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Manual Prtico de Microbiologia

CAPTULO 1 Segurana biolgica em laboratrios de microbiologia 1.1. Introduo

Os laboratrios de microbiologia so ambientes de trabalho especiais em que as pessoas que neles trabalham esto sujeitas a contrair doenas infecciosas que podem constituir risco de vida. So inmeros os trabalhos publicados desde o incio do sculo descrevendo casos de doenas associadas ao trabalho laboratorial, incluindo a febre tifoide (causada pela Salmonella typhi), clera (causada pelo Vibrio cholerae), brucelose (causada pela Brucella abortus), hepatite B, shigelose (causada por algumas espcies de Shigella spp.), tuberculose (causada pelo Mycobacterium tuberculosis), arboviroses, ttano (causada pelo Clostridium tetani) e SIDA (causada pelo HIV) (Tabela 1.1).

Tabela 1.1. Casos de SIDA ou infeces por HIV contradas profissionalmente at Setembro de 1992 nos Estados Unidos1 Profisso

No. de transmisses profissionais (%) 25 (24.8) 26 (25.7) 13 (12.8) 7 (6.9) 6 (5.9) 6 (5.9) 6 (5.9) 3 (3.0) 3 (3.0) 2 (2.0) 2 (2.0) 2 (2.0) 101

Tcnico de laboratrio Enfermeiro Mdico Tcnico biomdico/paramdicos Dentista/tcnico dentista Recepcionista/auxiliares Trabalhadores de limpeza/manuteno Tcnico morgue Tcnico/terapeuta Terapeuta respiratrio Tcnico cirrgico Outros trabalhadores em sade

Total
1

Adaptado de: Sewell, D.L. 1995. Laboratory-associated infections and biosafety. Clin. Microbiol.

Reviews 8: 389-405.

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Nalguns casos as infeces tero sido associadas simples manipulao de culturas microbianas ou amostras clnicas, ou ainda inalao de p ou aerossis contendo microrganismos patognicos. Noutros casos, as infeces foram associadas utilizao de tcnicas incorrectas e descuidadas de manuseamento de materiais infecciosos (Tabela 1.2). Neste contexto so tristemente famosas as infeces mortais adquiridas por iminentes cientistas como H.T. Ricketts, S.J.M. von Prowazek e E. Weil, durante os seus estudos das doenas provocadas por Ricktesias spp. Tabela 1.2. Tipos de acidentes associados com infeces de origem laboratorial1 Acidentes

No. de infeces (%) 188 (26.7) 177 (25.2) 112 (15.9)

Salpicos e aerossis Perfurao/ferida com agulha Perfurao/ferida com objectos pontiagudos

Mordedura ou arranho de animal ou ectoparasita

95 (13.5)

Pipetao boca Outros (desconhecidos)

92 (13.1) 39 (5.5) 703

Total
1

Adaptado de: Sewell, D.L. 1995. Laboratory-associated infections and biosafety. Clin. Microbiol.

Reviews 8: 389-405.

Estes estudos sugeriram que os indivduos que trabalham em laboratrios de microbiologia correm o risco efectivo de ser infectados pelos agentes que manipulam. Em contraste, estudos semelhantes demonstraram que os laboratrios que trabalham com agentes infecciosos no constituem uma ameaa para a comunidade, havendo a registar somente casos espordicos de infeces comunitrias que tero sido transmitidas por trabalhadores deste tipo de laboratrios. De forma a minorar ou eliminar a ocorrncia de doenas infecciosas associadas a actividades laboratoriais, foram elaborados alguns manuais de segurana por diversas organizaes, incluindo a Organizao Mundial de Sade e o Center for Disease Control dos Estados Unidos, que descrevem as Boas Prticas de Laboratrio e as instalaes requeridas para trabalhar em segurana com materiais infecciosos. Este

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captulo sistematiza e resume a informao sobre segurana microbiolgica, contida nestes manuais e em outras publicaes, que directamente relevante para minimizar ou eliminar os perigos associados ao manuseamento de culturas bacterianas e fngicas nas aulas prticas laboratoriais de Microbiologia para que estas aulas no constituam risco de segurana biolgica para os alunos, professores, pessoal de limpeza e manuteno, e restante comunidade do ISCSS.

1.2. Princpios de segurana biolgica O termo conteno do risco biolgico (ou simplesmente conteno biolgica) utilizase para descrever mtodos seguros de gesto de agentes infecciosos no meio ambiente laboratorial em que so produzidos, manuseados ou conservados. Os objectivos das medidas de conteno biolgica so a reduo ou eliminao da exposio a agentes potencialmente patognicos por parte de tcnicos laboratoriais e pessoal auxiliar, comunidade e meio ambiente geral extra-laboratorial. Entende-se por conteno primria, a proteco de pessoal e meio ambiente laboratorial da exposio a agentes infecciosos. A conteno primria obtm-se aplicando boas tcnicas microbiolgicas e utilizando equipamento de segurana apropriado. A utilizao de vacinas pode tambm aumentar o nvel de proteco pessoal. Entende-se por conteno secundria a proteco do meio ambiente externo ao laboratrio da exposio a materiais infecciosos. A conteno secundria obtm-se recorrendo a uma combinao de prticas operacionais especficas e desenho adequado de instalaes.

Os trs elementos que permitem definir o tipo de conteno do risco biolgico incluem, portanto, a tcnica e prtica laboratorial, o equipamento de segurana, e o desenho de instalaes. A anlise de risco do trabalho a efectuar com um agente especfico determinar a apropriada combinao destes trs elementos.

1. Tcnica e prtica laboratorial O elemento mais importante da conteno biolgica a aderncia estrita a prticas e tcnicas microbiolgicas seguras e padronizadas. Os indivduos que trabalham com agentes infecciosos ou materiais potencialmente infectados devem conhecer os potenciais riscos envolvidos na sua actividade, e devem ser treinados e proficientes na
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execuo das tcnicas e prticas requeridas para manusear de forma segura tais materiais. O director ou pessoa a cargo do laboratrio responsvel pelo treino apropriado do pessoal. Cada laboratrio deve desenvolver ou adoptar um manual de segurana biolgica ou de operaes que identifique os perigos que podero ser encontrados e quais as prticas especficas e procedimentos a adoptar para minimizar ou eliminar riscos (Tabela 1.3). Tabela 1.3. Vias de exposio a microrganismos patognicos em ambiente laboratorial1 Via de exposio Ingesto

Prtica microbiolgica Pipetao boca Salpicos de material infeccioso para a boca

Colocao de artigos contaminados ou dedos na boca

Consumo de alimentos no laboratrio Acidentes com agulhas Cortes Mordeduras de insecto e arranhes Derrames ou salpicos para os olhos, boca, e nariz

Inoculao

Contaminao da pele e membranas mucosas

Derrames ou salpicos em pele intacta ou pele lesada

Superfcies, equipamento, e material contaminados

Inalao
1

Numerosos procedimentos que produzem aerossis

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O pessoal deve ser alertado para perigos especiais e deve ser compelido a ler e a seguir as prticas e procedimentos requeridos para os evitar. O laboratrio deve ser dirigido por um cientista conhecedor das tcnicas laboratoriais apropriadas, procedimentos de segurana, e perigos associados com o manuseamento de agentes infecciosos. Quando as prticas laboratoriais padronizadas se revelem insuficientes para controlar os perigos

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associados com um agente particular ou procedimento laboratorial, podem ser necessrias medidas adicionais. O director de laboratrio responsvel pela seleco de prticas de segurana adicionais, que devem ser coerentes com os perigos associados com o agente ou procedimento em causa. O pessoal de laboratrio, as medidas de segurana, e tcnicas devem ser suplementadas pelo desenho apropriado de instalaes e por caractersticas prprias de engenharia, equipamento de segurana, e prticas de gesto.

2. Equipamento de segurana_ barreiras primrias_ O equipamento de segurana inclui cmaras de segurana biolgica, recipientes fechados, e outras solues de engenharia desenhadas para eliminar ou minimizar a exposio a materiais biolgicos perigosos. As cmaras de segurana biolgica so os principais equipamentos utilizados para possibilitar a conteno de derrames infecciosos ou aerossis gerados por muitos procedimentos microbiolgicos (Tabelas 1.4 e 1.5). Tabela 1.4. Identificao de actividades laboratoriais geradoras de aerossis1 Actividades laboratoriais Manipulao de ansas de inoculao

1

Prticas microbiolgicas Inoculao de meios de cultura bacterianos Arrefecimento de ansas nos meios de cultura Chamejamento de ansas contaminadas Agitao de suspenses bacterianas Derrames em superfcies slidas Expelir ar Retirar tampa da agulha Injectar animais Retirar a agulha da a seringa Centrifugao Utilizao de misturadores, agitadores, sonicadores Adio ou decantao de fludos Abertura de frascos de cultura Derrames de materiais infecciosos Liofilizao e filtrao sobre vcuo Inoculao de ovos e posterior colheita de fludos contendo vrus

Pipetao Manuseamento de agulhas e seringas

Outras

Adaptado de: Sewell, D.L. 1995. Laboratory-associated infections and biosafety. Clin. Microbiol.

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Tabela 1.5. Exemplos de aerossis infecciosos produzidos por algumas tcnicas bacteriolgicas comuns1 Procedimento laboratorial Aglutinao em lmina Injeco de animal sem desinfectar o local de inoculao Tubo partido em rotor de centrfuga com tampa Tubo partido em rotor de centrfuga sem tampa (derrame de lquido para fora da centrfuga) Uma gota de Salmonella indica depositada altura de cerca de 10 cm sobre: Ao inox Toalha de mos seca Toalha molhada com fenol (5%) Insero de uma ansa quente num caldo de cultura Insero de uma ansa fria em caldo de cultura Quebra de ampola contendo S. indica liofilizada Inoculao de agar solidificado com ansa Utilizao de misturador mal vedado Abertura de garrafas com tampa de rosca
1

No. mdio de colnias em amostras de ar 0-0.7 15-16

0-20

80-1800

0.2-4.7 0-0.4 0-0.1 0.7-25 0-0.2 1939-2040 7-73 77-1246 0-45

Adaptado de: Chatigny MA and Clinger DI. Contamination control in aerobiology. In: Dimmick, R.L:,

and AB. Akers (Eds.) 1969. An introduction to experimental aerobiology, pp. 194-263. WileyInterscience, New-York.

Existem trs tipos de cmaras de segurana biolgica utilizadas em laboratrios de microbiologia: cmaras de classe I , II e III. As cmaras de classe I (Fig. 1.1) e classe II (Fig. 1.2) so cmaras abertas que oferecem nveis significativos de proteco ao pessoal de laboratrio e ao meio ambiente quando utilizadas em conjunto com boas tcnicas microbiolgicas. As cmaras de classe II tambm protegem contra a

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contaminao externa de materiais (e.g. culturas de clulas, stocks microbianos) que so manipulados dentro da cmara. As cmaras de classe III (Fig. 1.3), cmaras fechadas, so estanques a gases e constituem o mais alto nvel de proteco alcanvel actualmente para o pessoal e para o meio ambiente.

Figura 1.1. Diagrama de uma cmara de segurana biolgica de classe I. A) Abertura frontal; B)

Superfcie de trabalho; C) Janela; D) Coluna de

exausto; E) Filtro HEPA.

Figura 1.2. Diagrama de uma cmara de segurana biolgica de classe II, tipo A. A) Ventilador; B) Coluna de exausto; C) Filtro HEPA de entrada; D) Exaustor; E) Vidro; F) Superfcie de trabalho.

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Figura

1.3.

Diagrama de uma cmara de segurana biolgica de classe III. A) Mesa de apoio; B) Compartimento das luvas; C) O-ring para ligao das luvas; D) Janela de vidro; E) Filtro HEPA de sada; F) Filtro HEPA de exausto (embora sejam necessrios dois filtros HEPA consecutivos de exausto o segundo filtro no est representado na figura); G) Autoclave com duas sadas.

Outro exemplo de barreira primria as tampas dos rotores de centrfuga que impedem a libertao de aerossis formados durante a centrifugao. Para minimizar este perigo potencial, sobretudo quando se manuseiam agentes infecciosos que podem ser transmitidos por via respiratria aps exposio a aerossis, deve tambm efectuarse o trabalho laboratorial em cmaras de segurana biolgica. O equipamento de segurana pode tambm incluir itens para proteco pessoal tais como luvas, batas, tocas, sapateiras, botas, respiradores, mscaras faciais, vidros protectores, ou culos. O equipamento de proteco pessoal muitas vezes utilizado conjuntamente com cmaras de segurana biolgica e outros dispositivos de conteno dos agentes, animais ou materiais infecciosos que esto a ser manipulados. Em algumas situaes em que pouco prtico trabalhar em cmaras de segurana biolgica, o equipamento de proteco pessoal pode constituir a primeira barreira entre o pessoal e os materiais infecciosos (ex. actividades relacionadas com a manuteno de equipamentos). 3. Desenho de instalaes _barreiras secundrias_ O desenho das instalaes pode constituir uma importante barreira de proteco do pessoal intra- e extra-laboratorial e da comunidade em geral, dos agentes infecciosos que podem ser acidentalmente libertados do laboratrio. A direco do laboratrio responsvel pela disponibilizao de instalaes adequadas funo do laboratrio e ao nvel de segurana recomendado para os agentes efectivamente manipulados.

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As barreiras secundrias recomendadas dependem do risco de transmisso do agente especfico. Por exemplo, os riscos de exposio para a maior parte do trabalho laboratorial em instalaes de nvel 1 e 2 de segurana biolgica so o contacto directo com os agentes, ou o contacto inadvertido atravs do meio ambiente de trabalho contaminado. As barreiras secundrias nestes laboratrios podem incluir a separao da rea de trabalho laboratorial do acesso pblico, existncia de equipamento para descontaminao (ex. autoclave) e locais para lavagem de mos.

medida que o risco de transmisso dos microrganismos por aerossis aumenta, tornam-se necessrios nveis mais elevados de conteno primria e mltiplas barreiras secundrias para impedir a sada de agentes infecciosos para o meio ambiente. As caractersticas do desenho das instalaes podem ento incluir: sistemas de ventilao especializados que assegurem fluxo de ar direccionado, sistemas de tratamento do ar laboratorial para descontaminar ou remover agentes do ar contaminado (ar expelido), zonas de acesso controlado, isolamento do laboratrio em edifcios ou mdulos separados

1.3. Nveis de segurana biolgica Existem quatro nveis de segurana biolgica (NSB) que so definidos pela utilizao combinada de diferentes prticas e tcnicas laboratoriais, equipamento de segurana, e instalaes laboratoriais. Cada combinao especificamente apropriada para as operaes efectuadas, as vias de transmisso conhecidas ou suspeitadas de cada agente infeccioso, e para a funo ou actividade do laboratrio (Tabela 1.6). O director do laboratrio responsvel pela anlise de riscos associados ao trabalho laboratorial com um determinado agente microbiano e pela aplicao apropriada dos nveis de segurana biolgica recomendados para esse agente microbiano.

1. Nvel 1 de segurana biolgica (NSB 1) As prticas, o equipamento e as instalaes deste nvel de segurana so apropriadas para laboratrios de ensino (de nvel bsico introdutrio, caso da Microbiologia Geral), outras instalaes em que seja efectuado trabalho com estirpes bem definidas e

caracterizadas de microrganismos viveis que sejam incuos para o adulto

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saudvel. O Bacillus subtilis e a Escherichia coli K12, a Naegleria gruberi, e o vrus da hepatite canina so exemplos representativos de microrganismos que satisfazem estes critrios. Muitos agentes que no esto normalmente associados a doena no homem adulto so, no entanto, patognios oportunistas e podem causar infeces no jovem, no idoso, e nos indivduos imunodeficientes ou imunosuprimidos. Este nvel de biosegurana representa um nvel bsico de conteno biolgica que assenta em prticas microbiolgicas padronizadas no sendo recomendadas barreiras primrias ou secundrias especiais, a no ser a existncia de um lavatrio para lavagem de mos.

2. Nvel 2 de segurana biolgica (NSB-2) As prticas, equipamento, e instalaes deste nvel de segurana so apropriadas para laboratrios de diagnstico, laboratrios de ensino ( onde se manipule produtos biolgicos, caso da Bacteriologia Clnica) e ainda outras instalaes em se trabalhe com uma grande variedade de microrganismos de risco moderado naturalmente presentes na comunidade e associados com doenas humanas de maior ou menor severidade. Com a adopo de boas tcnicas microbiolgicas, estes agentes podem ser manuseados com segurana em bancadas abertas, desde que se assegure que o potencial formador de aerossis, derrames e salpicos, resultante dessas actividades baixo. O vrus da hepatite B, as Salmonella spp., e os Toxoplasma spp. so exemplos de microrganismos que devem ser trabalhados nestas condies de segurana. O nvel 2 de segurana biolgica apropriado para trabalho com fluidos e tecidos corporais e produtos derivados do sangue humano, produtos biolgicos em que a presena de um agente infeccioso pode ser desconhecida.

Os perigos primrios para o pessoal que trabalha com estes agentes relacionam-se com exposies percutneas ou exposies acidentais das membranas mucosas, ou ainda com a ingesto de materiais infecciosos. Deve ter-se precaues extremas com agulhas contaminadas ou instrumentos ponteagudos. Embora os organismos manipulados em instalaes de nvel 2 de segurana biolgica (NSB-2) no se transmitam normalmente por via aerossol, todos os procedimentos que possam aumentar o risco de exposio do pessoal a aerossis devem ser efectuados em/com equipamento ou utenslios de conteno primria como so as cmaras de segurana biolgica e as tampas dos rotores

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de centrfugas. Outras barreiras primrias podem ser utilizadas quando tal seja apropriado: escudos contra derrames e salpicos, proteces faciais, luvas e toucas. Para reduzir a potencial contaminao ambiental devem sempre existir e estar disponveis e em funcionamento, barreiras secundrias tais como lavatrios e instalaes ou equipamento para descontaminao dos resduos infectados.

3. Nvel 3 de segurana biolgica (NSB-3) As prticas, equipamento, e instalaes deste nvel de segurana biolgica so apropriadas para laboratrios de diagnstico, de ensino, de investigao e de produo industrial em se trabalhe com uma grande variedade de microrganismos indgenas ou exticos com potencial para transmisso respiratria via aerossis, e que podem causar infeces srias e potencialmente letais. Exemplos de microrganismos que devem ser trabalhados a este nvel de segurana so: Mycobacterium tuberculosis, vrus da encefalite de St. Louis, e Coxiella burnetii. Os perigos primrios para o pessoal que trabalhe com estes agentes relacionam-se com a auto-inoculao, ingesto, e exposio a aerossis infecciosos. No nvel 3 de segurana biolgica, mais nfase colocado na utilizao de barreiras primrias e secundrias para proteco do pessoal que trabalhe em reas contguas, proteco da comunidade, e proteco do ambiente, contra a exposio a aerossis potencialmente infecciosos. Por exemplo, todas as manipulaes devem ser efectuadas numa cmara de segurana biolgica ou outro equipamento fechado. As barreiras secundrias incluem: Acesso controlado ao laboratrio Sistema de ventilao especializado que minimize a libertao de aerossis infecciosos

4. Nvel 4 de segurana biolgica (NSB-4) o nvel mais elevado de segurana biolgica. As prticas, equipamento, e instalaes deste nvel de segurana biolgica so apropriadas para o trabalho com microrganismos perigosos e exticos que constituam um elevado risco individual de contrair uma doena mortal, que podem ser transmitidos por aerossis, e para os quais no existe vacina ou terapia. Adicionalmente, agentes microbianos com um perfil antignico semelhante ou igual dos agentes deste nvel de segurana biolgica devem igualmente ser manuseados neste nvel de segurana. Exemplos de
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microrganismos que tm de ser manuseados neste nvel de segurana so os vrus de Marburg e da febre hemorrgica do Congo-Crimeia.

Os riscos primrios para o pessoal que trabalhe neste nvel de segurana so a exposio respiratria a aerossis infecciosos, exposio das membranas mucosas a gotculas infecciosas, e auto-inoculao. Todas as manipulaes de materiais de diagnstico potencialmente infecciosos, microrganismos isolados, e animais natural ou experimentalmente infectados constituem um risco de exposio e infeco para o pessoal laboratorial, a comunidade, e o meio ambiente. A proteco completa do trabalhador contra o material infeccioso aerossolizado obtida efectuando o trabalho em cmaras de segurana biolgica de classe III ou utilizando um fato individual com fornecimento autnomo de ar e presso positiva. As instalaes de nvel de segurana 4 so normalmente um edifcio separado ou uma zona completamente isolada equipada com complexos sistemas especializados de ventilao e de gesto de resduos para prevenir a libertao de agentes viveis para o meio ambiente.

Em todos os casos, o director do laboratrio o primeiro responsvel pela operao em segurana do laboratrio. O seu conhecimento e julgamento so crticos na anlise de riscos e aplicao apropriada destas recomendaes. Os nveis de segurana recomendados representam as condies de trabalho que, uma vez adoptadas, permitem o trabalho em segurana com os diversos microrganismos. As caractersticas particulares do agente usado, o treino e a experincia do pessoal, e a natureza ou funes do laboratrio podem tambm influenciar o director na aplicao destas recomendaes.

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Tabela 1.6. Resumo dos nveis de segurana biolgica recomendados para agentes infecciosos Nvel de segurana biolgica (NSB)
NSB-1

Agentes

Prticas
Prticas microbiolgicas padronizadas Prticas de NSB-1 mais: Acesso limitado Sinais avisadores de perigo Precaues contra objectos pontiagudos Manual de segurana biolgica definindo mtodos de descontaminao de resduos e polticas de vigilncia mdica Prticas de NSB-2 mais: Acesso controlado, Descontaminao de todos os resduos Descontaminao das vestes laboratoriais antes de as lavar, Obteno de um colheita de soro para determinar nveis de base. Prticas de NSB-3 mais: Troca de roupa antes de entrar Duche sada Todo o material descontaminado sada das instalaes

Equipamento de segurana (barreiras primrias)

No requerido Utilizao de cmaras de segurana biolgica de classe I ou II para manipulaes de agentes que originem salpicos e formao de aerossis de material infeccioso. Batas, Luvas, Proteco facial quando necessria

Instalaes (barreiras secundrias)

Obrigatria bancada aberta com lavatrio NSB-1 mais: Autoclave disponvel

No causam doena em adultos saudveis Associados com doenas humanas. Perigos auto ingesto, das mucosas primrios: inoculao, exposio membranas

NSB-2

Agentes indgenas ou exgenos com potencial para transmisso por aerossis; A doena provocada pelos microrganismos pode ter consequncias srias ou mesmo mortais

NSB-3

Utilizao de cmaras de segurana biolgica de classe I ou II para a manipulao de todos os agentes Bata, Luvas, Proteco respiratria quando necessrio

NSB-2 mais: Separao fsica dos corredores gerais de acesso Acesso com portas duplas e que se fechem automaticamente Ar exaurido no reciclvel Fluxo de ar com presso negativa para dentro do laboratrio NSB-3 mais: Edifcio separado ou zona isolada Sistemas dedicados de fornecimento e exausto de ar , de vcuo, e de descontaminao Outros requerimentos descritos no texto

Agentes perigosos/exticos que provocam doenas mortais, infeces transmitidas por aerossis;

Todos os procedimentos efectuados em cmaras de segurana biolgica de classe III Todos os procedimentos efectuados em cmaras de segurana de classe I ou II em combinao com a utilizao de fatos pessoais de corpo inteiro, com fornecimento de ar e presso positiva

ou

ou NSB-4 Agentes relacionados com vias de transmisso desconhecidas

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1.4. A segurana biolgica em laboratrio de ensino da Microbiologia Para o ensino laboratorial de cursos de nvel introdutrio de Microbiologia Geral, em que se manuseia essencialmente estirpes bem definidas e caracterizadas de microrganismos viveis que so incuos para o adulto saudvel e constituem um perigo mnimo para o pessoal laboratorial e para o meio ambiente, so apropriadas prticas, equipamento e instalaes de Nvel 1 de Segurana Biolgica (NSB-1). O trabalho geralmente conduzido em bancada aberta usando prticas microbiolgicas

padronizadas. Geralmente no necessrio nem utilizado equipamento de conteno especial nem edifcios especiais. Os alunos, o pessoal auxiliar e de limpeza, e o pessoal de manuteno, devem ter treino especfico nos procedimentos efectuados no laboratrio, e a sua actividade tem de ser supervisionada por um cientista ou professor com treino geral em microbiologia ou cincia relacionada.

As prticas microbiolgicas padronizadas e especficas, equipamento de segurana e instalaes so as aplicadas a agentes de nvel 1 de segurana biolgica:

A. Prticas Microbiolgicas Padronizadas

1. O acesso ao laboratrio limitado ou restrito discrio do director do laboratrio quando esto em curso experincias ou trabalho com culturas e amostras de microrganismos. 2. As mos devem ser lavadas: Aps lidar com materiais contendo microrganismos viveis Aps lidar com animais, Aps a remoo das luvas, Antes de deixar o laboratrio. 3. Comer, beber, fumar, manusear lentes de contacto, e aplicar cosmticos no so permitidos nas reas de trabalho onde exista a possibilidade de exposio, mesmo que remota, a materiais infecciosos. 4. Os indivduos que utilizam lentes de contacto no laboratrio devem usar culos ou uma mscara facial. 5. Os alimentos so guardados e conservados fora da rea de trabalho em armrios e frigorficos utilizados somente com este objectivo.

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6. A pipetao boca proibida; tm de ser utilizados dispositivos de pipetao automtica. 7. Todos os procedimentos so executados cuidadosamente para evitar a libertao de aerossis, salpicos ou derrames. 8. As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas pelo menos uma vez por dia e aps qualquer derrame de material infeccioso. 9. Todas as culturas, stocks, e outros resduos infecciosos formados devero ser descontaminados antes da sua rejeio por um mtodo de descontaminao aprovado (ex. autoclavagem). 10. Os materiais a descontaminar fora da rea do laboratrio devem ser colocados num contentor durvel, prova de fugas, que dever ser fechado antes do transporte. A embalagem e transporte final dos lixos infecciosos devem obedecer s regulamentaes exigidas pelas autoridades locais. 11. Dever ser implementado um programa de controlo de insectos e roedores.

B. Prticas microbiolgicas especficas

No so requeridas nenhumas prticas microbiolgicas especficas.

C. Equipamento de segurana (barreiras primrias)

1. No so geralmente requeridos dispositivos ou equipamentos especiais de segurana para a manipulao de agentes microbianos de NSB-1. 2. Deve ser utilizada bata ou uniforme para prevenir a contaminao das roupas. A bata deve ser vestida entrada do laboratrio e retirada sada do laboratrio. 3. Devem ser utilizadas luvas no caso de haver feridas nas mos ou quando a pele das mos est gretada ou queimada. 4. Devem ser utilizados dispositivos de proteco dos olhos (culos ou mscaras) quando se antecipa que o trabalho laboratorial poder provocar derrames, salpicos ou aerossis infecciosos.

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C. Instalaes laboratoriais (barreiras secundrias)

1. Cada laboratrio deve ter um lavatrio de mos. 2. O desenho laboratorial de molde a que seja facilmente limpo. No devem existir tapetes porque a sua descontaminao muito difcil. 3. Os tampos das bancadas devem ser impermeveis gua e resistentes aos cidos, bases, solventes orgnicos, e calor moderado. 4. O mobilirio laboratorial deve ser rgido e duradouro. Os espaos entre as bancadas, e entre os equipamentos deve ser acessvel para limpeza. 5. No caso do laboratrio ter janelas que abrem, estas devem estar equipadas com mosquiteiros.

Referncias bibliogrficas Chatigny, M.A, and D.I. Clinger. Contamination control in aerobiology. In: Dimmick, R.L:, and AB. Akers (Eds.) 1969. An introduction to experimental aerobiology, pp. 194263. Wiley-Interscience, New-York. Sewell, D.L. 1995. Laboratory-associated infections and biosafety. Clin. Microbiol. Reviews 8: 389-405. Fleming, D.O, J.H. Richardson, J.J. Tulis, and D. Vesley. 1995. Laboratory safety. Principles and practices. Second Edition. ASM Press. Strain, T.A, and D.H.M. Groschel. Laboratory safety and infectious waste management. In: Murray, P.R., E.J. Baron, M.A Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (Eds.) 1995. Manual of clinical microbiology, pp.75-85. Sixth Edition. ASM Press. Center for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health. 1993. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 3rd ed. HHS publication no. (CDC)93-8395. Public Health Service, U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.

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