol.

En el laboratorio usamos Fructosa y sacarosa; las cuales dan positivo para la prueba de Selivanoff. La sacarosa da positivo por ser un disacrido formado por fructosa y glucosa.

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3. Determinacin del Ttulo del Licor de Fehling Se coloca en la bureta la solucin estndar de glucosa a 0,5 g; en el Erlermeyer el licor de Fehling A, B y C; en proporcin 2:2:1, y se preparo 5 mL, este se calienta en ebullicin en una cocinilla, agitando constantemente; se deja caer gota a gota la solucin estndar de glucosa, hasta que esta se torna amarilla, no esperar a que se torne marrn. Para mayor precisin se puede agregar una gota de azul de metileno, el cual no interfiere en la titulacin solo ayuda a mantener el color del indicador hasta el momento en el que vira a amarillo.

1ra Sol. Estndar de Glucosa 1,55 mL

2da 1,85 mL

3ra 1,55 mL

4ta 1,55 mL

5ta 1,50 mL

Para hallar el titulo del Reactivo de Fehling se procede de la siguiente manera.

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Determinacin de Carbohidratos Para obtener el volumen gastado, sacaremos un promedio de los volmenes; pero como tenemos un valor alto de 1,85 mL no lo tomaremos en cuenta; por lo tanto el volumen gastado es 1,54 mL.

Bibliografa
Curso prctico de qumica orgnica. Enfocado a biologa y alimentos. Rogelio Ocampo, Luz Amalia Ros, Luz Adriana Betancur, Diana Marcela Ocampo. Universidad de Caldas. Caracterizacin de hidratos de Carbono, Trabajo Prctico. Universidad Nacional de Quilmes. Bioqumica I. 2do cuatrimestre 2004 Carbohidratos. Practica N2. Escuela de medicina veterinaria. Universidad Nacional de Costa Rica (UNA).

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1. Hidrlisis de un disacrido Procedimiento: Preparar agregar en un tubo de ensayo Sacarosa al % y Acido clorhdrico; colocar en un caso precipitado agua y llevar al fuego por 20 min. Recordar neutralizar la solucin con alguna base, como indicador se uso fenolftalena.

Para la preparacin del licor de Fehling: Utilizaremos Fehlig A, B y C; en proporcin 2:2:1. Preparamos 5mL del Licor de Fehling y le agregamos 5mL de agua destilada.

Y con el volumen gastado:

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