Tema IV: CIDOS NUCLEICOS Definicin y composicin Nucletidos: nuclesido (pentosa + base nitrogenada) fosfato oligonucletidos y polinucletidos

ADN:

Descubrimiento
Estructura y formas Plegamiento Desnaturalizacin FUNCIN

ARN: Caractersticas Tipos y localizacin ARNm: llevar el mensaje desde el ADN ARNt: transferir los aminocidos a la cadena peptdica ARNr: constituir el ribosoma Ribozimas

cidos nucleicos
Polinucletidos formados por nucletidos, molculas compuestas de C, H, O y P.

Nucletidos

Bases nitrogenadas

Polinucletidos
Cadenas lineales de nucletidos. Se forman mediante un enlace ster entre el OH del grupo fosfato situado en 5 y el OH situado en 3 liberando una molcula de agua. Siempre presenta dos extremos 3 y 5. Puede observarse que la estructura es una cadena de pentosas y fosfatos de los que salen bases nitrogenadas.

ADN: cido desoxirribonucleico

Cadena de polinucletidos donde la pentosa es la 2desoxirribosa y las bases nitrogenadas son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). Al igual que el ARN tiene carcter cido por lo que se tie con colorantes bsicos. Se encuentra en el ncleo de la clula eucariota, asociado a protenas de carcter bsico, histonas, y en mitocondrias, plastos y citosol de clulas procariotas. Adems puede formar parte de virus ADN.

Descubrimiento del ADN

Friedrich Miescher Frederick Griffith Oswald Avery Colin MacLeod 1869 1928 1944 Aisl el ADN del ncleo celular Streptococcus pneumoniae Bacterias S lisas virulentas
Bacterias R rugosas no virulentas (pgina 102) Establece la composicin del ADN S*en protenas y P*en cidos nucleicos de fago. Estructura del ADN

Maclyn McCarty Alexander R. Todd 1950-51 Alfred D. Hershey 1952 Martha Chase James Watson 1953 Francis Crick Maurice Wilkins

Rosalind Franklin
Erwin Chargaff

Fotografa de rayos X de la forma B del ADN

A +T = G + C

Estructura del ADN

Formas del ADN

ADN. Tamao
Siempre es una molcula muy grande. Los virus, que tienen las molculas ms pequeas, superan los 5000 pares de bases. El ADN humano tiene 3.000.000.000 pares de nucletidos.

El lugar que una especie ocupa en la escala evolutiva no tiene relacin directa con el nmero de nucletidos de su genoma:
Una cebolla tiene un genoma 5 veces mayor que el del humano. Un helecho presenta un genoma casi 10 veces mayor que el de la cebolla. Si estirramos el ADN de un ncleo de clula humano, medira 1 metro de longitud. Veremos cmo se empaqueta.

ADN. Forma

Plegamiento del ADN

ADN. desnaturalizacin
Desnaturalizacin. Variando T y/o pH ADN (doble hlice) ADN (hlice sencilla) Renaturalizacin. A 65 C. Gran afinidad entre las bases complementarias. Utilidad: Comparacin de secuencias: medicina forense, estudios evolutivos...

Tcnicas de ingeniera gentica: Bsqueda de genes mediante sondas genticas, PCR, ARN de interferencia.
Aplicaciones biomdicas.

Etc.

ADN. Funcin
Almacn de la informacin: Gobierno de la actividad celular ADN transcripcin Epigentica. Transmite la informacin de una generacin celular a la siguiente: ARN traduccin Protenas

ADN
duplicacin o replicacin

ARN: cido ribonucleico

ARN: tipos y localizacin

ARN mensajero (ARNm) ARN transferente (ARNt)

ARN ribosmico (ARNr)

Estos tres tipos de ARN se pueden encontrar en el ncleo de clulas eucariotas, donde se forman, y en el citoplasma donde ejercen su funcin; el ARNr forma la estructura de los ribosomas. En el citoplasma de bacterias, mitocondrias y plastos, donde se forman y ejercen su funcin; el ARNr en los ribosomas.

ARN heterogneo nuclear (ARNhn) se encuentran en el ncleo y son los precursores de diferentes ARNm.
ARN de interferencia (ARNi). Descritos recientemente, parece que intervienen en la regulacin de la actividad gnica.

ARN mensajero
Se encuentra en menor cantidad en la clula (5%). Presenta estructura lineal. Es el que lleva el mensaje que va a dar lugar a protenas, por tanto, puede ser, en algunos casos, el de mayor longitud.

Su funcin es transmitir el mensaje codificado en el ADN.

Se forma en el ncleo de eucariotas o en el citosol de bacterias, plastos y mitocondrias y se traduce a protenas en los ribosomas. En eucariotas sufre el proceso de maduracin.

ARN transferente

ARN ribosmico
Es el ms abundante (>75%), el de mayor tamao y peso molecular? Junto a protenas forma los ribosomas. Estos, sern los encargados de traducir el cdigo gentico a protenas. En eucariotas se forman en el nuclolo. ARN nucleolar (ARNn) Eucariotas: genes en tndem. Procariotas:

ADN
45S 28S 18S 5,8S ARN 5S 16S + 21 prot. 5S + 23S + + 34 prot.

33 prot. 4OS

49 prot. 6OS 30S 50S

Ribozimas
Sidney Altman y Robert Cech obtuvieron el premio Nobel de qumica por descubrir la actividad cataltica del ARN.

La capacidad enzimtica de muchas molculas de ARN apoyara la teora de que fue el ARN la primera molcula con capacidad de replicacin necesaria para el origen de la vida. Las molculas de ARN son ms inestables que las de ADN.

GENTICA MOLECULAR: Dogma Central? de la Biologa Duplicacin FASE S del ADN ADN Replicacin Ciclo Celular Sntesis de ADN
Transcripcin inversa (virus)

Transcripcin (cdigo en ADN a ARN) Mensajero ARN

Transferente
Ribosomal

Traduccin (nucletidos a aminocidos)

PROTENAS

Mutacin: alteracin del ADN

Duplicacin o replicacin del ADN

Proceso de sntesis o autocopiado de todo el ADN nuclear (eucariota) o cromosmico (procariota). Descrito por Arthur Kornberg. El mecanismo fue propuesto por Watson y Crick y demostrado por Matthew S. Meselson y Franklin W. Stahl en 1957 (pgina 103). Requerimientos en procariotas: Molcula de ADN molde. Protenas: iniciadoras (Ori I), helicasas y topoisomerasas, estabilizadoras (abrir la hlice, girarla y estabilizarla), primasa (sintetizar los primer o cebadores), ADN polimerasas III (genera las nuevas hebras), II (ADN mitocondrial) y I (retira los primer, rellena los huecos y repara posibles errores) y ADN ligasa (une los fragmentos de Okazaki). Nucletidos: NTP. Energa: NTP NMP + E (ATP energa AMP)

Duplicacin del ADN. Proceso

Duplicacin del ADN en eucariotas

Diferencias con el proceso descrito en procariotas: Distintos orgenes de iniciacin.

Formacin de mltiples horquillas de replicacin y de burbujas.

Hay que separar las histonas que se vuelven a unir tras la creacin de la nueva copia. Estas protenas se han sintetizado previamente.

Diferencias en las protenas: ver cuadro de la pgina 84.

Construccin de los extremos: telomerasa. Implicaciones de la existencia y funcionamiento de la telomerasa.

Transcripcin del ADN. Sntesis de ARN

Transcripcin. Proceso

Transcripcin en eucariotas I

Transcripcin en eucariotas II. Maduracin

Traduccin. Sntesis de protenas

Tras la transcripcin se forma, entre otros, el ARNm. En eucariotas cada ARNm es monocistrnico; tiene informacin para una nica protena; en procariotas puede ser policistrnico, es decir, da lugar a varias protenas. Los aminocidos deben ser transportados en ARNt para formar la protena, luego deben ser activados. Cada aminocido se une al ARNt que tenga el anticodn que le corresponda segn el Cdigo Gentico. El ARNm presenta una secuencia de nucletidos que se leen de tres en tres y que tienen sus correspondientes complementarios en el ARNt. Este triplete se denomina codn.

Cdigo Gentico

Cdigo Gentico. Caractersticas

Lo intuy Francis Crick. Lo demostraron Niremberg, Khorana y Ochoa.

Cada tres bases o triplete se denomina codn.

Es especfico: cada triplete slo codifica para un aminocido. Es degenerado: varios tripletes codifican para el mismo aminocido. Conviene observar que son las bases que ocupan el tercer lugar las que cambian generalmente (leucina, serina y arginina). No presenta solapamientos ni discontinuidades. Es universal.

Traduccin. Fases y requerimientos

Al igual que en la transcripcin se definen tres fases: Iniciacin: ARNm, ribosoma separado en subunidades, factores proteicos de iniciacin, energa cedida por GTP, iones Mg2+, el primer aminocido siempre es la metionina (eucariotas) y en procariotas la formilmetionina, el codn de iniciacin AUG, se acoplan el codn con el anticodn en la posicin P y a continuacin la subunidad mayor del ribosoma se une a la subunidad menor. Elongacin: Son necesarios los factores de elongacin y los distintos aminocidos unidos a los ARNt. Se une en la posicin A el aminoacil-tRNA correspondiente al segundo codn. Se produce el enlace peptdico mediante la peptidiltransferasa de la subunidad mayor del ribosoma. Se desplaza el ARNm en sentido 5 3. El pptido pasa al lugar P, deja el sitio A para el nuevo a y sale el ARNt que ha quedado sin a. Se utiliza la energa de GTP. Terminacin: codn de terminacin. Factores de terminacin que bloquean el sitio A. Separacin de la cadena polipeptdica del ARNt ltimo y degradacin del ARNm por las ARNasas.

Traduccin. Proceso

Regulacin de la expresin gnica

Regulacin en eucariotas
Procesos ms complejos y peor conocidos.
Diferentes niveles: Transcripcin: momento y frecuencia (protenas reguladoras: activadores y represores; cambios en la estructura del ADN (compactacin, metilacin, factores de transcripcin Maduracin del ARNm.

Transporte del ARNm.

Traduccin. Degradacin de los ARNm. Actividad de las protenas. Elementos transponibles o transposones. Factores extracelulares: hormonas, etc.

ARN de interferencia. Premio Nobel de Medicina,2006. Fire, A y Mello, C.

Mutaciones
Alteraciones de la informacin gentica. Tipos: gnicas. Afectan a la estructura molecular del gen.
cromosmicas: afectan al cromosoma.
Se estudiarn en los temas de gentica mendeliana

genmicas. Afectan al genoma. Clasificacin de mutaciones gnicas:

sustitucin: una base nitrogenada por otra.

delecin: prdida de uno o varios nucletidos.

insercin: ganancia de uno o varios nucletidos.

5ATTGCCGTGACTAC 3
Anlisis de las consecuencias

5ATTGCTGTGACTAC 3
5ATTGCGTGACTAC 3

5ATTGCACGTGACTAC 3

Mutaciones. Causas y reparacin

Causas: Errores de lectura: fallos de la polimerasa; en las oxidaciones, radicales libres provocan que G se altere y se una a T en vez de C. Cambios qumicos: desaminaciones (C x U), despurinaciones (rotura del enlace N-glucosdico), formacin de dmeros de T mediante radiacin ultravioleta. Transposiciones: transposones.

Reparaciones: ADN polimerasa I, accin de endonucleasas, sntesis de protenas reparadoras (ante los dmeros de T), reparacin inespecfica y posterior apoptosis, ...

Ingeniera Gentica I. Manipulacin del material gentico

Objetivos:

Conocer el material gentico. Genmica (Proyecto Genoma Humano).

Sustitucin de genes defectuosos por genes normales. Introduccin de genes nuevos: terapia gnica, organismos genticamente modificados (OGM) o transgnicos. Obtencin de pptidos y protenas en grandes cantidades: hormonas, antibiticos, vacunas, etc.

Ingeniera Gentica II. Tcnicas de manipulacin

Tecnologa del ADN recombinante: Enzimas de restriccin (extremos cohesivos o pegajosos y extremos romos). Mutagnesis dirigida.

Electroforesis en gel.
Clonacin. PCR (reaccin en cadena de la polimerasa).

Hibridacin.

Ingeniera Gentica III. Logros alcanzados

Secuenciacin de diferentes genomas. Proyecto Genoma Humano Mapas genticos: posicin relativa de genes conocidos por su funcin. Mapas fsicos: secuencia de nucletidos a lo largo del cromosoma. Terapia gnica. Transgnesis: seres transgnicos, alimentos transgnicos, productos, xenotransplantes, etc. Clulas madre: embrionarias y adultas. Consideraciones ticas, legales y sociales. ???

Proyecto Genoma Humano

Proyecto genoma Cromosomas Genes 1 2968 2 2288 3 2032 4 1297 5 1643 6 1963 7 1443 8 1127 9 1299 10 1440 11 2093 12 1652 13 748 14 1050 15 1122 16 1098 17 1576 18 766 19 1454 20 927 21 303 22 288 X 1184 Y 231 Sin colocar Bases Bases determinadas 245.203.898 218.712.898 243.315.028 237.043.673 199.411.731 193.607.218 191,610,523 186,580,523 180,967,295 177,524,972 170,740,541 166,880,540 158,431,299 154,546,299 145,908,738 141,694,337 134,505,819 115,187,714 135,480,874 130,710,865 134,978,784 130,709,420 133,464,434 129,328,332 114,151,656 95,511,656 105,311,216 87,410,661 100,114,055 81,117,055 89,995,999 79,890,791 81,691,216 77,480,855 77,753,510 74,534,531 63,790,860 55,780,860 63,644,868 59,424,990 46,976,537 33,924,742 49,476,972 34,352,051 152,634,166 147,686,664 50,961,097 22,761,097 25,263,157 25,062,835