Manual de Procedimientos Pro-Fa-Micr-018 v.2

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDARIZADOS MICROBIOLOGIA
CONTROL DE COMUNICACION FECHA DE APROBACION: FECHA DE COMUNICACIN:

CONTROL DE EMISIN Elaborado por: Nombre Firma Fecha 22/06/2007 23/06/2007 23/0/2007 Dr. Franklin Arancibia Revisado por: Dr. Christian Trigoso Aprobado por: Dra. Elma Rossell Simon
Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS MICROBIOLOGICOS REQUISITO TECNICO Norma NB ISO 15189:2004
CODIGO: PRO-FA-MICR018
Revisin: 3 Pgina 2 de 791112-2
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INDICE
1. Objetivo 2. Alcance 3. Responsables 4. Condiciones/Normativas 5. Descripcin de las actividades A. Tinciones microbiolgicas B. Exmenes directos microbiolgicos C. Anlisis por cultivos microbiolgicos D. Antibiogramas 6. Documentos de referencia 7. Registros 8. Glosario 9. Anexos
Anexo 1: PROCEDIMIENTO PARA CULTIVAR MUESTRAS MICROBIOLOGICAS 50 Anexo 2: LISTADO DE ANTIBIOTICOS Anexo 3: PROCEDIMIENTO DE HEMOCULTIVO Anexo 4: PROCEDIMIENTO PARA COPROCULTIVO Anexo 5: PROCEDIMIENTO PARA UROCULTIVO Anexo 6: PROCEDIMIENTO PARA EXUDADO FARINGEO Y NASALES Anexo 7: EXUDADO GENITALES Anexo 8: SECRECION DE HERIDAS Y LIQUIDOS ORGANICOS Anexo 9: MICOLOGICOS DIRECTOS Anexo 10: CULTIVOS MICOLOGICOS Anexo 11: IDENTIFICACION BIOQUIMICA 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 3 3 3 3 3 4 12 15 47 48 48 49 50
CONTROL DE DOCUMENTOS Elaborado por: Nombre Fecha Dr. Franklin Arancibia 22/06/2007 Revisado por: Dr. Christian Trigoso 23/06/2007 Autorizado por: Dra. Elma Rossell Simon 23/06/2007
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PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS MICROBIOLOGICOS 1. Objetivo Instruir a los responsables de realizar los anlisis microbiolgicos con las directrices especficas para la realizacin apropiada de los mtodos descritos en el presente manual 2. Alcance El procedimiento general tiene como alcance a todo el personal responsable y asignado en el rea de microbiologa de LABCLINICS S.R.L. 3. Responsables a. Responsables designados segn rol de actividades para la realizacin de los anlisis de microbiologa de LABCLINICS S.R.L. . 4. Condiciones/Normativas: a. Norma NB ISO 15189 :2004 b. Norma NB ISO 9001:2000 c. Manual de Calidad de LABCLINICS S.R.L. 5. Descripcin de las Actividades
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A.
TINCIONES MICROBIOLOGICAS I. II. TINCION GRAM PREPARACION
CRISTAL VIOLETA

Cristal violeta...................................... 1g. Alcohol 95%....................................... 20 ml. Agua destilada................................... 80 ml
Nota.- Triturar cristal violeta con alcohol al 95% y poco a poco mezclar con agua destilada. LUGOL

Yodo metlico o resublimado............................ 1g. Yoduro de potasio............................................. 2g Agua destilada..................................................... 300 ml
Nota.- Triturar en un mortero yodo metlico resublimado mas yoduro de potasio, luego se mezcla poco a poco con agua destilada hasta su completa disolucin. ALCOHOL-ACETONA

Alcohol al 95%.................................................... 50 ml Acetona............................................................... 50 ml
Nota.- En una probeta de 100 ml mezclar alcohol 95% y acetona, mezclar por inmersin para su completa disolucin. Si no contamos con acetona por ser una sustancia controlada podemos utilizar como decolorante alcohol al 95%. FUCSINA BACICA O SAFRANINA

Fucsina basica................................................ 2,5 g Alcohol 95%.................................................... 100 ml Agua destilada................................................ 100 ml
Nota.- Triturar en un mortero fucsina bsica con alcohol al 95, luego agregar agua destilada.
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COMENTARIO.- Todos los reactivos preparados se deben almacenar en frascos de vidrio color mbar, los colorantes deben dejar reposar 24 horas para su utilizacin, luego filtrar. Propsito del anlisis: Tincin diferencial que se emplea para demostrar las propiedades de tincin de todo tipo de bacterias. Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta despus de la decoloracin, y aparecen de color azul intenso. Las bacterias Gram negativas no son capaces de retener el cristal violeta despus de la decoloracin, y son teidas de rojo con el colorante de contraste safranina.
1.
Principio del procedimiento: En las bacterias Gram positivos (cidos teicoicos y magnesio) el cristal violeta se fija a la pared celular y con la adicin de lugol (mordiente) se produce el complejo cristal violeta-yodo el cual es resistente a la decoloracin con alcohol acetona.
2.
El decolorante de las bacterias Gram negativas acta como un solvente de los lpidos presentes en los poros de la pared que aumentan de tamao liberando el complejo cristal violeta-yodo, tomando la bacteria el colorante de contraste (safranina).
3. 4.
Sistema de muestra primaria: Todo tipo de muestras y cultivos.
Tipo de recipiente y aditivo: Las especificadas para toma de muestra en bacteriologa (Manual de toma de muestra) Equipo y reactivos requeridos: Microscopio, kit para tincin Gram, solucin fisiolgica, portaobjetos, mechero, lpiz graso, aceite de inmersin.
5.
6.
Pasos de procedimiento: Hacer un delgado extendido del material para estudio, y permitir que seque al aire. Fijar el material al portaobjeto. Pasndolo tres o cuatro veces a travs de la llama de un mechero de Bunsen, de modo que el material no se lave durante el procedimiento de tincin. Colocar el extendido en una cubeta para teido, y cubrir la superficie con solucin de cristal violeta. Despus de 1 minuto, lavar minuciosamente con agua destilada o buffer. Cubrir el extendido entre el pulgar y el ndice, y cubrir la superficie con unas pocas gotas del decolorante alcohol acetona, hasta que no se arrastre mas violeta. Esto lleva usualmente 10 segundos o menos. Lavar con agua corriente y volver a ubicar el extendido sobre la bandeja de tincin. Colocar sobre la superficie safranina de contraste durante 1 minuto. Lavar con agua corriente.
CONTROL DE DOCUMENTOS Elaborado por: Revisado por: Dr. Christian Trigoso 23/06/2007 Autorizado por: Dra. Elma Rossell Simon 23/06/2007
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Dr. Franklin Arancibia 22/06/2007
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Ubicar el extendido en posicin vertical en una bandeja de tincin, permitiendo que se escurra el exceso de agua y el extendido se seque. Examinar el extendido bajo un objetivo de inmersin x 100 (aceite). Las bacterias grampositivas se tien de azul oscuro: las gramnegativas aparecen rosa plidas. Procedimientos de control de calidad: Se utilizan cepas ATCC tipificadas.
7. 8.
totalmente
Interferencias y reacciones cruzadas: Reactivos mal preparados, exposiciones de los reactivos por mas tiempo. 9. Interpretacin del laboratorio: Se observan numerosos, moderados o escasos cocos, bacilos (Gram negativos o positivos) No se observan formas bacterianas.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, guantes, barbijos, lentes de proteccin.

10.
Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras mal tomadas, recepcin y recoleccin de muestras en recipientes inadecuados, pacientes con tratamiento antimicrobianos o antimicticos.
11.
III.
1.
CUENTAGOTAS DE COLORANTE AZUL DE ALGODON DE LACTOFENOL
Propsito del anlisis: Los cuentagotas de colorantes azul de algodn de lactofenol han sido diseados para utilizarse en la tincin de hongos para su estudio. Principio del procedimiento: El azul de algodn de lactofenol es un colorante azul utilizado para el estudio directo de muestras clnicas para buscar elementos micticos. Al aadir el azul de algodn de lactofenol, los hongos se tien de color azul, lo cual facilita su visualizacin y estudio. Sistema de muestra primaria: Todo tipo de muestras clnicas en especial descamaciones de piel y uas.
2.
Tipo de recipiente y aditivo: Las especificadas para toma de muestra en microbiologa (Manual de toma de muestra)
3.
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Equipo y reactivos requeridos: Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, pinza, aceite de inmersin, colorantes de azul de algodn de lactofenol.
4.
5.
6. 7.
Pasos de procedimiento: Colocar en un portaobjetos una pequea cantidad de material o muestra en estudio Luego disolver el material o muestra con el colorante azul de algodn de lactofenol Colocar un cubreobjetos en la mezcla Observar al microscopio Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado con un control positivo. Interferencias y reacciones cruzadas: Muestras contaminadas y mal tomadas.
8.
Interpretacin del laboratorio: Se observan levaduras, hifas y esporas de hongos No se observan levaduras, hifas y esporas de hongos
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio a 1%
9.
Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras mal tomadas, recepcin y recoleccin de muestras en recipientes inadecuados, pacientes con tratamiento antimicticos.
10.
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II. TINCION ZIEHL-NEELSEN III. PREPARACION DE REACTIVOS CARBOLFUCSINA O FUCSINA FENICADA

Cristales de fenol....................................... 2,5 Alcohol 95%............................................... 5 Fucsina bsica........................................... 0,5 Agua destilada............................................ 100
ml ml g ml
Nota.- Triturar en un mortero fucsina bsica con alcohol 95%, previamente calentar cristales de fenol, pipetear el fenol calentado e inmediatamente aadir a la mezcla inicial, diluir completamente con agua destilada. ACIDO ALCOHOL

Acido clorhidrico concentrado................................ 3ml Alcohol al 70%........................................................ 100 ml
Nota.- Medir en una probeta de 100 ml alcohol al 70%, luego aadir el acido clorhidrico concentrado (el acido al agua). AZUL DE METILENO

Azul de metileno...................................................... 0,5 g Agua destilada......................................................... 100 ml Acido actico glacial................................................ 0,5 ml
Nota.- Disolver en un mortero azul de metileno mas agua destilada, luego aadir acido actico glacial. COMENTARIO.- Todos los reactivos preparados se almacenan en frascos de vidrio color mbar, los colorantes deben dejar reposar 24 horas.
1.
Propsito del anlisis: Determinar la presencia de BAAR en muestras biolgicas. Los bacilos resistentes al acido son llamados as porque estn rodeados por una envoltura cerosa resistente a la tincin. Se requieren tanto el calor como un detergente para
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permitir que la tincin penetre en la capsula. Una vez teidas, las bacterias resistentes al acido resisten la decoloracin, mientras que otras se destien con el alcohol acido. Evidenciar los bacilos acido alcohol resistentes con la ayuda de reactivos y el calor. Principio del procedimiento: Se fundamenta en que las micobacterias estn cubiertas por un material grueso. Cerosos que resiste la tincin. No obstante, una vez que se tien las paredes celulares bacterianas resistente a la decoloracin por solventes orgnicos fuertes, como el alcohol-acido. Consecuentemente, dichas bacterias son conocidas como resistentes al acido, se requiere un tratamiento especial para que el colorante primario, la carbolfucsina, penetre en el material ceroso de los bacilos resistente al acido.
1.
Sistema de muestra primaria: Esputo, Orina, Lquidos orgnicos y secreciones purulentas.

2.
Tipo de recipiente y aditivo: Frascos estriles de boca ancha con tapa hermtica, las muestras deben ser tomadas como dicen las normas.
3.
Equipo y reactivos requeridos: Microscopio, reactivos para la tincin Ziehl-Neelsen, mechero, hipoclorito al 1% o cal, portaobjetos.
4.
5.
Pasos de procedimiento: Realizar un frotis en un portaobjetos el cual con un aplicador de madera, escogiendo en el caso de esputo la mejor partcula, vale decir la porcin mas representativa putrefacta, con manchas de sangre, etc., para realizar esta eleccin debemos trabajar obviamente dentro del rea de proteccin que nos brinda el mechero, adems de usar barbijo rigurosamente para este tipo de trabajos. Una vez que hemos logrado coger la mejor particula, esta es depositada sobre el portaobjetos identificado, procedimiento a extender la muestra sobre la mayor superficie posible que nos brinde este; esto para aumentar la posibilidad de hallar BAAR a la microscopia: por dems esta el indicar que la muestra debe ser bien extendida. Homogeneizndola en forma adecuada. Cumpliendo este paso dejamos desecar el frotis al medio ambiente, a la vez que incineramos el aplicador a la llama del mechero, colocando los restos en el mismo recipiente de obtencin de muestra del esputo. Fijar al calor. Colorante primario fucsina fenicada Realizar un calentamiento sobre el colorante primario: aplicando una estopa de fuego por debajo del portaobjetos llegando a obtener 3 vapores, no hervir el colorante, pues de suceder esto, la fucsina fenicada precipitara en cristales que adoptan morfologa de agujas, lo cual nos dara resultados equivocados. Lavar la preparacin con agua corriente Decolorar con una solucin de acido-alcohlica por 30 segundos a 1 minuto
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6.
Lavar con agua corriente Colorante secundario: azul de metileno de 1 minuto a 3 minutos Lavar con agua corriente. Secar Observar
Procedimientos de control de calidad: Cepas ATCC tipificadas de Micobacterium tuberculosis y realizar la prueba por duplicado con la ayuda de dos observadores. Interferencias y reacciones cruzadas: Reactivos mal preparados, muestras mal tomadas, recepcin de muestras en frascos inadecuados.
7.
8.
Interpretacin del laboratorio: Negativo: No se observan BAAR en la lamina POSITVO: 1 a 9 BAAR- anotar N de BAAR POSTIVO (+): 10 a 99 BAAR en 100 campos POSITIVO (++): 1 a 10 BAAR por campo POSITIVO (+++): Mas de 10 BAAR por campo
11. Valores de alerta o crticos: Presencia de BAAR Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, guantes, lentes, barbijos, soluciones desinfectantes, mecheros, utilizar campana de seguridad.
12.
Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras mal tomadas y reactivos mal preparados, aplicacin incorrecta de la tcnica.
13.
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B.
EXAMENES DIRECTOS MICROBIOLOGICOS
IV. EXAMEN EN FRESCO SECRECIONES GENITALES Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Observar clulas en clave y trofozoitos de Trichomonas vaginalis en secreciones genitales. El examen en fresco se caracteriza por observar en la placa clulas epiteliales en cuya superficie tienen adheridas gran cantidad de bacterias: en este caso se trata de Gardnerella vaginalis y en la lectura tambin se pueden observan Trichomonas vaginalis y levaduras.
1. 2. 3.
Sistema de muestra primaria: Muestras de secreciones genitales.
Tipo de recipiente y aditivo: Solucin fisiolgica estril o medios de transporte como el Stuart Equipo y reactivos requeridos: Microscopio, hisopos, solucin fisiolgica, porta objetos, cubre objetos.
4.
5.
Pasos de procedimiento d. Una vez tomada la muestra y medir el pH e. Cargar en un portaobjetos la muestra mas solucin fisiolgica, cubrir el preparado con un cubreobjetos f. Observar al microscopio
Procedimientos de control de calidad: La realizacin del examen por duplicado con la ayuda de dos operadores.
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Muestras mal tomadas y transportadas.

8.
Interpretacin del laboratorio: Negativo: No se observan Trichomonas vaginalis ni levaduras Positivo: Se observan Trichononas vaginalis y levaduras
Precauciones de seguridad: Aplicar criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos e hipoclorito de sodio al 1% para desechar el material utilizado. 10. Fuentes potenciales de variabilidad: Mala toma y transporte de muestras.
9.
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IV. PRUEBA DE CAMPO OSCURO Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Observacin directa de microorganimos treponmicos. Se realiza utilizando un condensador especial que es prcticamente opaco excepto una pupila circular en la periferia de la lente frontal. Como resultado, los rayos llegan a la preparacin con un ngulo muy inclinado y no son recogidos por el objetivo, lo que produce cierta difraccin que facilita de manera notable la visualizacin del material no teido.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Ulceras genitales. Tipo de recipiente y aditivo: Solucin fisiolgica.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de hemlisis, porta objetos, cubre objetos, microscopio con lente de campo oscuro, solucin fisiolgica. 5. Pasos de procedimiento. Tomar la muestra de la ulcera Preparar una placa de examen en fresco Observar al microscopio con objetivo de 40X, enfocar y examinar cuidadosamente el portaobjetos Observar la presencia del Treponema pallidum por su morfologa, tamao y movimientos tpicos. Es un microorganismo blanco y delgado (0,25 a 0,3 um) de 6 16 um de longitud. Sus movimientos son bastantes bruscos. Gira con relativa lentitud en torno a su eje longitudinal. Dicha rotacin se acompaa de una flexin central y con bastante rigidez. Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba Interferencias y reacciones cruzadas: Muestras mal tomadas. Interpretacin del laboratorio: La observacin de treponemas con la morfologa y la movilidad caracterstica de T. pallidum permite el diagnostico positivo para la sfilis primaria o secundaria. El hecho de que no pueda encontrarse el microorganismo no excluye el diagnostico de sfilis. Un resultado negativo pude indicar: nmeros insuficiente de microorganismos presente en la muestra; tratamiento previo; lesin no sifiltica.
6. 7.
8.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio al 1%
9.
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10.
Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras mal tomadas.
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C. ANALISIS POR CULTIVO MICROBIOLOGICO. PREPARACION MEDIOS DE CULTIVO AGAR SANGRE y CHOCOLATE (Soya tripticasa, sangre y mueller hinton): Medio agar con digeridos de soya y casena. Suspender 40 g del polvo en 1 litro de agua destilada, mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante 1 minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Evite calentar demasiado. Para preparar placas de sangre agregue de 5 a 10 % de sangre estril desfibrinada al medio estril que previamente se ha derretido y enfriado a temperaturas entre 45 y 50C, en caso de preparar chocolate se calienta la mezcla de agar soya tripticasa y sangre al 5 10% por un tiempo hasta que se observe un cambio de color rojizo a chocolate, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR MACCONKEY: Base para el aislamiento y la diferenciacin de organismos entricos. Suspender 50 g del polvo en 1 litro de agua destilada, mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante 1 minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR SHIGELLA SALMONELLA (SS): Base para el aislamiento de Samonella y algunas especies de Shigella. Suspender 60 g del polvo en 1 litro de agua destilada, mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante 2 a 3 minutos para disolver completamente el polvo. Evite calentar demasiado. No lo autoclave, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR MUELLER HINTON: Base para pruebas de sensibilidad antimicrobiana de difusin con discos. Suspender 38 g del polvo en 1 litro de agua destilada, mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante 1 minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. No caliente en forma excesiva, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR SABOURAUD (CULTIVO DE HONGOS): Base para medio selectivo para aislar hongos patgenos. Suspenda 36 g del polvo en 1 litro de agua destilada, mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente, justo hasta que hierva el medio para disolver completamente el polvo. Autoclave a 118 C durante 15 minutos. NO CALIENTE EN FORMA EXCESIVA, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR DE CITRATO DE SIMMONS: Base para la diferenciar bacterias gram negativas segn utilizacin de citrato. Suspenda 24,2 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante y minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfre el medio en el tubo en posicin inclinada para formar un medio inclinado, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR KLIGER IRON .: Base para la diferenciar bacterias gram negativas entricas. Suspenda 65 g g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante y minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfre el medio en el tubo en posicin inclinada para topes profundos, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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AGAR LISINA HIERRO: Base para la diferenciar bacterias gram negativas entricas. Suspenda 32 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezcla bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante y minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfre el medio en el tubo en posicin inclinada, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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CALDO UREASA: Base para la diferenciar bacterias gram negativas entricas. Suspenda 3,87 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezcle bien. Disuelva sin calentar y esterilizar por filtracin. Alicuote en tubos, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
AGAR SEMISOLIDO SIM: Base para la diferenciar bacterias gram negativas entricas. Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad. Produccin de indol y de sulfuro de hidrogeno en un mismo tubo. Suspenda 30 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante y minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfre el medio en el tubo en posicin vertical, luego del plaqueado y la gelificacion completa se procede a identificar todas las cajas con el nombre del medio de cultivo, fecha de vencimiento y numero de lote, esto para evitar cualquier margen de error al cambio de lote y fecha de preparacin de los medios de cultivo.
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CALDO TIOGLICOLATO: Medio de transporte y aislamiento de anaerobios facultativos . Suspenda 29 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien. Caliente agitando frecuentemente y hierva durante y minuto para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Alicuotar en tubos verticalmente.
VI.
1.
METODOS DE SIEMBRA
Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Siembra es la tcnica y/o procedimientos que permite colocar la muestra, sobre el medio de cultivo para cumplir un objetivo: el aislamiento de microorganismos.
2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Microorganismos (bacterias y hongos) Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivos slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Cajas petri, agares slidos y lquidos estriles, asas y agujas bacteriolgicas, mecheros 5. Pasos de procedimiento. POR AGOTAMIENTO: Utilizamos el asa bacteriolgica o hisopo, si vamos a trabajar con asas esa debe ser previamente flameada a la llama de un mechero hasta que se ponga al rojo vivo, posteriormente la enfriamos en un recipiente que contenga agua destilada estril, o en su defecto en un borde del medio de cultivo, luego tomamos la
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muestra y cerca a la llama del mechero, procedemos a destapar la capa petri, solo lo suficiente para que penetre el asa bacteriolgica, colocamos enseguida el inoculo en un extremo del medio de cultivo, para despus con movimientos suaves y delicados proceder a desparramar la muestra sobre el medio, tocndolo y describiendo movimientos en zig-zag hasta cubrir tola la superficie con un solo trazo. Luego extraemos el asa bacteriolgica y volvemos a flamearla, enfrindola y guardndola finalmente. Simplemente es agotar la muestra a travs del paseo sobre el medio de cultivo. POR CUADRANTES: Tambin es una tcnica basada en el agotamiento; solo que en este caso dividimos la caja petri en 4 cuadrantes, de igual forma flameamos y enfriamos el asa bacteriolgica y tomamos la muestra, luego proceder a sembrar en el primer cuadrante por agotamiento, inmediatamente, pasamos al segundo cuadrante. POR RADIOS: Con posterioridad al flameado y enfriamiento del asa, se toma la muestra; esta luego es depositada en un extremo del medio de cultivo, para despus proceder a realizar un trazo a partir del inoculo hasta el otro extremo de la caja petri. EN PENTAGONO: Una vez flameada y enfriada el asa, y despus de tomar la muestra (cargarla), el inoculo es colocado en un extremo de la caja petri procedimiento a realizar trazos paralelos en un sentido, quemando nuevamente el asa, esta se enfra en un borde del medio de cultivo donde no se ha sembrado y luego apoyando sobre un extremo del anterior trazo realizar otro en diferente sentido, as sucesivamente (sin volver a cargar el asa) hasta formar un pentgono, los bacterilogos usan esta tcnica para asegurar un mayor aislamiento generalmente a partir de muestras de heces fecales. METODO DE CARGADO: Esta tcnica es til es el caso de muestras de piel, pelo, uas, bsicamente consisten en depositar las descamaciones de piel, trozos de ua o pelos, directamente sobre la superficie de un medio de cultivos selectivo.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin.

6.
Fuentes potenciales de variabilidad: Medios contaminados, esterilizacin incompleta, criterios de bioseguridad mal aplicados.
7.
VII.
PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION BACTERIANA
PRUEBA DE LA COAGULASA
1.
Propsito del anlisis: Identificacin especifica para Staphylococcus aureus.
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Principio del procedimiento: La prueba permite la facultad de un organismo de coagular el plasma por accin de la enzima coagulasa; se utiliza de manera especifica en la diferenciacin de especies pertenecientes al genero estafilococos.
2. 3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Colonias puras de Staphylococcus. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivos slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Estufa, tubos de hemlisis, portaobjetos, pipetas de 1 ml, plasma citratado y agua destilada estril. 6. Pasos de procedimiento: Coagulasa ligada: Colocar en un portaobjetos una gota de agua destilada estril o solucin fisiolgica, aadir una asada de de colonias puras, emulsionar suavemente a eso colocar una gota de plasma citratado y emulsionar suavemente. Coagulasa libre: A un tubo de ensayo limpio, colocar 0,5 ml de plasma citratado, aadir 0-,5 ml de una suspensin de cultivo puro, mezclar suavemente por inversin (no agitar), incubar en bao Maria a 37C, durante 4 horas controlar cada 30 minutos si hay coagulacin. En portaobjeto observar la presencia de un precipitado macroscpico, en forma de aglutinados blancos. En tubo observar la presencia de coagulo parcial o total.

7.
Procedimientos de control de calidad: Se utilizan cepas positivas y negativos a la prueba, realizar la prueba simultneamente, control positivo Staphylococcus aureus ATCC 25923 , cepa negativa Staphylococcus epidermidis Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas, tubos sucios, plasma citratados viejos, portaobjetos sucios.
8.
9.

Interpretacin del laboratorio: La ausencia de coagulo indica la prueba NEGATIVA para Staphylococcus aureus. La presencia de coagulo indica la prueba POSITIVA para Staphylococcus aureus.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizacin de guantes, barbijos, mechero bunsen, hipoclorito de sodio al 1% Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas, tubos sucios, plasmas citratados pasados, portaobjetos sucios.
10.
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PRUEBA DE LA CATALASA Propsito del anlisis: La prueba nos sirve para la identificacin de bacterias aerobias y anaerobias facultativas que son capaces de degradar el peroxido de hidrogeno.
1.
Principio del procedimiento: Comprueba la presencia de la enzima catalasa que se encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo, la excepcin principal es Streptococcus. La enzima catalasa convierte el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. La liberacin de oxigeno se observa por la formacin de burbujas.
2. 3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Colonias puras y totalmente aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos
Equipo y reactivos requeridos: Portaobjetos, mechero bunsen, asa bacteriolgica, aplicadores estriles y perxido de hidrgeno 10 vol. 6. Pasos de procedimiento: Con un asa bacteriolgica recoger una colonia pura de 18 a 24 horas de incubacin (de la parte central de la colonia evitando arrastrar el medio). Colocar la colonia en un portaobjetos. Agregar una gota de perxido de hidrgeno al 10 vol. sobre la colonia. Inmediatamente, observar la formacin de burbujas.
Procedimientos de control de calidad: Se utilizan cepas positivos y negativas a la prueba. Control positivo Staphylococcus aureus ATCC 25923, cepa negativa Enterococcus faecalis ATCC 29212
7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y colonias con restos de medio de cultivo.
8. 9.
Interpretacin del laboratorio: Negativo: Ausencia de burbujas Positivo: Presencia de burbujas
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Precauciones de seguridad: Aplicar criterios de bioseguridad, guantes, barbijos, hipoclorito de sodio al 1%.
11.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y cepas con restos de medios de cultivo.
12.
PRUEBA DE LA HEMOLISIS Propsito del anlisis y principio del procedimiento: La prueba permite determinar la presencia de toxinas citolticas (hemolisinas) que tienen algunos estafilococos para hemolizar los eritrocitos.
1. 2. 3.
Sistema de muestra primaria: Colonias aisladas y puras.
Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos suplementados con sangre humana al 5%.
4.
Equipo y reactivos requeridos: Cajas petri, Lupa, agar sangre. Pasos de procedimiento: Siembra de colonias de estafilococos en placas de agar sangre Incubar a 35 C durante 18 a 24 horas.
5.
Procedimientos de control de calidad: Cepas control ATCC positivas y negativas. Control positivos Staphylococcus aureus ATCC 25923, control negativo Escherichia coli ATCC 25922
6.
Interferencias y reacciones cruzadas: Medios de cultivo contaminados, sangre hemolizada.

7.
8.
Interpretacin del laboratorio:
Beta hemlisis o hemlisis total: halo de color amarillo pajizo: Staphylococcus aureus Alfa hemlisis o hemlisis parcial: Halo verdusco: Streptococcus grupo viridans Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad; utilizar guantes, barbijos, mecheros.
9.
Fuentes potenciales de variabilidad: Medios de cultivos contaminados y sangre hemolizada.

10.
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PRUEBA DE LA OXIDASA
1. 2.
Propsito del anlisis: Determinar la presencia de enzimas oxidasas
Principio del procedimiento: Los citocromos son protenas que forman parte de algunas cadenas transportadoras de electrones, propias del metabolismo respiratorio. Determinar la presencia o ausencia de estas protenas proporcionara informacin til para la clasificacin de grupos bacterianos. La prueba de citocromo c-oxidasa detecta la presencia de citocromo c en la bacteria. Se basa en la capacidad del colorante dihidrocloruro de tetrametil p-fenilendiamina al 1% de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. en su estado reducido es incoloro pero en presencia de la citocromo oxidasa del microorganismo e el oxigeno atmosfrico se oxida formando el azul de indofenol.
3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Colonias aisladas y puras. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Porta objetos, aplicadores de madera, disco de oxidasa y agua destilada. 6. Pasos de procedimiento: Realizar la prueba a partir de un cultivo de 18 a 24 horas, de un medio que no contenga azucares. Humedecer el disco con agua destilada estril sobre un porta objetos. Colocar la colonia sobre el disco con aplicador de madera o asa de platino.
Procedimientos de control de calidad: Cepas control ATCC positivas y negativos. Control positivo Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, control negativo Escherichia coli ATCC 25922
7. 8.
Interferencias y reacciones cruzadas: Material contaminado. Interpretacin del laboratorio: POSITIVO: Aparicin de color rosado o morado e inclusive prpura intenso NEGATIVO: Ausencia de color
9.

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Precauciones de seguridad: Utilizar criterios de bioseguridad, guantes, barbijos, mecheros, hipoclorito de sodio al 1%
10.
Fuentes potenciales de variabilidad: Material contaminado. PRUEBA DE LA NOVOBIOCINA

11.
Principio del anlisis y principio del procedimiento: Es la capacidad que exhibe Staphylococcus saprophyticus de inhibir su desarrollo con concentraciones estndar de novobiocina.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Colonias puras y aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Caja petri de agar sangre, asa bacteriolgica, estufa a 35 C, discos de novobiocina 5ug. 5.

Pasos de procedimeinto: A partir de un cultivo puro de colonias de Staphylococcus coagulasa negativa Sembrar en una placa de agar sangre Colocar un disco de novobiocina de 5 ug Incubar a 35C durante 18-24 horas
Procedimientos de control de calidad: Controlar los discos de novobiocina con cepas ATCC. Control positivo Staphylococcus saprophyticus, control negativo Staphylococcus aureus atcc 25923.
6.
Interferencias y contaminadas.
7.
reacciones cruzadas: Los discos con baja carga y cepas
8.
Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Halo de inhibicin menor a 16 mm: Staphylococcus saprophyticus NEGATIVO: Halo de inhibicin mayor a 16 mm: otros Staphylococcus
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes, hipoclorito de sodio al 1%
9.
Fuentes potenciales de variabilidad: Baja carga de los discos de novobiocina y cepas contaminadas.
10.
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PRUEBA DE LA BACITRACINA Principio del anlisis y principio del procedimiento: Es la inhibicin del crecimiento que se presenta en los estreptococos del grupo A al ser confrontados con discos de bacitracina de 0,04 U.I.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Colonias puras y aisladas de Streptococcus Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Caja petri agar sangre, asas bacteriolgicas, estufa a 35 C y discos de bacitracina de 0,04 U.I. 5. Pasos de procedimiento: A partir de un cultivo puro de 24 horas. Sembrar en grilla Colocar el disco de bacitracina 0.04 UI al centro de la siembra Incubar a 35 C durante 18 a 24 horas
Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicada la prueba, con cepas. Control positivo Streptococcus pyogenes, control negativos Streptococcus grupo viridans
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y discos con baja carga. Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Halo de inhibicin de cualquier tamao: Streptococcus pyogenes (grupo A) NEGATIVO: Ausencia de halo de inhibicin.
8.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio al 1%.
9.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y baja carga de los discos de bacitracina.
10.
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PRUEBA DE CAMP-TEST Principio del anlisis y principio del procedimiento: Para la determinacin de Streptococcus agalactiae (grupo B), El factor CAMP es una sustancia extracelular producida por estreptococo del grupo B que incrementa la lisis de los eritrocitos por la beta lisina estafilococica y que produce una tpica hemlisis en forma de punta de flecha.
1. 2. 3.
Sistema de muestra primaria: Colonias puras y aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos (agar sangre)
Equipo y reactivos requeridos: Caja petri-agar sangre, asas bacteriolgicas, estufa a 35C, cepas de Staphylococcus aureus
4.
5.
Pasos de procedimiento: Sembrar una estra de estreptococos perpendicular a la de Staphylococcus aureus en una placa de agar sangre. Incubar a 35 C por 24 horas
Procedimientos de control de calidad: Realizar la prueba utilizando cepas positivos y negativas. Control positivo Streptococcus agalactiae, control negativo Streptococcus pyogenes
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas. Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Presencia de sinergismo: Streptococcus agalactatiae (grupo B) NEGATIVO: Ausencia de sinergismo Observar la presencia o ausencia de sinergismo de hemlisis o punta de flecha caracterstica.
8.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin, hipocloritos de sodio al 1%
9. 10.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas.
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PRUEBA DE LA OPTOQUINA Principio del anlisis y principio del procedimiento: Identificar especifica de Streptococcus pneumoniae. La optoquina es un compuesto qumico, clorhidrocuprena, impregnado en discos de papel filtro a una concentracin de 5 ug que inhibe el crecimiento de Streptococcus pneumoniae. Es completamente soluble en el agua y se difunden rpidamente en el medio. Las colonias de Streptococcus pneuminae alrededor del disco son lisadas debido a cambios de tensin superficial, produciendo una zona de inhibicin.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Colonias pura y aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Cajas de agar sangre, asas bacteriolgicas, estufa a 35C + 5% CO2, discos de optoquina 5 ug. 5.
6.
Pasos de procedimiento: Preparar una suspensin de colonias puras igual a la escala de McFarland tubo 0,5 con un hisopo estril sembrar la suspensin en la placa de agar sangre Colocar un disco de Optoquina de 5ug. Incubar a 35 C al 5 % de CO2 durante 18 24 horas Medir el dimetro de la zona de inhibicin en milmetros.
Procedimientos de control de calidad: Realizar la prueba por duplicado y testar los discos con cepas aisladas. Control positivo Streptococcus pneumoniae, cotrol negativo Streptococcus grupo viridans Interferencias y discos de optoquina.
7.
reacciones cruzadas: Cepas contaminadas, baja carga de los
8.
Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Discos de 6 mm: halo de inhibicin mayor a 14 mm Discos de 10 mm: halo de inhibicin mayor a 16 mm NEGATIVO: Ausencia de halo de inhibicin.
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Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizacin de guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio al 1%
9.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y baja carga de los discos de optoquina.
10.
PRUEBA DE LA BILIS ESCULINA Principio del anlisis: Ayuda a la diferenciacin de los Streptococcus del grupo D de otros Streptococcus que no pertenecen a dicho grupo, ayuda a la diferenciacin de la Listeria monocytogenes (+)
1.
Principio del procedimiento: Determina la facultad de un organismo de hidrolizar el glucsido esculina en esculeteina y glucosa, en presencia de bilis. La esculeteina reacciona con una sal de hierro para formas un complejo castao oscuro o negro.
2. 3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Cepa pura y aislada. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slido.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos con tapa rosca, aguja bacteriolgica, estufa a 35C y medio de bilis esculina. 6. Pasos de procedimiento: Se inocula dos o tres colonias al medio de bilis esculina por puncin vertical con aguja Incubar a 35 C durante 24 horas Se observa el cambio de color del medio
Procedimientos de control de calidad: Realizar las pruebas por duplicado con cepas control. Control positivo Enterococcus faecalis ATCC 29212, control negativo Staphylococcus aureus ATCC 25923.
7. 8.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas, reactivos pasados. Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Si mas de la mitad de la superficie se ennegrece NEGATIVO: Ausencia de ennegrecimiento
9.

Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1%
10.
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11.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y reactivos pasados.
PRUEBA DE TOLERANCIA AL NaCl al 6,5 % Principio del anlisis: Ayuda a diferenciar especies del grupo enterococo y no enterococo.
1.
Principio del procedimiento: Se fundamente en la capacidad que presentan los enterococos para soportar concentraciones elevadas de cloruro de sodio.
2. 3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Cepa pura y aislada. Tipo de recipiente y aditivo: Medio de cultivo slido.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos con tapa rosca, asa bacteriolgica, estufa a 35 C, medio base para enterococos. 6. Pasos de procedimientos: Inocular dos o tres colonia de estreptococos en caldo o agar de NaCl al 6,5% Incubar 24 horas a 35C en atmsfera normal o que contenga mas CO2 Examinar el crecimiento, indicado por enturbiamiento y a veces por el cambio de color del indicador.
Procedimientos de control de calidad: Realizar la prueba por duplicado y con cepas control. Control positivo Enterococcus faecalis ATCC 29212, control negativo Staphylococcus spp.
7.
8.
Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Crecimiento bacteriano indica que la cepa es halo tolerante NEGATIVO: La ausencia de crecimiento bacteriano indica que la cepa no es halo tolerante
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizacin de guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio al 1%
9. 10.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas
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PRUEBA-MOTILIDAD Principio del anlisis: Ayuda a diferenciar gneros y especies en general las enterobacterias y bacilos Gram negativos.
1.
Principio del procedimiento: La motilidad de muchas bacterias debido a que poseen flagelos es puesta en evidencia utilizando un agar blando.
2. 3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Cepa pura y aislada. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa a rosca, estufa de 35C, mechero, agar blando. (SIM) 6. Pasos de procedimiento: Tubo con 2 ml de agar blando vertical (en pie) Eligiendo una colonia bien aislada se toma con aguja bacteriolgica un toque de la colonia Inocular el medio por puncin vertical Se inocula a 35C por 18 a 24 horas Observar crecimiento y turbidez alrededor de la picada
Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado utilizando cepas control. Control positivo Escherichia coli ATCC 25922, control negativo Klebsiella pneumoniae.
7. 8.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y medios vencidos. Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Presencia de turbidez (crecimiento) que se desplaza hacia las paredes del tubo. NEGATIVO: Crecimiento limitado al lugar de picada.
9.

10.
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11.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y medios vencidos.
PRUEBA-AGAR KLIGLER (KIA)

1. 2.
Propsito del analisis: Diferenciacin de enterobacterias.
Principio del procedimiento: Pone en evidencia la utilizacin de la glucosa y la lactosa. Adems la produccin de acido sulfhdrico (H2S). Al fermentarse la glucosa que contiene el medio este se acidifica a nivel de la columna virando el indicador fojo fenol a amarillo. Por otro lado la fermentacin de la lactosa se hace evidente en la zona inclinada del agar. En el cado de ausencia de fermentacin, la formacin de H2S se detecta a partir de aminocido del medio y/o tiosulfato, siendo la fuente de hierro sales frricas presentes tambin en el medio.
3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Cepas puras y aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa a rosca, estufa a 35C, Mechero, Medio de cultivo deshidratado. 6.
7.
Pasos de procedimiento: Tubo con agar inclinado (3ml). Elegir una colonia bien aislada Se toma con aguja bacteriolgica una toque de la colonia Realizar puncin en la columna; al retirar la aguja de la columna, se realiza la inoculacin por estra y agotamiento en la zona inclinada. Se incuba a 35C por 24 horas
Procedimientos de control de calidad: Utilizando cepas ATCC cada compra de lote, Control positivo Escherichia coli ATCC 25922, control negativo Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
8.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y medios vencidos. Interpretacin de laboratorio: En la columna se lee: Fermentacin de la glucosa Color amarillo: Positivo Color rojo: Negativo
9.
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Formacin de acido sulfhdrico precipitado negro de FeS En el inclinado: Fermentacin de lactosa Color amarillo: Positivo Color rojo: Negativo
10. 11.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y medios caducados.
PRUEBA-AGAR LISINA HIERRO (LIA)

1. 2.
Propsito del anlisis: Evidenciar grupos bacterianos entre las enterobacterias.
Principio del procedimiento: Pone en evidencia la descarboxilacin de la lisina o su desaminacin. Adems la produccin de acido sulfhdrico (H2S). En las primeras horas se degrada la glucosa que contiene el medio y este se acidifica; pero al descarboxilarse la lisina se libera CO2 que alcaliniza de nuevo el medio, este queda de color violeta debido al indicador Prpura de bromo cresol. Por otro lado en caso de desaminacin se detecta cundo se forma un complejo rojo vino con el indicador (en el pico). La formacin de H2S se detecta a partir de aminocidos del medio y tiosulfato, siendo la fuente de hierro sales de hierro presentes tambin en el medio.
3. 4. 5.
Equipo y reactivos requeridos: tubos de tapa rosca, estufa a 35 C, mechero, medio de cultivo LIA 6. Pasos de procedimiento: Tubo con agar inclinado (3 ml). Elegir una colonia bien aislada se toma con aguja bacteriolgica un toque de la colonia. Realizar puncin en la columna; al retirar la aguja de la columna, se realiza la inoculacin por estra y agotamiento en la zona inclinada. Se incuba a 35C por 24 horas.
Procedimientos de control de calidad: Realizar la prueba por duplicado utilizando controles. Control positivo Escherichia coli ATCC 25922, control negativo Citrobacter spp.
7.
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8.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y medios vencidos.
9.
Interpretacin de laboratorio: En la columna se lee: Descarboxilacin de la lisina: Color violeta : Positivo Color amarillo: Negativo Formacin de acido sulfhdrico precipitado negro de FeS En el inclinado : Desaminacin de la lisina, Color rojo vino : Positivo
10. 11.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y medios caducados.
PRUEBA UREASA
1. 2.
Propsito del anlisis: Diferenciar grupos enterobacterias
Principio del procedimiento: Muchos organismos poseen la enzima ureasa que a partir de la urea producen amoniaco. La presencia del indicador rojo fenol nos permite al tornarse Rojo/Rosado la alcalinizacin del medio. Los microorganismos altamente productores de ureasa pueden dar positivo a las 3 horas de incubacin, algunos requieren hasta 3 das.
3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Cepas puras y aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa rosca, estufa de 35 C, mechero, agar o caldo urea 6. Pasos de procedimiento e interpretacin de laboratorio: Tubo con 2 ml de caldo o con 3 ml de agar inclinado. En el agar, elegir una colonia bien aislada se toma con aguja bacteriolgica un toque de la colonia Inocular el medio por estra a lo largo de la superficie inclinada. En el caldo se toma un asa de la colonia y se inocula Se incuba a 35C por 18 a 24 horas
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En el caldo urea: Color rojo positivo, color amarillo negativo En el agar urea: Color rojo en todo el tubo: Positivo, color rojo en el pico: positivo (Productores dbiles), color amarillo reaccin negativa. Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando controles. Control positivo Klebsiella pneumoniae, Control negativo Escherichia coli ATCC 25922
7. 8. 9.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y medios vencidos.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de seguridad e hipoclorito de sodio al 1%.
10.
PRUEBA - CITRATO
1. 2.
Propsito del anlisis: diferenciar gneros de enterobacterias
Principio del procedimiento: El citrato de slido, un compuesto orgnico simple encontrado como uno de los metabolitos del ciclo de Krebs. Algunas bacterias pueden utilizarlo como nica fuente de carbono. Esta prueba detecta la formacin de productos alcalinos. El medio contiene adems fosfato de amonio. As como la produccin de amonio (NH4+) que alcaliniza el medio. El indicador azul de bromotimol permite observar la alcalinizacin.
3. 4. 5.
Sistema de muestra primaria: Cepa pura y aislada. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos. Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa rosca, estufa 35C, mechero, agar Pasos de procedimiento: En un tubo con 2 ml de Agar, elegir una colonia bien aislada de la que se toma c on aguja bacteriolgica un toque de la misma evitando arrastrar medio de cultivo (provoca falsos positivos) inocular el medio con una sola estra a lo largo de la superficie inclinada Incubar a 35 C por 24 a 48 horas. Observar el cambio de color
citrato. 6.
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Procedimientos de control de calidad: Realizar la prueba por duplicado utilizando controles. Control positivo Klebsiella pneumoniae, control negativo Escherichia coli ATCC 25922.
7. 8.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y medios vencidos Interpretacin de laboratorio: POSITIVO: Viraje a Azul o crecimiento en el trayecto de la siembra NEGATIVO: Se mantiene verde sin desarrollo en el trayecto de la siembra
9.

Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizacin de guantes, barbijos, lentes de seguridad e hipoclorito de sodio al 1 %.
10. 11.
PRUEBA CALDO ROJO DE METILO (RM) Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Nos ayuda a diferenciar bacilos Gram negativos. Pone en evidencia la utilizacin de la glucosa. Es una prueba cuantitativa para revelar la produccin de cidos (lctico, actico y formico) segn diferentes vas de fermentacin. Por contener el indicador rojo de metilo (rojo a pH 4,4 Amarillo a pH 6,0) requiere la presencia de alta cantidad de cidos para virar de color. Los microorganismos que producen bajas cantidades de cidos requieren de 48 a 72 horas de incubacin para dar positivo.
1. 2. 3. 4.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa rosca, estufa a 35C, mechero, caldo RM/VP, reactivo indicador rojo de metilo. 5. Pasos de procedimiento. Tubo de 2 ml de caldo. Elegir una colonia bien aislada se toma con aguja bacteriolgica un toque de la colonia inocular el caldo Se incuba a 35C por 48 a 72 horas, con un mnimo de 48 horas. Revelar con 5 gotas del reactivo rojo de metilo.
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Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando cepas ATCC. Cepa positiva Escherichia coli ATCC 25922, Cepa negativa Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
7. 8. 9.
Interferencias y reacciones cruzadas: Colonias contaminadas y medios vencidos. Interpretacin del laboratorio: POSITIVO: El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio indica suficiente formacin de acido para llevar hasta pH 4,4 NEGATIVO: La presencia de color naranja o amarillo
10. 11.
PRUEBA DESCARBOXILACION DE LA ORNITINA Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Diferenciar enterobacterias. Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido para formar una amina con la consiguiente alcalinidad. La descarboxilacin es el proceso por el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especificas son capaces de atacar a los aminocidos en su grupo carboxilo, dando una amina o una diamina y anhdrido carbnico.
1. 2. 3. 4.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa rosca, estufa a 35C, mechero, caldo o agar ornitina 5. Pasos de procedimiento. Inocular dos tubos de caldo descarboxilasa de Moeller, uno con aminocido por ensayar y otro sin aminocido (control) Adicionar a ambos tubos 0,5 ml de aceite mineral estril Incubar a 35C durante 18 a 24 horas Observar el cambio de color en ambos tubos
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Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando cepas positivas y negativas. Control positivos Enterobacter aerogenes , control negativos Klebsiella pneumonia.
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Colonias contaminadas y medios vencidos. Interpretacin del laboratorio: el desarrollo de color amarillo en el tubo control indica que el organismo es viable y que produjo la acidificacin del medio por uso de glucosa. El color azul prpura del tubo que contiene el aminocido indica una reaccin POSITIVA debido a la liberacin de aminas por accin de la descarboxilasa.
8.
Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio al 1% 10. Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y medios vencidos.
9.
PRUEBA BIOQUIMICA DEL INDOL Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Nos ayuda a diferenciar especies de enterobacterias. Determina la capacidad de un organismo para desdoblar el indol de la molcula de triptofano. El triptofano es un aminocido que puede se oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos indolicos principales: indol, escatol e indol acetico. El principal intermediario en la degradacin del triptofano es el acido indol piruvico del cual puede formarse indol por desaminacin, y escatol por descarboxilacin del acido actico.
1. 2. 3. 4.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa rosca, estufa a 35C, mechero, base de peptina, reactivo de Kovacs o Ehrlich 5. Pasos de procedimiento. Inocular por picada el microorganismo en agar motilidad, caldo peptinado o SIM Incubar a 35C durante 18 a 24 horas.
Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando cepas ATCC. Control positivos Escherichia coli ATCC 25922, control negativo Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
6.
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7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Colonias contaminadas y medios vencidos. Interpretacin del laboratorio: POSITIVO: Presencia de un anillo de color rojo en la superficie del caldo. NEGATIVO: La ausencia de coloracin
8.
9. 10.
PRUEBA SATELITISMO Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Para la identificacin y el fenmeno del satelitismo de Haemophilus influenzae se presenta porque el Staphylococcus aures suministra el factor V (NAD) que se difunde en el medio de cultivo, a su vez la sangre del medio proporciona el factor X.
1. 2. 3. 4.
Equipo y reactivos requeridos: Asa bacteriolgica, caja petri-agar sangre, estufa a 35C y cepas de Staphylococcus aureus hemoltico 5. Pasos de procedimiento. Realizar la siembra del Staphylococcus aureus al centro de la placa (una lnea) Perpendicularmente a la siembra del Staphylococcus aureus, realizar de dos a cuatro siembra en estra de la cepa en estudio Incubar a 35 C en CO2 por 18 a 24 horas. Observar el desarrollo de colonias alrededor del Staphyloccus aureus

Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando cepas ATCC de S.aureus ATCC 25923.
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Colonias contaminadas y medios vencidos. Interpretacin del laboratorio: POSITIVO: Como producto del metabolismo del Staphylococcus aureus, se libera el factor V (NAD) que requiere el Haemophilus influenzae para su desarrollo. NEGATIVO: Ausencia de desarrollo bacteriano.
8.
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9.
Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas y medios mal preparados y caducados. PRUEBA PARA LA DETERMINACION DEL REQUERIMIENTO DE FACTORES XV V
10.
Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Es la determinacin de los requerimientos de los factores de crecimiento V (NAD) y X (Hemina), que permite diferenciar especies de Haemophilus influenzae y Haemophilus parainfluenzae.
1. 2. 3. 4.
Equipo y reactivos requeridos: Asa bacteriolgica, caja petri Mueller Hinton, estufa a 35C 5% CO2 y discos de factores V/XV 5. Pasos de procedimiento. A partir de un aislamiento puro, sembrar en una caja de agar Mueller Hinton o agar BHI, evitar el contacto con el agar chololate, para no arrastrar los factores contenidos en el medio. Colocar los discos o tiras de X y V sobre la superficie del agar, a una distancia de mas o menos un centmetro entre ambos. Incubar a 35C con 5% de CO2 durante 18 24 horas
Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando controles positivos y negativos. Control positivos Haemophylus influenzae, control negativos Staphylococcus aureus ATCC 25923.
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Colonias contaminadas y medios vencidos. Interpretacin del laboratorio: Si el desarrollo se presenta alrededor del Factor V: Haemophilus parainfluenzae. Si el desarrollo se presenta alrededor de los dos factores X y V: Haemophilus influenzae Si el desarrollo se presenta alrededor del factor X: Actynomiceto comitans.
8.

9.
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10.
PRUEBA AMINAS VOLATILES Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Capacidad que presenta algunas bacterias de desaminar aminocidos provenientes de las rutas de las prutrescina y cadaverina y luego de una alcalinizacin se liberan compuestos aromticos voltiles (triaminas) fcilmente detectables.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Secreciones genitales. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de transporte.
Equipo y reactivos requeridos: Tubos de tapa rosca, hisopos, hidrxido de potasio al 10% y solucin fisiolgica. 5.
6.
Pasos de procedimiento. Sobre la muestra vaginal en fresco Colocar 4 a 5 gotas de KOH al 10 % Agitar Luego de unos segundos, percibir la presencia de olor
Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba utilizando controles positivos y negativos. Control positivo Gardnerella vaginalis, control negativo Lactobacillus spp. Interferencias y reacciones cruzadas: Muestras mal tomadas y reactivos mal preparados.
7.
8.
Interpretacin del laboratorio: POSITIVO: Presencia de olor fuerte a pescado NEGATIVO: Ausencia de olor a pescado
9.
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Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras mal tomadas y reactivos mal preparados.

10.
PRUEBA PARA LA DETECCION DE BETA-LACTAMASA Propsito del anlisis y principio del procedimiento: Ayuda a identificar cepas productoras de beta lactamasas. Los antibiticos beta lactamicos actan sobre la pared bacteriana actuando como un bacteriosttico y luego bactericida. Ese efecto antimicrobiano se ve limitado por algunos microorganismos que producen beta lactamasa entre los cuales tenemos a H.influenzae, estas enzimas rompen el anillo beta lactamico con la produccin de acido penicilinoico, lo que produce muchos fracasos teraputicos con el uso de penicilihnas, ampicilinas, cefalosporinas. El mtodo Cromognico se basas en el cambio de color de rojo a amarillo de una cefalosporina cromognica (nitrocefina) cuando la fraccin amida del compuesto unida al anillo beta lactamico es hidrolizado por la beta lactamasa.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Cepas puras y aisladas. Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivo slidos. Equipo y reactivos requeridos: Cajas petri estriles, asas bacteriolgicas, solucin fisiolgica.
5. Pasos de procedimiento. Colocar el disco en una caja Petri y humedezca el disco con una gota de agua destilada. Con un asa estril, remover una colonia bien aislada y frotarla sobre la superficie del disco. Observar el cambio de color en la superficie del disco. Procedimientos de control de calidad: Realizar por duplicado la prueba con cepas positivas y negativas. Controles positivos microorganismos resistentes a los betalactamicos (ampicilina, penicilina etc.), controles negativos microorganismos sensiblea a los betalactamicos (ampicilina, penicilina etc,).
6. 7.
Interferencias y reacciones cruzadas: Cepas contaminadas y medios vencidos. Interpretacin del laboratorio:
8.
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La presencia de un color rosado en la superficie del disco indica un resultado POSITIVO, es decir que el microorganismo estudio produce beta lactamasa. La ausencia de un cambio de color en el disco indica un resultado NEGATIVO. Neisseria gonorrhoeae da la prueba POSITIVA. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito de sodio al 1%
9. 10.
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ESPERMATOGRAMA
OBJETIVO.- El objetivo fundamental en el estudio del semen es conocer la calidad citomorfolgica y las caracteristicas funcionales del los espermatozoides.
BASES PARA UNA CORRECTA OBTENCION DE LA MUESTRA.- En primer punto a tener en cuenta es la abstinencia sexual previa al la obtencin de la muestra de semen. Es necesario un periodo minimo de 3 dias a un maximo de 7 dias, preferentemente 5 dias. Si durante este tiempo de espera se produce una polucin nocturna, antes de obtener la muestra para el estudio, es necesario tener una eyaculacion voluntaria. OBTENCION DE LA MUESTRA. CONSIDERACIONES.- La muestra de semen siempre se obtendra por masturbacin sobre el contenedor de vidrio o polipropileno neutro, exento de citotoxicidad, con un dimetro de boca de 45 mm, suministrado y contrastado por el propio laboratorio. No pueden ser aceptadas las muestras obtenidas por coitus interruptus y obtenidas utilizando lubricantes, no deben aceptarse las muestras incompletas. El lugar de obtencin tambien es importante; el mas idoneo es el domicilio del varon, puesto que las
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condiciones ambientales son mas favorables. Sin embargo, sera siempre y cuando se tenga la garantia de que la muestra llegara al laboratorio antes de los 60 minutos. INSTRUCTIVOS DE RECOLECCION PARA LOS PACIENTES.- El paciente debe en primera instancia miccionar, luego realizarse el aseo correspondiente, debe cumplir como minimo 3 dias y como maximo 5 dias de abstinencia sexual. Procede a la masturbacin, una vez por recolectar la muestra el recipiente dotado por el laboratorio debe estar al alcance para luego se depositado en el recipiente. La toma de muestra se lo realiza exclusivamente en el laboratorio, en caso de recolectar las muestras en el domicilio del paciente, este debe mantener el recipiente a una temperatura fisiologica de 35 a 37 C, e inmediatamente debe transportarse al laboratorio para su respectivo proceso.
1.
EXAMEN FISICO pH
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Principio del anlisis: Ayuda diferenciar la acidez y alcalinidad del liquido seminal b. Principio del procedimiento: Determina la facultad de medir los hidrogeniones en liquido seminal. curo o negro. c. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia 3 7 dias. d. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. e. Equipo y reactivos requeridos: Tubos de plastico o vidrio, tiras de papel tornasol con un intervalo entre 6.4 y 8.0 para medir pH. f. Pasos de procedimiento: Realizar la prueba inmediatamente Una alcuota de semen homogeneizado se coloca sobre un extremo de la tira de papel de tornazol Se observa el cambio de color de la tira y se compara con su correspondiente patron g. Procedimientos de control de calidad: Realizar paralelamente con agua destilada. h. Interferencias y reacciones cruzadas: Frascos inadecuados y muestras contaminadas con lubricantes o secreciones vaginales. i. Interpretacin de laboratorio: pH mayor a 8.0 sugieren proceso inflamatorios agudos de los organos sexuales accesorios. pH menor a 7.2 sugieren proceso obstructivos de las vias excretoras, agenesia de las mismas o proceso inflamatorios crnicos Valor de referencia 7.2 8.0 j. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% k. Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras contaminadas con lubricantes o secreciones vaginales y errores tecnicos con relacion al tiempo de exposicin (muestra-tira de papel)
a.
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Volumen
Principio del anlisis: El volumen es un parmetro importante puesto que los valores bajos o altos nos orientan a diferentes patologas. b. Principio del procedimiento: Ayuda a la diferenciar entre una hipospermia y espermoconcentracion (hiperespermia). c. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias.
a.
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Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. e. Equipo y reactivos requeridos: Tubos de plastico o vidrio graduados en decimas de milimetro. f. Pasos de procedimiento: Trasvasar el eyaculado previa rotacion suave del contenedor a un tubo conico graduado en decimas de mililitro. g. Procedimientos de control de calidad: No procede h. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion interrumpida de las muestras. i. Interpretacin de laboratorio: Menor a 2 ml se utiliza el termino hipospermia Mayor a 6 ml se utiliza el termino espermoconcentracion o hiperespermia Valor de referencia 2 6 ml j. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% k. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion interrumpida de las muestras.
d.
Viscosidad
a.
b. c. d.
e. Se homogeniza la muestra Se toma una alcuota mediante una pipeta pasteur o de plastico Luego se deja caer espontaneamente f. Procedimientos de control de calidad: No procede
Principio del anlisis y del procedimiento: Una vez finalizada la fase de coagulacin y posteriormente la de licuefaccin, que tiene lugar en el curso de 30 minutos (temperatura dependiente), es cuando realmente hay que valorar la viscosidad, puesto que la realizarlo en un momento anterior, se estara cometiendo un eroror en su valoracin real. La viscosidad es fcilmente valorable. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. Equipo y reactivos requeridos: Pipetas pasteur o de plastico. Pasos de procedimiento:
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Interferencias y reacciones cruzadas: Manipulacin de la muestra h. Interpretacin de laboratorio: Caida gota a gota: viscosidad normal Caida de forma continua: viscosidad aumentada Valor de referencia 2 6 ml i. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% j. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion interrumpida de las muestras.
g.
Aspecto Principio y procedimiento del anlisis: El semen se comporta como cualquier liquido biologico puesto que numerosas substancias pueden excretarse a traves del eyaculado como ocurre con algunos medicamentos. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. b. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. c. Equipo y reactivos requeridos: Tubos de plastico o vidrio graduados en decimas de milimetro y pipetas pasteur d. Pasos de procedimiento: Trasvasar el eyaculado previa rotacion suave del contenedor a un tubo conico graduado en decimas de mililitro y observar el color y aspecto. e. Procedimientos de control de calidad: No procede f. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion interrumpida de las muestras. g. Interpretacin de laboratorio: Lechoso opalescente: Liquido seminal aparentemente normal Lechoso transparente: Liquido seminal aparentemente anormal h. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% i. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion interrumpida de las muestras.
a.
Licuefaccin
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a.
Principio y procedimento del anlisis: Inmediatamente despus de la emision del semen se pone en marcha el mecanismo de la coagulacin, dependiente de factores que se hallan en las vesiculas seminales. Posteriormente comienza la fase de licuefaccin, dependiente de factores que se originan en la prstata y en las glndulas de Cowper.
Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. c. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. d. Equipo y reactivos requeridos: Tubos de plastico o vidrio graduados en decimas de mililitro. e. Pasos de procedimiento: Trasvasar el eyaculado previa rotacion suave del contenedor a un tubo conico graduado en decimas de mililitro. f. Procedimientos de control de calidad: No procede g. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion interrumpida de las muestras. h. Interpretacin de laboratorio: Valor normal hasta 30 minutos. i. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% j. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion interrumpida de las muestras.
b.
2. EXAMENES MICROSCOPICOS. MOTILIDAD ESPERMATICA

k.
Principio del anlisis y del procedimiento: La movilidad es un parmetro fundamental y hay que ser extremadamente rigurosos en su evaluacin. Hay que diferenciar el movimiento traslativo de los espermatozoides, que puede ser ms o menos rpido y que corresponde al movimiento util, de la movilidad insitu,
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movimiento mas o menos rapido de la cabeza o de la cola, pero sin desplazamiento l. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. m. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. n. Equipo y reactivos requeridos: Pipetas pasteur, tubos graduados en decima de mililitro, cubre objetos, portaobjetos. (Temperatura 37C) o. Pasos de procedimiento: Se procede a previa homogeneizacion de la muestra Colocar dos alcuotas de 10 a 20 ul, dependiendo de la concentracin celular sobre un mismo portaobjetos. Encima se dpositan con sumo cuidado, evitando la formacin de burbujas, cubreobjetos de 20x20 mm. Se realiza la observacin microscopica a 40X Deben despreciarse todos aquellos espermatozoides que esten cercanos a los bordes del cubreobjetos, a los posibles gotas de aire, moco, celulas epiteliales o cualquier artefacto, e incluso la aglutinacin espontanea de los espermatozoides puesto que la lectura seria erronea. p. Procedimientos de control de calidad: No procede q. Interferencias y reacciones cruzadas: Manipulacin incorrecta de la muestra y cambios de temperaturaen el proceso. r. Interpretacin de laboratorio: Grado 1 (tipo 0): Espermatozoide inmvil. Grado 2 (tipo +): Movimiento de la cabeza o de la cola sin traslacin, in situ Grado 3 (tipo ++): Movimiento progresivo lento, de vaiven ocircular, con velocidad de progresin menor a 25 um/s. Grado 4 (tipo +++): Movimiento progresivo rectilineo rapido, con velocidad de progresin mayor o igual a 25 um/s. Valor normal Grado 4 mayor a 25%; o Grado 4+3 mayor a 50%) Las lecturas se realizan a los 60 y 180 minutos. Luego se procede a observar la aglutinacin espermatica especificacin el tipo de aglutinacin (cabeza-cabeza; cabeza-cola) y en que grado se encuentra (+ , ++, +++) s. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% t. Fuentes potenciales de variabilidad: Manipulacin incorrecta de la muestra y cambios de temperatura en el proceso.
Nombre Fecha
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RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES
u.
Principio del anlisis y del procedimiento: La preparacin de orientacin permite conocer la dilucion mas conveniente a utilizar en cada caso, utilizando las normas. v. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. w. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. x. Equipo y reactivos requeridos: Pipetas pasteur, tubos graduados en decima de mililitro, cubre objetos, portaobjetos, camara de neuvauer, solucion fisiologica al 0.9%. (Temperatura 37C) y. Pasos de procedimiento: La diluciones realizadas son 1/100 si se obervan mas de 20 SPZ por campo, 1/10 si se observan menos de 20 SPZ por campo Previa homogenizacin las diluciones se realizan en tubos de vidrio Luego se carga la camara de neuvauer para su posterior conteo Una vez cargada se deja reposar 5 minutos en camara humeda para facilitar la sedimentacin. z. Procedimientos de control de calidad: No procede aa. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion inadecuada e interrumpida de las muestras. bb. . Interpretacin de laboratorio: Se considera como valor de referencia mayor o igual a 20 millones SPZ/ml Se considera como valor de referencia por total eyaculado mayor o igula a 40 millines SPZ/total cc. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% dd. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion inadecuada e interrumpida de las muestras.
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MORFOLOGIA ESPERMATICA
ee. Principio del anlisis y del procedimiento: La tincion
idonea es aquella que permite la identifiacion de todas las estructuras del espermatozoide, que proporcione una imagen nitida y una correcta definicin, los permatozoides, en la mayoria de los mamiferos, presentan una morfologa muy homogenea que se correlaciojna claramente con la cpacidad de fertilizacion. ff. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. gg. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. hh. Equipo y reactivos requeridos: Pipetas pasteur, tubos graduados en decima de mililitro, portaobjetos, tincion fucsina basica ii. Pasos de procedimiento: Se homogeniza la muestra seminal, una alcuota de 50 ul se deposita en un portaobjetos Luego suavemente se realiza la extensin de la muestra (extensin uniforme) Se deja secar a medio ambiente por 30 minutos Luego se tie con colorante de fucsina fenicada por el espacio de 1 minuto Se deja secar a medio ambiente Se realiza la observacin microscopica con el objetivo de 100X Valores normales: espermatozoides normales igual o mayor a 15% jj. Procedimientos de control de calidad: No procede kk. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion inadecuada e interrumpida de las muestras. ll. . Interpretacin de laboratorio: Anomalias de cabeza: Amorfa, alargada, microcefalo, macrocefalo, bicefalo, tapering, redonda, hipercromicos, hipocromicos. Anomalias de pieza intemedia: Angulacion, ausencia, engrosada, alargada. Anomalas de cola: Irregular, corto, enrollado, Multiple.
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Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% nn. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion inadecuada e interrumpida de las muestras.
mm.
BIOQUIMICA DEL LIQUIDO SEMINAL
Los componentes del plasma seminal son el soporte de los espermatozoides y son necesarios para que estos puedan ejercitar su funcion: sin embargo, no conoce exactamente ne que condiciones actuan y a que componentes corresponden. Este hecho se reafirman al observar que el plasma seminal de eyaculados con un alto porcentaje de espermatozoides moviles puede, ocasionalmente, incrementar la movilidad de aquellos euyaculados que presentan una baja tasa de movimiento de los espermatozoides; asimismo, el plasma seminal contiene factores inmunosupresores y antibacterianos, nutrientes para los espermatozoides y agentes estabilizadores del acorosoma (decapacitantes), asi como un pH que neutraliza el pH acido de la vagina. 1. FRUCTOSA
oo. Principio del anlisis y del procedimiento: La secrecion
de la vesicula seminal humana con un pH basico, contiene niveles elevados de proteinas y azucares reducidos. La funcion secretora se valora a traves del analisis de la fructosa en el semen. La produccin dedicho azucar corresponde en un 90% a las vesiculas seminales y el 10% restante, a los vasos deferentes. pp. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. qq. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. rr. Equipo y reactivos requeridos: Pipetas pasteur, tubos graduados en decima de mililitro, eppendorf, plasma seminal, sulfato de zinc 1.8% e NaOH 0.1M. ss. Pasos de procedimiento: Centrifugar 500 ul de semen a 2500 rpm durante 15 minutos, para obtener plasma seminal libre de celulas. Se diluye el plasma seminal (1:50) con agua destilada y se coloca en un tubo de centriguga:
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Plasma seminal Sulfato de zinc NaOH 0.1 M
1 ml 0.3 ml 0.1 ml
Mezclar, reposar 15 minutos, centrifugar 2000 rpm 20 minutos, rcoger 0.5 ml de sobrenandante.
tt. Procedimientos de control de calidad: No procede uu. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion
inadecuada e interrumpida de las muestras. vv. . Interpretacin de laboratorio: Valor normal: Mayor a 1.200 ug/ml ww. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% xx. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion inadecuada e interrumpida de las muestras.
2. FOSTASA ACIDA
yy. Principio del anlisis y del procedimiento: El fluido
prostatico posee elevados niveles de fosfatasa acida, tiene un pH acido y contiene los enzimas responsables de la licuefaccin del eyaculado. Los marcadores bioquimicos usados normalmente como indicadores de la contribucin prostatica al eyaculado y que dan una medida real de la secrecion de la glandula prostatica son el zinc, el acido citrico y fosfasa acida. zz. Sistema de muestra primaria: Liquido seminal con abstinencia de 3 7 dias. aaa. Tipo de recipiente y aditivo: Frasco de plastico limpio y esteril. bbb. Equipo y reactivos requeridos: Pipetas pasteur, tubos graduados en decima de mililitro, eppendorf, plasma seminal, tampon citrato 0.09 M, NaOH 0.1M y colucion de fosfato p-nitrofenol
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ccc. Pasos de procedimiento: Centrifugar 500 ul de semen a 2500 rpm durante 15 minutos, para obtener plasma seminal libre de celulas. Se diluye el plasma seminal (1:50) con agua destilada y se coloca en un tubo de centriguga: Plasma seminal Sulfato de zinc NaOH 0.1 M 1 ml 0.3 ml 0.1 ml
Mezclar, reposar 15 minutos, centrifugar 2000 rpm 20 minutos, rcoger 0.5 ml de sobrenandante.
ddd. Procedimientos de control de calidad: No procede eee. Interferencias y reacciones cruzadas: Recoleccion
inadecuada e interrumpida de las muestras.

fff. . Interpretacin de laboratorio:
Valor normal: Mayor a 1.200 ug/ml ggg. Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos lentes de seguridad, e hipoclorito de sodio al 1% hhh. Fuentes potenciales de variabilidad: Recoleccion inadecuada e interrumpida de las muestras.
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:

Pablo Andolz y M. Angeles Bielsa, SEMEN HUMANO MANUAL Y ATLAS, 1ra ed, Madrid Espaa, 1995 MANUAL DE PROCEDIMEINTOS- LABORATORIO CLINICO, Instituto Mexicano del Seguro Social. Dr. Raul Sanchez g. Departamento de Ciencias Preclinicas. Facultad de Medicina, Universidad de la Frontera. rsanchez ufro.cl Autor: LAR- Laboratorio de Andrologia y Reproduccin http://www.lablar.com/lar
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D. ANTIBIOGRAMAS Propsito del anlisis y principio del procedimiento: El antibiograma es un conjunto de procedimientos que nos permite determinar la sensibilidad o la resistencia bacteriana in vitro ante determinados quimioterpicos y/o antibiticos.
1. 2. 3. 4.
Sistema de muestra primaria: Microorganismos (bacterias) Tipo de recipiente y aditivo: Medios de cultivos Mueller Hinton.
Equipo y reactivos requeridos: Cajas petri, agar Mueller Hinton, mechero bunsen, asas bacteriolgicas, solucin fisiolgica estril, patrn de turbiedad escala de McFarland 0,5, regla y discos embebidos con antibiticos a concentraciones estndar definida por las normas de la C.L.S.I 5. Pasos de procedimiento. Aislamientos puros de las cepas problemas a evaluar. Realizar una disolucin de bacterias en solucin fisiolgica comparando con un patrn de turbiedad de la escala de MacFarland 0,5. Con un escobillon o hisopo estriar por enrejado en toda la placa del agar Mueller --Hinton tres veces realizando rotacin de la caja a 45 grados Luego dejar reposar por 2 a 3 minutos y colocar los discos en un lapso de 15 minutos. Coloque los discos de antibiograma teniendo la precaucin de utilizar una pinza anatmica, procediendo a flamear levemente cada vez que coloque un disco. Los discos son colocados sobre el medio de cultivo sembrado conservando la siguiente disposicin: una separacin de 2 cm, entre disco y disco y a una distancia de 2 cm de las paredes de la caja petri. En una caja petri de dimetro corriente no debemos colocar mas de 7 discos.
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Dejar reposar por 5 minutos e incubar en una estufa 35 a 37 C. Durante 18 a 24 horas Realizar la lectura midiendo los halos de inhibicin en centmetros con una regla y comparndolos con las normas de la C.L.S.I Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin e hipoclorito al 1 %.
6.
Fuentes potenciales de variabilidad: Medios contaminados, esterilizacin incompleta, criterios de bioseguridad mal aplicados, reactivos caducados.
7.
6. Documentos de referencia
Manual de la Calidad LABCLINICS S.R.L, Norma NB ISO 15189: 2004 Inserto de los medios de cultivo Manual de laboratorio bacteriologa clnica (INLASA) Manual de bacteriologa de infecciones de transmisin sexual (INLASA) Bacteriologa bsica. Dr Christian Trigoso y colaboradores Manual de procedimientos bacteriolgicos en sensibilidad y resistencia antimicrobiana (INLASA) Manual de procedimientos bacteriolgicos para infecciones respiratorias agudas. (INLASA) Manual de procedimientos para aislamiento e identificacin de patgenos entricos (INLASA) Diagnostico microbiolgico texto y atlas, Elmer W. Koneman. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica, Mac FADDIN.
7. Registros
1.

Libros de registros PRO-FA-MICR-018 Libro de registros secreciones Libro de registros urocultivos Libro de registros coprocultivos Libro de registros hemocultivos Libro de registros micologico directo y cultivo de hongos Libro de registros baciloscopias, BK cultivos y PCR.
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8. Glosario Procedimiento operativo: Documento que describe a detalle el desarrollo de las actividades de un proceso en particular. Muestra primaria (espcimen): conjunto de una o ms partes tomadas inicialmente de un sistema Anlisis: Conjunto de operaciones que tiene por objeto determinar el valor o caractersticas de una propiedad Medicin: Conjunto de operaciones que tienen como objetivo determinar el valor de una magnitud Magnitud: Atributo de un fenmeno, cuerpo o sustancia, que puede ser identificado cualitativamente y determinado cuantitativamente Exactitud de la medicin: Proximidad de concordancia entre el resultado de una medicin y un valor verdadero del mensurando Veracidad de la medicin: Proximidad de la concordancia entre el valor promedio obtenido a partir de una serie grande de resultados de mediciones y el valor verdadero. Incertidumbre de la medicin: Parmetro asociado con el resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que pudieran ser razonablemente atribuido al mensurando. Intervalo biolgico de referencia: Intervalo de referencia Intervalo del 95% de la distribucin de los valores de referencia Trazabilidad: Propiedad del resultado de una medicin o del valor de un patrn, por el cual puede ser relacionado con los patrones de referencia , usualmente patrones nacionales o internacionales, a travs de una cadena ininterrumpida de comparaciones, teniendo todas ellas, incertidumbres determinadas
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9. Anexos Anexo 1: PROCEDIMIENTO PARA CULTIVAR MUESTRAS MICROBIOLOGICAS
PROCEDIMIENTO PARA CULTIVAR MUESTRAS MICROBIOLOGICAS

MUESTRA ORINAS HECES HISOPEADOS FARINGEOS Y NASALES SECRRECIONES GENITALES LIQUIDOS ORGANICOS ESPUTO Y ASPIRADOS BRONQUIALES SECRECIONES PURULENTAS CULTIVOS MICOLOGICOS DESCAMACIONES DE PIEL DESCAMACIONES DE UAS X X X X X X X X X X X X X X SANGRE CHOCOLATE AGAR MULLER HILTON X AGAR MAC CONKEY X X X AGAR S.S. AGAR MYCOSEL
Nota.- Para todos los cultivos realizar un frotis directo de la muestra en un portaobjetos, con relacin a las secreciones genitales colocar una porcin de la muestra en solucin fisiolgica 09%.
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Anexo 2: LISTADO DE ANTIBIOTICOS

ANTIBIOTICOS
ENTEROBACTERIAS CEFOTAXIMA 30 UG, CEFTAZIDIMA 30 UG, CEFALOTINA 30 UG, AMPICILINA 10 UG, COTRIMOXAZOL 30 UG CIPROFLOXACINA 5 UG GENTAMICINA 10 UG, AMIKACINA 30 UG, AMPICILINA 10 UG, CEFTRIAXONA 30 UG, COTRIMOXAZOL 30 UG, CLORANFENICOL 30 UG, ACIDO NALIDIXICO 30 UG, IMIPENEM 10 UG, CIPROFLOXACINA 5 UG, AMIKACINA 30 UG, GENTAMICINA 10 UG IMIPENEM 10 UG, AMPISULBACTAM 10 UG, CIPROFLOXACINA 5 UG, AMIKACINA 30 UG, COTRIMOXAZOL 30 UG, SALMONELLA EN INFECCIONES SISTEMICAS AMPISULBACTAM 10 UG, CEFOTAXIMA 30 UG, CEFTAZIDIMA 30 UG , PSEUDOMONAS CEFIXIME 5 UG, MEROPENEM 10 UG, CEFTAZIDIMA 30 UG, ACINETOBACTER CEFIXIME 5 UG, MEROPENEM 10 UG, CEFTAZIDIMA 30 UG, STAPHYLOCOCCUS OXACILINA 1 UG, ERITROMICINA 15 UG, CLINDAMICINA 2 UG, COTRIMOXAZOL 30 UG, CIPROFLOXACINA 5 UG, VANCOMICINA 30 UG, GENTAMICINA 10 UG, CLORANFENICOL 30 UG, SE DEBEN COLOCAR LOS DISCOS DE ERITROMICINA Y CLINDAMICINA LADO A LADO A 1,5 CM PARA EVALUAR RESISTENCIAS MLB, EN CASO DE INFECCIONES URINARIAS UTILIZAR NITROFURANTOINA. ENTEROCOCCUS AMPICILINA 10 UG, VANCOMINA 30 UG, GENTAMICINA 120 UG, AMPISULBACTAM 10 UG, CLORANFENICOL 30 UG, NITROFURANTOINA 300 UG, TETRACICLINA 30 UG. HAEMOPHILUS INFLUENZAE Y H. PARAINFLUENZAE AMPICILINA 10 UG, CLORANFENICOL 30 UG, CIPROFLOXACINA 5 UG, COTRIMOXAZOL 30 UG, CEFUROXIMA 30 UG. NEISSERIA MENINGITIDIS CEFOTAXIMA 30 UG, CEFTRIAXONA 30 UG, MEROPENEM 10 UG, CLORANFENICOL 30 UG NEISSERIA GONORRHOEAE PENICILINA 10 U, CEFTRIAXONA 30 UG, TETRACICLINA 30 UG, CIPROFLOXACINA 5 UG, ESPECTIMOCINA OTROS STREPTOCOCCUS PENICILINA 10U, ERITROMICINA 15 UG CLINDAMICINA 2 UG.
IMIPENEM 10 UG,
CIPROFLOXACINA 5 UG
GENTAMICINA 10 UG.
ACIDO NALIDIXICO 30 UG, MICROORGANISMOS PROVENIENTES DE INFECCIONES URINARIAS SE COLOCA EN EL ANTIBIOGRAMA NITROFURANTOINA 300 UG, NORFLOXACINA, 10 UG.
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Anexo 3: PROCEDIMIENTO DE HEMOCULTIVO

MUESTRA
CALDO DE TRIPTICASA SOYA
MAC CONKEY
AGAR SANGRE Y CHOCOLATE
FROTIS CITRATO SIM KLIGLER
IDENTIFICACION Y TIPIFIACION
GRAMNEGATIVOS
GRAMPOSITIVOS
IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIA S
PRUEBA DE COAGULASA
HEMOLISIS
ESTAFILOCOCO
BACITRACINA
OPTOQUINA
ESTREPTOCOCO
NEUMOCOCO
Anexo 4: PROCEDIMIENTO PARA COPROCULTIVO

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MUESTRA
MAC CONKEY
ANTIBIOGRAMA SI PROCEDE
SS
SIM
KLIGLER
CITRATO
Nota: Cuando se trata de una muestra de nio deber, adems, sembrarse en gelosa sangre y se hace la identificacin de los grmenes que se desarrollen. Tambin se prueba la patogenicidad de los E. coli con los antisueros correspondientes.
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Anexo 5: PROCEDIMIENTO PARA UROCULTIVO
MUESTRA
CUENTA DE COLONIAS EMPLENADO DILUCIONES O ASA CALIBRADA
SEDIMENTO: LEUCOCITOS BACTERIAS TRICOMONAS
AGAR SANGRE, MULLER HILTON O NUTRITITIVO
MAC CONKEY
LEVADURAS
FROTIS
BIOQUIMICA
TIPIFICACION
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Anexo 6: PROCEDIMIENTO PARA EXUDADO FARINGEO Y NASALES

MUESTRA
MAC CONKEY
AGAR SANGRE
FROTIS
SEGUIR PASOS PARA IDENTIFICAR ENTEROBACTERIAS
COAGULASA HEMOLISIS FROTIS
ESTAFILOCOCOS BETA HEMOLITICOS
IDENTIFICACION
ESTREPTOCOCO BETA HEMOLITICO.: HEMOLISIS TOTAL Y CLARA
ESTREPTOCOCO ALFA HEMOLITICO.: HEMOLISIS PARCIAL VERDOSA
PNEUMOCOCO: HEMOLISIS PARCIAL O SIN HEMOLISIS
ESTREPTOCOCO GAMMA HEMOLITICO.: NO HEMOLIZA EL MEDIO
SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA
DIFERENCIACION
OPTOQUINA (EL PNEUMOCOCO ES SENSIBLE A LA OPTOQUINA)
Anexo 7: EXUDADO GENITALES

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MUESTRA
CULTIVO
FROTIS
EX. FRESCO
A. SANGRE
MAC CONKEY
THAYER MARTIN O CHOCOLATE
MYCOSEL
TRICOMONAS
OXIDASA FROTIS
FROTIS LEVADURAS
BIOQUIMICA
FROTIS LEUCOCITOS
CLAMIDOSPORAS
IDENTIFICACION
IDENTIFICACION
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Anexo 8: SECRECION DE HERIDAS Y LIQUIDOS ORGANICOS
MUESTRA
GRAM
AGAR SANGR E
AGAR CHOCOLATE
MAC CONKEY
MYCOSEL O SABORAUD
TIOGLICOLA TO
IDENTIFICACION
e79 79
Anexo 9: MICOLOGICOS DIRECTOS

MUESTRAS (DESCAMACIONES Y SECRECIONES)
SOLUCION FISIOLOGICA 0.9%
AZUL DE LACTOFENOL
LEVADURAS, HIFAS Y ESPORAS DE HONGOS
e79 79
Anexo 10: CULTIVOS MICOLOGICOS
MUESTRAS (DESCAMACIONES, SECRECIONES Y LIQUIDOS ORGANICOS)
SOLUCION FISIOLOGICA 0.9%
AGAR MYCOSEL O SABORAUD
LEVADURAS
HONGOS
TUBO GERMINATIVO PARA LA IDENTIFICACION DE Candida albicans
OBSERVACION DIRECTA AL MICROSCOPIO (SCOCH)
IDENTIFICACION
e79 79
Anexo 11: IDENTIFICACION BIOQUIMICA

BIOQUIMICA Y MICROORGANISMOS QUE CON MAYOR FRECUENCIA SE AISLAN DE LAS MATERIAS FECALES Lact Suc Manital Indol + +o+ + (-) + +o+ +o+ + v + + o - lento + +o+v + v + v +o+ + o - lento + Sh. Sonnei D lento Proteus mirabilis + + v Proteus vulgaris + + + + Proteus morganii +o+ - (+) v Proteus rettgeri + + + + + Pseudomonas aeruginosa +o+ Alcaligenes feacalis + +o+ + + + + Vibrio lento Klebsiella + + + + A = Acido AG = Acido y gas V= Variable * Hay excepciones como: S. typhi, S. paratyphi A y C que producen escasa o ninguna cantidad de H2S E.coli Citrobacter (E. freundii) Enterobacter aerobacter Paracolobactrum Salmonella Sh dysenteriae A Sh. Flexneri B Sh Boydil C Movilidad +o+ +o+o+ Gluc + + + + + + + + H2S + +* + + Urea Sac - o lento + - o lento + + + + + +Gas + + v + + + -+ +
e79 79
ANEXO 12: TABLA CODIFICADA PARA LA IDENTIFICACION , CONTROL Y VALIDEZ DE LOS MEDIOS DE CULTIVO ASIGNACION DE AGARES Agar Sangre Agar Chocolate Agar Macconkey Agar Salmonella Shigella Agar Mueller Hinton Agar Sabouraud Agar Citrato Agar Triple Sugar Iron Agar Lisina Hierro Caldo ureasa Agar semisolido ABREVIATURA S CH MC SS MH SB CIT TSI LIA UREA SIM FECHA DE VENCIMIENTO FECHA DE PREPARACION TIEMPO DE VALIDEZ 2 das 2 das 2 das 2 das 2 das 2 das 1 semana 1 semana 1 semana 1 semana 1 semana
Nota.- El control se realiza con la verificacin diaria del estado de los medios de cultivo a cargo del auxiliar de laboratorio. En caso que se deseche un medio de cultivo ya sea por contaminacin o que este fuera de fecha de vigencia se procede al marcado del medio con una X para luego proceder al respectivo desecho y eliminacin empleando criterios de bioseguridad.
e79 79
Ejemplo 1: Esquema de Agar Sangre identificado con numero de lote, fecha de vencimiento y preparacin.
S
NL: 25556 Fv: 11/09/09 Fp: 12/09/09
e79 79
Ejemplo 2 : Esquema de Agar Sangre desechado por no cumplir con los requerimientos de validez (marcado con una X)
S
NL: 25556 Fv: 11/09/09 Fp: 12/09/09
ANEXO 13: TABLA PARA LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
e79 79 CONTIDAD EN GRAMOS 40 g 40 g 38 g 47 g 60 g 65 G 30 g 24.2 g 65 g 32 g 29 g CANTIDAD DE AGUA DESTILADA 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt 1 Lt
NOMBRE DEL AGAR Agar Sangre (Soya tripticasa, sangre o Mueller hinton) Agar Chocolate (Soya tripticasa, Sangre o Mueller hinton) Agar Mueller hinton Agar Macconkey Agar Salmonella Shigella Agar Sabouraud Medio Semisolido Agar Citrato Agar Triple Sugar Iron Agar Lisina Hierro Caldo ureasa
ABREVIATURA S CH MH MC SS SB SIM CIT TSI LIA UREA

Manual de Procedimientos Pro-Fa-Micr-018 v.2

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDARIZADOS MICROBIOLOGIA

CONTROL DE COMUNICACION FECHA DE APROBACION: FECHA DE COMUNICACIN:

Revisin: 3 Pgina 2 de 791112-2

Revisin: 3 Pgina 3 de 791113-3

Revisin: 3 Pgina 4 de 791114-4

TINCIONES MICROBIOLOGICAS I. II. TINCION GRAM PREPARACION

Cristal violeta...................................... 1g. Alcohol 95%....................................... 20 ml. Agua destilada................................... 80 ml

Yodo metlico o resublimado............................ 1g. Yoduro de potasio............................................. 2g Agua destilada..................................................... 300 ml

Alcohol al 95%.................................................... 50 ml Acetona............................................................... 50 ml

Fucsina basica................................................ 2,5 g Alcohol 95%.................................................... 100 ml Agua destilada................................................ 100 ml

Revisin: 3 Pgina 5 de 791115-5

Sistema de muestra primaria: Todo tipo de muestras y cultivos.

Dr. Franklin Arancibia 22/06/2007

Revisin: 3 Pgina 6 de 791116-6

Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, guantes, barbijos, lentes de proteccin.

CUENTAGOTAS DE COLORANTE AZUL DE ALGODON DE LACTOFENOL

Revisin: 3 Pgina 7 de 791117-7

Revisin: 3 Pgina 8 de 791118-8

II. TINCION ZIEHL-NEELSEN III. PREPARACION DE REACTIVOS CARBOLFUCSINA O FUCSINA FENICADA

Acido clorhidrico concentrado................................ 3ml Alcohol al 70%........................................................ 100 ml

Dr. Franklin Arancibia 22/06/2007

Revisin: 3 Pgina 9 de 791119-9

Sistema de muestra primaria: Esputo, Orina, Lquidos orgnicos y secreciones purulentas.

Revisin: 3 Pgina 10 de 7911110-10

Revisin: 3 Pgina 11 de 7911111-11

EXAMENES DIRECTOS MICROBIOLOGICOS

Sistema de muestra primaria: Muestras de secreciones genitales.

Interferencias y reacciones cruzadas: Muestras mal tomadas y transportadas.

Revisin: 3 Pgina 12 de 7911112-12

Revisin: 3 Pgina 13 de 7911113-13

Fuentes potenciales de variabilidad: Muestras mal tomadas.

Revisin: 3 Pgina 14 de 7911114-14

Revisin: 3 Pgina 15 de 7911115-15

Revisin: 3 Pgina 16 de 7911116-16

Revisin: 3 Pgina 17 de 7911117-17

Revisin: 3 Pgina 18 de 7911118-18

Revisin: 3 Pgina 19 de 7911119-19

Revisin: 3 Pgina 20 de 7911120-20

Revisin: 3 Pgina 21 de 7911121-21

Revisin: 3 Pgina 22 de 7911122-22

Revisin: 3 Pgina 23 de 7911123-23

Revisin: 3 Pgina 24 de 7911124-24

Precauciones de seguridad: Criterios de bioseguridad, utilizar guantes, barbijos, lentes de proteccin.

PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION BACTERIANA

Propsito del anlisis: Identificacin especifica para Staphylococcus aureus.

Revisin: 3 Pgina 25 de 7911125-25

Revisin: 3 Pgina 26 de 7911126-26

Interpretacin del laboratorio: Negativo: Ausencia de burbujas Positivo: Presencia de burbujas

Revisin: 3 Pgina 27 de 7911127-27

Sistema de muestra primaria: Colonias aisladas y puras.

Interferencias y reacciones cruzadas: Medios de cultivo contaminados, sangre hemolizada.

Interpretacin del laboratorio:

Fuentes potenciales de variabilidad: Medios de cultivos contaminados y sangre hemolizada.

Revisin: 3 Pgina 28 de 7911128-28

Propsito del anlisis: Determinar la presencia de enzimas oxidasas

Revisin: 3 Pgina 29 de 7911129-29

Fuentes potenciales de variabilidad: Material contaminado. PRUEBA DE LA NOVOBIOCINA

reacciones cruzadas: Los discos con baja carga y cepas

Revisin: 3 Pgina 30 de 7911130-30

Revisin: 3 Pgina 31 de 7911131-31

Fuentes potenciales de variabilidad: Cepas contaminadas.

Revisin: 3 Pgina 32 de 7911132-32

reacciones cruzadas: Cepas contaminadas, baja carga de los