Universidad Gran Mariscal de Ayacucho Facultad de Ingeniera Escuela de Materiales Ctedra: Caracterizacin de los Materiales

CROMATOGRAFIA

HISTORIA
El botnico ruso Mikhail Tswett (Mikhail Semenovich Tsvett, 1872-1919) emple por primera vez en 1906 el trmino "cromatografa" (que proviene del griego y que significan a su vez respectivamente "color" y "escribir").

A comienzos del ao 1903, Mikhail Tswett us columnas de adsorcin de lquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacan pasar a travs de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que stos se separaban en distintas bandas a lo largo de la columna.

Objetivo:

Conocer los fundamentos de la tcnica de cromatografa de gas.

Identificar y definir los diferentes mecanismos de separacin del sistema cromatogrfico.

Cromatografa
Es la tcnica para separar entre si los componentes de una sustancia. La separacin se consigue pasando la muestra a travs de una columna, distribuidos entre un fluido que se mueve, llamado la fase mvil, y una fase estacionaria adyacente

Procesos de Separacin

Clasificacin

Tcnicas Manuales de Laboratorio

Cromatografa de Columna Cromatografa de Capa Fina

Tcnicas Instrumentales
Cromatografa de Gases (GC) Cromatografa de Lquidos (LC) Cromatografa de Lquidos de Alta Eficiencia (HPLC)

Clasificacin
Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir segn cmo est dispuesta la fase estacionaria:
CROMATOGRAFA PLANA. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son: Cromatografa en papel Cromatografa en capa fina CROMATOGRAFA EN COLUMNA. La fase estacionaria se sita dentro de una columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen: Cromatografa de lquidos Cromatografa de gases Cromatografa de fluidos supercrticos

Clasificacin
Tipos Cromatografa en papel Cromatografa en capa fina Cromatografa de gases Fase mvil Lquido Lquido Gas Lquido (polar) Lquido (menos polar) Lquido (polar) Lquido Lquido Lquido Fase estacionaria Slido Slido Slido o lquido

Cromatografa lquida en fase inversa

Cromatografa lquida en fase normal Cromatografa lquida de intercambio inico Cromatografa lquida de exclusin Cromatografa lquida de adsorcin Cromatografa de fluidos supercrticos

Slido o lquido (menos polar)

Slido o lquido (polar) Slido Slido Slido Slido

Cromatografa en papel
Es utilizado para anlisis cualitativo y no requiere de ningn equipamiento. Fase estacionaria (tira de papel de filtro) Extremo
Evaporando El disolvente se hace ascender por capilaridad Al dejar de ascender se retira el papel y se seca, se vern las manchas de distintos colores separadas Fase mvil (solvente)

CAPILARIDAD
La capilaridad es una propiedad de los lquidos que depende de su tensin superficial (la cual a su vez, depende de la cohesin o fuerza intermolecular del lquido), que le confiere la capacidad de subir o bajar por un tubo capilar. TUBO CAPILAR Un aparato comnmente empleado para demostrar la capilaridad es el tubo capilar; cuando la parte inferior de un tubo de vidrio se coloca verticalmente, en contacto con un lquido como el agua, se forma un menisco cncavo

Tcnica Manual: Cromatografa de Columna

EMPAQUETADO COLUMNA APLICACIN MUESTRA ELUCIN Y RECOGIDA DE FRACCIONES RESERVORIO f. mvil

LECHO CROMATOGRFICO f. estacionaria COLUMNA MUESTRA

FLUJO gravedad

DIFUSIN
llave

SEPARACIN

Tipos de Muestras
Tcnica Cromatografa Gaseosa (GC): muy verstil, econmica y ampliamente usada Tipo de Muestra Analizada Slidos, liquidos, compuestos orgnicos gaseosos voltiles y gases permanentes inorgnicos Compuestos orgnicos e inorgnicos, Lquidos voltiles y no voltiles y compuestos Biolgicos, polmeros, compuestos quirales, compuestos trmicamente lbiles, pequeos iones y macromolculas Liquidos polares y compuestos no polares, algunos elementos, orgnicos no inicos y inicos, aniones y cationes inorgnicos , macromolculas y compuestos quirales Analitos slidos, liquidos, gaseosos ermolbiles y no voltiles como la mayora de las muestras que se analizan por GC LC Liquidos inorganicos, aniones cationes, cidos orgnicos , aminas, amino cidos, carbohidratos y cidos nucleicos Rango de Sensibilidad Partes por trilln nanogramos / litro hasta niveles de porcentaje g / l

Cromatografa Liquida (HPLC): usada en todo el mundo, una tcnica analtica lder para aquellos componentes que no son fciles de volatilizar

Partes por billn microgramos / litro hasta de porcentaje g / l

Electroforesis Capilar (CE): anlisis de biomolculas, requiriendo solo nanolitros de muestra Cromatografa de Fludo Supercritico (SFC): puede hacer los tipos de anlisis de la GC y la LC; instrumentacin ms bien compleja Cromatografa Inica (IEC) : facilita la separacin de iones inorgnicos y iones orgnicos y especies ionizables Cromatografa Planar (TLC): simple, alternative econmica a la LC con el anlisis simultneo de un gran nmero de muestras Fraccionamiento por Flujo de Campo (FFF): Una tcnica emergnete y prometedora

Partes por billn microgramos / litro hasta de porcentaje g / l

Partes por trilln nanogramos / litro hasta niveles de porcentaje g / l

Partes por billn microgramos / litro hasta de porcentaje g / l

Igual que para la Cromatografa Liquida

Partes por billn microgramos / litro hasta escala preparativa

Igual que para la Cromatografa Liquida pero ms con macromolculas

Partes por billn microgramos / litro hasta de porcentaje g / l

Tcnicas Instrumental

Cromatografa de gases:
Es una tcnica utilizada para la separacin y anlisis de mezclas de sustancias voltiles.

La muestra es vaporizada e introducida en un flujo de un gas apropiado denominado de fase mvil (FM) o gas de arrastre.
Este flujo de gas con la muestra vaporizada pasa por un tubo conteniendo la fase estacionaria FE (columna Cromatogrfica), donde ocurre la separacin de la mezcla.

Componentes de un Cromatgrafo de Gases

1
2

1 - Cilindro de Gs y Controles de Presin. 2 - Injetor (Vaporizador) de la muestra. 3 3 - Columna Cromatogrfica y horno da la Columna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamiento (Amplificacin) de Seal. 6 - Registro de la Seal (Registrador o Computador).

Componentes necesarios en la lnea de Gas:

Controladores de presin de gs Dispositivos para purificacin de gs (trampas/filtros) 3 6 4 2

1
5 1 - Cilindro de Gs 2 - Regulador de Presin Primrio 3 - Traps para eliminar impurezas del gs 4 - Regulador de Presin Secundrio 5 - Regulador de flujo (Controlador Diferencial de Flujo) 6 - Medidor de flujo (Rotmetro)

Componentes de un Cromatgrafo de Gases

Fase Mvil en CG: NO interfiera con la muestra Es referido como GS DE ARRASTE

Requisitos:
INERTE : No debe reaccionar con la muestra, fase estacionria o superfcies del instrumento. PURO: Debe ser libre de impurezas que puedan degradar la fase estacionria.
Impurezas tpicas en gases y sus efectos:

H2O, O2 hidrocarbonatos

oxidan / hidrolizan algunas FE incompatbles con el TCD seal de rudo en el FID

Componentes de un Cromatgrafo de Gases

Gas de Arrastre:
COSTO : Gases de altsima pureza pueden ser muy caros.
COSTO

B
PUREZA

A = 99,995 % (4.5) B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)

COMPATBILIDAD CON EL DETECTOR, Cada detector demanda un gs de arraste especfico para un mejor funcionamento.
Selecin de Gases de Arraste en Funcin del Detector:

TCD FID ECD

He , H2 N2 , H2 N2 (SS), Ar + 5% CH4

COLUMNAS de los Cromatgrafos

EMPACADAS = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m
Rellena con un slido pulverizado (FE slida o una FE lquida depositada sobre las partculas del relleno)

CAPILAR = 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Paredes internas recobiertas con una pelcula fina (fraccin de m) de FE lquida o slida

Detectores de los Cromatgrafos

DETECTOR DE LLAMA (FID) DETECTOR DE TRMICA (TCD)

IONIZACION

LA

CONDUCTIVIDAD

DETECTOR DE CAPTURA ELECTRNICA

Detectores FID

Detectores TCD

Detector ECD

Cromatgrafo de Gases

Cromatgrafo de Gases

Cromatgrafo de Gases

Cromatgrafo de Gases

Esquema de Inyeccin de Muestras

Cromatograma