Tincin de la muestra

Aumenta la resolucin Acenta las caractersticas morfolgicas Conserva la muestra

Colorantes
Hacen ms visibles las estructuras internas y externas aumentando el contraste con el fondo 2 caractersticas fundamentales : Grupos cromforos
Afinidad por los componentes celulares
Por enlaces inicos (ms comunes) , covalentes o hidrfobos Con dobles enlaces conjugados Dan al colorante su color

Colorantes
cidos:
afinidad por las estructuras alcalina hemoglobina Eosina. afinidad por las estructuras cidas cidos nucleicos. Azul de metileno.

Bsicos:

 Neutros:

Colorantes

Sales de un cido y de una base coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Eosinato de azul de metileno. Insolubles en el agua y tien a aquellas sustancias que tienen un poder de disolucin superior al del lquido empleado para preparar la solucin colorante. Sudn III para teir las grasas.

Indiferentes:

 Por calor Preserva la morfologa general pero no las estructuras internas Qumica Protege la subestructura fina y la morfologa de los microorganismos delicados de mayor tamao

Fijacin

 Aldehdicos cido smico Tetrxido de osmio Compuestos mercricos y crmicos, Alcoholes, la acetona, el dietilpirocarbonato.

Fijacin qumica

 Tincin simple

Tipos de tincin
Un solo colorante.
Safranina

Colorantes bsicos

Mas usados Tienen cargas positivas

Colorantes cidos

Ej.: Cristal violeta, fucsina bsica, safranina, verde malaquita

Menos usados Tienen cargas negativas

Ej.: Eosina, Fucsina cida

Tipos de tincin
Tincin diferencial
2 ms colorantes Divide a las bacterias en grupos diferentes segn sus propiedades de tincin: Tincin de Gram Tincin cido alcohol resistente

 Tincin de Gram

Procedimiento Tcnico

Gram positiva

Gram negativa

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Tincin cidoalcohol resistente

Elevado contenido en lpidos de las paredes de estas clulas Se tien calentando una mezcla de fucsina bsica y fenol

Mycobacterium leprae Colorante de contraste: azul de metileno

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Mtodo de Ziehl-Neelsen

Frotis fijacin x calor teir con fucsina fenicada Calentar suavemente con el mechero hasta la emisin de vapores.
El colorante no debe secarse ni hervir, aadir ms si es necesario. Mantener la emisin de vapores durante 5 minutos. un minuto.

Lavar con agua decolorar con alcohol cido Lavar con agua teir con azul de metileno Lavar con agua escurrir dejar secar al aire microscopio *Rojo Positivo *Azul Negativo

TINCIN DE KINYOUN
Ziehl-Neelsen modificado Mtodo fro
Extensin Desecacin Fijacin Dejar enfriar Coloracin
Fucsina de Kinyoun 5-7 minutos-min., sin calentar.

Lavar con agua/escurrir el colorante Decolorar con alcohol-HCl Lavar con agua Coloracin de contraste Lavar secar microscopio.
Azul de metileno 2-3 min.

Tincin de estructuras especficas

Tincin negativa Para capsulas Se mezclan las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se extienden sobre un porta Las capsulas se observan sin color sobre un fondo oscuro
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Cryptococcus neoformans tincin negativa con tinta china

Tincin de esporas (Mtodo de Schaeffer-Fulton)

Doble tincin Las esporas se tien primero calentando las bacterias con verde malaquita Se contratie con safranina quedando las clulas vegetativas y las endosporas con colores diferentes

Bacillus cereus

Tincin de flagelos
Los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observados Se aplica mordiente Vibrio cholerae O1 (como cido tnico y alumbre de potasio) para aumentar el grosor de los flagelos y se tien con pararosanilina (Mtodo de Leifson) o fucsina bsica (Mtodo de Gray)

Tinciones policrmicas
Tipo Romanowsky
un colorante cido (eosina) Colorantes bsicos (tiacinas).
Azul de metileno y sus derivados (colorantes tipo azur).

Diagnstico hematolgico
Wright Giemsa
sola o en combinacin con la de May-Grnwald

 Frotis sanguneo Fijacin con metanol x 3 minutos Escurrir secar al aire Diluir en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosinaazul de metileno segn Giemsa con 2 ml de solucin tampn pH 7,2. Cubrir el frotis con la dilucin de colorante Escurrir lavar con agua del grifo. Lavar con tampn pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Escurrir y secar en posicin vertical
dejndolo actuar durante 25 minutos.

TINCIN GIEMSA

TINCIN GIEMSA
Eritrocitos color rosa asalmonado Plaquetas color violeta. Neutrfilos ncleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulacin de un color violeta rojizo

TINCIN DE WRIGHT
Frotis sanguneo muy fino secar al aire. Verter 1 ml de eosina-azul de metileno
por un minuto

Lavar con solucin tampn pH 7,2 escurrir y secar en posicin horizontal Diluir 0,5 ml. de eosina-azul de metileno con 0,5 ml de solucin tampn pH 7,2. Mezclar bien y cubrir la extensin.
durante 3-5 minutos

Lavar con agua del grifo con solucin tampn pH 7,2 escurrir y secar en posicin vertical.

Tincin de estructuras especficas

Sistemas de marcaje inmunocitoqumico Mtodos directos primer anticuerpo o anticuerpo primario se encuentra unido a algn tipo de marcador fluorocromo

Tincin de estructuras especficas

Mtodos indirectos
El anticuerpo primario aplicado sobre las clulas es reconocido por un segundo anticuerpo, secundario, unido a un marcador El anticuerpo secundario se aplica a una concentracin en exceso. Mas sensible

Tincin de estructuras especficas

Mtodos del anticuerpo no marcado o de puente
anticuerpo anticuerpo, anticuerpo peroxidasa. primario secundario anti-peroxidasa anti

Otras tinciones
Para protozoos Para Trichomonas vaginalis Para amibas de vida libre Para helmintos

Conclusin
Materiales

Tcnica

Observacion