LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL Dra. Keiko Shirai Prctica No.

5 "Cultivo de hongos filamentosos INTRODUCCIN Los hongos son microorganismo eucariotes de mayor tamao y complejidad que las bacterias. Segn su morfologa los hongos se pueden dividir en dos grupos: mohos (hongos filamentosos) y levaduras. Las levaduras son unicelulares y generalmente presentan reproduccin asexual por gemacin. Los mohos presentan una estructura vegetativa denominada micelio, el cual esta formado por una serie de tubos rgidos ramificados, dentro de los cuales se encuentra el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben el nombre de hifas. De esta forma a partir de una espora en germinacin se desarrolla una hifa, esta se ramifica y forma un micelio. El crecimiento del hongo se prolonga hasta que los nutrientes desaparezcan. Las hifas pueden ser de dos tipos: vegetativas que penetran el substrato con el fin de absorber nutrientes e hifas areas que son las portadoras de las estructuras reproductoras. La clasificacin de los hongos se hace segn las caractersticas de las hifas, la formacin de esporas asexuales, las estructuras que contienen stas y la capacidad de producir esporas sexuales. OBJETIVOS Conocer e identificar algunos aspectos de la morfologa microscpica de los hongos filamentosos mediante la tcnica de microcultivo y el examen directo de los mismos. MATERIAL REACTIVOS Por equipo Glicerina 8 Cajas petri de vidrio Agar Sabouraud 5 varillas de vidrio dobladas en forma de Solucin lugol (tincin de Gram) U 5 portaobjetos Agua 5 cubreobjetos Gasa 1 bisturi Algodn 1 pinzas de diseccin Papel de estraza 3 Pipetas de 10 ml 1 Cilindro para esterilizar pipetas 1 Cilindro para esterilizar cajas petri 1 Matraz erlenmeyer de 250ml 1 Microscopio ptico 1 Microscopio de diseccin 2 mecheros fisher

Cuenta colonias Por grupo 1 Parrilla 1 vaso de precipitados de 1000 ml 2 Agitadores magnticos 1 probeta de 100 ml 1 Matraz erlenmeyer de 500 ml Balanza analtica Material que deben traer los alumnos: muestras (por ejemplo tortillas y/o pan enmohecido, frutas u hortalizas) METODOLOGA 1.- Preparacin de reactivos y medio de cultivo: a) Solucin glicerinada al 5 % (5 ml de glicerina en 100 ml de agua) b) Agar Sabouraud: Preparar medio siguiendo las indicaciones del reactivo. 2.- Preparar 6 cajas petri (por equipo) de la siguiente forma: Colocar una varilla de vidrio en forma de U dentro de la caja encima de esta un portaobjetos y 2 cubreobjetos, cerrar la caja. 3.- Colocar las cajas petri preparadas de acuerdo al punto anterior en un cilindro para esterilizar cajas petri. 4.- Colocar las pipetas en un cilindro para esterilizar (por equipo). 5.- Esterilizar el medio de cultivo, agua glicerinada, bistur y pinzas envueltas en papel de estraza y los cilindros con cajas petri y pipetas en el autoclave a 15 lb/plg2, durante 15 minutos. 6.- En condiciones aspticas vaciar el agar a 2 cajas petri (por equipo) calcular aproximadamente 25 ml por caja. Preparacin del microcultivo 1.- Bajo condiciones estriles y con ayuda de un bistur cortar cuadros pequeos de agar aproximadamente de 1 cm X 1 cm. 2.- Utilizando las pinzas de diseccin colocar en cada una de las cajas petri un cuadro de agar sobre el portaobjetos. 3.- Con el asa estril inocular por picadura en cada uno de los 4 lados del cuadro de agar hongos (muestra y aquellos proporcionados por el profesor). Colocar con la ayuda de las pinzas de diseccin estriles el cubreobjetos encima del agar. 4.- Adicionar agua glicerinada estril a cada una de las cajas petri hasta cubrir dos terceras partes de la varilla de vidrio. Tapar las cajas. 5.- Incubar las cajas a 30C durante una semana. Verificar que las cajas conserven un nivel adecuado de agua glicerinada. Observacin de los hongos 1.-Observar con el microscopio de diseccin los hongos desarrollados despus de 7 das de incubacin. 2.-En un portaobjetos colocar una gota de lugol y cubrirla con el cubreobjetos que proviene del microcultivo, observar al microscopio ptico. 3.- Observar al microscopio el portaobjetos del microcultivo, retirar el cuadro de agar, agregar una gota de solucin de lugol y cubrir con un cubreobjetos limpio.

RESULTADOS Reportar en esquemas las observaciones hechas a los microcultivos y comparar con lo encontrado en la literatura. Estas descripciones se realizarn con TODOS LOS HONGOS tanto de las muestras como las cepas proporcionadas por el profesor. Adems presentar descripcin de morfologa de colonias. CUESTIONARIO 1. Explica cules son las caractersticas distintivas de los hongos? 2. Cules son los principales criterios de clasificacin? 3. Cmo estn divididos? 4. Cules son las principales diferencias ente hongos y levaduras? 5. Explica en que consisten las reproducciones asexuales y sexuales en: a. Oomicetos b. Basidiomicetos c. Ascomicetos d. Zigomicetos e. Deuteromicetos